Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

ПСИХОИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ СОЛЕЙ И КОМПОЗИЦИЙ ФЕНИБУТА НА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ДЕПРЕССИИ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Кулешевская Надия Растямовна

Волгоград - 2012

Работа выполнена в ГБОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ" и ГБОУ ВПО "Астраханская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ"/

Научный руководитель:

Иван Николаевич Тюренков, Член-корреспондент РАМН, Заслуженный работник высшей школы РФ, доктор медицинских наук, профессор;

Научный консультант:

Марина Александровна Самотруева, кандидат медицинских наук, доцент.

Официальные оппоненты:

Диляра Шагидуллаевна Дубина, доктор медицинских наук, профессор;

Ольга Вилоровна Решетько, доктор медицинских наук, профессор.

Ведущая организация: ГБОУ ВПО "Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко Министерства здравоохранения и социального развития РФ".

Защита состоится "14" февраля 2012 г. в 10.00 ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 при ГБОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ" (Россия, 400131, Волгоградская область, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ" (Россия, 400131, Волгоградская область, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

Автореферат разослан "___" " _____________" 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор А.Р. Бабаева.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. По данным ВОЗ, депрессия встречается более чем у 120 млн. человек и является четвёртым по тяжести и последствиям заболеванием в мире (Смулевич А.Б., 2007). Среди соматических больных с сердечно-сосудистыми, онкологическими заболеваниями и др., частота развития тревожно-депрессивных состояний составляет 22-33 % и превосходит такое распространенное заболевание, как артериальная гипертензия (Соловьева С. Л., 2008; Рачин А.П., 2010). В ряде исследований установлено, что как эндогенная, так и психогенная депрессия у людей ассоциирована с изменениями показателей иммунной системы (Blume J. et al., 2010), что нередко сопровождается повышением риска развития инфекционной и онкопатологии.

В настоящее время доказан тот факт, что ключевые патогенетические механизмы депрессии обусловлены функциональным дефицитом серотонинергической и сложной дисрегуляцией норадренергической систем, которые тесно взаимодействуют с системой гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), являющейся модулятором выработки основных нейромедиаторов в головном мозге (Ашмарин И.П. и др., 1999; Nemeroff Ch.D., 2000). В связи с этим исследователи выделили новую теорию в развитии депрессии - ГАМК-ергическую, которая сопровождается снижением активности соответствующей системы (Калуев А.В., 2002-2006).

Изучение нейроиммунных механизмов патогенеза депрессии, а также разработка новых фармакологических средств (в частности, в группе производных ГАМК), эффективно купирующих состояние депрессии, и одновременно характеризующихся иммуномодулирующей активностью, является одним из основных направлений современной психоиммунофармакологии.

Цель исследования: изучение особенностей психоиммуномодулирующего действия солей и композиций фенибута на модели экспериментальной депрессии.

Задачи исследования:

1. Провести в ряду структурных аналогов ГАМК, являющихся производными фенибута, скрининг веществ с выраженными иммуномодулирующими свойствами.

2. Изучить психомодулирующие эффекты фенибута и его наиболее активных производных при курсовом введении на модели экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести.

3. Изучить иммуномодулирующую активность фенибута и его наиболее активных производных на модели экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести.

4. Оценить влияние фенибута и его наиболее активных производных на уровень сывороточных цитокинов ИЛ-1в и ИЛ-6 при экспериментальной депрессии.

5. Провести нейрохимический анализ иммунотропного действия наиболее активного производного фенибута, оценив его влияние на лимфопролиферативные процессы в иммунокомпетентных органах при применении в условиях блокады основных нейромедиаторных систем.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение иммуномодулирующей активности фенибута и его новых производных под лабораторными шифрами РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-150, РГПУ-151, РГПУ-177, РГПУ-178, РГПУ-179, РГПУ-189 и гаммоксина - на модели экспериментальной иммунодепрессии. Установлено, что наиболее выраженной иммуномодулирующей активностью обладают фенибут, РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189.

В работе впервые установлены анксиолитические и антидепрессивные свойства новых производных фенибута (РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189), проявляющиеся у крыс-самцов на модели экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести, вызванной хроническим "социальным" стрессом.

Показано корригирующее влияние фенибута и его новых производных РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 на различные звенья иммуногенеза, а также на активность АОС и процессы ПОЛ в иммунокомпетентных органах на модели экспериментальной депрессии разной степени тяжести, вызванной хроническим "социальным" стрессом.

Проведен анализ возможного механизма психоиммуномодулирующего действия фенибута и его новых производных. Установлено, что в основе психоиммуномодулирующего действия фенибута и его новых производных, лежит способность восстанавливать уровень ИЛ-1в и ИЛ-6. Впервые определен нейрохимический механизм иммунотропного действия нового производного фенибута - соединения РГПУ-147.

Теоретическая и практическая значимость. Тема диссертации является составной частью плана совместной научно-исследовательской работы ГБОУ ВПО "Волгоградский государственный медицинский университет" и ГБОУ ВПО "Астраханская государственная медицинская академия".

Полученные в работе данные расширяют теоретические представления о последствиях хронического "социального" стресса и позволяют предположить общий механизм поведенческих и иммунных расстройств, формирующихся при депрессии. Результаты исследования могут быть полезны при разработке новых способов фармакологической коррекции депрессивноподобной патологии с учетом изменений процесса развития заболевания в зависимости от глубины депрессивного расстройства и сопутствующих ему нарушений иммунитета. Выявленные психоиммуномодулирующие свойства новых производных фенибута являются основанием для рекомендации данных веществ в качестве основы для создания лекарственных препаратов с антидепрессивными, анксиолитическими и иммунотропными свойствами.

Положения, выносимые на защиту.

1. Скрининговое изучение иммуномодулирующих свойств структурных аналогов ГАМК в ряду производных фенибута показало, что РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189 и исходное вещество, оказывают наиболее выраженное действие корригирующее действие на гуморальную и клеточную реакции иммуногенеза, а также на пролиферативные процессы в иммунокомпетентных органах.

2. Фенибут и его новые производные - РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - проявляют анксиолитическое и антидепрессивное действие при экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести, вызванной хроническим "социальным" стрессом разной продолжительности.

3. Фенибут и его новые производные - РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - способны устранять развитие иммунного дисбаланса при экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести, вызванной хроническим "социальным" стрессом разной продолжительности.

4. Фенибут и его новые производные, проявляя психоиммуномодулирующую активность, регулируют интенсивность ПОЛ и активность каталазы, как непосредственно в иммунокомпетентных органах, так в гипоталамической и префронтальной областях головного мозга.

5. В основе механизма психоиммуномодулирующего действия фенибута и новых производных является способность восстанавливать уровень ИЛ-1в и ИЛ-6.

6. Нейрохимический анализ показал, что в основе иммунотропного действия наиболее активного производного фенибута - РГПУ-147 - вероятно, лежит влияние на ГАМК_А-бензодиазепиновый ионофорный комплекс, а также на ГАМК_Б-рецепторы.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены и обсуждены на II Международном конгрессе "Актуальные проблемы современной медицины" (Украина, 2009); Международной конференции "Фармацевтическая наука и практика: достижения и перспективы" (Москва, 2009); III Международной конференции "Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины" (Ростов-на-Дону, 2009); VI Российской конференции по нейроиммунопатологии (с международным участием) (Москва, 2010); III общероссийской научной конференции "Фундаментальные и прикладные исследования в медицине" (Сочи, 2010); XI Международном конгрессе "Здоровье и образование в XXI век" (Москва, 2010). По материалам диссертации опубликовано 14 работ, из них 4 публикации в рецензируемых ВАК журналах. Получен 1 патент на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертация содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы и список литературы. Работа проиллюстрирована 5 схемами, 23 рисунками и 12 таблицами. Список литературы содержит 290 источников, из них 122 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на 360 мышах линии СВА обоего пола 3-4-х мес. возраста и на 830 крысах-самцах линии Wistar 6-7 мес. возраста, которых содержали в стандартных условиях вивария. Все манипуляции с животными проводили с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях.

На этапе скрининга проводили сравнительное изучение иммуномодулирующей активности фенибута и его новых производных - гаммоксина, РГПУ-29, РГПУ-189, РГПУ-147, РГПУ-150, РГПУ-151, РГПУ-177, РГПУ-178 и РГПУ-179 на модели экспериментальной циклофосфамидной иммунодепрессии (ЦФА, 150 мг/кг, внутрибрюшинно, однократно). Фенибут и его новые производные вводили внутрибрюшинно в течение 3-х дней за сутки до ЦФА.

С целью моделирования экспериментальной депрессии легкой и средней степени тяжести применяли метод "сенсорного" контакта (хронического "социального" стресса), предложенный Н.И. Кудрявцевой (1989), путем одновременного формирования агрессивного и субмиссивного типов поведения в результате 10 (N10) и 20 (N20) межсамцовых конфронтаций соответственно. Фенибут и его новые производные вводили внутрибрюшинно в течение 10 дней, начиная с последнего дня конфронтаций.

Для оценки психоэмоционального состояния изучали поведение животных в тестах ПКЛ, ОП и "Порсолт" (Воронина Т.А.,1982, 2000; Калуев А.В., 2005; Porsolt R.D., 1978). Изучение особенностей иммунореактивности проводили на основании РПГА, РГЗТ, количественного определения сывороточных JgА, JgМ, JgG, а также посредством латексного теста по оценке фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (Хаитов Р.М., 2005). При постановке РПГА и РГЗТ в качестве антигенного стимула использовали ЭБ. Уровень плазменных цитокинов ИЛ-1в и ИЛ-4 определяли с использованием наборов фирмы "Bender Medsystems". Окислительно-восстановительные процессы в гомогенатах органов иммунной системы и в различных отделах головного мозга оценивали по исходному содержанию МДА, скорости спонтанного и аскорбатзависимого ПОЛ, а также активности каталазы. Интенсивность антиоксидантной защиты всего организма изучали на основании определения активности каталазы и церулоплазмина, а также исходного уровня МДА в сыворотке крови (Гончаренко М.С., 1985; Королюк М.А., 1988; Стальная И.Д., 1977; Тен Э.В., 1981).

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft, США) и BIOSTAT 2008 Professional 5.1.3.1. Достоверность различий в группах сравнения оценивалась при уровне значимости p<0,05 (с указанием индекса группы сравнения).

психомодулирующий иммуномодулирующая фенибут депрессия

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На этапе скрининга проводили сравнительное изучение иммуномодулирующей активности фенибута и его производных - гаммоксина, РГПУ-29, РГПУ-189, РГПУ-147, РГПУ-150, РГПУ-151, РГПУ-177, РГПУ-178 и РГПУ-179 на модели тотальной иммунодепрессии, вызванной ЦФА. Установлено, что все изучаемые аналоги ГАМК уменьшали нарушения гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа, а также пролиферативных процессов в иммунокомпетентных органах (таблица 1). При этом РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 проявляли наиболее выраженный эффект, что объясняет выбор данных соединений для дальнейшего углубленного изучения на модели экспериментальной депрессии.

Таблица 1. Влияние фенибута и его производных на формирование РГЗТ, РПГА, а также массу и клеточность иммунокомпетентных органов в условиях подавления ЦФА-иммунодепрессии

Примечание: ? и * - p<0,05 - степень достоверности относительно контроля 1 и контроля 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони).

Одним из главных симптомов большой депрессии является ангедония, под которой понимается отказ от получения удовольствий людьми в результате развития болезни. По аналогии с депрессией у людей, снижение потребления сахарозы животными свидетельствовало о гедоническом дефиците (ангедония), являющемся симптомом указанной патологии. При этом по мере увеличения числа конфронтаций от N10 до N20, еще в большей степени изменялось соотношение потребления сахарозы/воды в сторону увеличения последнего. Следует подчеркнуть, что фенибут и новые производные РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 устраняли состояние эмоционального "равнодушия", что проявлялось в восстановлении потребления раствора сахарозы.

Результаты изучения поведения животных в тесте "Порсолт" после "социального" стрессирования подтверждают формирование устойчивого депрессивноподобного состояния: отмечено увеличение времени пассивного плавания, снижение латентации до 1-го "зависания", а после 20-ти конфронтаций также и суммарного времени иммобильности. Все изучаемые вещества проявили способность уменьшать нарушения поведения в тесте "Порсолт". При депрессии N10 наиболее выраженные антидепрессивные свойства у агрессивных животных проявили РГПУ-147 и РГПУ-189, у субмиссивных - РГПУ-189; при депрессии N20 у агрессоров - фенибут и РГПУ-189, у жертв - все вещества оказали практически сопоставимое психомодулирующее действие (таблица 2).

Таблица 2. Влияние фенибута и его производных на поведение животных с депрессией в тесте "Порсолт"

Примечание: ? и * - р<0,05 достоверность различий по сравнению с контролем 1 и с контролем 2 соответственно (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)

Изучение поведения животных, подверженных "социальному" стрессированию, в тесте ОП показало, что конфронтации в течение 10-ти и 20-ти дней и у агрессоров и у жертв приводили к развитию устойчивого тревожно-депрессивного состояния, что сопровождалось снижением горизонтальной и вертикальной двигательной активности, а также угнетением исследовательского поведения. На фоне введения изучаемых аналогов ГАМК наблюдалось восстановление всех параметров психоэмоционального состояния. У агрессивных и субмиссивных животных, подверженных 10-ти конфронтациям, фенибут, РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 практически восстановили активность животных до исходного уровня. После 20-ти конфронтаций нарушения локомоторной активности и исследовательского поведения у агрессоров устраняли фенибут и РГПУ-189; при субмиссии наиболее выраженные свойства проявили фенибут и соединения РГПУ-147 и РГПУ-189 (таблица 3).

Таблица 3. Влияние фенибута и его производных на поведение животных с депрессией в тесте ОП

Примечание: ? и * - р<0,05 достоверность различий по сравнению с контролем 1 и с контролем 2 соответственно (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений);

Результаты тестирования животных с агрессивным и субмиссивным типами поведения в ПКЛ показали, что при N10 и N20 наблюдалось достоверное снижение времени нахождения в открытых рукавах теста, количества стоек, исследовательских "свешиваний" и "выглядываний" из закрытых рукавов (p₂<0,05), что свидетельствует о формировании у животных повышенной ситуативной тревожности. По мере увеличения стрессирующего воздействия до 20-ти агонистических взаимодействий у животных снижение двигательно-исследовательского поведения и повышение общего уровня тревожности было выражено в большей степени. Все изучаемые вещества с разной степенью эффективности устраняли поведенческий дефицит у животных с депрессией; наиболее выраженной активностью обладали вещества РГПУ-147 и РГПУ-189 (таблица 4).

Таблица 4. Влияние фенибута и его производных на поведение животных с депрессией в тесте ПКЛ

Примечание: ? и * - р<0,05 достоверность различий по сравнению с контролем 1 и с контролем 2 соответственно (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)

На сегодняшний день установлено, что в основе нарушений психонейроиммуномодуляции при депрессивных расстройствах лежит дисбаланс иммунной системы. Развитие депрессии сопровождается снижением чувствительности ГАМК-ергических структур иммунной системы, что коррелирует с тяжестью психопатологической симптоматики. Сказанное выше делает актуальным изучение иммуномодулирующей активности производных ГАМК. Нами было установлено, что на стадии формирования депрессии (N10) и у агрессоров и у жертв происходило повышение индекса РГЗТ. Длительные межсамцовые конфронтации (N20), напротив, вызывали подавление клеточно-опосредованной РГЗТ, особенно, у субмиссивных животных. У животных с депрессией легкой и средней степени тяжести отмечалось также снижение ТА в РПГА; при этом, увеличение числа межсамцовых конфронтаций приводило к более выраженным изменениям. Фенибут и его производные у агрессоров после 10-ти конфронтаций устраняли явления гиперреактивности клеточного звена иммунитета, тогда как у жертв наблюдалась лишь тенденция к снижению показателей. После 20-конфронтаций изучаемые вещества также восстанавливали клеточную реакцию иммунного ответа, повышая ИР ГЗТ у агрессоров и у жертв (рисунок 1).

Агрессивный тип поведения ИР ГЗТ, %

Субмиссивный тип поведения ИР ГЗТ, %

Титр антител в РПГА, Ig

Титр антител в РПГА, Ig

Рисунок 1. Влияние фенибута и его производных на формирование РГЗТ и РПГА при депрессии легкой и средней степени тяжести

Примечание: ? и Ч - р<0,05 по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (коэффициент Стьюдента с поправкой Бонферрони); _ - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)

Введение изучаемых аналогов ГАМК у крыс с агрессивным и субмиссивным типами поведения после 10-ти конфронтаций способствовало стимуляции антителообразования, что проявлялось увеличением ТА в РПГА не только по сравнению с контролем 2, но и по сравнению с контролем 1. После 20-ти конфронтаций фенибут и его производные РГПУ-147 и РГПУ-189 проявили в отношении гуморального звена иммунокорригирующие свойства (рисунок 1).

Агрессивный тип поведения

Иммуноглобулин А, г/л

Субмиссивный тип поведения

Иммуноглобулин А, г/л

Иммуноглобулин G, г/л

Иммуноглобулин G, г/л

Иммуноглобулин М, г/л

Иммуноглобулин М, г/л

Рисунок 2. Влияние фенибута и его производных на уровень иммуноглобулинов при депрессии легкой и средней степени тяжести

Примечание: ? и Ч - р<0,05 по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (коэффициент Стьюдента с поправкой Бонферрони); _ - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений).

Установлено также, что "социальный" стресс приводит к разнонаправленным изменениям уровня различных типов иммуноглобулинов. Так, независимо от типа поведения после 10-ти дневных конфронтаций наблюдалось повышение IgA и IgM и снижение IgG; после 20-ти конфронтаций отмечалось снижение IgM. Применение фенибута и его производных после 10-ти конфронтаций сопровождалось восстановлением уровня IgA и IgG, при этом все показатели как у агрессоров, так и у жертв достигали фоновых значений у животных группы интактного контроля. Важно отметить, что и у агрессоров, и у жертв РГПУ-147 проявил выраженные стимулирующие свойства в отношении IgM. При депрессии, сформированной в результате 20-ти дневных конфликтах, под влиянием РГПУ-29 и РГПУ-189 в обеих группах уровень IgA достигал показателей животных, не подвергшихся "социальному" стрессу. Восстановление уровня IgG у агрессоров и жертв на фоне 20-ти дневных конфронтаций наблюдалось под влиянием фенибута и РГПУ-147. Уровень IgМ у животных-агрессоров восстанавливался под влиянием РГПУ-29. У субмиссивных животных эффективными являлись РГПУ-147, РГПУ-189 и фенибут (рисунок 2).

Агрессивный тип поведения

Уровень ЦИК, опт. пл.

Субмиссивный тип поведения

Уровень ЦИК, опт. пл.

Рисунок 3. Влияние фенибута и его производных на уровень циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови при депрессии легкой и средней степени тяжести

Примечание: ? и Ч - р<0,05 по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (коэффициент Стьюдента с поправкой Бонферрони); _ - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)

Конфронтации в течение 10-ти и 20-ти дней вызывали снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), при этом более выраженные изменения наблюдались по мере увеличения количества "социальных" конфликтов. Оценка влияния фенибута и его производных на уровень ЦИК при депрессии легкой степени тяжести (N10) показала, что у крыс, получавших фенибут и РГПУ-29, показатель достигал значений контроля 1. Соединения РГПУ-147 и РГПУ-189 также увеличивали уровень ЦИК по сравнению с контролем 2, но при этом, показатели оставались ниже значений в 1-ой контрольной группе. После 20-ти конфронтаций к повышению уровня ЦИК приводило лишь соединение РГПУ-147, тогда как остальные соединения практически не изменяли количественные параметры ЦИК у депрессированных животных, подверженных 20-ти дневным конфронтациям (рисунок 3).

Установлено, что у животных с экспериментальной депрессией легкой степени тяжести (N10) изменения неспецифической иммунореактивности имеют разнонаправленный характер: индекс фагоцитоза (ФИ) снижался и у агрессоров и у жертв; тогда как фагоцитарное число (ФЧ) - повышалось. Необходимо подчеркнуть, что количество активных фагоцитов у агрессивных животных снижалось, в то время как у субмиссивных, наоборот, повышалось. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что на фоне 10-ти дневных конфронтаций при снижении количества клеток, участвующих в неспецифической защите организма, наблюдается компенсаторное увеличение напряженности фагоцитоза. Анализ изменений фагоцитоза при депрессии N20 показал, что у жертв и агрессоров возрастали ФИ и ФЧ. Под влиянием РГПУ-147 у агрессоров и у жертв после 10-ти дневных конфронтаций наблюдалось восстановление фагоцитоза, что проявлялось в увеличении ФИ. Фенибут и РГПУ-189 восстанавливали ФИ лишь у агрессоров, подверженных 10-ти дневным конфронтациям, тогда как в остальных группах - изменения отсутствовали. Восстановление ФИ под влиянием РГПУ-29 наблюдалось лишь у агрессоров при депрессии N 20 (рисунок 4). Что касается интенсивности фагоцитоза, то у агрессивных животных при депрессии легкой степени тяжести отмечено, что восстановление ФЧ происходило под влиянием фенибута и РГПУ-29, в то время как введение РГПУ-147 и РГПУ-189 при указанном типе патологии приводило к еще большему повышению ФЧ. Следует отметить, что у субмиссивных животных при N10 все изучаемые вещества способствовали восстановлению ФЧ, снижая данный показатель до исходных значений. На стадии выраженной депрессии (N20) у агрессивных животных корригирующее действие проявили лишь фенибут, РПГУ-29 и РГПУ-147, достоверно снизив ФЧ; у субмиссивных крыс значимых изменений ФЧ отмечено не было (рисунок 4).

Агрессивный тип поведения

Индекс фагоцитоза, %

Субмиссивный тип поведения

Индекс фагоцитоза, %

Фагоцитарное число

Фагоцитарное число

Рисунок 4. Влияние фенибута и его производных на фагоцитарную активность нейтрофилов при депрессии легкой и средней степени тяжести

Примечание: ? и Ч - р<0,05 по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (коэффициент Стьюдента с поправкой Бонферрони); _ - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)

Учитывая тесную взаимосвязь между состоянием иммунной системы и оксидантным статусом организма один из этапов исследования, мы посвятили изучению уровня ПОЛ и активности каталазы в иммунокомпетентных органах (тимусе и селезенке), а также в отделах ГМ (ПФК и ГТ), наиболее подверженных изменениям при депрессии (Арушанян Э.Б., 2011; Магаева С. В. и др., 2005; Nongpiur A. et al., 2011; Priftis K.N. et al., 2009). Оценка изменений ПОЛ и активности АОС в органах иммунной системы показала, что при депрессии легкой степени тяжести и у жертв и у агрессоров происходило повышение активности каталазы в селезенке на 40-60 % соответственно (р ₁<0,05). В тимусе при вышеуказанном типе депрессии происходило, наоборот, снижение активности каталазы у агрессоров и жертв на 40-60 % соответственно (р ₁<0,05). При депрессии средней степени тяжести наблюдались противоположные изменения: в селезёнке - происходило снижение активности каталазы на 40-60 % (р ₁<0,05); в тимусе - повышение на 40-65 % (р ₁<0,05). В селезенке также было выявлено незначительное повышение активности ПОЛ (р ₁>0,05). Что касается ПОЛ в тимусе отмечено, что на фоне 10-ти дневных конфронтаций происходит повышение показателя более чем на 20 % (р ₁<0,05), тогда как при 20-ти дневном "социальном" воздействии - повышение показателей не носило достоверный характер (р ₁>0,05).

Фенибут и его аналоги РГПУ-29, РПГУ-147 и РПГУ-189 при депрессии легкой степени тяжести оказывали сопоставимое корригирующее действие на активность каталазы в селезёнке; при депрессии средней степени тяжести наиболее активными оказались фенибут и РГПУ-147 (p₂<0,05). На фоне введения всех соединений при депрессии легкой степени тяжести повышалась активность каталазы тимуса (p₂<0,05). При депрессии N20 фенибут и его новые производные оказали корригирующее действие на активность каталазы тимуса.

Наиболее выраженное снижение уровня МДА в селезенке при депрессии легкой степени тяжести в обеих группах происходило после введения РГПУ-189. Остальные изучаемые соединения статистически достоверно уровень ПОЛ в селезенке при депрессии легкой степени тяжести не изменяли. Максимальное снижение процессов пероксидации липидов в тимусе после 10-ти конфронтаций отмечалось при введении РГПУ-147. Остальные изучаемые соединения способствовали менее выраженному снижению уровня МДА в тимусе. У крыс после 20-ти межсамцовых конфронтаций все соединения проявляли корригирующие свойства. Наибольшую активность у агрессивных животных проявило соединение РГПУ-29, у субмиссивных - РГПУ-189.

Изменение ПОЛ и активности АОС в разных областях ГМ у животных с депрессией носило разнонаправленный характер. Агрессия и субмиссия, сформированная в результате "социальных" конфронтаций, приводила к повышению активности каталазы и усилению процессов пероксидации в ПФК (р<0,05), тогда как в ГТ - наряду с интенсификацией ПОЛ наблюдалось снижение активности каталазы (p<0,05). Фенибут, РГПУ-29 и РГПУ-189 у агрессивных животных оказывали корригирующее действие на активность каталазы в ПФК: наблюдалось снижение показателей в 1,5-2 раза по отношению к группе животных с депрессией (р<0,05). Под влиянием всех веществ и у агрессивных и у субмиссивных животных наблюдалось снижение интенсивности ПОЛ в ПФК практически до значений интактных особей (р<0,05). Наиболее выраженные позитивные изменения отмечались при введении РГПУ-189. Все изучаемые соединения у агрессивных животных приводили также к усилению АОЗ в ГТ, что сопровождалось нарастанием активности каталазы (p<0,05); при этом наиболее выраженное увеличение показателя вызывало РГПУ-147 (p<0,05), но, несмотря на активацию системы каталазы под влиянием РГПУ-147, исходное содержание МДА сохранялось на высоком уровне (как и у животных с депрессией). Лишь РГПУ-29 уменьшал повреждающее действие "социального" стресса на ГТ: под его влиянием происходило подавление процессов липидной пероксидации на фоне увеличения активности каталазы. Остальные вещества не оказали влияния на интенсивность ПОЛ и активность каталазы в ГТ. Изменение интенсивности ПОЛ и АОЗ в ПФК и ГТ у животных с депрессией под влиянием изучаемых аналогов ГАМК свидетельствует о возможном участии данных отделов ГМ в реализации их психоиммуномодулирующего действия.

Важную роль в регуляции нейроиммунных взаимодействий при формировании ряда патофизиологических процессах, в том числе и при депрессии, играют ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, фактор некроза опухолей и др. Для изучения возможного механизма действия аналогов ГАМК на процессы психоиммуномодуляции при депрессии мы оценили особенности изменения уровня сывороточных ИЛ-1в и ИЛ-6. Установлено, что у агрессоров происходило незначительное снижение уровня ИЛ-1в на 8 %, у жертв - показатель уменьшился на 40 %. Необходимо подчеркнуть, что у агрессоров и жертв уровень ИЛ-6 достоверно повышался в 2,5-3,5 раза по сравнению с контролем 1. Введение вещества РГПУ-189 сопровождалось восстановлением уровня ИЛ-1в, остальные соединения у агрессивных животных практически не изменяли количественные параметры данного цитокина. У субмиссивных животных все изучаемые соединения восстанавливали уровень ИЛ-1в, снижая показатели до параметров контрольной группы. Все изучаемые аналоги ГАМК вызывали достоверное снижение уровня ИЛ-6 у животных с депрессией; наиболее выраженную активность у агрессивных животных проявили фенибут и РГПУ-147, у субмиссивных - РГПУ-29 и РГПУ-189 (рисунок 5).

Агрессивный тип поведения

Уровень ИЛ, пкг/мл

Субмиссивный тип поведения

Уровень ИЛ, пкг/мл

Рисунок 5. Влияние фенибута и его производных на уровень интерлейкинов при экспериментальной депрессии

Примечание: ? и Ч - р<0,05 по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (коэффициент Стьюдента с поправкой Бонферрони); _ - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений).

Для проведения нейрохимического анализа иммунотропных свойств наиболее активного производного фенибута РГПУ-147 применяли следующие антагонисты нейромедиаторных рецепторов: пикротоксин (блокатор хлорных каналов ГАМК_А бензодиазепинового комплекса), факлофен (антагонист ГАМК_В рецепторов), бикукуллин (селективный антагонист ГАМК_А рецепторов), галоперидол (антагонист центральных D₂-рецепторов), дизоциллин (антагонист NMDA-рецепторов) флюмазенил (антагонист бензодиазепинового сайта ГАМК_А-бензодиазепиновых рецепторов), ципрогептадин (антагонист 5-НТ 2а-серотониновых и H₁-гистаминовых). Снижение иммуностимулирующей активности аналога фенибута РГПУ-147 в отношении лимфопролиферативных процессов в селезенке на фоне применения пикротоксина, факлофена, бикукуллина и флюмазенила объясняет возможное взаимодействие с ГАМК_А-бензодиазепиновым рецепторным комплексом, а также с ГАМК_В рецепторами. Результаты, отражающие влияние РГПУ-147 на процессы в тимусе, показали снижение иммунотропной активности вещества при его применении на фоне введения флюмазенила, являющегося антагонистом бензодиазепинового сайта ГАМК_А-бензодиазепиновых рецепторов. Полученные результаты указывают на то, что реализация действия РГПУ-147 на В-зависимые иммунные реакции, вероятно, осуществляется через взаимодействие с ГАМК_А-бензодиазепиновым ионофорным комплексом и ГАМК_В рецепторами; на Т-зависимые реакции - ГАМК_А-бензодиазепиновым ионофорным комплексом. Кроме того, в реализации иммунотропных свойств РГПУ-147 участвуют, возможно, дофамин-, глутамат- и серотонинергические системы, о чем свидетельствует уменьшение стимулирующего влияния вещества на лимфопролиферативные процессы в тимусе и селезенке на фоне применения галоперидола, дизоциллина и ципрогептадина соответственно.

Таким образом, комплексный анализ результатов проведенного нами исследования показал, что фенибут и его производные РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - обладают выраженным психоиммуномодулирующим действием, что позволяет считать перспективным их дальнейшее углубленное изучение с целью создания на их основе новых лекарственных препаратов.

ВЫВОДЫ

1. В ряду новых солей и композиций фенибута наибольшей иммуномодулирующей активностью обладают вещества под лабораторными шифрами РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189, способствующие восстановлению клеточных и гуморальных иммунных реакций при экспериментальной иммунодепрессии.

2. "Социальные" конфронтации в течение 10-ти и 20-ти дней приводят к развитию у лабораторных животных устойчивого депрессивноподобного состояния легкой и средней степени тяжести, проявляющегося снижением двигательной, ориентировочно-исследовательского активности, а также повышением общего уровня тревожности, сопровождающегося развитием ангедонии. Фенибут и его новые производные - РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - в условиях развития депрессии уменьшают нарушения психоэмоционального состояния, проявляя антидепрессивные и анксиолитические свойства. Наиболее выраженной психомодулирующей активностью обладают РГПУ-147 и РГПУ-189.

3. У животных при депрессии легкой степени тяжести, сформированной в результате 10-ти дневных "социальных" конфронтаций, отмечена активация клеточного звена иммунитета, тогда как при депрессии средней степени тяжести как результата 20-ти дневных конфронтаций - его подавление. При любом типе депрессии отмечено угнетение процессов антителообразования, интенсивность которых находится в обратной зависимости от продолжительности "социального" стресса. "Социальный" стресс оказывает стимулирующее воздействие на активность фагоцитоза. Фенибут, а также его новые производные РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 уменьшают проявления при депрессии иммунного дисбаланса. Наиболее выраженная иммуномодулирующая активность характерна для РГПУ-147.

4. В основе психоиммуномодулирующего действия фенибута и его производных РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 лежит восстановление уровня основных нейроиммунных цитокинов ИЛ-1в и ИЛ-6.

5. Реализация иммунотропного действия РГПУ-147 на В-зависимые иммунные реакции, вероятно, осуществляется через взаимодействие с ГАМК_А-бензодиазепиновым комплексом и ГАМК_В-рецепторами, а на Т-зависимые реакции - ГАМК_А-бензодиазепиновым комплексом.

6. Новые аналоги фенибута - РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - являются перспективными веществами, обладающими анксиолитическими, антидепрессивными и иммунокорригирующими свойствами и могут быть рекомендованы для дальнейшей разработки в качестве основы для создания средств фармакологической коррекции нейроиммунных нарушений, формирующихся при депрессии.

Научно-практические рекомендации:

1. Результаты изучения психоиммуномодулирующих свойств фенибута и его новых аналогов рекомендуется использовать при разработке новых способов фармакологической коррекции депрессии с учетом динамических изменений процесса развития патологии в зависимости от глубины депрессивного расстройства и сопутствующих ему нарушений иммунитета.

2. Выявленные в ходе работы психонейроиммуномодулирующие свойства фенибута после подтверждения на этапе клинических исследований позволяют расширить спектр применения данного препарата.

3. Новые производные фенибута - РГПУ-29, РГПУ-147 и РГПУ-189 - рекомендуется рассматривать как основу для создания лекарственных препаратов с антидепрессивными, анксиолитическими и иммунотропными свойствами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Самотруева М.А. Иммунорегуляторное действие фенибута в условиях липополисахарид-индуцированного иммунного стресса / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Н.Р. Кулешевская, Е.Б. Хлебцова // Экспериментальная и клиническая фармакология*. - 2010. - № 5. - С. 30-32.

2. Тюренков И.Н. Экспериментальное обоснование применения фенибута как модулятора иммунного ответа / И.Н. Тюренков, М.А. Самотруева, Н.Р. Кулешевская, Т.К. Сережникова // Фармация*. - 2010. - № 4. - С. 42-44.

3. Тюренков И.Н. Сравнительное изучение иммуномодулирующих свойств фенибута и гаммоксина / И.Н. Тюренков, М.А. Самотруева, Н.Р. Кулешевская, В.М. Берестовицкая, О.С. Васильева // Экспериментальная и клиническая фармакология*. - 2010. - № 12. - С. 25-27.

4. Тюренков И.Н. Коррекция иммунных нарушений структурным аналогом ГАМК - РГПУ-147 / И.Н. Тюренков, М.А. Самотруева, Д.Л. Теплый, Т.К. Сережникова, Н.Р. Кулешевская // Вестник Вол гМУ*. - 2010. - № 4. - С. 52-55.

5. Кулешевская Н.Р. Влияние фенибута на клеточное и гуморальное звенья иммуногенеза в условиях "социального" стресса / Н.Р. Кулешевская, М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Е.А. Кушниренко, С.А. Бахтиярова // Успехи современного естествознания. - 2011. - №1 С. 134-135.

6. Кулешевская Н.Р. Влияние фенибута на показатели фагоцитоза крыс линии Wistar на модели экспериментальной депрессии / Н.Р. Кулешевская, М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Е.Б. Хлебцова// European Journal Of Natural History. - 2011. - №1 С. 49.

7. Кулешевская Н.Р. Влияние фенибута на формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа и пассивной гемагглютинации крыс // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2010. - №11 С. 26.

8. Кулешевская Н.Р. Фенибут как нейроиммуномодулятор при экспериментальной депрессии / Н.Р. Кулешевская, М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Е.А. Кушниреко // Тез. докл. конф. "Нейроиммунопатология". - Москва. - 2010. - №1 - С. 46-47.

9. Кулешевская Н.Р. Изменение показателей фагоцитоза в процессе формирования оппозитных форм поведения при депрессии / Н.Р. Кулешевская, Е.А. Кушниренко, М.М. Магомедов, С.В. Прилучный // Тез. докл. международ. конф. молодых ученых и студентов. - Архангельск. - 2010. - №1 - С. 148.

10. Самотруева М.А. Влияние фенибута и РГПУ-29на поведен...