Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Оценка иммунотропной активности конденсированных производных бензимидазола

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Самотруева Марина Александровна

Волгоград - 2006



Работа выполнена в ФГУ «НИИ по изучению лепры Росздрава» и на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: Доктор медицинских наук, профессор Анатолий Борисович Матвеев

Научный консультант: Кандидат биологических наук Светлана Алексеевна Хиврина

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Иван Николаевич Тюренков

Доктор медицинских наук, профессор Михаил Николаевич Ивашев

Ведущая организация: ГНЦ РФ Институт медико-биологических проблем РАН, г. Москва

Защита состоится 4 июля 2006 г. в ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 при Волгоградском государственном медицинском университете (400066, Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета.

Автореферат разослан « 29 » « мая » 2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук А.Р. Бабаева



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последнее время в популяции отмечается интенсивный рост первичных форм иммунодефицитов и вторичной иммунной недостаточности, обусловленной различными стрессовыми состояниями, нарушением сбалансированности питания с дефицитом белков, витаминов, микроэлементов, длительной антибиотико- и химиотерапии (Манько В.М., 2002).

Ситуация утяжеляется нарастающим экологическим неблагополучием (Черешнев В.А. и соавт., 2001), ростом устойчивости патогенных факторов к традиционным лекарственным средствам и др. (Богданов Ю.В., 2003).

Сложившаяся обстановка делает проблему профилактики и лечения патологических состояний, диктующих, в свою очередь, необходимость поиска новых эффективных иммунотропных лекарственных веществ, весьма актуальной.

Кроме того, стимулом к созданию и детальному изучению новых иммунотропных соединений являются убедительные научные данные, дающие основание утверждать, что роль иммунной системы в организме много шире, чем ее защитная функция. Исследования последних лет доказывают, что лимфоидная ткань занимает одно из центральных мест в адаптации организма к действию различных экстремальных факторов в качестве резерва энергетического и пластического материала (В.А. Черешнев и соавт., 2003). Доказана принципиальная возможность воздействия иммунной системы на ДНК, РНК и ферментативные системы клетки (Андреев Л.И., 2001; П.Д. Горизонтов и соавт., 1983). В последние годы накоплено много данных, касающихся синтеза клетками иммунной системы гормонов, играющих регулирующую роль в функционировании многих систем и органов (И.М. Кветной, 2000).

Таким образом, разработка новых химических соединений, регулирующих функции иммунной системы, позволяет также опосредованно воздействовать на различные биологические процессы.

Перспективным химическим классом могут явиться конденсированные производные бензимидазола (БИ), обладающие широким спектром воздействия на физиологические процессы в условиях нормы и патологии. Актуальность этих исследований обусловлена: во-первых, тем, что в указанном ряду химических соединений уже найдены вещества с иммуномодулирующими свойствами (дибазол, беметил, тиетанилбензимидазолы); во-вторых, информацией об их механизме действия. Доказано, что БИ близок по строению к пуриновым основаниям нуклеиновых кислот - аденину и гуанину, что объясняет его способность стимулировать синтез РНК и, как следствие, синтез различных белков. Активизирующее действие этих веществ может, по-видимому, реализоваться и на уровне системы иммунитета.

Цель исследования. Изучить иммунотропную активность конденсированных производных бензимидазола, выявить перспективные соединения для дальнейшей разработки и создания на их основе иммуномодулирующих препаратов.

Задачи исследования:

Провести первичное изучение иммунотропной активности одиннадцати конденсированных производных БИ: РУ-13, РУ-36, РУ-64, РУ-85, РУ-185, РУ-254, РУ-284, РУ-355, РУ-354, РУ-670, РУ-353, исследовав их влияние на гуморальные и клеточные звенья иммунитета при первичном иммунном ответе мышей на эритроциты барана. Выявить из них наиболее перспективные.

Изучить степень влияния некоторых производных БИ на морфофункциональное состояние лимфоидных органов и некоторые показатели гемопоэза.

Изучить зависимость иммунотропного эффекта некоторых производных БИ от используемой дозы - «доза-эффект».

Изучить зависимость иммунотропного эффекта некоторых производных БИ от фазы иммуногенеза - «время-эффект».

Изучить степень влияния некоторых производных БИ на неспецифическое звено иммунного ответа.

Провести оценку некоторых производных БИ как иммунокорректоров на фоне экспериментально вызванной циклофосфановой иммунодепрессии.

Научная новизна.

Впервые изучены иммунофизиологические аспекты влияния одиннадцати новых конденсированных производных БИ с целью выявления перспективных соединений для дальнейшей разработки и создания на их основе иммуномодулирующих препаратов.

Впервые получены данные, что производные БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 стимулируют пролиферацию тимоцитов и спленоцитов; вызывают выраженные изменения показателей белой крови, стимулируя процессы лейкопоэза. Повышают фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, увеличивая количество активных клеток; оказывают влияние на клеточное и гуморальное звенья первичного иммунного ответа. Определены наиболее эффективные минимальные дозы изученных веществ и оптимальное время введения в зависимости от фазы иммуногенеза. Выявлена их способность оказывать иммунокорригирующее действие в условиях экспериментально вызванной циклофосфановой иммунодепрессии.

Основные положения, выносимые на защиту.

Производные БИ обладают иммунотропностью. Наиболее перспективными из них по влиянию на клеточное (РГЗТ) и гуморальное (число АОК, РПГА) звенья иммунитета являются химические соединения, известные под лабораторными шифрами РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355.

Иммунотропный эффект веществ РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-353 проявляется при их применении в дозах от 1/20 до 1/5 LD₅₀, что позволяет рекомендовать дозу 1/20 LD₅₀ как базовую.

Конденсированные производные БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-353 эффективно воздействуют на показатели иммунитета при введении в различные фазы иммуногенеза.

Конденсированные производные БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 оказывают стимулирующее влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов.

Конденсированные производные БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 стимулируют пролиферацию клеток тимуса, селезенки, а также нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов периферической крови.

Конденсированные производные БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 восстанавливают индукцию РГЗТ и уровень выработки антител к эритроцитам барана в РПГА после экспериментально вызванной циклофосфановой иммунодепрессии.

Апробация диссертации.

Апробация диссертации проведена на III, IV и V международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств в России» (Москва, 2003, 2004 и 2005), на III конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004), на ХI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), на научно-практической конференции, посвященной 85-летию АГМА (Астрахань, 2003).

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, собственные результаты, обсуждение собственных результатов, выводы, список литературы. Материалы диссертации изложены на 183 страницах машинописного текста, включают 15 таблиц, 18 диаграмм. Список литературы состоит из 320 работ, из них 207 отечественных и 113 зарубежных авторов.

Перечень использованных сокращений

АОК - антителообразующие клетки	АТ - антитела
РГЗТ - реакция гиперчувствительности замедленного типа	ЭБ - эритроциты барана
	ИР - индекс реакции
РПГА - реакция пассивной гемагглютинации	ТГ - титр гемагглютининов
ЯСК - ядросодержащие клетки	БИ - бензимидазол

Материалы и методы исследования

Исследование выполнено на 1370 мышах линии СВА обоего пола 3-4-х месячного возраста массой 18-20 г. Животные каждой серии эксперимента были синхронизированы по условиям содержания и питанию.

Все использованные в работе методы были выбраны согласно методическим рекомендациям по изучению иммунотропной активности новых фармакологических веществ (Хаитов Р.М., Гущин И.С., 2000).

Для определения клеточности лимфоидных органов после выведения мышей из опыта извлекали тимус и селезенку, взвешивали их, готовили гомогенат. Количество тимоцитов, спленоцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, гемограмму исследовали в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе под масляной иммерсией.

Для оценки иммунотропной активности изучаемых соединений была использована система первичного иммунного ответа мышей на эритроциты барана. Эффективность воздействия производных БИ на гуморальное звено иммуногенеза определяли посредством методов локального гемолиза (Jerne N.K., Nordin A.A., 1963) и прямой гемагглютинации (Федосеева В.Н., 1993, Фримель Г., 1987); на клеточное звено - в реакции ГЗТ (Хаитов Р.М. и соавт., 2000). Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови изучали посредством нагрузки латексом (Любимов Б.И. и соавт., 2000).

Все результаты были обработаны статистически с использованием программы "STATGRAP" с применением t-критерия Стьюдента (Гланц С., 1986). бензимидазол лимфоидный иммунотропный

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Первичная оценка иммунотропной активности конденсированных производных бензимидазола

Влияние производных БИ на массу и клеточность селезенки, продукцию антител в реакции гемагглютинации

Исследование проведено на 450 мышах линии СВА. Исследуемые вещества вводили животным в/б в день иммунизации в дозе 50 мг/кг в 0,5 мл дистиллированной воды (Хаитов Р.М. и соавт., 2000). В качестве контрольных во всех экспериментах исследования использовали животных, получавших 0,5 мл дистиллированной воды (контроль I) и дибазол в дозе изучаемых соединений (контроль II). Мышей иммунизировали подкожно субоптимальной дозой ЭБ (2х10⁷) в 0,2 мл дистиллированной воды. Забор материала для определения АОК проводили на пике иммунного ответа на 5-й день, для постановки РПГА на 7 день после антигенной стимуляции. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1. Влияние производных бензимидазола на массу селезенки, содержание кариоцитов и антителообразующих клеток

Шифр соединения	Масса селезенки (М±m; n=10; мг)	Кол-во кариоцитов (М±m; х106; n=10)	Кол-во АОК (М±m; х103; n=10)
I серия
РУ-13	176 ± 20*	1748 ± 262	394 ± 52*
РУ-36	139 ± 12	1640 ± 218*	351 ± 43*
РУ-185	226 ± 18***	2373 ± 186 ***	487 ± 37***
РУ-284	172 ± 14*	2630 ± 404**	526 ± 80**
РУ-354	289 ± 22***	2233 ± 146***	471 ± 26***
РУ-355	208 ± 25**	1818 ± 134 **	363 ± 26**
Контроль I (Н2О)	127 ± 6	1182 ± 78	236 ± 16
Контроль II (дибазол)	220 ± 15***	3500 ± 200***	750 ± 50***
II серия
РУ-64	166 ± 15	1736 ± 239	247 ± 47
РУ-85	266 ± 33**	1942 ± 133	388 ± 26
РУ-254	175 ± 32	1276 ± 299	280 ± 59
РУ-353	194 ± 28	1281 ± 191	238 ± 48
РУ-670	192 ± 17*	3083 ± 381**	516 ± 77
Контроль I (Н2О)	136 ± 9	1743 ± 167	348 ± 33
Контроль II (дибазол)	226 ± 12***	3927 ± 268***	799 ± 54

Примечание: * - р‹0,05; ** - р‹0,01; *** - р‹0,001 (в сравнении с К I)

В большей степени пролиферацию селезеночной ткани стимулируют химические соединения РУ-354, РУ-85 и РУ-185 (p<0,001 и p<0,01). Масса селезенки при этом нарастает в 2,3; 1,9 и 1,7 раза соответственно. Эффект от введения РУ-354 превосходит таковой при использовании дибазола (p<0,05). Активность РУ-85 и РУ-185 сопоставима с влиянием дибазола (табл.1).

С меньшей степенью достоверности, но достаточно выраженное изменение изучаемого показателя вызывали вещества РУ-13, РУ-284, РУ-355 и РУ-670: масса селезенки при их введении по сравнению с контролем I увеличилась в 1,4-1,6 раза.

Производные РУ-36, РУ-64, РУ-254 и РУ-353 оказывали на объект исследования меньшее воздействие и уступали по эффективности дибазолу. Масса селезенки мышей, получавших РУ-64 и РУ-36, была статистически достоверно ниже, чем при введении дибазола.

Наиболее выраженные изменения со стороны клеточного состава селезенки выявлены при введении соединений РУ-185, РУ-284, РУ-354 и РУ-670. У мышей, получавших эти вещества, количество ЯСК возрастало в 1,9-2,2 раза, число АОК - в 1,5-2 раза. Следует отметить, что в случае применения РУ-670 нарастание количества АОК (в 1,5 раза) не являлось статистически достоверным.

При изучении корреляционных связей установлено, что при применении РУ-185 отсутствует зависимость между увеличением количества ЯСК и массой селезенки, но имеет место выраженная прямая корреляция между количеством кариоцитов и антителопродуцентов. Те же тенденции наблюдали у мышей, получавших РУ-354. При введении РУ-670 и РУ-284 выявлена корреляционная зависимость между всеми показателями (r = + 0,92 и r = + 0,95 при p<0,001).

Статистически достоверное увеличение числа кариоцитов и АОК также зафиксировано при использовании соединений РУ-36 и РУ-355. При этом корреляции, между описываемыми показателями и массой селезенки не наблюдалось.

Соединение РУ-13 вызывало значительное увеличение количества кариоцитов и повышение числа АОК, но эти изменения не были статистически достоверными. Введение РУ-85 способствовало незначительному увеличению количества ЯСК и соответственно АОК. Использование РУ-254 и РУ-353 приводило к некоторому снижению числа исследуемых клеток селезенки. Производное БИ - РУ-64 не влияло на число кариоцитов, но, при этом, несколько снижало пролиферацию АОК. Следует отметить, что изменения, вызванные применением РУ-85, РУ-254, РУ-353 и РУ-64 не являлись статистически достоверными, но даже незначительные изменения в количестве ЯСК и АОК имели сильно выраженную корреляционную зависимость между собой и не зависели от изменений массы селезенки.

Сравнительный анализ эффективности воздействия конденсированных производных БИ и дибазола показал, что все изучаемые нами вещества уступают дибазолу по влиянию на рассматриваемые показатели (табл.1).

Наиболее сильное влияние на продукцию антител к ЭБ оказывали производные БИ - РУ-185, РУ-284, РУ-354, РУ-355 (p<0,001). Титр АТ в сыворотке крови мышей при введении этих соединений возрастал в 1,7-1,9 раз по сравнению с контролем I (p<0,001). Эти изменения практически сопоставимы с влиянием дибазола (табл. 2).

Таблица 2. Влияние производных бензимидазола на продукцию антител к ЭБ

I серия	II серия
Шифр соединения	Титр антител (М±m; n=10; lоg2)	Шифр соединения	Титр антител (М±m; n=10; lоg2)
РУ-13	0,9 ± 0,1	РУ-64	0,63 ± 0,1*
РУ-36	1,8 ± 0,2**	РУ-85	0,8 ± 0,1**
РУ-185	2,1 ± 0,04***	РУ-254	0,72 ± 0,09**
РУ-284	2,1 ± 0,1***	РУ-353	0,45 ± 0,03
РУ-354	1,9 ± 0,07***	РУ-670	0,56 ± 0,07*
РУ-355	1,9 ± 0,03***	Контроль I (Н2О)	0,37 ± 0,03
Контроль I (Н2О)	1,1 ± 0,1	Контроль II (дибазол)	1,05 ± 0,19**
Контроль II (дибазол)	2,05 ± 0,2**

Примечание: * - р‹0,05; ** - р‹0,01; *** - р‹0,001.

Соединение РУ-36 также статистически достоверно, но в меньшей степени стимулировало продукцию антиэритроцитарных АТ, при этом, титр АТ был близок к показателям, наблюдаемым при использовании дибазола.

Значительно стимулировали, в сравнении с контролем I, выработку АТ производные под шифрами РУ-64, РУ-85, РУ-254 и РУ-670. У мышей, получавших эти вещества, показатели титра АТ превышали контрольные в 1,5-2,2 раза. Однако, влияние их уступало воздействию дибазола. Следует отметить, что выявленная разница в показателях у мышей разных групп, получавшими исследуемые вещества и дибазол, за исключением РУ-670, не являлась статистически достоверной.

Соединение РУ-13 практически не оказывало воздействия на процесс антителообразования. РУ-353 по влиянию также не отличался от контроля I и был менее эффективен, чем дибазол.

Известно, что после антигенной стимуляции Т-клетки концентрируются в Т-зонах лимфоидных органов, куда несколько позже мигрирует большое количество В-клеток, где между ними происходит взаимодействие и кооперативное распознавание антигена, приводящее к дифференцировке В-клеток в антителопродуценты (Галактионов В.Г., 2004). Таким образом, можно предположить, что увеличение ядросодержащих клеток в селезенке под воздействием некоторых производных БИ происходит, по всей вероятности, за счет стимуляции ими притока в орган кариоцитов из костного мозга. Рост популяции антителообразующих клеток у экспериментальных мышей, получавших изучаемые соединения, обеспечивается, вероятнее всего, способностью последних влиять на процессы пролиферации, дифференцировки и кооперации лимфоцитов.

Влияние производных БИ на формирование реакции ГЗТ

Эксперимент проведен на 130 мышах линии СВА. Для иммунизации применяли оптимальную дозу ЭБ (2х10⁸) в 0,2 мл, разрешающую дозу - 10⁸ ЭБ в 0,05 мл физиологического раствора. Введение веществ и контрольные группы были идентичны при постановке РПГА.

Полученные результаты показали, что подавляющее большинство изучаемых соединений оказывают влияние на величину индекса реакции ГЗТ (табл.3).

Таблица 3. Влияние производных бензимидазола на индекс реакции ГЗТ

Шифр соединения	Индекс РГЗТ (М±m; n=10; %)	Шифр соединения	Индекс РГЗТ (М±m; n=10; %)
РУ-13	22,4 ± 3,6**	РУ-64	19 ± 1,9***
РУ-36	8,8 ± 1,7	РУ-85	13,2 ± 1,7*
РУ-185	23,4 ± 4,3***	РУ-254	26,77 ± 2,6***
РУ-284	16,7 ± 2,6**	РУ-353	13,4 ± 2,6
РУ-354	10,2 ± 1,02	РУ-670	18,6 ± 2,5**
РУ -355	29,8 ± 2,8***	Контроль II (дибазол)	22,1 ± 1,3***
Контроль I (Н2О)	7,1 ± 1,4

Примечание: * - р‹0,05; ** - р‹0,01; *** - р‹0,001.



К веществам сильного воздействия можно отнести РУ-13, РУ-185, РУ-254, РУ-355. При их введении индекс реакции ГЗТ мышей возрастал по сравнению с контролем I в 3-4 раза. Степень их влияния была либо сопоставима с влиянием дибазола, либо выше.

К несколько меньшему, но также статистически достоверному повышению ИР ГЗТ приводило введение животным соединений РУ-284, РУ-64, РУ-85 и РУ-670. В этих группах у мышей ИР увеличивался в 2-2,5 раза. Эффективность действия соединений сопоставима с активностью дибазола (за исключением РУ-85).

РУ-36 и РУ-354 изучаемые показатели практически не изменяли. Соединение РУ-353 способствовало повышению индекса реакции ГЗТ, которое, однако, статистически достоверным не являлось.

В формирование клеточного иммунного ответа на ЭБ вовлекаются различные Т-клеточные субпопуляции. До поступления антигена активны Т-супрессоры, в момент же проникновения антигена и на протяжении всего иммунного ответа повышен уровень Т-хелперов и Т-эффекторов (Казанский Д.Б., 2000). Все исследуемые нами производные БИ в различной степени увеличивали индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа. Это свидетельствует о выраженном влиянии соединений на функциональную активность Т-эффекторов и Т-хелперов, учитывая, что химические соединения вводили лабораторным животным одновременно с иммунизацией ЭБ.

Важную роль в развитии иммунного ответа играет кооперация между Т- и В-звеньями иммуногенеза. При сравнении индексов реакции ГЗТ и титров антител у животных, получавших исследуемые вещества, были выявлены прямые корреляционные связи (r колеблется от + 0,8 до + 0,95; при p<0,05 и p<0,01). По всей вероятности, повышая активность Т-хелперов, производные БИ опосредованно стимулируют антителообразующую функцию В-лимфоцитов, оказывая стимулирующее влияние на процессы взаимодействия клеток костно-мозгового и тимусного происхождения.

Таким образом, первичное исследование конденсированных производных БИ показало, что большинство изучаемых соединений проявляют иммунотропную активность.

Основываясь на данных результатах, мы выбрали для дальнейшего изучения химические соединения РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355, которые по эффективности воздействия на все указанные выше показатели превосходят остальные. В пользу такого выбора говорил еще и тот факт, что эти соединения, по данным ряда исследователей (Г.П. Дудченко, 2001; О.В. Островский, 1996; Т.И. Панченко, 1990; О.А. Салазникова, 2001; И.В. Сеньчуков, 2001; А.А. Спасов и соавт., 1999; А.В. Цибанев, 1991), характеризуются широким спектром воздействия на различные биологические процессы в организме.

Дозозависимость иммунотропного эффекта производных бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355.

Эксперимент поставлен на 340 мышах. В I-ой серии изучали влияние веществ на титры антител в РПГА, во II-ой - на индекс РГЗТ. Иммунизацию животных проводили согласно схемам, описанным выше. Введение препаратов, осуществляли в/б в день иммунизации. Контролем служили иммунизированные мыши, получавшие плацебо. Для проведения эксперимента использовались дозы, составляющие 1/20, 1/15, 1/10 и 1/5 от LD₅₀ каждого соединения (рис. 1).

РУ-185 в дозе 11,3 мг/кг способствовало по сравнению с контролем нарастанию титра антител в 4,2 раза (p<0,001). ТГ у мышей, получавших исследуемое вещество в дозах 15 мг/кг и 22,6 мг/кг, возросли в 3-3,2 раза, а в дозе 45,2 мг/кг - в 2 раза (p<0,001) (рис.1А).



А

Б

Рис. 1. Зависимость величины титра антител и индекса РГЗТ от дозы производных бензимидазола



Применение РУ-185 в дозах 11,3 мг/кг и 15 мг/кг с высокой степенью достоверности вызвало увеличение ИР ГЗТ в 5-5,5 раза (p<0,001). Введение исследуемого вещества в дозах 22,6 мг/кг и 45,2 мг/кг приводило также к значительной индукции клеточного звена иммуногенеза, что проявлялось увеличением ИР ГЗТ в 2-3 раза (p<0,001). Между дозой применяемого вещества и изменениями наблюдалась обратная корреляционная зависимость: r = - 0,8 (р<0,05) (рис.1Б).

РУ-254 в дозах 13,75 мг/кг и 18,3 мг/кг способствовало по сравнению с контрольными показателями нарастанию титра АТ в 2,8 и 2,4 раза (p<0,001). ТГ у мышей, получавших исследуемое вещество в дозе 27,5 мг/кг возросли в 3,3 раза, а в дозе 55 мг/кг - в 4 раза (p<0,001). Между дозой РУ-254 и изменениями наблюдалась прямая корреляционная зависимость: r = + 0,8; (р<0,05) (рис.1А).

Применение РУ-254 в дозах 13,75 мг/кг, 18,3 мг/кг и 27,5 мг/кг с высокой степенью достоверности вызвало увеличение ИР ГЗТ в 2,5-3 раза (p<0,001). Введение исследуемого вещества в дозе 55 мг/кг приводило к 4-кратному возрастанию ИР (p<0,001). Между дозой применяемого вещества и ростом ИР ГЗТ наблюдалась прямая корреляционная зависимость: r = + 0,4 (p>0,05) (рис.1Б).

ТГ в РПГА у мышей, получавших вещество РУ-284 в дозе 9,75 мг/кг, превышал контрольные показатели в 3 раза (p<0,001), в дозах 13 мг/кг и 19,5 мг/кг - в 3,2 раза (p<0,001), в дозе 39 мг/кг изменение количества антиэритроцитарных АТ по сравнению с контролем - в 4,5 раза (p<0,001). Доза исследуемого вещества и величина ТГ находились в прямой корреляционной зависимости: r = + 0,8 (р<0,05) (рис. 1А).

При постановке РГЗТ выявлено в высокой степени достоверности стимулирующее воздействие РУ-284 во всех используемых дозах. При этом степень его воздействия снижалась по мере нарастания применяемой дозы (рис. 1Б).

ТГ в РПГА у мышей, получавших РУ-355 в дозе 6,75 мг/кг, превышал контрольные показатели в 2 раза (p<0,01), в дозах 9 мг/кг и 13,5 мг/кг вызвало изменение количества АТ в 2,5 раза (p<0,01 и p<0,001). Содержание АТ при использовании РУ-355 в дозе 27 мг/кг увеличилось в 3,5 раза (p<0,001). Статистически достоверной корреляционной связи между дозой вводимого вещества и описываемыми изменениями не наблюдалось: r = + 0,4 (р>0,05) (рис. 1А).

Введение вещества РУ-355 в дозе, составляющей 1/20 от LD₅₀, вызвало увеличение ИР ГЗТ в 3,5 раза (p<0,001). По мере увеличения дозы исследуемого соединения эффективность его влияния несколько снижалась. Так, ИР ГЗТ у мышей, получавших РУ-355 в дозах 9 мг/кг и 13,5 мг/кг, по сравнению с контролем увеличился в 3 раза (p<0,001), в дозе 27 мг/кг - только в 2 раза. Таким образом, индукция РГЗТ находилась с дозой исследуемого соединения в сильно выраженной обратной корреляционной связи: r = - 0,98 (р<0,001) (рис.1Б).

Проведенная работа показала, что во всех применяемых нами дозах (1/5, 1/10, 1/15 и 1/20 от LD₅₀) новые конденсированные производные БИ проявляют иммунотропную активность.

Проанализировав полученные результаты, мы пришли к выводу, что наиболее перспективными для дальнейшего изучения являются следующие дозы веществ: РУ-185 - 11,3 мг/кг, РУ-254 - 13,75 мг/кг, РУ-284 - 9,75 мг/кг и РУ-355 - 6,75 мг/кг, т.е. минимальные дозы, выбранные нами для исследования.

Влияние производных бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 на показатели периферической крови и лимфоидных органов.

Эксперимент поставлен на 120 мышах линии СВА. Исследуемые соединения вводили в течение 5 дней в/б в дозах: РУ-185 - 11,3 мг/кг; РУ-254 - 13,75 мг/кг; РУ-284 - 9,75 мг/кг и РУ-355 - 6,75 мг/кг. Контролем I служили животные, получавшие плацебо. Группой сравнения служили также животные, получавшие дибазол в дозе 10 мг/кг (контроль II). Забой животных и забор материала проводили через сутки после последнего введения изучаемых веществ.

Таблица 4. Влияние производных бензимидазола на массу и клеточность тимуса

Шифр соединения	Масса тимуса (мг)	Кол-во тимоцитов на 1 мг тимуса (х 106)
	M ± m, n = 10	P1	P2	M ± m, n = 10	P1	P2
РУ-185	62,9±4,6	<0,001	>0,05	1,68±0,06	<0,001	>0,05
РУ-254	40,5±3,2	>0,05	<0,01	1,36±0,3	>0,05	>0,05
РУ-284	75,5±8,9	<0,01	>0,05	1,93±0,1	<0,001	>0,05
РУ-355	60,8±6,3	<0,01	>0,05	1,8±0,2	<0,01	>0,05
Контроль I	34,7±3,9			0,84±0,1
КонтрольII (дибазол)	69,5±4,2	<0,001		1,8±0,4	<0,05

Применение РУ-284 способствовало более чем двукратному увеличению массы тимуса и количества тимоцитов (p<0,01) (табл.4).

Использование соединений РУ-185 и 355 привело также к ярко выраженной стимуляции пролиферативных процессов, что повлекло возрастание массы и количества клеток изучаемого органа (p<0,001 и p<0,01), но по абсолютным показателям эти изменения были несколько менее выражены, чем при введении РУ-284. Курсовое применение РУ-254 вызвало незначительное увеличение массы тимуса и его клеточного состава (p>0,05) (табл.4).

Все исследуемые производные БИ в разной степени выраженности стимулировали пролиферативные процессы в селезенке (табл.5).

Таблица 5. Влияние производных бензимидазола на массу и клеточность селезенки

Шифр соединения	Масса селезенки (мг)	Кол-во ЯСК на 1 мг селезенки (х 106)
	M ± m, n = 10	P1	P2	M ± m, n = 10	P1	P2
РУ-185	194±8,4	<0,001	>0,05	1,63±0,18	<0,01	>0,05
РУ-254	136±7,5	<0,05	<0,01	1,12±0,1	<0,05	<0,05
РУ-284	205±28	<0,05	>0,05	1,6±0,09	<0,001	>0,05
РУ-355	190±14	<0,001	>0,05	1,25±0,1	<0,01	>0,05
Контроль I	115±5,7			0,8±0,09
КонтрольII (дибазол)	198±15	<0,001		1,56±0,1	<0,001

Так, соединение РУ-284 способствовало значительному по абсолютным показателям увеличению массы селезенки и количества в ней ЯСК. Количество клеток белой пульпы возросло в 2 раза, а масса - в 1,8 раза

Введение веществ РУ-185 и РУ-355 привело также к выраженным изменениям изучаемых показателей (p<0,001).

Несколько менее яркое, но также статистически значимое нарастание массы селезенки и количества ЯСК наблюдалось при введении мышам РУ-254 (p<0,05). Сравнение с дибазолом показало, что химические соединения РУ-185, РУ-284 и РУ-355 идентичны дибазолу по степени влияния. РУ-254 менее эффективен, нежели известный иммуномодулятор.

Таким образом, все изучаемые вещества оказывали стимулирующее влияние на морфофункциональные показатели тимуса и селезенки. Представляется вероятным активирующее влияние производных БИ - РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 на миграцию клеток-предшественников из костного мозга в тимус и селезенку и/или пролиферативные процессы в самих лимфоидных органах.

У животных всех опытных групп введение производных БИ стимулировало пролиферативные процессы, приводящие к увеличению количества лейкоцитов (табл.6).

Таблица 6. Влияние производных бензимидазола на количество лейкоцитов периферической крови мышей

Шифр соединения	Статистические показатели
	(M ± m, х 109/л), n = 10	P1	P2
РУ-185	12,8 ± 1,1	<0,001	>0,05
РУ-254	9,8 ± 0,9	>0,05	<0,05
РУ-284	11,9 ± 1,1	<0,001	>0,05
РУ-355	13,6 ± 1,3	<0,01	>0,05
Контроль I	8,4 ± 0,7
Контроль II (дибазол)	12,5 ± 1,1	<0,001

У мышей, получавших химические соединения под шифрами РУ-185, РУ-284 и РУ-355, количество лейкоцитов статистически значимо возрастает в 1,4-1,6 раза. Введение РУ-254 было менее эффективно. Введение дибазола статистически достоверно способствует увеличению числа лейкоцитов, сопоставимо по эффекту с РУ-185, РУ-284 и РУ-355 и значительно превышает таковой при применении РУ-254.

Под влиянием соединений РУ-185 и РУ-355 наблюдалось увеличение процентного содержания нейтрофилов практически в 2 раза. Менее выраженные, но также статистически достоверные изменения - под влиянием РУ-254 и РУ-284.

У мышей, получавших вещества РУ-185, РУ-284, РУ-355, также вдвое возрастало относительное число моноцитов. При введении РУ-254 изменение содержания моноцитов было менее значимо и не являлось статистически достоверным. При подсчете абсолютного числа клеток оказалось, что количество всех видов лейкоцитов статистически значимо превышает показатели контроля (табл.7).

Таблица 7. Изменения абсолютного числа различных видов лейкоцитов под влиянием производных бензимидазола

Шифр соединения	Нейтрофилы (M ± m, х109/л)n = 10	Лимфоциты (M ± m, х109/л) n = 10	Моноциты (M ± m, х109/л) n = 10
РУ-185	5,8 ± 0,4***	6,4 ± 0,04***	0,6 ± 0,04***
РУ-254	3,5 ± 0,07***	5,9 ±0,005***	0,3 ± 0,03*
РУ-284	4,8 ± 0,02***	6,4 ± 0,03***	0,6 ± 0,08***
РУ-355	6,3 ± 0,4***	6,4 ± 0,05***	0,7 ± 0,08***
Контроль I	2,25 ± 0,1	5,8 ± 0,01	0,2 ± 0,01
Контроль II (дибазол)	5,3 ± 0,4***	6,6 ± 0,1***	0,6 ± 0,04***

Примечание: степень достоверности относительно контроля I: * - р < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001



Таким образом, изучаемые производные БИ вызывают выраженные изменения показателей белой крови мышей, стимулируя процессы лейкопоэза.

Влияние производных бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 на фагоцитарную активность нейтрофилов

Эксперимент поставлен на 60 мышах линии СВА. Для исследования функционального состояния нейтрофилов периферической крови мышей все вещества вводили в/б в течение 5 дней в следующих дозах: РУ-185 - 11,3 мг/кг; РУ-254 - 13,75 мг/кг; РУ-284 - 9,75 мг/кг и РУ-355 - 6,75 мг/кг. Контролем I служили животные, получавшие 0,5 мл дист. воды. Группой сравнения служили также животные, получавшие дибазол в дозе 10 мг/кг (контроль II). Забор крови проводили через сутки после последнего введения изучаемых веществ.

Таблица 8. Влияние производных бензимидазола на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови

Шифр соединения	Фагоцитарное число (n=10)	Фагоцитарный индекс (%; n=10)	Кол-во активных нейтрофилов (х 109/л; n=10)
РУ-185	6,2 ± 0,4***	64,9 ± 3,2**	3,7 ± 0,6**
РУ-254	4,0 ± 0,3	57,9 ± 1,3**	2,1 ± 0,3**
РУ-284	6,4 ± 0,6**	69,4 ± 1,8***	3,3 ± 0,3***
РУ-355	4,3 ± 0,3	61,4 ± 2,5**	3,7 ± 0,4***
Контроль I	3,7 ± 0,2	48,3 ± 2,7	1,1 ± 0,2
Контроль II (дибазол)	6,5 ± 0,4***	72,3 ± 2,5***	3,9 ± 0,4***

Примечание: степень достоверности относительно контроля I: * - р < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001

Анализ полученных данных показал, что при введении производных БИ - РУ-185 и РУ-284 у мышей возрастало как абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов, так и % фагоцитоза. Следует отметить, что количество активных нейтрофилов увеличивалось более чем в 3 раза, тогда как фагоцитарный индекс лишь на 17-20 %. Использование этих соединений также приводило к возрастанию и числа фагоцитируемых частиц латекса (в 1,7 раза)

Применение РУ-355 и РУ-254 также вызывало изменение абсолютного количества активных нейтрофилов и процент фагоцитоза, но практически не оказывало влияния на фагоцитарное число (табл. 8).

Дибазол активно стимулирует процесс фагоцитоза по всем изучаемым нами показателям: сравним по воздействию с РУ-185 и РУ-284, и несколько превышает по эффективности РУ-254 и РУ-355.

Увеличение количества и усиление фагоцитарной активности нейтрофилов представляется значимым фактором в оценке влияния изучаемых производных БИ в связи с новым пониманием функциональной роли нейтрофилов, представляющих собой универсальный эффектор гомеостаза (М.В. Дегтярева, 2000). То есть, стимулирующее влияние производных БИ на количество и активность нейтрофилов может свидетельствовать о многообразии вызываемых ими физиологических эффектов.

Зависимость иммунотропного эффекта производных бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 от фазы иммуногенеза.

Конденсированные производные БИ под шифрами РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 вводили животным в индуктивную и пролиферативную фазы иммуногенеза, а также в период иммунизации в/б в дозах, соответствующих 1/20 от LD₅₀. Группами сравнения служили животные, получавшие дист. воду (контроль I) и дибазол в дозе 10 мг/кг (контроль II).

Введение мышам РУ-185 во все фазы иммуногенеза с высокой степенью достоверности (p<0,001) изменяло показатели обеих реакций. Наиболее выраженные изменения в РГЗТ при использовании РУ-185 были зафиксированы в группе мышей, получавших вещество в индуктивную фазу и фазу иммунизации. ИР превосходил таковой в контроле в 2,9-3 раза. Несколько менее эффективно было влияние РУ-185 при его применении в фазу пролиферации (рис. 2Б).

На продукцию АТ в РПГА РУ-185 более выраженное влияние оказывало при использовании в фазу иммунизации: величина титра возрастала более чем в 3 раза. В индуктивный и продуктивный периоды его воздействие было менее эффективным: титр АТ увеличился менее чем в 2 раза (рис. 2А).

Применение РУ-254 в индуктивную и в пролиферативную фазу стимулировало антителообразование по сравнению с контролем в 1,3 раза (p<0,05), одновременно с иммунизацией - в 1,7 раза (p<0,001) (рис. 2А).

Производное РУ-254, при использовании его за два дня до введения ЭБ, существенных изменений в показателях РГЗТ не вызвало, тогда как применение его в период иммунизации и в период продукции иммунокомпетентных клеток оказывало стимулирующее влияние. ИР возрастал в 3,2 и 3,5 раза соответственно (p<0,001) (рис. 2Б).

У мышей, получавших РУ-284 в период иммунизации и пролиферации, наблюдались выраженные изменения. Так, ИР ГЗТ возрастал в 5,5 и 3,5 раза соответственно (p<0,001), величина титров АТ - в 1,7 и 2,7 раза (p<0,001).

Между показателями гуморального и клеточного звена первичного иммунного ответа при введении РУ-284 имела место прямая корреляционная связь: r = + 0,88 (р<0,05) (рис. 2А, Б).

Введение соединения РУ-284 в индуктивную фазу также статистически значимо стимулировало иммунологическую реактивность, но изменения эти были менее выраженными: ИР увеличился в 2,2 раза (p<0,001), титр АТ - в 1,5 раза (p<0,05). Между исследуемыми показателями была также выявлена прямая корреляционная связь, но статистически достоверной она не являлась: r = + 0,5 (р>0,05).

Соединение РУ-355, введение его в индуктивную и продуктивную фазы, повышало ИР по сравнению с контролем, в 4,5 и 3,9 раза соответственно (p<0,001). Введение этого вещества одновременно с иммунизацией привело к увеличению ИР ГЗТ в 3,8 раза (p<0,001). На продукцию антител данное вещество оказывало слабое влияние: введение его за два дня и одновременно с иммунизацией существенных количественных изменений не вызвало (p>0,05). Использование РУ-355 в период продукции иммунокомпетентных клеток привело по сравнению с контролем к статистически достоверному увеличению титра АТ (p<0,001) (рис. 2 А, Б).

А

Б

Рис. 2. Уровень продукции антител и интенсивность реакции ГЗТ при введении производных бензимидазола в разные фазы иммуногенеза.



Дибазол, при введении во все фазы иммуногенеза (наиболее выраженный эффект - во время иммунизации) индуцирует РГЗТ и РПГА. Его влияние сопоставимо с РУ-185, РУ-284 и РУ-355 и превосходит воздействие РУ-254 (рис. 2 А, Б)

Таким образом, химические соединения под шифрами РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 эффективны при введении в разные фазы иммуногенеза (за исключением РУ-254 в индуктивную стадию) и активность различается лишь по абсолютной величине изучаемых показателей.

Изучение иммунокорригирующей активности производных бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 при экспериментальной иммуносупрессии.

Исследования проведены на 140 мышах линии СВА. Соединения РУ-185, 254, 284 и 355 животным вводили в/б в течение семи дней, начиная за три дня до иммунизации, в дозах, соответствующих 1/20 LD₅₀. Подавление иммуногенеза вызывали применением циклофосфана в дозе 100 мг/кг в день иммунизации.

Контролем I служили иммунизированные мыши, получавшие только циклофосфан (циклофосфамид) в указанной выше дозе. В качестве контроля II - иммунизированные животные, получавшие дист. воду. Для сравнения изучали группу животных, получавших дибазол в дозе 10 мг/кг.

Применение циклофосфана в день антигенной стимуляции привело к значительному нарушению формирования РГЗТ, что проявилось в снижении ИР по сравнению с контролем II практически в 3 раза (p<0,01). Кроме того, наблюдали угнетение и антителогенеза с 0,84 ±0,06 до 0,48 ± 0,03 (p<0,001) (табл.9).



Таблица 9. Корригирующее влияние производных бензимидазола на показатели РГЗТ и РПГА у мышей

Шифр соединения	Индекс реакции ГЗТ (%)	Титры антител в РПГА (log2)
	M ± m n = 10	P 1	P 2	M ± m n = 10	P 1	P 2
РУ-185	39 ± 4,3	<0,001	<0,001	1,5 ± 0,16	<0,001	<0,01
РУ-254	27 ± 2,8	<0,001	<0,01	1,1 ± 0,09	<0,001	<0,05
РУ-284	37,4 ± 5,8	<0,001	<0,01	1,53 ± 0,09	<0,001	<0,001
РУ-355	40 ± 4,2	<0,001	<0,001	0,93 ± 0,09	<0,001	>0,05
Дибазол	33 ± 2,4	<0,001	<0,001	1,3 ± 0,09	<0,001	<0,001
Контроль I (циклофосфан)	5,6 ± 1,2		<0,01	0,48 ± 0,03		<0,001
Контроль II (Н2О)	14,2 ± 1,8			0,84 ± 0,06

Курсовое введение соединений РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 привело к выраженной стимуляции РГЗТ. При этом, вещества РУ-185 и РУ-284 вызвали увеличение реакции местной сенсибилизации, по сравнению с контролем II, более, чем в 2,5 раза (p<0,01) и более, чем в 6,5 раз по сравнению с группой животных, получавших только циклофосфан (p<0,001). Введение РУ-355 привело к значительной стимуляции клеточной инфильтрации. ИР ГЗТ увеличился почти в 3 раза относительно мышей, получавших плацебо (p<0,001), и более чем в 7 раз по сравнению с экспериментальной моделью иммунодепрессии (p<0,001). РУ-254 также стимулировало клеточное звено иммуногенеза (p<0,001) (табл.9).

Установлено, что всем исследуемым веществам в РПГА присущ иммунокорригирующий эффект. Максимальное воздействие наблюдалось при использовании РУ-185 и РУ-284, когда уровень титра АТ повысился более чем в 3 раза по сравнению с мышами, получившими циклофосфан (p<0,001) (табл.9). Количество АТ при использовании РУ-254 достоверно увеличилось по сравнению с контролем II в 1,4 раза (p<0,05), а по сравнению с экспериментальной моделью иммунодепрессии в 2,3 раза (p<0,001). Иммунотропная активность РУ-355 несколько отличалась от воздействия других производных: увеличивало количество АТ в 2 раза (p<0,001), но, в отличие от соединений РУ-284 и 254 выраженного стимулирующего действия на процесс антителообразования не оказывало.

Таким образом, изучаемые нами производные БИ под шифрами РУ-185, 254, 284 и 355 проявляют выраженные иммунокорригирующие свойства. Они не только статистически достоверно восстанавливают показатели РПГА и РГЗТ у мышей, получавших циклофосфан, но и одновременно оказывают выраженный стимулирующий эффект.

Имеющаяся в научной литературе информация (Любин Г.С., 1997; Оковитый С.В., 2002; Розин М.А., 1971; Chenehev I. et al., 1981; Schneiden H., 1981) дает основание предполагать, что иммунопотенциирующий эффект новых производных БИ также, как и известных препаратов этого химического класса, реализуется через стимуляцию образования цГМФ. Вероятнее всего, под влиянием производных БИ происходит усиление пролиферации Т- и В-лимфоцитов, секреции ими факторов взаимного регулирования, кооперативной реакции и активации эффекторной функции клеток. Таким образом, результаты наших исследований наглядно демонстрируют, что изучаемые нами новые конденсированные производные имидазо(1,2-б)бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 обладают иммуностимулирующими и иммунокорригирующими свойствами, которые способны проявляться на разных стадиях иммуногенеза. Данные соединения содержат в своей структуре имидазольное кольцо, в связи с чем, можно (как уже указывалось выше) предположить сходство их механизма действия с известными препаратами этого химического класса. Но, учитывая широкий диапазон их воздействия на различные физиологические процессы в условиях нормы и патологии, этот механизм представляется более универсальным. В связи с этим, соединения РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355, с нашей точки зрения, являются перспективными для создания на их основе не только высокоэффективных иммуномодуляторов, но и многосторонне действующих адаптагенов.



ВЫВОДЫ

Производные имидазо(1,2-б)бензимидазола под лабораторными шифрами РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 проявляют при внутрибрюшинном введении по ряду показателей выраженную иммунотропную активность и являются перспективными для дальнейших углубленных исследований в этом направлении.

Линейная зависимость в показателях доза-эффект при введении РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 отсутствует. Выраженный иммунотропный эффект в РПГА и РГЗТ эти вещества проявляют в минимальной дозе, составляющей 1/20 от LD₅₀.

Производные бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 эффективны при введении в разные фазы иммуногенеза.

Производные бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 стимулируют пролиферацию тимоцитов, спленоцитов; вызывают выраженные изменения показателей белой крови, стимулируя лейкопоэз и влияя на процессы дифференцировки клеток.

Производные бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 повышают фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, увеличивая количество активных клеток.

Производные бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 восстанавливают индукцию РГЗТ и уровень выработки антител к эритроцитам барана в РПГА после экспериментально вызванной циклофосфановой иммунодепресии.

Конденсированные производные имидазо(1,2-б)бензимидазола РУ-185, РУ-254, РУ-284 и РУ-355 являются перспективными соединениями для дальнейшей разработки с целью создания на их основе эффективных иммуномодуляторов, а, учитывая их известный широкий диапазон влияния на различные физиологические процессы и универсальных адаптогенов.



СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Самотруева М.А. Доклиническое исследование иммунотропной активности некоторых производных бензимидазола / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, А.Б. Матвеев, Д.Ш. Дубина // Тез.докл. III междунар. конф. «Клинические исследования лекарственных средств в России». - Москва. - 2003. - С.373-374.

Самотруева М.А. Поиск перспективных иммуномодуляторов / М.А. Самотруева, А.Б. Матвеев // Труды АГМА «Клинические вопросы современной медицины - 2003. - Т.29. - С. 161-163.

Самотруева М.А. Сравнительная оценка иммуномодулирующей активности дибазола и новых производных бензимидазола / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, А.Б. Матвеев, Е.Н. Лазарева // Тез.докл. IV междунар. конф. «Клинические исследования лекарственных средств в России». - Москва. - 2004. - С.204-205.

Самотруева М.А. Иммунологическая активность производных бензимидазола / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, А.Б. Матвеев, Д.Ш. Дубина // Иммунопатология, аллергология и инфектология. - 2004. - №4. - С.24-26.

Самотруева М.А. Производные бензимидазола как основа создания высокоэффективных иммуномодуляторов / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, А.Б. Матвеев, Е.Н. Лазарева // Тез.докл. ХI Росс. нац. конгр. «Человек и лекарство». - Москва. - 2004. - С.830.

Самотруева М.А. Перспективы применения производных бензимидазола в качестве иммуномодуляторов / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, Д.Ш. Дубина, А.Б. Матвеев // Тез.докл. конф. молод. учен. России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва. - 2004. - С.343.

Самотруева М.А. Аспекты влияния производных бензимидазола на некоторые физиологические процессы в условиях нормы и патологии / М.А. Самотруева // Естественные науки. - 2004. - №7. - С.73-81.

Самотруева М.А. Некоторые аспекты иммуномодулирующего действия новых производных бензимидазола / М.А. Самотруева, С.А.Хиврина, А.Б. Матвеев // Бюлл. экспер. биологии и медицины. - 2005. - № 1. - С. 86-88.

Самотруева М.А. Влияние производных бензимидазола на фагоцитарную активность нейтрофилов / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, Д.Ш. Дубина, А.Б. Матвеев // Труды АГМА «Актуальные вопросы современной медицины». - 2005. - Т.31. - С. 85-88.

Самотруева М.А. Иммуномодулирующая активность имидазо (1,2б)бензимидазола / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, Д.Ш. Дубина, Е.Б. Хлебцова // Технологические основы экономического развития сельского социума / Сб. тр. под ред. А.Л. Иванова. - 12-14 мая 2005 г. - М.: Изд-во «Современные тетради», 2005. - С. 564 -566.

Самотруева М.А. Влияние производных бензимидазола на пролиферативные процессы в лимфоидных органах / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, Д.Ш. Дубина, Е.Н. Лазарева // Тез.докл. V междунар. конф. «Клинические исследования лекарственных средств в России». - Москва. - 2005. - С.139-140.

Самотруева М.А. Перспективы применения новых производных бензимидазола в качестве иммунокорректоров / М.А. Самотруева, С.А. Хиврина, Д.Ш. Дубина // Материалы межвузовской научной конференции. - Курск: КГМУ, 2005. - С. 48-49.

Размещено на Allbest.ru

...