33

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ТАШКЕНТСКИЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Разработка методов изолирования и обнаружения гексамидина из биологических объектов при судебно-химическом исследовании

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Жалилов Фазлиддин Содикович

Ташкент - 2008

Работа выполнена в Ташкентском фармацевтическом институте Министерства здравоохранения Республики Узбекистан

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор

Таджиев Мансур Азизович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Камилов Ходжиасрор Максудович

кандидат фармацевтических наук, доцент Муслимов Мухаммаджан Камолович

Ведущая организация:

Главное Бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РУз

Защита диссертации состоится "___"___________2008 года в "____" час на заседании специализированного совета Д 087.12.01 при Ташкентском фармацевтическом институте по адресу: 100015, г. Ташкент, ул. Ойбека, 45.

С диссертацией можно ознакомиться в информационно-ресурсном центре Ташкентского фармацевтического института.

Автореферат разослан "____" ____________2008 г.

Ученый секретарь

специализированного совета Д 087.12.01, доктор фармацевтических наук, профессор Урманова Ф.Ф.

Общая характеристика диссертации

Актуальность работы. На сегодняшний день наряду с развитием науки и техники, в частности химической промышленности, в медицинской практике многих стран начали применяться синтетические препараты, относящиеся к различным группам химических соединений. Использование этих препаратов в лечебных дозах нормализует патологические процессы, протекающие в организме, однако, в случае передозировки или неправильного использования, они могут вызвать сильные отравления.

К числу таких препаратов относится гексамидин, принадлежащий к группе барбитуратов, который применяется для лечения эпилепсии.

Гексамидин (Lespiral, Liskantin, Mylepsin, Mysoline, Prilepsin, Primaсlоnе, Primidone, Sertan и др.) - белый кристаллический порошок, без запаха, слабо горького вкуса, не растворяется в воде, эфире и бензоле, мало растворим в 95% спирте и ацетоне. Темпратура плавления 279-284^о С.

Гексамидин в печени разлагается на фенобарбитал (15-25%) и фенилэтил малонамид. Фенобарбитал, являясь основным метаболитом гексамидина, широко используется в медицинской практике в качестве снотворного и противоэпилептического средства.

Фенобарбитал (Fenobarbital, Phenemalum, Phenobarbital, Phenylethylbarbituric аcid, Phenylethylmalonylurea, Gardenal, Luminal) - белый кристаллический порошок, слабо горького вкуса, без запаха, не растворим в холодной воде, мало растворим в горячей воде 2,5%, хорошо растворим в спирте, щелочных растворах и эфире. Температура плавления 174-178^о С.

До настоящего времени изучение случаев острого отравления гексамдином, его извлечение из различных биологических объектов, очищение извлечения и анализ, а также распределение гексамидина и его метаболита фенобарбитала в организме, изучение сохраняемости препарата в биообъектах не исследовались. В научной литературе авторами точно не указаны возможности применения химических и физико-химических методов анализа при качественном и количественном определении гексамидина и фенобарбитала. Существующие же сведения в этой области очень разрознены и в них не учтены и не изучены все факторы, влияющие на ход анализа. Гексамидин относится к ряду мало изученным с химико-токсикологической точки зрения препаратам.

По методике, рекомендованной некоторыми авторами, невозможно выделить из биологического объекта гексамидин и фенобарбитал в необходимом количестве. Не достаточны сведения о методах их очистки от соэкстрактивных веществ. Не изучены сроки сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в биологических объектах и факторы, влияющие на них.

Исходя из вышеизложенного, актуальна проблема оказания быстрой и квалифицированной медицинской помощи при отравлении гексамидином, разработка оптимальных методов выделения гексамидина и фенобарбитала из биологических объектов, а также совершенствование методов их анализа в проведении судебно-химической экспертиз.

Степень изученности проблемы. Диссертационная работа являются первым законченным научным исследованием в химико-токсикологическом отношении, посвященным анализу гексамидина и его метаболита фенобарбитала.

Связь диссертационной работы с тематическими планами НИР. Диссертационная работа выполнена согласно тематическому плану научно-исследовательских работ кафедры токсикологической химии Ташкентского фармацевтического института.

Цель исследования. Химико-токсикологическое исследование гексамидина и его метаболита фенобарбитала в биологических жидкостях и объектах, и на основе полученных результатов составление методических рекомендаций для использования лабораториями судебно-химической экспертизы.

Задачи исследования. Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

усовершенствование существующих и разработка новых оптимальных условий анализа гексамидина и фенобарбитала;

разработка новых и подбор существующих методов количественного определения гексамидина и фенобарбитала в малых количествах, пригодного для анализа в биологических объектах;

проведение сравнительного изучения наиболее часто используемых методов изолирования ядовитых веществ из трупного материала по отношению к гексамидину и фенобарбиталу;

изучение и разработка оптимальных условий экстракции гексамидина и фенобарбитала из крови, мочи, водных сред, промывных вод желудка и внутренних органов лабораторных животных;

гексамидин судебная химическая экспертиза

установление пригодности разработанных методик анализа при определении гексамидина и фенобарбитала, выделенного из вышеназванных объектов;

изучение распределения и накопления гексамидина и фенобарбитала во внутренних органах лабораторных животных при острых отравлениях;

изучение сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в биологических объектах животного и растительного происхождения, а также факторов, влияющих на этот процесс;

подготовка методических рекомендаций для внедрения в практику судебно-химических отделов Главного и областных бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РУз.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования являются противосудорожный препарат гексамидин и его метаболит фенобарбитал. Предметом исследования являются биологические объекты: печень, почки, желудок с содержимым и др., а также биологические жидкости: кровь, моча, промывные воды желудка.

Методы исследования. Систематические и химико-токсикологические исследования гексамидина и фенобарбитала проведены физико-химическими методами - тонкослойной хроматографией (ТСХ), УФ-, ИК-спектрофотометрией, термодесорбционной поверхностно-ионизационной спектроскопией (ТДПИС), высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), газ-хромато-масс спектрометрией (ГХ-МС).

Основные положения, выносимые на защиту:

результаты исследований по разработке методов экстракции гексамидина и фенобарбитала из водной среды, биологических жидкостей и биологических объектов;

результаты разработок новых методов идентификации гексамидина и фенобарбитала, рекомендуемых для проведения химико-токсикологического анализа;

методы количественного определения гексамидина и фенобарбитала, выделенных из биологических материалов;

результаты изучения распределения, накопления и сохраняемости гексамидина и его метаболита фенобарбитала во внутренних органах лабораторных животных;

Научная новизна. Разработанные методы обнаружения гексамидина и фенобарбитала являются пригодными для судебно-химического анализа биологических объектов.

Разработаны оптимальные условия качественного определения как чистого, так и изолированного из биологических объектов гексамидина и фенобарбитала методами ТСХ, УФ и ИК спектрофотометрии, ГХ-МС, рекомендуемыми для использования в судебно-химической практике.

Для качественного и количественного определения гексамидина и фенобарбитала, выделенных из биологических объектов, предложена современная методика анализа высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Для обнаружения в химико-токсикологических объектах токсических веществ впервые был предложен термосорбционный поверхностно - ионизационный спектроскопический метод анализа, основанный на измерении поверхностной ионизации гексамидина и фенобарбитала.

С целью установления оптимальных условий выделения гексамидина и фенобарбитала из жидкой среды была подробно изучена экстракция гексамидина и фенобарбитала органическими растворителями и влияние на этот процесс различных факторов.

На основе проведённых исследований предложены оптимальные методы изолирования гексамидина и фенобарбитала из органов трупов и биологических жидкостей.

Изучено ориентировочное распределение гексамидина и фенобарбитала в органах лабораторных животных, отравленных этим препаратом, а также сроки сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в биоматериале при его гниении в обычных условиях и влияние консерванта на этот процесс.

Научная и практическая значимость результатов исследования.

Разработанные методы выделения гексамидина и фенобарбитала из биологического материала, а также методы идентификации и количественного определения препарата могут быть использованы в практике судебно-химических лабораторий.

В результате изучения сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в биологических объектах установлены сроки проведения судебно-химических и химико-токсикологических экспертиз при острых отравлениях гексамидином и фенобарбиталом.

По результатам химико-токсикологического исследования гексамидина и фенобарбитала и на основании экспериментальных данных составлены методические рекомендации: "Выделение и анализ гексамидина и его метаболита фенобарбитала из биологических жидкостей", одобренные Главным бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РУз и утвержденные Ученым медицинским советом МЗ РУз (2008 г.); а также информационное письмо "Выделение из биологических жидкостей гексамидина и его метаболита фенобарбитала и анализ методами газ-хромато-масс спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии" (2008 г.), одобренные Главным бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РУз (2006 г.).

Реализация результатов. Разработанные методические рекомендации об изолировании, обнаружении и определении гексамидина и фенобарбитала при судебно-химических исследованиях внедрены в практику судебно-химических отделов Бюро судебно-медицинской экспертизы Республики и областей Узбекистана.

Вышеуказанные работы также внедрены в учебный процесс кафедры токсикологической химии Ташкентского фармацевтического института.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на: научно-практических конференциях Ташкентского педиатрического медицинского института "Современные аспекты судебно-медицинской экспертизы и криминалистики", Республиканской научно-практической конференции (Ташкент, 2006 г.); Республиканской научно-практической конференции аспирантов, докторантов и соискателей, организованной Министерством высшего и среднего специального образования (Ташкент, 2007 г.); научно-практической конференции "Интеграция образования, науки и производства в фармации", посвященной 70-летию Ташкентского фармацевтического института (Ташкент, 2007 г.); ХV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2008 г.); заседании кафедры токсикологической химии Ташкентского фармацевтического института (протокол № 13 от 5 мая 2008 г.); научном семинаре Ташкентского фармацевтического института (протокол №14 от 12 мая 2008 г.); расширенном заседании ученого совета Государственного Центра экспертизы и стандартизации лекарственных средств МЗ РУз (протокол №3 от 23 мая 2008 г.).

Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 12 работ: в том числе 5 научных статей, 5 тезисов докладов, 1 методические рекомендации и 1 информационное письмо.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 24 рисунками и 33 таблицами; состоит из введения, обзора литературы, шести глав экспериментальной части, общих выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 160 источников.

Основное содержание диссертации

Во введении отражены актуальность, научная новизна, научная и практическая значимость работы, цель и задачи исследований, сведения об апробации работы и положения, выносимые на защиту.

В первой главе изложены общие сведения о гексамидине и фенобарбитале, их использовании и токсикологическом значение, фармакокинетика в организме и метаболизм. Детальное изучение литературы показало, что методы экстракции и анализа гексамидина и фенобарбитала из различных объектов были изучены не достаточно четко для проведения токсикологического анализа. Исходя из вышеизложенного, основной целью настоящих исследований явилось выделение гексамидина и фенобарбитала из различных биологических объектов, изыскание оптимальных условий проведения анализа и разработка методов анализа.

В первой главе приведены общие сведения о гексамидине и фенобарбитале: фармакологические свойства и токсичность, фармакокинетика и метаболизм в организме, физико-химические свойства, методы анализа, а также судебно-медицинское и токсикологическое значение. Тщательное изучение литературных данных показало, что существующие методы анализа гексамидина и фенобарбитала в различных объектах являются разрозненными и не систематизированными.

Участившиеся случаи отравлений и отсутствие достаточно надежных методов его химико-токсикологического исследования явились основанием для разработки методики исследования объектов биологического происхождения на наличие гексамидина и фенобарбитала. Результаты этих исследований нашли отражение в последующих главах.

Во второй главе приведены результаты разработки условий качественного обнаружения гексамидин и фенобарбитала с помощью методов ТСХ, УФ-, ИК - спектрофотометрии, ТДПИС, ВЭЖХ, ГХ-МС, пригодных для химико-токсикологического анализа.

Гексамидин и фенобарбитал были выявлены методом ТСХ в оптимальных условиях. На пластинке с сорбентом марки “Силуфол УФ 254" и в системе, состоявшей из смеси этилового спирта-хлороформа-бензола (1: 1: 4) были получены хорошие результаты. Для обнаружения объекта был использован реактив 0,05 % раствор бром фенола синего, при этом гексамидин показал Rf=0,49-0,51 (чувствительность 1,0 мкг), а фенобарбитал в этих условиях показал Rf=0,70-0,72 (чувствительность 1 мкг). Это доказывает, что выработанные методики пригодны для исследования биологическогих объектов.

Разработаны оптимальные условия проведения УФ-спектрофотометрического метода анализа гексамидина. При этом было доказано, что максимум светопоглощения 95% спиртового раствора гексамидина в УФ спектре происходит при длине волны 258 нм.

Проведенными ИК-спектроскопическими методами анализа гексамидина и фенобарбитала, доказано что препаратам гексамидина свойственно светопоглощение при 3201, 2881, 1706, 1661, 1488, 1116, 755, 511 см^-1, а для фенобарбитала при 3303, 3079, 1767, 1711, 1381, 1294, 832, 766, 491 см^-1. Установлено соответствие по количеству, интенсивности и общему виду полос поглощения ИК-спектров образцов гексамидина и фенобарбитала, выделенных из биологического объекта и очищенных методом ТСХ, чистым образцам препаратов.

Впервые для обнаружения гексамидина и фенобарбитала применен метод термодесорбционной поверхностно-ионизационной спектроскопии с помощью индикатора ПИИ-Н-С "Искович-1". Указанный прибор разработан и изготовлен в институте электроники им. У.А. Арифова АН РУз. Данный индикатор предназначен для обнаружения минимальных количеств (следов) наркотических веществ в пробах мочи, крови и трупном материале. Этим прибором, начиная с 2006 года, оснащено большинство судебно-химических лабораторий республики. Сущность метода заключается в температурно-программируемом режиме испарения молекул искомых веществ в экстрактах биопроб с последующим поступлением их в детектор поверхностной ионизации, сигналы которого регистрируются в виде термодесорбционных спектров. Качественное определение веществ (стандартный метод)

проводится по эффективной температуре десорбции. Идентификацию спектров гексамидина и фенобарбитала, изолированных из биологической пробы, сравнивали с эталоном спектров банка данных компьютера (Рис.1).

Рис.1. ТДПИ спектры: А - 1-нативного гексамидина, 2-гексамидина, выделенного из мочи, 3 - гексамидина, выделенного из крови; В - 1 - нативного фенобарбитала, 2 - фенобарбитала, выделенного из мочи, 3 - фенобарбитала, выделенного из крови.

При этом было доказано, что характерные для гексамидина пики обнаружены при ~205±10⁰С и ~298±10⁰С, а для фенобарбитала соответствуют ~155±10^о С и ~363±10^о С значениям графика.

Для обнаружения гексамидина и фенобарбитала, изолированного из трупного материала разработан метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены взаимосвязанные оптимальные параметры и условия хроматографирования: колонка, наполненная обращенно-фазным сорбентом марки Zorbax Eclipse XDB C-18 размером частиц 3,5 мкм. Размер колонки 150х3 мм, детектирован при 258 нм. В качестве подвижной фазы была использована смесь ацетонитрил - вода (20: 80). Скорость потока подвижной фазы - 0,75 мл/мин. Объем вводимой пробы - 20 мкл. В этих условиях гексамидин и его метаболит фенобарбитал идентифицировали по характерному значению времени удерживания, равному 2,64 и 7,41 минут. Хроматограмма, полученная в этих условиях, представлена на рис.2.

Рис.2. Хроматограмма гексамидина и фенобарбитала, полученная методом ВЭЖХ: А1 - нативного гексамидина и Б1 - гексамидина, выделенного из биологического объекта; А2 - нативного фенобарбитала и Б2 - фенобарбитала, выделенного из биологического объекта.

Как показано на хроматограмме, приведённой на рисунке 2, при рекомендуемых условиях было достигнуто разделение гексамидина и фенобарбитала. Образование соответствующих пиков позволит в последующем качественно идентифицировать гексамидин и его метаболит фенобарбитал при выделении их из биологических объектов.

Разработана методика определения гексамидина и фенобарбитала методом ГХ-МС на приборе HP GC/MC 6890 фирмы Hewlett-Packard. В результате проведенных исследований рекомендованы следующие условия анализа гексамидина и фенобарбитала: металлическая капиллярная колонка размером 30 м х 0,25 мм, внутренняя поверхность, которой покрыта 5% метилфенилсилоксаном. Температура инжектора - 280⁰ С; температура термостата колонки программирована от 150 до 280⁰ С, скорость 15⁰ С/мин; газ - носитель - гелий, скорость его составляла 3,2 мл/мин. Энергия ионизации на масс-спектре - 70 эВ; объем вводимой пробы - 1 мкл; продолжительность анализа - 15 мин.

При помощи образовавшихся частичек ионов была доказана возможность определения структуры строения гексамидина и фенобарбитала. При указанных условиях хроматографирования время удерживания для гексамидина составило 12,2 минуты, а для фенобарбитала - 9,6 минуты. Также было отмечена идентичность времени удерживания растворов гексамидина и фенобарбитала, выделенных из биологических объектов и очищенных от балластных веществ, с временем удерживания рабочих растворов стандартных образцов при хроматогрфировании ГХ-МС методом (рис.3.).

Рис.3. Хроматограмма гексамидина и фенобарбитала, изолированного из биологической пробы, полученная методом ГХ-МС.

Затем был проведён масс-спектрофотометрический анализ для образовавшихся пиков. При этом было установлено соответствие ионов (частицы ионов с массой 218; 190; 161; 146; 117; 103; 91; 77; 51 m/z) и для второго пика. Также было определено соответствие других ионов (частицы ионов с массой 232; 204; 161; 146; 117; 103; 91; 77; 51 m/z) для первого пика. При сопоставлении хроматограммы и масс спектров гексамидина и фенобарбитала, полученных в ходе исследований, с банком данных компьютера было подтверждено соответствие строения идентифицированных веществ со структурой гексамидина и фенобарбитала.

В третей главе диссертации приведены результаты количественного определения гексамидина и фенобарбитала, проведённые методом УФ-спектрофотометрии, ТДПИС и ВЭЖХ. Эти методы широко применяются при судебно-медицинской экспертизе. Экспериментальные данные точны и достоверны.

Разработаны условия для проведения УФ-спектрофотометрического метода анализа гексамидина. Максимальные длины волны поглощения УФ-лучей являются его относительными (Е^1%_1см=11,24) и молярными (е=245,31) показателями свето - поглощения. В условиях опыта диапазон определения гексамидина составил 0,1-0,8 мг/мл.

Разработаны условия количественного определения гексамидина и фенобарбитала методом ТДСИС. Количественное содержание гексамидина определяли в соответствии с калибровочным графиком, составленном на основе определения образцов стандартных растворов (из расчёта пиков при ~205±10⁰ С). Как показывают результаты экспериментов, приведенных на графике, диапазон исследований составил 50 - 300 нг, а точность определений - 20 нг. Количественное содержание метаболита фенобарбитала определяли по калибровочному графику, построенному в соответствии с показателями концентрированных растворов стандартных образцов (из расчёта пиков ~363±10⁰С), в диапазоне 50 - 300 нг, чувствительность составила 50 нг.

Были разработаны условия проведения анализов количественного содержания гексамидина и фенобарбитала методом ВЭЖХ. При этом пользовались условиями, разработанными для качественного анализа гексамидина и фенобарбитала методом ВЭЖХ. На основе проведённых исследований строили график зависимости концентрации раствора от площади поверхности, который был составлён для определения гексамидина в диапазон 0,5-50 мкг и чувствительность 0,25 мкг, а для фенобарбитала - диапазон 0,2 - 20 мкг и чувствительность 0,1 мкг.

Разработанные методы установление количественного содержания гексамидина и фенобарбитала были использованы для определении препаратов, выделенных из биологических объектов. Были получены положительные результаты.

Четвёртая глава диссертации посвящена разработке оптимальных условий экстрагирования гексамидина и фенобарбитала из раствора, биологических жидкостей и изучению факторов, влияющих на процесс экстракции, а также способам очистки от соэкстрактивных веществ, отделяющихся при выделении из биологической жидкости и биологического объекта. При выделении гексамидина и фенобарбитала из раствора изучали следующие факторы, определяющие процесс экстракции: природу органического раствора, показатели рН раствора, число экстракций, действие электролитов. При показателе рН среды 1,68 использовали в качестве экстрагента хлороформ и при проведении трёхкратной экстракции выход гексамидина составил 91,84%, а выход фенобарбитала - 92,83%. Электролиты натрия хлорида и аммония сульфата на процесс экстракции существенного влияния не оказали.

Для очистки от соэкстрактивных (балластных) веществ, выделенных из биолигических жидкостей и биологических объектов вместе с гексамидином и фенобарбиталом, был рекомендован метод тонкослойной хроматографии, где в качестве элюента использовали этиловый спирт по 5 мл при четырёхкратной элюации. При очистке методом колоночной хроматографии рекомендовано использование в качестве сорбента силикагель марки КСК, а для трёхкратной повторной элюации - этиловый спирт по 50 мл.

Были апробированы условия выделения гексамидин и его метобалита фенобарбитала из биологических жидкостей (крови, мочи и промывных вод желудка). При этом из модельных объектов выделяли следующие количества гексамидина: из крови - 64,02%, мочи - 77,90%, промывных вод желудка - 71,66%, а фенобарбитала, соответственно, 69,76%, 82,08% и 78,74%, (таблица 1).

Таблица 1. Результаты, полученные при экстракции биожидкостей гексамидина и фенобарбитала

Пятая глава диссертации посвящена вопросам выделения гексамидина и фенобарбитала из различных биологических объктов. В связи с этим, при выделении из биологических объектов гексамидина и фенобарбитала пользовались общими методами выделения органических ядовитых веществ, предложенными А.А. Васильевой, В.Ф. Крамаренко и Стаса-Отто. Результаты исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты определения гексамидина и фенобарбитала в биологических объектах общими методами

Совместное выделение гексамидина и фенобарбитала в достаточном количестве при использовании общих методов не представлялось возможным, поэтому для выделения препаратов из биологических объектов был разработан ацетонно-водный метод. Результаты исследований приведены в таблице 3.

Таблица 3. Результаты изолирования гексамидина и фенобарбитала из биологического объекта ацетонно-водным методом

При использовании этого метода было выделено 47,34% гексамидина при относительной ошибке метода 6,44%. Количество выделенного фенобарбитала составило 52,10% при относительной ошибке 6,78%.

Рис. 4. Схема получения гексамидина и фенобарбитала из биологического объекта ацетонно-водным методом

Шестая глава диссертации посвящена исследованиям по распределению гексамидина и его метаболита фенобарбитала во внутренних органах экспериментальных животных, а также вопросам сохраняемости препаратов в различных объектах.

Результаты исследований приведены в таблице 4.

Таблица 4. Распространение гексамидина и его метаболита фенобарбитала во внутренних органах подопытных животных

При остром отравлении гексамидином большое количество препарата было обнаружено в желудочно-кишечном тракте, печени, крови и моче. Для проведения судебно-медицинской экспертизы при отравлениях гексамидином рекомендуется изымать для пробы образцы крови, мочи, промывных вод желудка, а в случаях смерти - части печени, желудка и кишечника, а также кровь и мочу.

Изучены сроки сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в составе биологических объектов. Вследствие гниения биологического объекта количество гексамидина и фенобарбитала постепенно уменьшается. Консервация биологического объекта 95% этиловым спиртом замедляет процесс снижения количества гексамидина и фенобарбитала. На основе проведённых исследований можно заключить, что гексамидин и фенобарбитал в образцах, подвергшихся гниению, сохраняется в течение 300 дней, а в консервированных образцах этот срок составляет 365 дней. Это является важным фактором для проведения судебно-химических исследований.

Общие выводы

1. Для идентификации гексамидина и фенобарбитала усовершенствованы существующие и разработаны новые методики ТСХ, УФ - и ИК - спектрофотометрии, термодесорбционной поверхностно-ионизационной спектроскопии (ТДПИС), ВЭЖХ, в том числе и газо хромато-масс спектрометрии. Определена специфичность разработанных методов, а также пригодность для определения гексамидина и его метаболита фенобарбитала, выделенных из различных объектов.

2. Для количественного определения гексамидина и фенобарбитала при исследовании судебно-химических объектов предложены УФ-спектрофотометрический, ТДСИС и ВЭЖХ методы.

3. Изучены факторы, влияющие на условия выделения гексамидина и фенобарбитала из растворов. При этом установлено, что при показателе среды рН, равном 1,68 и при использовании в качестве экстрагента хлороформа, а также при трёхкратном экстрагировании возможное количество экстракционного гексамидина достигало 91,84%, а фенобарбитала - 92,83%. Электролиты натрия хлорида и аммония сульфата на процесс экстракции существенного влияния не оказывалы.

4. Для очистки гексамидина и фенобарбитала, выделенных из биологических объектов, от соэкстрактивных (чужеродных) веществ были предложены методы ТСХ и колоночной хроматографии.

5. Апробированы разработанные условия выделения гексамидина и фенобарбитала из биологических жидкостей (кровь, моча и промывные воды желудка). При этом из модельных объектов экстрагировано следующее количество гексамидина: из крови - 64,02%, из мочи - 77,90%, из промывных вод желудка - 71,66%, а фенобарбитала выделено - 69,76%, 82,08% и 78,74%, соответственно.

6. Был разработан ацетонно-водный метод извлечения гексамидина и фенобарбитала из биологических объектов, при этом было экстрагировано 47,34% гексамидина из биообъекта. Относительная ошибка составила 6,44%. Количество экстрагированного фенобарбитала составило 52,10%, при относительной ошибке 6,78%.

7. Изучено распределение гексамидина и фенобарбитала во внутренних органах лабораторных животных при острых отравлениях. Большое содержание гексамидина было отмечено в желудочно-кишечном тракте, печени, в крови и моче. При отравлении гексамидином рекомендовано взятие для анализа проб крови, мочи, промывных вод желудка для проведения судебно-химической экспертизы. При летальном исходе рекомендуется взятие проб печени, кусочков желудка и кишечника, кровь и мочу.

8. Изучен срок сохраняемости гексамидина и фенобарбитала в биологических объектах. При гниение биологического объекта в течение девять месяцев содержание гексамидина составляло 18,65%, а фенобарбитала - 35,4%. При консервировании биологического объекта в 95% этиловом спирте содержание гексамидина в течение девяти месяцев составляло 29,6%, а фенобарбитала - 46,4%.

9. На основе полученных результатов были составлены методические рекомендации и информационное письмо для внедрения в практику судебно-химических отделов Главного и областных бюро судебно-медицинской экспертизы МЗ РУз.

Список опубликованных работ

1. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А. Гексамидиннинг юп?а ?атламли хроматография усулида та?лилини ўрганиш // Farmatsevtika jurnali. - Тошкент, 2005. - №2. - Б.17-19.

2. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А., Ё?убов Ж.А. УБ - спектрофотометрия усулда гексамидиннинг ми?дорий та?лилини ўрганиш // Farmatsevtika jurnali. - Тошкент, 2005. - №4. - Б.42-43.

3. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А., Сафарова Д.Б. Гексамидинни хроматоспектрофотометрик усулида та?лилини ўрганиш // Farmatsevtika jurnali. - Тошкент, 2006. - №3. - Б.32-34.

4. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А. Биологик объект таркибидаги гексамидинни та?лил усулини ўрганиш // Тошкент педиатрия тиббиёт институтининг “Современные аспекты судебно-медицинской экспертизы и криминалистики” мавзусидаги Республика илмий-амалий анжумани материаллари. - Тошкент, 2006. - Б.216-217.

5. Жалилов Ф.С. Суд-кимё амалиёти учун гексамидинни биологик ашёвий далиллардан ажратиб олиш ва та?лил усулларини яратиш // Олий ва ўрта махсус таълим вазирлиги томонидан ташкил этилган аспирант, докторант ва тад?и?отчиларнинг Республика илмий - амалий анжумани маърузалар тўплами материаллари. - Тошкент, 2007. - Б.260-262.

6. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А. Биологик сую?лик (?он) таркибидаги гексамидинни термодесорбцион сирт ионлашув спектроскопия усулида та?лили // Тошкент фармацевтика институтининг 70-йиллигига ба?ишланган "Фармацияда таълим, фан ва ишлаб чи?ариш интеграцияси" мавзусидаги илмий-амалий анжумани материаллари. - Тошкент, 2007. - Б.132.

7. Термосорбцион сирт ионлашув спектроскопия усулида пешоб таркибидаги фенобарбитални та?лил ?илиш / Жалилов Ф.С., Тожиев М.А., Ахмаджонов И. ?., Мадгазина М.А. // Тошкент фармацевтика институтининг 70-йиллигига ба?ишланган "Фармацияда таълим, фан ва ишлаб чи?ариш интеграцияси" мавзусидаги илмий-амалий анжумани материаллари. - Тошкент, 2007. - Б.133.

8. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А. Термодесорбцион сирт ионлашув спектроскопия усулини гексамидин та?лилида ?ўллаш // Farmatsevtika jurnali. - Тошкент, 2007. - №4. - Б.47-50.

9. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А. Биологик сую?ликлардан гексамидин ва унинг метаболити фенобарбитални ажратиб олиш ва та?лил ?илиш: услубий тавсиянома. - Тошкент, 2008. - 12 б.

10. Биосую?ликлар таркибидаги фенобарбитални термодесорбцион сирт ионлашув спектроскопия усулида та?лилини ўрганиш / Ф.С. Жалилов, М.А. Тожиев ва бош?. // Farmatsevtika jurnali. - Тошкент, 2008. - №1. - Б.23-25.

11. Жалилов Ф.С., Тожиев М.А., Ахмаджонов И. ?. Биологик ашёлардан гексамидин ва фенобарбитални ажратиб олиш ?амда газ-хромато-масс спектрометрия ва ю?ори самарали сую?лик хроматография усулларида ани?лаш: информацион хат. - Тошкент, 2008. - 8 б.

12. Жалилов Ф.С., Таджиев М.А. Сравнительная оценка методов изолирования гексамидина из биологического материала // XV Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. - М., 2008. - С.622.

Размещено на Allbest.ru