Влияние химио- и пробиотических препаратов на белково-азотистый обмен и глюконеогенную функцию печени кроликов, больных эймериозом

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

ВЛИЯНИЕ ХИМИО-И ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА БЕЛКОВО-АЗОТИСТЫЙ ОБМЕН И ГЛЮКОНЕОГЕННУЮ ФУНКЦИЮ ПЕЧЕНИ КРОЛИКОВ, БОЛЬНЫХ ЭЙМЕРИОЗОМ

Смутнев Петр Владимирович

03.00.19 - паразитология

Саратов - 2009

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор,

член-корреспондент, РАСХН

Ларионов Сергей Васильевич

доктор медицинских наук, профессор

Блинов Валерий Анатольевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Резяпкин Иван Николаевич

доктор биологических наук, доцент

Горбунов Александр Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится «9»июня 2009 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335

Автореферат диссертации разослан «___»__________2009 г. и размещен на сайте университета www.sgau.ru

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» ученому секретарю диссертационного совета

Ученый секретарь диссертационного совета Карпунина Л.В.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Эймериоз (кокцидиоз) широко распространен среди сельскохозяйственных животных и птицы. Частота эймериоза, например, у взрослых кур составляет 57,3%, у цыплят до 100% (Пашкин, 2006), а у кроликов - 93%-100% (Новинская, Давыдов, Красников, 1983; Кетема, 2008). Значительные потери в животноводстве от этой болезни происходят за счет высокой смертности, которая у кроликов может достигать 85% , а у цыплят - 100 %. Кроме того, больные животные существенно отстают в росте и развитии, а потеря живой массы у них составляет 12-30% (Новинская, Давыдов, Красников 1983; Кетема, 2008).

В процессе развития эймериоза у животных развивается дисбаланс белковых фракций крови, изменяется всасывание аминокислот, активность ферментов крови и желудочно-кишечного тракта, нарушается обмен липидов, своеобразные изменения претерпевает картина периферической крови (Новинская, Давыдов, Красников 1983; Хованских, 1984; Омаров, 1990; Литвинский, 1991).

Для лечения эймериоза с переменной эффективностью используются препараты следующих групп: сульфаниламиды (норсульфазол, сульфадимезин, сульфамонометоксин), нитрофураны (фурацилин, фуразолидон, фураклин), антибиотики (канамицин, тетрациклин, хлорамфеникол). Подобный значительный арсенал лекарств косвенно свидетельствует о ещё недостаточной изученности этиологии, патогенеза и клиники эймериоза. Действительно, в литературе, например, отсутствуют данные о влиянии эймериоза на такие специфические функции печени как глюконеогенная и мочевинообразовательная, которые интегрируют обмен аминокислот, углеводов и липидов. Нет сведений о влиянии лекарственных препаратов, применяемых для лечения эймериоза, в частности кроликов, на указанные функции печени. Между тем выяснение функционального состояния печени позволит, на наш взгляд, наметить новые пути патогенетически обоснованной коррекции обмена веществ и терапии животных, больных эймериозом, что является весьма актуальной задачей современной ветеринарии.

Цель работы состояла в изучении влияния препаратов химиотерапевтического и пробиотического генеза на динамику белково-азотистого, углеводного обмена, глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени кроликов разного возраста, больных эймериозом.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить в возрастном аспекте сдвиги белково-азотистого и углеводного обмена у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возраста.

2. Изучить состояние мочевинообразовательной и глюконеогенной функций печени у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возраста.

3. Оценить эффективность лечения кроликов, больных эймериозом, химиотерапевтическим (дитрим), и пробиотическими (ветом-1.1 и «Байкал ЭМ1») препаратами по состоянию метаболизма, глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени.

Научная новизна. Установлено, что эймериоз кроликов вызывает существенные нарушения обмена азотистых соединений и мочевинообразовательной функции печени. С возрастом в крови у больных животных возрастает содержание мочевины, усиливается распад аргинина, повышается активность аланинаминотрансферазы и аргиназы, что свидетельствует об усилении орнитинового цикла мочевинообразования. Впервые установлено, что у кроликов больных эймериозом для детоксикации аммиака в большей степени, чем в норме используется система глутаминовая кислота-глутамин.

У кроликов разного возраста, больных эймериозом, значительно усиливается глюконеогенная функция печени. Это проявляется в увеличении скорости глюконеогенеза, приросте глюкозы, образовавшейся из глицерина, снижении толерантности периферических тканей к глюкозе глюконеогенного генеза.

Установлено, что под влиянием химиотерапевтического препарата дитрим у больных животных разного возраста улучшается клиническое состояние, что прямо коррелирует с уменьшением числа ооцист в фекалиях. Препарат способствует нормализации белково-азотистого обмена и уменьшению интенсивности глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени. В результате лечения кроликов, больных эймериозом, пробиотическим препаратом ветом-1.1 в фекалиях у них полностью исчезают ооцисты, значительно улучшается клиническое состояние, восстанавливается нарушенный обмен азотистых и углеводных соединений, а также глюконеогенная и мочевинообразовательная функции печени. Полученные данные свидетельствуют о том, что ветом-1.1 является более эффективным средством для лечения эймериоза, чем дитрим. В то же время данные копрологического исследования и результаты биохимических исследований показали неэффективность препарата «Байкал ЭМ1» для терапии кроликов, больных эймериозом.

Практическая значимость. Материалы диссертационной работы значительно расширяют, углубляют и дополняют сведения о патогенезе и лечении эймериоза кроликов разного возраста, больных эймериозом. Результаты исследований, изложенные в диссертации, рекомендуются для использования в учебном процессе при изучении дисциплин «Паразитология», «Биохимия», «Клиническая биохимия», на курсах по повышению квалификации ветеринарных врачей, а также при написании учебников и учебных пособий.

Из трёх исследованных препаратов (дитрим, ветом-1.1, эффективные микроорганизмы) наиболее оправданным для терапии кроликов больных эймериозом является пробиотический препарат, полученный из Bacillus subtilis, что позволяет рекомендовать его хозяйствам для лечения указанного заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У кроликов разного возраста эймериоз вызывает значительные нарушения белково-азотистого обмена, а также глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени.

2. Химиотерапевтический препарат дитрим у кроликов, больных эймериозом, восстанавливает нарушенный метаболизм, специфические функции печени, существенно уменьшает число ооцист в организме.

3. Лечение эймериоза кроликов пробиотическим препаратом ветом-1.1 полностью избавляет кроликов от ооцист эймерий, нормализует обмен белково-азотистых соединений, синтез глюкозы de novo и мочевинообразовательную функцию печени.

Апробация работы. Основные материалы исследований были представлены на: Всероссийских научно - практических конференциях «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных» (г. Саратов, 2007 и 2008г.г.); Всероссийских научно - практических конференциях «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (г. Саратов 2006, 2007 и 2008г.г.); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 119-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова (г. Саратов, 2006г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова (г. Саратов, 2007г.), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития АПК» (г. Саратов, 2006г.); научно-практической конференции молодых учёных Приволжского федерального округа «Роль молодых учёных в реализации национального проекта «Развитие АПК» (г. Саратов, 2007г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского госагроуниверситета (г. Саратов, 2008г.); Международной научно-практической конференции, посвящённой 80-летию со дня основания биотехнологического факультета «Актуальные проблемы зоотехнии, биотехнологии, аквакультуры и биоэкологии» (г. Саратов, 2009г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, из них одна статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 217 наименования, из них 64 иностранных. Работа иллюстрирована 17 таблицами, 26 рисунками и изложена на 140 страницах компьютерного текста.

печень кролик лечение эймериоз

Собственные исследования

Материалы и методы исследований. Опыты проведены на 78 кроликах породы советская шиншилла в возрасте 2-х, 3-х и 6-ти месяцев. Животные выращивались и получены из СХПК «Тургеневское» Аткарского района Саратовской области. На производстве кролики в качестве корма получали овёс, подсолнечный жмых, комбикорм, травяную муку, морковь, картофель, кормовую капусту, траву, кормовые дрожжи и поваренную соль. Здоровые кролики были получены из фермерских хозяйств Саратовской области. В условиях нашей лаборатории животные находились на рационе вивария Саратовского ГАУ.

Сначала была определена распространённость эймериоза кроликов в СХПК «Тургеневское» Саратовского района. Диагноз устанавливали на основании учёта эпизоотических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и микроскопического исследования печени, тонкого и толстого кишечника. У всех обследованных кроликов обязательно исследовали фекалии на наличие ооцист эймерий по методу Фюллеборна.

Затем в динамике изучено состояние белково-азотистого обмена, мочевинообразовательной и глюконеогенной функций печени у здоровых кроликов разного возраста, и кроликов, больных эймериозом. В крови у них определено содержание общего белка на рефрактометре «RL2». Количественное определение мочевины в сыворотке крови проводили при помощи диагностического набора фирмы «Агат». (Данилова, 2000). Содержание аммиака и глутамина в сыворотке крови животных исследовали по методу А.И. Силаковой и др. (1962). Концентрацию орнитина и активность сывороточной аргиназы исследовали по методике В.А.Храмова и др., в основе которой лежит модификация нингидриновой реакции на орнитин Chinard (1952). Об активности аргиназы сыворотки крови судили по приросту орнитина. Содержание глюкозы в сыворотке крови определяли глюкозооксидазным методом при помощи набора реагентов «Фотоглюкоза» ООО «Импакт». (Камышников, 2000). Активность трансаминаз - аланинаминотрансфераза (АЛТ, КФ 2.6.1.2) и аспартатаминотрансфераза (АСТ, КФ 2.6.1.1) в сыворотке крови была определена модифицированным методом Райтмана-Френкеля с помощью наборов реагентов фирмы «Lachema». Измерения оптической плотности окрашенных растворов проводили на КФК-2-УХЛ 4,2 при длине волны 490 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 3 мм против холостой пробы. Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ, КФ 1.1.1.27) в сыворотке определяли оптимизированным кинетическим методом с помощью наборов реагентов фирмы «Витал Диагностик СПб», фотометрирование против воздуха при длине волны 365 нм, кювета - 1 см.

Глюконеогенная функция печени у кроликов оценивалась по методике Н.В. Блиновой (1988). Для этого у кроликов натощак определяли в сыворотке крови содержание глюкозы. Затем перорально им вводили глицерин, из расчёта 2 мл/кг живой массы, растворённый в равном по объёму количестве воды. После проведения такой нагрузки исследовали содержание глюкозы, образовавшейся из глицерина в сыворотке крови, через 1, 2 и 3 часа. На основании полученных результатов строили гликемические кривые, рассчитывали прирост глюкозы, образовавшейся в печени из глицерина за три часа, скорость глюконеогенеза и толерантность периферических тканей к глюкозе глюконеогенного генеза. Одновременно оценивали влияние перорального введения глицерина на сдвиги белково-азотистого обмена животных.

Терапевтическую эффективность дитрима по данным глюконеогенной и мочевинообразовательной функции печени определяли на кроликах трёх возрастных групп. Дитрим давали вместе с питьевой водой в дозе 1 мл/кг в течение 5 дней. Кровь и фекалии исследовали до и после лечения. Препарат «Байкал ЭМ-1» вводили перорально в дозе 0,2 мл/кг массы тела двухмесячным кроликам. Кровь из краевой вены уха, а также фекалии брали перед первым введением, далее через 10, 20 и 30 дней. Ветом-1.1 вводили согласно существующим наставлениям двухмесячным кроликам перорально в дозе 75 мг/кг массы тела. На протяжении всего опыта у этих кроликов исследовали фекалии на ооцисты эймерий.

Статистическую обработку данных осуществляли на персональном компьютере с помощью стандартного пакета статистических программ Microsoft Excel. Достоверность различий определяли методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (Петухов с соавт., 1996), различия считали достоверными при Р<0,05.

Распространённость эймериоза кроликов и возрастная динамика специфических функций печени

Нами была изучена распространённость эймериоза кроликов на базе СХПК «Тургеневское» Аткарского района Саратовской области. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Распространённость эймериоза у кроликов в зависимости от возраста

Возраст, месяцы	Число голов	Количество ооцист в 1г. фекалий	Р
2	35	20,0±0,57	-
3	19	54,7±3,65	<0,001
4-6	21	90,7±3,51	<0,001

Примечание: Р - по отношению к 2-х месячным кроликам.

Установлено, что это заболевание поражает 100% кроликов. Полученные данные позволяют считать, что с возрастом в организме кроликов число ооцист увеличивается: у трёхмесячных на 173,5% по сравнению с двухмесячными кроликами; а у шестимесячных ооцист почти в 4,5 раза больше, чем у двухмесячных животных. Иными словами, для указанного хозяйства нашей области характерна высокая заражённость кроликов. Это, видимо, связано с отсутствием соответствующих профилактических мероприятий и постоянным самозаражением животных.

Патоморфологически в печени у больных кроликов обнаруживаются ооцисты, поражение соединительной ткани в виде папилломоподобных выростов. Отмечены жировая дистрофия, лимфоидная инфильтрация и некроз в ткани печени. Патоморфологические изменения в кишечнике проявились в виде отёка, очагов некроза и лимфоидной инфильтрации ворсинок.

В дальнейшем было изучено состояние белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возраста (табл. 2).

Как видно из таблицы 2 в крови у здоровых кроликов к шестому месяцу несколько возрастает содержание общего белка, мочевины, аммиака, глутамина и орнитина соответственно на 3,7; 2,7;10,0; 50,0 и 4,6% по сравнению с двухмесячными животными. У этих кроликов с возрастом повышается и активность ферментов трансаминирования. Так, активность АСТ у шестимесячных кроликов была выше на 17,2%, а АЛТ - на 31,8%, чем у двухмесячных животных. Причём, у всех здоровых кроликов активность АСТ всегда превышала активность АЛТ. Исходя из этого, коэффициент де Ритиса (отношение АСТ/АЛТ) для здоровых кроликов 2, 3 и 6 мес. составил соответственно 1,44±0,02; 1,49±0,02 и 1,29±0,01. В противоположность этому, активность лактатдегидрогеназы у здоровых кроликов с возрастом практически не изменилась. Так, у молодняка в возрасте двух и трёх месяцев она была равна в среднем 1787±15,30 U/L и снижалась всего на 3,5% у шестимесячных. Полученные данные отражают особенность онтогенетического становления обмена веществ у здоровых животных.

Таблица 2

Сдвиги некоторых показателей крови у обследованных кроликов

Возраст, мес. Показатели
	2	3	6
Общий белок, г/л	68,66±0,21	68,88±0,20	71,28±0,31
	69,33±1,49	65,14±2,12	69,22±0,31
Мочевина, ммоль /л	6,22±0,02	6,28±0,01	6,39±0,03
	6,50±0,33	5,92±0,44	6,88±0,23*
Глутамин, мкмоль/л	0,02±0,01	0,02±0,001	0,03±0,01
	0,03±0,01*	0,03±0,01*	0,03±0,001
Аммиак, мкмоль/л	0,10±0,01	0,10±0,01	0,11±0,004
	0,11±0,01	0,09±0,01	0,12±0,01
Орнитин, мкмоль/л	5,45±0,04	5,50±0,01	5,70±0,02
	4,66±0,38*	5,21±0,26*	5,36±0,04*

Примечание: числитель - здоровые, знаменатель - больные кролики

* ? различия статистически достоверны по сравнению со здоровыми кроликами, 0,05<Р<0,001

Что касается больных кроликов, то в крови у них с возрастом по сравнению с контролем уменьшается содержание общего белка, особенно значительно у шестимесячных (Р<0,001) и, напротив, повышается уровень глутамина (2-3 месячные кролики) и мочевины (взрослые животные). Весьма существенно, что у больных животных всех возрастов содержание орнитина в крови всегда оказывалось статистически достоверно более низким (0,02>P<0,001), чем в контрольных группах кроликов, находившихся на частном подворье, и у которых эймерии в фекалиях отсутствовали. Активность аргиназы с возрастом у здоровых и больных кроликов повышается, однако у последних более значительно. Активность аргиназы у двух- и трёхмесячных больных кроликов была выше соответственно на 36,6% (Р<0,05) и 81,8% (Р<0,001), а у взрослых животных - на 16,6% (Р<0,05) по сравнению со здоровыми животными. У больных животных своеобразным образом изменялась активность и других ферментов крови. Установлено, что активность АСТ у больных кроликов была практически на том же уровне, что и у контрольных животных. В то же время активность АЛТ у больных животных всех возрастных групп была существенно выше, чем в контроле: у двухмесячных - на 106,8%, у трёхмесячных - на 127,3%, у взрослых - на 63,8%. В результате этого коэффициент де Ритиса у 2, 3 и 6-месячных больных кроликов был равен соответственно 0,71±0,05, 0,72±0,02, 0,78±0,02, т.е. по сравнению с нормой он уменьшился соответственно на 50, 51,7 и 39,5%. Как известно, аланинаминотрансфераза наиболее адекватно характеризует функциональное состояние печени. Повышение активности этого фермента у больных кроликов с большой долей достоверности свидетельствует о распаде гепатоцитов. Нами установлено также, что у этих животных с возрастом активность ЛДГ оказывалась ниже, чем у кроликов контрольной группы соответственно на 37,2%, 84,4% и 3,7%. Полученные данные отражают глубокие нарушения белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени у больных эймериозом кроликов разного возраста.

Далее нами была изучена глюконеогенная функция печени у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возраста. Как установлено, у здоровых кроликов уровень глюкозы в сыворотке крови натощак с возрастом снижается, в среднем на 21,6% (Р<0,001). Это оказалось характерно и для больных животных. Так, у больных эймериозом кроликов с возрастом содержание глюкозы в крови снижалось, в среднем на 22,6% (Р<0,001). Следовательно, возникает вопрос: за счет, каких механизмов у больных кроликов, несмотря на действие ооцист, концентрация глюкозы в крови поддерживается на уровне здоровых животных? Мы предположили, что это может быть связано с более усиленным глюконеогенезом у больных кроликов.

Для изучения глюконеогенной функции печени, нами использовалась нагрузка глицерином. Было установлено, что через один час после этой нагрузки содержание глюкозы в сыворотке крови здоровых животных всех возрастных групп достоверно повышается, т.е. глицерин у них эффективно трансформируется в глюкозу. Так, у двухмесячных животных контрольной группы уровень глюкозы в крови повысился на 4,5%, у трёхмесячных - на 7,3%, а у взрослых - на 4,7% (Р<0,05). В то же время у больных эймериозом кроликов через один час после перорального введения глицерина уровень глюкозы в крови оказался выше, чем в норме, соответственно по группам на 10,3; 13,2 и 11,9%. Значит, у больных кроликов синтез глюкозы из глицерина оказывался более интенсивным, чем у здоровых животных. Через 2 часа после введения глицерина у животных контрольной группы уровень глюкозы в крови начинал снижаться, а у больных животных содержание глюконеогенной глюкозы всё ещё оставалось повышенным. Это повышение у больных двухмесячных кроликов составило 8,8%, а у трех- и шестимесячных соответственно 16,3 и 13,3%. К третьему часу исследования содержание новообразованной глюкозы крови у здоровых кроликов соответствовала исходному уровню, т.е. глюкоза полностью усваивалась в периферических тканях, в то время как у кроликов, больных эймериозом, возврат уровня глюкозы к тощаковому значению не наблюдался. Это отражает повышение порога чувствительности периферических тканей больных животных к глюкозе глюконеогенного генеза.

Данные гликемических кривых позволили нам рассчитать прирост новообразованной глюкозы, а также скорость глюконеогенеза (табл. 3). Эти параметры у здоровых животных были максимальными в возрасте двух месяцев, а потом они существенно снижались. У больных эймериозом кроликов прирост глюкозы de novo и скорость глюконеогенеза были выше, чем у животных контрольных групп. Так, прирост новообразованной глюкозы по возрастным группам был выше у больных, чем у здоровых животных в 3,9; 6,5 и 5,2 раза. Скорость глюконеогенеза же оказалась больше у двухмесячных больных кроликов в 4 раза, у трёх- и шестимесячных - в 6,8 и 5,4 раза соответственно. Итак, поддержание глюкозы в крови у больных кроликов на уровне здоровых обусловлено существенным напряжением (повышением) глюконеогенной функции печени. Как известно, нагрузка глицерином позволяет проявить в организме скрытые нарушения азотистого обмена. Исходя из этого, мы оценили сдвиги в крови содержания общего белка, метаболитов орнитинового цикла и системы глутаминовая кислота-глутамин, а также ферментов трансаминирования и ЛДГ через три часа после перорального введения глицерина. Установлено, что введение глицерина здоровым животным снижало у них в крови содержание мочевины, аммиака, глутамина и аргиназную активность. В то же время активность АЛТ и АСТ показала определённую резистентность к действию глицерина, причём она не уменьшалась, а возрастала. У больных эймериозом кроликов через три часа после введения глицерина уровень аммиака в крови повышается.

Интересно, что в ответ на прогрессирующую тенденцию к увеличению содержания токсичного аммиака в сыворотке крови у таких животных увеличивается уровень мочевины и глутамина. Однако, как показывает анализ, интенсивность системы глутаминовая кислота-глутамин и усиление мочевинообразовательной функции печени оказываются у больных кроликов недостаточными для эффективного обезвреживания аммиака.

Таблица 3

Расчетные показатели глюконеогенеза

Показатели	Возраст, мес.
	2	3	6
Прирост новообразованной глюкозы за три часа, ммоль/л, P	0,49±0,02	0,28±0,02	0,26±0,02
	1,91±0,02 <0,001	1,34±0,08 <0,001	1,83±0,06 <0,001
Скорость глюконеогенеза, ммоль/л/ч, Р	0,16±0,01	0,09±0,01	0,08±0,01
	0,64±0,01 <0,001	0,61±0,02 <0,001	0,49±0,04 <0,001
Толерантность периферических тканей к глюкозе, ммоль/л, P	-0,014±0,004	-0,016±0,002	-0,012±0,004
	0,023±0,003 <0,001	0,020±0,006 <0,001	0,020±0,006 <0,001

Примечание: числитель - здоровые, знаменатель - больные кролики, Р - по сравнению с контролем

Что касается исследованных нами ферментов, то активность аргиназы, лактатдегидрогеназы, аланинаминотрансферазы и аспартаминотрансферазы в крови больных кроликов после введения глицерина всегда оказывалась более высокой, чем у здоровых животных. Иными словами, нагрузка глицерином действительно позволила более отчётливо выявить сдвиги азотистого обмена и активности ферментов в крови кроликов, больных эймериозом.

Влияние дитрима и пробиотиков на белково-азотистый обмен кроликов больных эймериозом

Показано, что применение лекарственного препарата дитрим эффективно для лечения эймериоза кроликов различных возрастных групп. Действительно, после применения дитрима у большей части животных ооцисты в фекалиях отсутствовали полностью, а у остальных под микроскопом обнаруживались единичные ооцисты. Данные, полученные при исследовании сыворотки крови кроликов, больных эймериозом, до и после лечения представлены в таблице 4.

Таблица 4

Изменение некоторых показателей крови у кроликов после применения дитрима

Показатели	Возраст, мес.
	2	3	6
Общий белок, г/л	69,33±1,49	65,14±2,12	68,92±0,12
	67,76±0,57	68,56±0,31	68,92±0,12
Мочевина, ммоль/л	6,50±0,33	5,92±0,44	6,88±0,12
	6,82±0,19	6,86±0,08	6,88±0,12
Глутамин, мкмоль/л	0,03±0,01	0,03±0,01	0,03±0,01
	0,03±0,01	0,03±0,01	0,03±0,01
Аммиак, мкмоль/л	0,11±0,01	0,09±0,01	0,12±0,01
	0,10±0,01	0,12±0,01	0,12±0,01
Орнитин, мкмоль/л	4,66±0,38	5,21±0,26	5,36±0,44
	5,05±0,08	5,54±0,12	5,36±0,44
Аспартатаминотрансфераза, мммккат/л	0,62±0,04	0,72±0,14	0,74±0,01
мккат/л	0,71±0,02	0,68±0,01	0,74±0,01
Аланинаминотрансфераза, мккат/л	0,91±0,08	1,00±0,04	0,99±0,02
мккат/л	0,82±0,02	0,76±0,04	0,99±0,02
Аргиназа, мкмоль/0,1 мл	0,15±0,02	0,20±0,01	0,16±0,01
сыворотки крови	0,13±0,04	0,14±0,01	0,16±0,01
Лактатдегидрогеназа, U/L	1364±90,09	1193±18,72	1250±55,32
	1380±41,38	1210,60±9,01	1250±55,32

Примечание: числитель - данные до лечения, знаменатель - после лечения.

После лечения у двухмесячных кроликов содержание общего белка в крови несколько снизилось, на 2,3 %. В крови у них практически не изменялось содержание мочевины, глутамина аммиака и активность ЛДГ. В то же время концентрация орнитина в крови обследованных кроликов после лечения возросла на 8,3%. Это происходило на фоне снижения активности аргиназы на 13,3%. По нашему мнению, общая картина сдвигов азотистых фракций крови такова, что позволяет предположить о некотором улучшении мочевинообразовательной функции печени у двухмесячных кроликов, подвергнутых лечению дитримом.

Что касается активности трансаминаз, то здесь получены следующие данные. Активность АСТ в крови больных кроликов двухмесячного возраста после лечения повысилась на 6,9%. Иные данные были получены при исследовании активности АЛТ. Активность данного фермента в крови после применения препарата снизилась на 10% (Р<0,05). Естественно поэтому и коэффициент де Ритиса оказался выше, чем до лечения в среднем на 28,6% (Р<0,001).

У трёхмесячных кроликов после лечения содержание общего белка в крови повысилось на 5,3%, мочевины - на 15,9% (Р<0,05), а орнитина - на 6,3%. Уровень глутамина в крови у кроликов этой группы до и после лечения не изменялся. Можно предположить, что после лечения эймериоза дитримом у трёхмесячных кроликов обезвреживание аммиака происходит главным образом в орнитиновом цикле мочевинообразования. Однако такой механизм детоксикации аммиака оказывается недостаточным, ибо уровень аммиака в крови у них всё еще оставался высоким.

Что касается ферментов, то активность АСТ у этой группы снизилась всего на 5,6%. Как и у предыдущей возрастной группы, статистически достоверно изменялась после применения препарата активность АЛТ. Этот показатель снизился на 24% (Р<0,001). В результате подобного изменения трансаминаз коэффициент де Ритиса у подопытных кроликов оказался выше, чем у животных до лечения на 12,5%. Активность аргиназы после применения препарата снизилась на 30% (Р<0,001), а ЛДГ практически не изменилась.

У взрослых шестимесячных кроликов после лечения дитримом содержание общего белка и мочевины в сыворотке крови существенно не изменялось. Ряд других показателей - глутамин, аммиак, орнитин оставался на том же уровне, что и до лечения. Более лабильными в этом отношении оказались ферменты. Так, если активность АСТ в крови больных кроликов после лечения дитримом практически не изменялась, то активность АЛТ снизилась на 23,2% (Р<0,05), отражая улучшение состояния печени. В связи с изменением активности трансаминаз изменялся и коэффициент де Ритиса. У взрослых животных после лечения данный показатель оказался выше, чем у животных до лечения на 14,3%. В крови леченных дитримом кроликов активность аргиназы возросла на 25,0% (Р<0,05), а активность ЛДГ - на 6,8%.

Нагрузка глицерином позволила выявить дополнительные позитивные изменения в нарушенном метаболизме больных кроликов. У двухмесячных кроликов это выражалось в существенном снижении в крови содержания аммиака и повышении активности лактатдегидрогеназы; у трёхмесячных - в повышении уровня глутамина и снижении концентрации аммиака, а также в снижении активности ферментов, а у взрослых кроликов - в снижении концентрации глутамина и аммиака.

Ветом-1.1

Весьма эффективным препаратом для лечения кроликов, больных эймериозом, оказался ветом-1.1 (табл. 5). Уже через 10 дней после применения этого пробиотика общее состояние животных существенно улучшалось, число ооцист эймерий стало единичным, а через 15 дней ооцисты в фекалиях не определялись.

Таблица 5

Изменение некоторых показателей крови у двухмесячных кроликов после применения ветома-1.1

Показатели	До применения препарата	После лечения
Общий белок, г/л	68,24±0,25	70,30±0,28
Мочевина, ммоль/л	5,55±0,08	6,24±0,07
Глутамин, мкмоль/л	0,03±0,01	0,02±0,001
Аммиак, мкмоль/л	0,10±0,01	0,10±0,004
Орнитин, мкмоль/л	5,65±0,11	5,59±0,03
Аспартатаминотрансфераза, мккат/л	0,72±0,01	0,69±0,01
Аланинаминотрансфераза, мккат/л	0,98±0,07	0,77±0,01
Аргиназа, мкмоль/0,1 мл сыворотки крови	0,15±0,01	0.16±0,01
Лактатдегидрогеназа, U/L	1914,00±41,24	1611,00±18,13

Весьма важным, на наш взгляд, является возрастание концентрации мочевины в сыворотке леченых кроликов, на 11,7-22,3% (Р<0,05) по сравнению с больными животными, при нормальном уровне аммиака. Это позволяет считать, что у животных леченных ветомом-1.1, для обезвреживания аммиака ведущую роль, как и в норме, приобретает орнитиновый цикл мочевинообразования. При исследовании активности ферментов были получены следующие данные. Активность АСТ в сыворотке крови значительно не изменялась и была практически на том же уровне, что и у кроликов до лечения. Иные результаты были получены при определении активности АЛТ. Активность данного фермента снижалась через 10 дней на 14,3%, а через 20 и 30 дней - на 21,4% (Р<0,05).

Полученные результаты могут свидетельствовать о благоприятном влиянии исследованного препарата на восстановление структуры и функций печени. Вследствие изменения активности аланинаминотрансферазы изменялся и коэффициент де Ритиса. Данный показатель повышался и к 30-му дню исследований был выше, чем у больных

нелеченых животных на 14,9%. Активность аргиназы в сыворотке крови на протяжении всего исследования, оказывалась выше, чем у кроликов без лечения: через 10 и 20 дней после начала применения препарата на 13,3%, а через 30 дней - на 6,7%. В то же время активность ЛДГ у этих животных была ниже по дням эксперимента соответственно на 12,5%, 16,6 и 15,8%.

Позитивное терапевтическое действие ветома-1.1 на кроликов, больных эйме-риозом, показала и глицериновая нагрузка. Так, после введения глицерина концентрация мочевины в сыворотке крови у леченых животных оказалась выше по дням эксперимента на 12,2%, 8,3 и 6,1% соответственно. У них снизился уровень аммиака, к 30-му дню на 27,3% (Р<0,001). Указанная нагрузка способствовала, по сравнению с больными нелечеными животными, повышению активности в сыворотки крови АСТ по дням эксперимента на 5,3%, 17,3 и 20% (Р<0,05), тогда как активность АЛТ, напротив, снижалась соответственно на 10,4%, 18,8 и 16,7%. Активность аргиназы после глицериновой пробы в ходе применения препарата изменялась у животных неоднозначно. Через 10 и 20 дней она была выше на 12,5%, а через 30 дней оказалась уже ниже на 6,3% по сравнению с нелечеными кроликами. Активность ЛДГ у леченых животных после нагрузки глицерином снижалась соответственно на 12,1%, 16,4 и 15,5% по сравнению с больными нелечеными животными.

Препарат эффективных микроорганизмов

Что касается второго использованного нами пробиотического препарата «Байкал ЭМ1», то его введение его кроликам двухмесячного возраста даже в течение 30 дней было неэффективным. В самом деле, число ооцист в фекалиях этих животных на протяжении эксперимента увеличивалось. Общее состояние подопытных кроликов ухудшалось, не исчезала диарея и желтушность слизистых оболочек. Они были вялые, аппетит снижен. У таких кроликов в сыворотке крови концентрация общего белка, орнитина, аммиака, а также активность АСТ, ЛДГ и аргиназы существенно не отличались от значений больных животных. В то же время активность АЛТ под влиянием ЭМ-препарата была выше, чем у больных кроликов до лечения: на 10-ый день исследований на 20,7% (Р<0,025), а на 20-ый и 30-ый дни - на 13,0 и 17,4% соответственно. У кроликов этой группы, леченных ЭМ-препаратом, повышалось в крови содержание глутамина и мочевины, отражая способность эффективных микроорганизмов повышать в организме подопытных кроликов активность систем, направленных на снижение уровня аммиака.

Изменение глюконеогенной функции печени у кроликов, больных эймериозом, под влиянием химио- и пробиотических препаратов

Нами установлено, что после лечения дитримом у кроликов во всех возрастных группах уровень глюкозы натощак снижается. Причём, если у двухмесячных, всего на 1,1%, то у 3-х и 6-ти месячных - на 7,5 и 7,6% соответственно. Почасовые изменения концентрации глюкозы в крови больных животных после введения глицерина соответствовали здоровым кроликам. Интересно, что через два часа после введения глицерина уровень глюкозы в крови у больных нелеченых кроликов всех возрастных групп повышался. После применения препарата концентрация глюкозы в крови у больных кроликов, как и у здоровых животных, снижалась, соответственно у 2, 3, и 6-ти месячных кроликов на 3,6% 5,2%, 4,3% (Р<0,025). Через три часа после введения глицерина уровень глюкозы в крови у леченых кроликов оказывался лишь незначительно выше, чем в тощаковых фракциях. Полученные результаты свидетельствуют о том, что дитрим, по данным гликемических кривых, оказывает отчётливое позитивное влияние на динамику глюкозы в крови у животных с эймериями (рис. 1).

Что же касается показателей глюконеогенеза, то здесь получены следующие данные. Прирост новообразованной глюкозы у животных после лечения значительно снижался. Этот показатель оказался ниже, чем до лечения у двухмесячных кроликов в 2,5 раза (Р<0,001), у трёх- и шестимесячных в 2,9 и в 5,1 раза соответственно. Аналогичные данные были получены нами при расчёте скорости глюконеогенеза. Так, у двухмесячных кроликов после лечения дитримом данный показатель снизился, по сравнению с больными животными в 2,6 раза, у трёхмесячных кроликов и взрослых животных - в 4,1 раза. Толерантность периферических тканей к глюкозе у этих животных оказалась ниже, чем у больных кроликов всех возрастных групп почти в 2 раза. Полученные данные подтверждают благоприятное действие дитрима не только на белково-азотистый обмен, но и на глюконеогенную функцию печени больных кроликов.



Рис. 1. Изменение содержания глюкозы в крови кроликов после нагрузки глицерином (дитрим) Примечание: 1 - до лечения, 2 - после лечения. А - 2 месяца; Б - 6 месяцев. По оси ординат - глюкоза, ммоль/л, по оси абсцисс - время в часах. Стрелка - введение глицерина. Вертикальные линии - доверительные интервалы средней

Рекомбинантный препарат ветом-1.1 ещё более значительно улучшал глюконеогенную функцию печени у больных кроликов. Так, у них к 10 дню после лечения гликемические кривые практически соответствовали таковым здоровых животных (рис. 2 А).

Данные, полученные при расчёте показателей, характеризующих глюконеогенез как процесс, представлены в таблице 6. Установлено, что у леченных ветомом-1.1 кроликов, по сравнению с больными животными, значительно снижается прирост новообразованной глюкозы и скорость глюконеогенеза. Так, прирост глюкозы уже через 10 и 20 дней после начала применения препарата по сравнению с больными кроликами снизился в 3 раза, а через 30 дней - в 2,6 (Р<0,001). В свою очередь, скорость глюконеогенеза, по сравнению с больными животными, снижалась через 10 и 20 дней в 3,2 и 3,6 раза, а к 30-му дню данный показатель снизился в 2,8 раза (Р<0,001). Полученные результаты свидетельствует о весьма существенном улучшении глюконеогенной функции печени под влиянием ветома-1.1.

Рис. 2. Изменение содержания глюкозы в крови кроликов после нагрузки глицерином (пробиотики) Примечание: 1 - до лечения, 2 - после лечения. А - ветом-1.1; Б - ЭМ-препарат. По оси ординат - глюкоза, ммоль/л, по оси абсцисс - время в часах. Стрелка - введение глицерина. Вертикальные линии - доверительные интервалы средней

Важной характеристикой углеводного обмена в организме является способность глюкозы проникать в различные ткани. Нами установлено, что ветом-1.1 существенно понижает порог чувствительности периферических тканей у кроликов, больных эймериозом. Так, на 10-ые и 20-ые сутки у этих кроликов толерантность к глюкозе снизилась на 46,2% и 38,5% (Р<0,05) соответственно. К 30 дню после начала лечения этот показатель оказался даже отрицательным (-0,020±0,03 ммоль/л), свидетельствуя о весьма эффективном проникновении углеводов в ткани как следствие увеличения проницаемости биомембраны клеток.

В то же время препарат эффективных микроорганизмов (применённый в течение 30 дней) не нормализовал динамику гликемических кривых (рис. 2, Б), а скорость глюконеогенеза и прирост глюкозы у них были даже выше, чем у больных животных. Толерантность периферических тканей к новообразованной глюкозе же у животных этой группы опытов, как и у не леченых кроликов, имела положительное значение, что расценивается как негативный признак (табл. 6).

Таблица 6

Изменение расчётных показателей глюконеогенеза после применения пробиотических препаратов

Показатели	Ветом-1.1	Байкал ЭМ1
Прирост новообразованной глюкозы за три часа, ммоль/л, Р	1,98±0,02	2,20±0,05
	0,75±0,06 <0,001	2,64±0,05, <0,025
Скорость глюконеогенеза, ммоль/л/ч, Р	0,71±0,01	0,73±0,04
	0,25±0,06 <0,001	0,88±0,06, >0,025
Толерантность периферических тканей к глюкозе, ммоль/л, Р	0,026±0,003	0,015±0,04
	0,020±0,003, <0,001	0,031±0,003, <0,05

Примечание: числитель - до лечения, знаменатель - после лечения, Р - по сравнению с данными до введения препарата.

Таким образом, результаты наших исследований позволили раскрыть новые ранее неизвестные стороны патогенеза эймериоза кроликов. Впервые установлено, что при данном заболевании нарушаются такие специфические функции печени как мочевинообразовательная и глюконеогенная. Показано, что лечение эймериоза кроликов дитримом или пробиотиком ветом-1.1 оказывается весьма эффективным и сопровождается нормализацией общего состояния животных, исчезновением ооцист эймерий в фекалиях, значительным улучшением белково-азотистого обмена, мочевинообразовательной и глюконеогенной функций печени.

Выводы

1. Высокая частота эймериоза у кроликов разного возраста (до 100%) в районах

Саратовской области сопровождается существенным поражением печени (жировая дистрофия, явления некроза), тонкого и толстого кишечника (отёк, очаги некроза и лимфоидная инфильтрация ворсинок).

По мере взросления здоровых кроликов (2...6 мес.) в крови у них увеличивается содержание ряда метаболитов орнитинового цикла мочевинообразования, повышается активность аргиназы и ферментов трансаминирования. У кроликов, больных эймериозом, с возрастом в крови уменьшается содержание общего белка и орнитина, не изменяется концентрация аммиака при одновременном повышении концентрации мочевины, глутамина, увеличивается активность аргиназы, аланинаминотрансферазы, а также лактатдегидрогеназы.

У здоровых кроликов с возрастом стабилизируется синтез глюкозы из неуглеводных (глицерин) соединений. У кроликов, больных эймериозом, прирост глюкозы, образовавшейся из глицерина, был выше нормы: у 2-месячных в 3,9 раза, у а 3 и 6- месячных в 6,5 и 5,2 раза соответственно. Скорость глюконеогенеза по возрастным группам повышалась в 4, 6,8 и 5,4 раза. Кроме того, у кроликов, больных эймериозом, повышена толерантность периферических тканей к глюкозе глюконеогенного генеза.

Нагрузка глицерином отчётливо проявила азотсберегающее действие только у здоровых животных. У кроликов, больных эймериозом, введение глицерина приводит к повышению в крови уровня аммиака, несмотря на увеличение содержания мочевины и глутамина. После введения глицерина активность аргиназы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы в крови больных животных всегда оказывалась более высокой, чем у здоровых животных.

5. Использование химиотерапевтическго препарата дитрим способствует существенному снижению числа ооцист в фекалиях больных животных и нормализации белково-азотистого обмена. Прирост глюкозы из глицерина у них уменьшается: у 2-месячных в 2,5 раза (Р<0,001), у 3 и 6-месячных в 2,9 и в 5,1 раза соответственно, скорость глюконеогенеза снижается у 2-месячных в 2,6, а у 3-месячных и взрослых кроликов в 4,1 раза, толерантность периферических тканей к глюкозе снижается в 2 раза. Однако в сыворотке крови этих кроликов по-прежнему высокой остается активность аланинаминотрансферазы.

6. Препарат эффективных микроорганизмов («Байкал ЭМ1») не оказывает терапевтического эффекта: у больных кроликов в фекалиях увеличивается число ооцист, позитивно не изменяются фракции белково-азотистого обмена, не восстанавливается глюконеогенная функция печени.

7. Введение рекомбинатного препарата ветом-1.1 приводит к полному исчезновению ооцист из фекалий больных кроликов, восстанавливает нарушенный обмен азотистых соединений, повышает эффективность орнитинового цикла мочевинообразования. Под влиянием препарата прирост новообразованной глюкозы снижается через 30 дней в 2,6 раза, а скорость глюконеогенеза - в 2,8 раза, при одновременном снижении порога чувствительности тканей к глюкозе, образовавшейся de novo.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Блинов, В.А. Изменение некоторых биохимических показателей крови кроликов, больных эймериозом под влиянием глицериновой нагрузки // В.А Блинов, П.В Смутнев // Актуальные проблемы развития АПК: Матер. Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2006. - С. 11-12.

2. Смутнев, П.В. Распространённость эймериоза у кроликов в зависимости от возраста / П.В. Смутнев // Актуальные проблемы развития АПК: Матер. Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2006. - С.92-95.

3. Блинов, В.А. Некоторые вопросы этиологии и патогенеза эймериоза кроликов / В.А. Блинов, СВ. Ларионов, П.В. Смутнев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Матер. VI Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2006. - С.З31-336.

4. Смутнев, П.В. Влияние глицериновой нагрузки на метаболизм кроликов, больных эймериозом/ П.В. Смутнев // Вавиловские чтения-2006: Матер. конференции, посвященной 119-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова. - Саратов, 2006. -С.92-95.

5. Смутнев, П.В. Эффективность лечения дитримом кроликов больных эймериозом по состоянию глюконеогенной и мочевинообразовательной функции печени / П.В. Смутнев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Матер. VII Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2007.-С.360-363.

6. Смутнев, П.В. Изменение специфических функций печени при лечении дитримом эймериоза кроликов/ П.В. Смутнев // Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК»: Матер. научно-практической конференции молодых ученых Приволжского федерального округа. - Саратов, 2007. - С.201-204.

7. Смутнев, П.В. Применение дитрима при эймериозе кроликов / П.В. Смутнев // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции: Сборник матер. Всероссийской конференции 29 января - 2 февраля 2007 г. -Саратов, 2007.-С. 115-118.

8. Смутнев, П.В. Эффективность лечения эймериоза кроликов ветомом-1.1 по состоянию белково-азотистого обмена / П.В. Смутнев // Вавиловские чтения - 2007: Матер. конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова. - Саратов, 2007. - ч. 1. - С.340-341.

9. Блинов, В.А. Изменение метаболизма кроликов больных эймериозом под влиянием ветома-1.1/ В.А.Блинов, П.В. Смутнев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Матер. VIII Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2008. - С.63-67.

10. Смутнев, П.В. Использование ветома-1.1 для лечения эймериоза кроликов / П.В Смутнев // Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных: Сборник матер. Всероссийской научно-практической конференции - Саратов, 2008. - С. 106-109.

11. Смутнев, П.В. Использование пробиотиков для лечения эймериоза кроликов / П.В. Смутнев // Вавиловские чтения - 2008: Матер. Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского госагроуниверситета. - Саратов, 2008. - С.295-297.

12. Ларионов, СВ. Изменение белково-азотистых компонентов крови у кроликов больных эймериозом / С.В.Ларионов, В.А.Блинов, П.В. Смутнев // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. - 2008. - № 4.-С. 26-28.

13. Блинов, В.А. Метаболические эффекты ветома-1.1 при лечении эймериоза / В.А.Блинов, П.В. Смутнев // Проблемы биологии и медицины: Матер. научной конференции, посвященной юбилею профессора А.А. Хусинова. - Самарканд, 2008. - № 3 (54).-С29.

14. Смутнев, П.В. Влияние пробиотического препарата ветом-1.1 на глюконеогенную функцию печени кроликов, больных эймериозом / П.В. Смутнев // Матер. международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня основания биотехнологического факультета. - Саратов, 2009. - С. 148-153.

Размещено на Allbest.ru

...