Клинико-экспериментальное применение зубных эликсиров для лечения и профилактики заболеваний полости рта

Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Клинико-экспериментальное применение зубных эликсиров для лечения и профилактики заболеваний полости рта

14.01.14 - стоматология

Лолаева Алина Владимировна

Ставрополь - 2011

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ставропольская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сирак Сергей Владимирович

Официальные оппоненты:

Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор Гаража Николай Николаевич

доктор медицинских наук Порфириадис Михаил Павлович

Ведущая организация: ФГУ «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства России»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Кариес зубов и воспалительные заболевания пародонта на сегодняшний день стали своеобразной «визитной карточкой» полости рта не только у взрослых людей, но и у детей и подростков. На сегодняшний день распространенность кариеса зубов составляет 98-100% во всех возрастных группах, распространенность заболеваний пародонта составляет от 60-75% в возрастных группах 19-29 лет (гингивит, кровоточивость десен, зубной камень) до 100% в старших возрастных группах (А.И. Кирсанов с соавт., 2005; А.И. Грудянов, О.А.Фролова, 2009; E.L. Dini, 2007; W.M. Jenkins, 2009; J.M. Albandar, 2010).

Лечебно-профилактические зубные пасты, бальзамы, эликсиры, нити-флоссы и ополаскиватели - эффективный и доступный абсолютному большинству населения инструмент местной профилактики этих заболеваний.

Лечебное действие бальзамов, ополаскивателей, зубных эликсиров и зубных паст проявляется в подавлении роста патогенной микрофлоры в полости рта и задержке развития патологического процесса. Ускоряется заживление тканей пародонта, ощутимо улучшается трофика десен и слизистой, снимаются характерные симптомы воспаления - кровоточивость, гноетечение, зубной налет, зубные камни (Л.М. Цепов, 2010; L.F. Rose 2008; L.А.Unell, 2009, V.В. Clerehugh 2011).

Большинство лечебно-профилактических зубных паст и зубных эликсиров, представленных на российском рынке, в качестве активного ингредиента содержат сильные антисептики: хлоргексидина биглюконат и триклозан. Эти средства обладают высокой антимикробной активностью, и их использование приводит к подавлению не только патогенной, но и сапрофитной микрофлоры, что приводит к дисбактериозу и резистентности патогенных штаммов к существующим антимикробным препаратам, снижая эффективность лечения. Длительное использование данных средств с антисептиками может способствовать обострению воспалительного процесса в пародонте. Это ведет к возникновению рецидивов, не поддающихся коррекции традиционной антибиотикотерапией, а также дисбактериозам (М.Я. Левин, Л.Ю. Орехова, 2008, А.И. Грудянов, И.В. Безрукова, 2010).

Недостатками большинства известных препаратов является то, что при ополаскивании вместе с пародонтопатогенной флорой под действием такого мощного антисептика, как 0,02% раствор хлоргексидина биглюконата, удаляется условно-патогенная микрофлора полости рта, происходит снижение иммунорезистентности мягких тканей полости рта и тканей пародонта. Кроме этого, указанные средства оказывают недостаточное укрепляющее и противовоспалительное действие, при этом, основной акцент фирмами-производителями ставится на дезодорирующее свойство разрабатываемых средств, в то время как эффективное воздействие на ткани пародонта отсутствует.

Данные композиции не устраняют воспаление в пародонтальных карманах и не обладают достаточной проникающей способностью в ткани пародонта и слизистую оболочку полости рта, что не позволяет с достаточной эффективностью использовать их при воспалительных заболеваниях полости рта, а также в целях профилактики кариеса зубов, особенно у детей школьного и дошкольного возраста.

В связи со всем вышесказанным становится очевидным, что разработка отечественных лечебно-профилактических гелей, ополаскивателей и эликсиров с фитокомплексами трав, сочетающих разностороннее лечебно-профилактическое воздействие на ткани полости рта и отсутствие побочных эффектов, является на сегодняшний день одним из самых перспективных направлений стоматологии.

Цель исследования

Разработка и клинико-экспериментальная апробация зубных эликсиров для повышения эффективности лечения воспалительных заболеваний пародонта и профилактики кариеса зубов.

Задачи исследования:

1. Разработать рецептуру и способ приготовления зубных эликсиров для лечения и профилактики заболеваний полости рта.

2. В эксперименте на животных изучить влияние разработанных зубных эликсиров на слизистую оболочку полости рта.

3. На модели экспериментального кариеса и пародонтита изучить влияние разработанных эликсиров на твердые ткани зубов и ткани пародонта.

4. Изучить биохимические показатели ротовой жидкости, пульпы зубов и тканей пародонта под действием разработанных зубных эликсиров.

5. Оценить гигиеническое состояние полости рта при использовании традиционных средств и разработанных зубных эликсиров в различные сроки наблюдения.

Научная новизна. Разработана рецептура, способ производства и обоснована методика применения новых зубных эликсиров (патент РФ на изобретение №2355379 «Лечебно-профилактический эликсир и способ его получения» и патент РФ на изобретение №2352351 «Зубной эликсир для профилактики кариеса зубов»).

Экспериментальным путем установлен низкий раздражающий эффект разработанных зубных эликсиров - среднее значение индекса раздражающего действия на слизистую оболочку полости рта кроликов составляет 0,5 балла.

Впервые в условиях эксперимента установлено снижение интенсивности воспалительного процесса в тканях пародонта и повышении неспецифической резистентности в полости рта при использовании разработанных зубных эликсиров.

Изучено влияние активных компонентов разработанных зубных эликсиров на видовой состав и концентрацию основных представителей пародонтопатогенной и нормальной микрофлоры зубодесневой борозды.

Установлено, что включение разработанных зубных эликсиров в схему комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта нормализует гомеостаз ротовой жидкости и улучшает микроциркуляцию тканей пародонта.

Практическая значимость полученных результатов. Практическому здравоохранению предложены новые зубные эликсиры с достаточно простой технологией их получения с использованием доступных растительных компонентов, обладающие противовоспалительным и реминерализующим действием. Разработан регламент и методические подходы для применения новых зубных эликсиров.

Установлено, что использование разработанных зубных эликсиров в комплексном лечении хронического катарального гингивита увеличивает период ремиссии и снижает повторное проявление клинических симптомов.

В клинических ситуациях в ближайшие и отдаленные сроки наблюдения показана эффективность использования разработанных новых зубных эликсиров для лечения воспалительных заболеваний пародонта и профилактики кариеса зубов. Доказана эффективность применения разработанных зубных эликсиров в комплексе гигиенического ухода за полостью рта у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта.

Разработанный на основании проведенных клинических и лабораторных исследований комплекс лечебно-профилактических мероприятий, включающий применение разработанных зубных эликсиров, позволит оптимизировать тактику оказания стоматологической помощи пациентам с катаральным и гипертрофическим гингивитом.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Разработанные зубные эликсиры эффективны при проведении комплексной профилактики кариеса зубов у детей в индексных возрастных группах 9, 12 и 15 лет (по ВОЗ, 1986).

2. Применение разработанных зубных эликсиров способствует улучшению гигиенического состояния полости рта и уменьшению воспалительных явлений в тканях пародонта.

3. Регулярное использование разработанных зубных эликсиров не вызывает выраженных изменений микробиоценоза полости рта, блокирует адгезию бактерий к поверхности эмали и образование зубной бляшки.

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе на кафедре стоматологии ИПДО СтГМА. Получены патенты РФ на изобретение №2355379 «Лечебно-профилактический эликсир и способ его получения» и патент РФ на изобретение №2352351 «Зубной эликсир для профилактики кариеса зубов».

На разработанные зубные эликсиры получены положительные санитарно-эпидемиологические заключения №26.01.10.915.П.000186.04.08(09) от 14.04.2009, сертификат соответствия № РОСС RU.АЯ21.В12996 срок действия с 17.06.2009 по 16.06.2012. Получено разрешение на клиническое применение разработанных эликсиров от Государственного института доклинической и клинической экспертизы лекарств №19-27/618 от 12.09.2009.

Результаты настоящего научного исследования представлены в конкурсную программу «СТАРТ-2008», учрежденную Правительством РФ. На разработку серии зубных эликсиров от «Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере» автором получен грант по проекту №7218.

Результаты исследования внедрены и используются в лечебной работе государственных и частных учреждений, в том числе стоматологической поликлинике Ставропольской государственной медицинской академии, Ставропольской краевой стоматологической поликлинике, в частных стоматологических клиниках «Фитодент», «Аполония» и «Полет».

Личный вклад автора в исследование. Диссертантом разработаны основные идеи и алгоритм обработки результатов проведённого исследования. Автор самостоятельно провела подробный анализ современной литературы, разработала методологические и методические основы исследования, лично выполнила основные методики исследования (экспериментальные, функциональные, лабораторные, клинические), курировала больных в течение всего времени наблюдения. Автором разработаны протоколы исследований, позволяющие получить информацию по теме диссертации, осуществлять выкопировку сведений из официальной медицинской документации. Результаты исследований зафиксированы в протоколах работы и в индивидуальных картах больных. Статистическая обработка и анализ полученных данных выполнен автором самостоятельно. На основании проведённых исследований сделаны достоверные, обоснованные выводы и разработаны практические рекомендации. Авторский вклад в написание научных работ по теме диссертации - 85%.

Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, получены 2 патента РФ и 2 удостоверения на рационализаторские предложения на изобретение. Материалы диссертационного исследования изложены на ХII научно-практической конференции «Актуальные вопросы челюстно-лицевой хирургии и стоматологии»; посвященной 80-летию кафедры челюстно-лицевой хирургии и стоматологии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (г. Санкт- Петербург, 2009), VII Всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» по объединенной тематике «3D-технологии - новое развитие стоматологии» (Москва, 2010), научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной стоматологии», посвященной 80-летию проф. А.Г. Шаргородского (Смоленск, 2010), XII научно-практической конференции «Актуальные вопросы стоматологии» (г Санкт- Петербург, 2011).

Апробация диссертационной работы проведена на межкафедральном заседании кафедр терапевтической стоматологии, челюстно-лицевой хирургии и хирургической стоматологии, стоматологии института последипломного и дополнительного образования (ИПДО) Ставропольской государственной медицинской академии.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 138 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы характеризующей материал и методы исследования, 2 глав экспериментальных исследований, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Указатель использованной литературы включает 276 источников, из них 125 отечественных и 151 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 19 таблицами, 30 рисунками и фотографиями. Диссертационное исследование выполнено на кафедре стоматологии ИПДО Ставропольской государственной медицинской академии в соответствии с планом научных исследовании академии в рамках отраслевой научно-исследовательской программы № 22 «Стоматология». Номер государственной регистрации: 01200950569.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы клинического исследования. Клинические исследования выполнены в период с 2008 по 2012 годы на базе кафедры стоматологии института последипломного и дополнительного образования Ставропольской государственной медицинской академии. В клинических исследованиях принимали участие 223 школьника 10-12 и 13-15 лет средних школ №21, 22 Промышленного района г. Ставрополя. У отобранных для наблюдения детей выявлен хронический катаральный гингивит и кариес зубов. Дети каждой возрастной группы в свою очередь были разделены на основную и контрольную группу. После изучения исходных данных, характеризующих состояние твердых тканей зубов и пародонта, в обеих возрастных группах были проведены лечебно-профилактические мероприятия, включавшие в себя обязательную санацию полости рта и обучение детей правильной гигиене полости рта.

Для полосканий в основной группе использовали разработанные зубные эликсир-1 и эликсир-2, 2 раза в сутки - утром и вечером, после чистки зубов, в виде полосканий по 3-5 минут. В контрольной группе для полосканий использовался зубной эликсир «Мятный». В домашних условиях детям основной и контрольной групп рекомендовалось 2-кратная (утром и вечером) чистка зубов лечебно-профилактической пастой «Синквель-актив». Профилактический курс применения разработанных зубных эликсиров в виде полосканий в течение 1 месяца проводились с периодичностью 1 раз в год.

Определение интенсивности и распространенности кариеса зубов у детей проводилось соответственно рекомендациям ВОЗ. Распространенность кариеса определялась по числу лиц с кариозными зубами на количество обследованных и выражалась в процентах. Показатель интенсивности кариеса зубов на одного обследованного определялся как среднее цифровое значение индексов КПУ (постоянных) и КП (в+п) зубов и полостей.

При обследовании детей, наиболее информативными для выявления распространенности и интенсивности кариеса в популяции является возрастная группа 10-12, для заболеваний пародонта - 13-15 лет. Поражаемость зубов кариесом в возрасте 12 лет и состояние пародонта в 15 лет позволяют наиболее объективно судить об эффективности проводимых профилактических мероприятий.

Оценка состояния пародонта проводилась по следующим клиническим признакам: цвету, форме, размеру десневых сосочков, наличию кровоточивости при пальпации и зондировании десневой борозды. Для объективной оценки состояния пародонта у детей проводили комплексное исследование тканей пародонта с использованием гигиенических и пародонтологических индексов: РМА, гигиенического индекса Грина-Вермильона, индекса кровоточивости, пробы Шиллера-Писарева, индекса СРІТN. Определение и подсчет индексов проводили по общепринятым методикам.

При определении электрофоретической подвижности ядер клеток буккального эпителия приводили оценку комплекса измеряемых зарядовых параметров КБЭ: процент подвижных ядер и плазмолемм клеток, их амплитуд. Благодаря данной методике можно объективно оценить состояние клеточного метаболизма и общую функциональную активность клетки. Исследования проводились утром, натощак, после тщательного полоскания полости рта. С помощью аппарата «Parkell» проводили микроэлектрофорез при токе силой 150 мкА и напряженности электрического поля 30 В/с в области слизистой оболочки щеки пациента. Частота изменения полярности для удобства подбиралась экспериментально. Затем со слизистой щеки шпателем брался соскоб. Процент подвижных ядер и плазмолемм КБЭ, их амплитуды смещения и соотношения этих амплитуд в каждом препарате оценивались для 100 неповрежденных клеток.

Целью первой части экспериментального исследования являлась оценка токсикологического потенциала разработанных зубных эликсиров. При проведении экспериментальных исследований использовано 24 кролика породы «Серый великан» 2-х месячного возраста. Все животные были разделены на 4 группы: 2 основные и 2 контрольные, по 6 животных в каждой группе.

В 1-ой основной группе (6 кроликов) животным проводили по 3 полоскания полости рта в сутки разработанным зубным эликсиром-1 в течение 60 суток с помощью резиновой груши емкостью 20 мл. Расход раствора на одно полоскание - 20 мл, суточная доза - 60 мл. В 1-ой контрольной группе (6 кроликов) полоскания проводили 0,02% раствором хлоргексидина биглюконата.

Во 2-ой основной группе (6 кроликов) животным проводили по 3 полоскания полости рта в сутки разработанным зубным эликсиром-2 в течение 60 суток с помощью резиновой груши емкостью 20 мл. Расход раствора на одно полоскание - 20 мл, суточная доза - 60 мл. Во 2-ой контрольной группе (6 кроликов) полоскания проводили 0,02% раствором хлоргексидина биглюконата.

Через 14, 30 и 60 суток под тиопенталовым наркозом у каждого животного проводили забор биоматериала со стороны десны и щеки (фрагменты ткани размером 0,5х05 см). Полученный гистологический материал окрашивали гематоксилин-эозином.

Во второй части экспериментальных исследований для выяснения эффективности применения разработанных зубных эликсиров как кариеспрофилактического и пародонтопротекторного препарата было проведено две серии эксперимента, в которых использовалось моделирование кариесогенной ситуации и пародонтита.

При проведении экспериментальных исследований использовано 52 морские свинки 1,5-3-месячного возраста, 40 - в основных группах и 12 - в контрольной. Формирование групп проводилось с учетом одинакового представительства в каждой группе разнополых особей и отклонения от средней массы животных не более, чем на 10%.

Кариеспрофилактическую эффективность разработанных зубных эликсиров изучали на модели кариеса, которая заключается в переводе одномесячных морских свинок на кариесогенный рацион Стефана. В состав диеты входят: 1 г сухой лиофилизированной печени крупного рогатого скота, 10 г сухого обезжиренного молока и 20 г сухарей. Указанное количество компонентов рассчитано на суточный рацион одной морской свинки.

В течение 40 дней проводили ежедневные полоскания полости рта морских свинок с помощью резиновой груши емкостью 20 мл. Расход раствора на одно полоскание - 20 мл.

В эксперименте использовались месячные морские свинки стадного разведения со средним весом 220,5 8,5 г. Все животные были разделены на 3 группы:

1 группа - контрольная - интактные животные, находилась на обычной диете вивария (6 животных); 2 группа - 10 животных, кариесогенная диета с ежедневным орошением полости рта физраствором; 3 группа - 10 животных, кариесогенная диета с ежедневным орошением полости рта разработанным зубным эликсиром.

Через 30 дней после начала эксперимента у морских свинок собирали ротовую жидкость для исследования активности ферментов, концентрации кальция, фосфора. После чего под тиопенталовым наркозом выводили животных из эксперимента.

Оценку интенсивности кариозного процесса проводили по следующим показателям: числу кариозных поражений в среднем на одну морскую свинку, глубине поражения зубов кариесом, активности ферментов в пульпе резцов и в ротовой жидкости, концентрации кальция и фосфора в ротовой жидкости.

Кариес классифицировали следующим образом: начальный - кариозная полость в пределах эмали (1 балл), средний - кариозная полость захватывает верхние слои дентина (2 балла), глубокий - обширная кариозная полость, достигающая пульповой камеры (3 балла).

Пародонтопротекторное действие разработанных зубных эликсиров было изучено на модели пародонтита по Евдокимову. Состав диеты: пшеничная мука - 10 г, сухое молоко - 10 г, крахмал - 10 г, сахар - 5 г, физиологический раствор - 2 мл. Указанное количество компонентов рассчитано на суточный рацион 1 морской свинки. При моделировании пародонтита было использовано 34 морские свинки стадного разведения. Животные были разделены на три группы:

1 контрольная группа - животные, находившиеся на стандартном рационе вивария (6 животных); 2 группа - животные с экспериментальным пародонтитом с обработкой ротовой полости физиологическим раствором (10 животных). 3 группа - экспериментальный пародонтит с обработкой ротовой полости разработанным зубным эликсиром (10 животных).

Для обработки полости рта морских свинок производили полоскания полости рта 3 раза в день, 7 раз в неделю. Расход раствора 20 мл на одно полоскание, для полосканий использовали резиновую грушу емкостью 20 мл.

По окончании эксперимента были проанализированы результаты биохимических исследований ротовой жидкости, крови, десен животных. Через 75 дней у морских свинок после пилокарпиновой стимуляции собирали слюну. Оценку пародонтопротекторного действия разработанных зубных эликсиров проводили по показателям активности лизосомальных ферментов ротовой жидкости и тканей десны. Гомогенаты готовили на физиологическом растворе. В ротовой жидкости проводили определение содержания белка, активности щелочной и кислой фосфатаз, общей протеолитической активности. Содержание белка и активность ферментов ЩФ, КФ, эластазы и ОПА определяли в ротовой жидкости и в гомогенатах десны.

Методы статистического анализа. Материалы исследования подвергнуты математической обработке на персональном компьютере с помощью пакетов статистических программ Exel 2007, Statistica for Windous 5.0. Результаты представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т). Достоверность различий (Р) между значениями в разные периоды времени внутри каждой из групп пациентов оценивалась с помощью Т-критерия Вилкоксона (для сопоставления показателей, измеренных в двух разных условиях на одной и той же выборке испытуемых). Для сопоставления двух, трех или более эмпирических распределений одного и того же признака использовали ч² - критерий Пирсона. При сравнении значений исследуемого показателя в разных группах в аналогичные периоды времени для оценки достоверности различий использовался U-критерий Манна-Уитни (для независимых выборок) и метод ранговой корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1 серия эксперимента (РЗЭ-1). Результаты исследования биоптататов, взятых со щеки животных контрольной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, показали, что на 14 и 30 сутки выявлен умеренный периваскулярный отек всех слоев дермы, а также умеренная инфильтрация как дермы, так и гиподермы круглоклеточными элементами. В небольшом количестве круглоклеточные элементы скапливались вокруг кровеносных сосудов. При оценке биоптатов животных основной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, на 14 сутки после начала эксперимента, в дерме и гиподерме также, как и в контрольной группе, выявлен незначительный отек. Скопление тканевой жидкости в умеренном количестве выявлено в сосочковом слое, вокруг кровеносных сосудов (периваскулярный отек), между пучками волокон в сетчатом слое, вокруг луковицы корня волоса (рис. 1).

Рис. 1. Микропрепарат. Основная группа. Скопление тканевой жидкости в сосочковом слое биоптата. Справа - Скопление тканевой жидкости между пучками волокон в сетчатом слое. Срок 14 суток. Окраска гематоксилином и эозином. X 140

Наряду с отеком, сосочковый и сетчатые слои инфильтрированы круглоклеточными элементами, т.е. иммунокомпетентными клетками - лимфоцитами и плазмоцитами. В небольшем количестве круглоклеточные элементы скопились вокруг кровеносных сосудов. ИРД на данном сроке наблюдения составил 1,3±0,3 балла.

При оценке биоптатов, взятых со щеки животных основной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, на 30 сутки после начала эксперимента выявлена менее обильная, чем при наблюдении в срок 14 суток, инфильтрация тканей круглоклеточным инфильтратом: небольшое количество круглоклеточного инфильтрата отмечено лишь в сосочковом слое дермы. Значительно меньшее их количество обнаружено в сетчатом слое, вокруг кровеносных сосудов и в гиподерме. Явления отека практически не выражены. ИРД на данном сроке наблюдения составил 0,7±0,1 балла. На 60 сутки после начала эксперимента, выявлено полное отсутствие отека, круглоклеточные элементы выявлены в незначительном количестве в поверхностных слоях биоптата (рис. 2). ИРД на данном сроке наблюдения составил менее 0,1 балла (Р<0,05).

Рис. 2. Микропрепарат. Основная группа. Отсутствие отека в поверхностных и глубоких слоях биоптата. Справа - незначительное количество круглоклеточных элементов в поверхностных слоях биоптата. Срок 60 суток. Окраска гематоксилином и эозином. X 140

зубной эликсир пародонт

2 серия эксперимента (РЗЭ-2). Результаты исследования биоптататов, взятых со щеки и десен животных контрольной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, показали, что на 14-30-60 сутки в дерме и гиподерме имеется отек. Скопление тканевой жидкости в умеренном количестве выявлено в сосочковом слое, вокруг кровеносных сосудов, между пучками волокон в сетчатом слое, вокруг луковицы корня волоса. Наряду с отеком, сосочковый и сетчатые слои инфильтрированы круглоклеточными элементами, т.е. иммунокомпетентными клетками (лимфоцитами и плазмоцитами). На фоне значительного отека инфильтрат отмечается и вокруг кровеносных сосудов. ИРД на данном сроке наблюдения составил 2,4±0,5 балла.

Результаты исследования гистологических материалов, взятых со щеки и десен животных основной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, показали, что на 30 сутки наряду с круглоклеточным инфильтратом имеет место наличие фибробластов и других соединительнотканных клеток в сосочковом слое (рис. 3).

Рис. 3. Микропрепарат. Основная группа. Периваскулярный отек вокруг кровеносных сосудов. Срок 14 суток. Справа - появление фибробластов и других соединительнотканных клеток в сосочковом слое. Срок 30 суток. Окраска гематоксилином и эозином. X 140, справа - Х240

ИРД на данном сроке наблюдения составил 0,8±0,4 балла.

На 60 сутки исследования отек исчезает, круглоклеточные элементы выявлены в незначительном количестве. Скопление тканевой жидкости в умеренном количестве выявлено только в сосочковом слое, межтканевая жидкость выявляется между пучками волокон в сетчатом слое и вокруг кровеносных сосудов, однако, интенсивность отека незначительная (рис. 4). ИРД на данном сроке наблюдения составил 0,4±0,2 балла.

Рис. 4. Микропрепарат. Основная группа. Незначительный отек между пучками волокон в сетчатом слое. Срок 60 суток. Справа - незначительный отек вокруг луковиц корней волос и кровеносных сосудов. Срок 60 суток. Окраска гематоксилином и эозином. X 140

Таким образом, дистрофических и некротических изменений в биоптатах животных основной группы не обнаружено, что свидетельствует об отсутствии токсикологических свойств у разработанных зубных эликсиров даже при длительном их применении.

3-я серия эксперимента. Исследование кариеспрофилактических свойств разработанного зубного эликсира проведены с использованием экспериментальной модели кариеса Стефана. Содержание животных на кариесогенном рационе приводило к существенному росту количества кариозных поражений в сравнении с животными контрольной группы (с 4,20,3 до 8,80,5; Р0,05) и увеличению глубины кариозных полостей (с 2,10,2 до 4,30,5; Р0,05). На фоне развития кариозного процесса ежедневные полоскания ротовой полости морской свинки РЗЭ оказывали выраженный ингибирующий эффект - количество и глубина кариозных поражений у этих животных практически соответствовали таковым у животных контрольной группы, получавших стандартный рацион вивария. Установлено, что у морских свинок контрольной группы активность щелочной фосфатазы в пульпе составляет 18,91,2 нкат/г. Кариесогенный рацион снижает этот показатель почти в 2 раза - 8,40,7 нкат/г.

Активность кислой фосфатазы пульпы на фоне кариеса напротив, резко возрастает с 0,190,04 до 0,310,02 нкат/г ткани. Поскольку принято считать кислую фосфатазу (КФ) маркерным ферментом катаболизма твердых тканей, можно сделать заключение о наличии значительных изменений, происходящих в пульпе зубов под влиянием кариесогенного рациона. Профилактические полоскания полости рта морских свинок РЗЭ существенно снижают активность КФ и повышают уровень ЩФ в пульпе резцов морских свинок. Числовые значения этих показателей у животных группы наблюдения для щелочной фосфатазы, достоверно неотличимы от соответствующих показателей у животных контрольной группы и составляют 17,72,2 и 18,91,9 (P0,5), и для кислой фосфатазы - 0,190,29 и 0,160,05 нкат/г; (P0,6) соответственно.

Биохимический анализ состава ротовой жидкости морских свинок показал, что экспериментальный кариес вызывает повышение активности всех изучаемых ферментов, а также содержание белка и уровня кальция. Так, ОПА возросла с 3,230,21 до 3,98 0,46 нкат/л, а активность ЩФ увеличилась с 4,26 0,59 до 6,090,731 нкат/л при сравнении с показателями контрольной группы. Особенно выраженные изменения в ротовой жидкости зарегистрированы для активности эластазы и КФ. Эти показатели при кариесе возросли более, чем в 2,2 раза. При этом содержание фосфатов в слюне достоверно не изменилось. Полученные данные свидетельствуют о существенных метаболических нарушениях, связанных с деминерализацией твердых тканей зубов и одновременном возникновении явлений воспаления в ротовой полости. Особого внимания заслуживает факт увеличения уровня ионизированного кальция в слюне морских свинок при кариесе. Наиболее вероятно, это связано с выходом ионов кальция из эмали зубов.

Применение разработанного зубного эликсира оказало положительное действие на все изучаемые показатели ротовой жидкости. Так, содержание белка и кальция, а также активность ЩФ и ОПА практически соответствует показателям этих значений у животных контрольной группы. Отмечается тенденция к снижению активности эластазы и КФ, однако их значения остаются недостоверными в сравнении с таковыми у контрольной группы животных (Р>0,05).

Ежедневное применение разработанного зубного эликсира в виде полосканий ротовой полости ингибирует развитие кариозного процесса, о чем свидетельствуют нормализация активности всех изучаемых ферментов и содержание белка в десне у животных группы наблюдения. Все показатели не имеют достоверных отличий от соответствующих в группе здоровых животных.

Проводя итог проведенным экспериментальным исследованиям, можно сделать заключение о высокой кариеспрофилактической эффективности разработанного зубного эликсира. Снижение интенсивности кариозного процесса под воздействием раствора разработанного зубного эликсира, по всей видимости, происходит, прежде всего, за счет повышения активности и нормализации минерализующей функции пульпы зубов.

4-я серия эксперимента. Исследование противовоспалительного и пародонтопротекторного действия разработанного зубного эликсира проводили на экспериментальной модели пародонтита по А.И. Евдокимову. В условиях вивария Ставропольского аграрного университета при проведении сравнительного анализа различных моделей показано, что предложенный Евдокимовым рацион вызывает изменения в тканях пародонта у морских свинок, в среднем через 2 месяца. Данные изменения соответствуют пародонтиту средней тяжести у человека, что позволяет экстраполировать полученные данные на больных.

Биохимический анализ ротовой жидкости морских свинок показал резкий рост активности деструктивных ферментов, участвующих в гидролизе белковых структур мягких тканей пародонта - эластазы и ОПА. Следствием этого является почти двукратное увеличение уровня водорастворимого белка в слюне: с 2,990,48 до 6,450,42 г/л. На фоне пародонтита наблюдается также подъем активности фосфатаз: щелочной в 1,4 раза и кислой - в 2,3 раза. Ежедневное применение разработанного зубного эликсира, в виде орошений полости рта оказывает выраженный пародонтопротекторный эффект, числовые показатели активности эластазы (0,540,03 и 0,450,07 мккат/л; Р0,5) и щелочной фосфатазы (5,670,39 и 3,970,39 нкат/л; Р0,5) основной группы достоверно неотличимы от соответствующих значений в контрольной группе. ОПА, содержание белка, и активность КФ под влиянием разработанного зубного эликсира, хотя и остаются выше контрольных значений, но отмечается явная тенденция к их снижению.

Воспроизведение в эксперименте пародонтита приводит к развитию активно текущего воспаления в тканях пародонта. Об этом объективно свидетельствует достоверное увеличение активности эластазы в десне (с 36,22,09 до 45,31,27 мккат/кг) и содержания белка (с 59,96,71 до 83,24,11 г/кг). Активность лизосомального фермента КФ на фоне пародонтита выросла более чем в 2,2 раза.

Проведенные исследования показали, что профилактическое применение разработанного зубного эликсира в виде орошений способствовало снижению всех изучаемых показателей в тканях десны. При этом уровень ОПА, активность ЩФ и содержание белка в гомогенатах десны третьей группы животных соответствовали таковым значениям у контрольной группы. Под влиянием разработанного зубного эликсира, существенно снижалась активность эластазы и КФ, но контрольных значений эти показатели не достигали.

Полученные результаты биохимического анализа ротовой жидкости и тканей десны свидетельствуют о выраженном противовоспалительном действии разработанного зубного эликсира. Развитие экспериментального пародонтита у морских свинок сопровождается и определенными изменениями в сыворотке крови, что выражалось в повышении уровня ОПА и активности ЩФ.

Достоверное повышение содержания кальция на фоне пародонтита (Р0,05) косвенно указывает на процессы деминерализации обезыствляющихся тканей. Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови морских свинок при этом достоверно не изменяется (Р0,5 и Р0,7). На основании произведенного биохимического анализа тканей десны и ротовой жидкости животных, можно предположить, что механизм действия разработанного зубного эликсира заключается в предупреждении экссудативной фазы воспалительного процесса, за счет непосредственного воздействия на метоболизм эндотелия, снижая проницаемость сосудистой стенки.

Кроме того, разработанный зубной эликсир предупреждает повышение активности лизосомального фермента КФ в десне и в ротовой жидкости животных с экспериментальным пародонтитом, что может говорить о стабилизации лизосомальных мембран под действием этого препарата и позволяет предположить наличие мембранотропных свойств разработанного зубного эликсира. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности применения разработанного зубного эликсира для профилактики воспалительно-дистрофических заболеваний пародонта на основании его ангиопротекторных, противовоспалительных, мембрано-стабилизирующих свойств.

Экспериментальные исследования, показали высокую кариеспрофилактическую и пародонтопротекторную эффективность разработанных зубных эликсиров и позволили проведение их клинической апробации.

Проведенный первичный осмотр детей выявил довольно высокие показатели распространенности и интенсивности кариеса зубов. В возрастной категории детей 10-12 лет в основной и контрольной группе показатели интенсивности заболеваемости кариесом по индексу КПУз составляли: 2,32±0,22-2,34±0,07 и КПУп - 2,29±0,31-2,19±0,33 соответственно; распространенность кариеса достигала 92,5%. В группе 13-15-летних детей распространенность кариеса достигала 95,8% при показателях КПУз 2,74±0,16-3,09±0,15 и КПУп 3,22±0,31-3,01±0,27 соответственно. Таким образом, исходные показатели КПУз и КПУп в основной и контрольной группах были практически равны.

После проведенных мероприятий во всех группах проведено обучение правильной чистке зубов и гигиене полости рта, применение лечебно-профилактических зубных паст; в основных группах - дополнительно разработанного зубного эликсира в виде ежедневных полосканий. Затем в основных группах по достижении положительного эффекта при лечении гингивита, для профилактики кариеса зубов, назначали полоскания разработанным зубным эликсиром для профілактики кариеса зубов в домашних условиях в течение месяца. Интервал проведения курсов лечения - 1 год. Осмотр с целью изучения интенсивности кариеса проводился 2 раза в год. По прошествии одного года была установлена прогрессирующая интенсивность кариеса зубов у детей контрольных групп.

Так, интенсивность кариеса зубов в этих группах через год достигла в младшей возрастной группе КПУз - 3,54±0,66; КПУп - 4,09±0,51. В старшей возрастной группе КПУз - 3,94±0,55 КПУп - 4,72±0,39 соответственно.

Между тем, у детей основных групп эти же показатели были значительно ниже. Интенсивность кариеса по индексу КПУз составила - 2,66±0,27 и КПУп - 2,89±0,23 у 10-12-летних детей; КПУз - 3,45±0,16 и КПУп - 3,69±0,12 у 13-15-летних соответственно.

Достаточно наглядно эти изменения видны при сравнении годового прироста кариеса в основной и контрольной группе. В основной группе 10-12-летних детей прирост интенсивности кариеса зубов составил 0,48-0,52 ед., что в среднем, в 1,9 раза меньше, чем этот же показатель у детей контрольной группы 0,94 - 1,15. У детей 13-15 лет годовой прирост интенсивности кариеса зубов в основной группе составил 0,14 - 0,27 ед., что в среднем, в 2,7 раза ниже, чем в контрольной группе, где он достигал 0,44-0,83 ед. Таким образом, следует заключить, что противокариозная эффективность разработанного зубного эликсира составляла от 26,4% в младшей возрастной группе до 32,3% - в старшей.

Результаты, полученные в клинике полностью, согласуются с данными экспериментальных исследований и свидетельствуют о высокой кариеспрофилактической эффективности разработанного зубного эликсира, что позволяет рекомендовать его к использованию для профилактики и лечения начального кариеса зубов.

Одним из методов определения клинической эффективности разработанного зубного эликсира в лечении воспалительных заболеваний полости рта (хронический катаральный гингивит) являлось изучение динамические изменения гигиенических и пародонтальных индексов - Грина-Вермильона, РМА, кровоточивости, пробы Шиллера-Писарева, индекса СРITN.

У детей младшей возрастной группы до лечения фиксировался высокий индекс кровоточивости (1,290,22 - в основной группе и 1,340,07 - в контрольной группе, Р<0,05), также отмечалось появление в этом возрасте твердого зубного налета (наддесневой твердый камень у нижних центральных резцов). Индекс Грина-Вермильона соответственно составил 1,240,22 в контрольной группе и 1,270,34 в основной группе.

После проведенного курса терапевтического лечения в обеих группах на 3-4 посещение наблюдалось купирование воспалительного процесса, о чем свидетельствовало снижение значений всех пародонтологических индексов. На завершающем этапе лечения индекс Грина-Вермильона снизился после лечения 2,3 раза в контрольной группе и в 2,9 раза в основной группе. Значения индекса Шиллера - Писарева уменьшились на 19,8% в контрольной группе и на 24,6% в контрольной группе. Значительно снизился индекс кровоточивости в обеих группах, которые достигли значений 0,550,17 и 0,320,41 соответственно. Состояние полости рта у детей в контрольной группе по индексу Грина-Вермильона сохранялось удовлетворительным на протяжении года (0,490,14 - после лечения; 0,920,12 - через полгода; 0,950,09 - через год), к концу второго года показатели ухудшились до значений 1,340,67, приближаясь к первоначальным значениям, полученным до лечения.

В основной группе гигиенический статус и состояние пародонта оставалось более стабильным в течение всего срока наблюдения 0,640,22 - после лечения, 0,550,12 - через полгода, 0,480,16 - через год и 0,390,04 - через 2 года по индексу Грина-Вермильона. В обеих группах, после проведения лечения, достоверности результатов получено не было, однако, при последующих осмотрах появляется достоверная разница в значениях индекса Грина-Вермильона (Р<0,01), которая сохраняется на протяжении последующих осмотров. Достоверные отличия выявлены между значениями индекса Шиллера-Писарева в основной и контрольной группе через полгода лечения (Р<0,01), минимальное значение было зафиксировано через год - Р<0,01, и через два года значение достоверности составило Р<0,01. Наблюдалась отчетливая разница между значениями по индексу кровоточивости, которая определялась сразу после лечения (Р<0,01) и увеличивалась с течением времени, составляя к концу второго года (Р<0,001). По всей вероятности, явное снижение индекса кровоточивости связано непосредственно с ангиопротекторными свойствами разработанного зубного эликсира.

В старшей возрастной группе детей 13-15 лет, при первом осмотре отмечались более высокие, по сравнению с младшей группой, значения индексов Шиллера-Писарева (1,66 0,17 в контрольной группе и 1,92 0,24 - в основной группе) и РМА (52,98 1,92 - в контрольной группе и 53,062,12 - в основной группе), что свидетельствует о нарастании воспалительного процесса с возрастом и его генерализации. Также в этой возрастной группе выявлен поддесневой зубной камень, твердые зубные отложения чаще всего были зафиксированы у 29,7% обследованных. Для этой группы также был характерен более высокий уровень гигиены полости рта (0,650,17 - по индексу Грина-Вермильона). При контрольном осмотре после лечения наблюдалось улучшение всех клинических признаков и снижение показателей всех исследуемых индексов. Достоверные отличия сразу после проведенного курса лечения были отмечены только для индекса кровоточивости (Р<0,02). Результаты остальных показателей индексов были сходными, значения индекса Грина-Вермильона уменьшились в среднем, в 1,9 раза.

Индекс РМА после лечения уменьшился на 40,2% в контрольной группе и на 39,4% - в основной группе. Показатели пробы Шиллера-Писарева также снизились до значений 1,290,25 и 1,340,09 соответственно. На протяжении дальнейшего наблюдения отмечается следующая динамика: в течении двух лет гигиена полости рта в обеих группах оставалась удовлетворительной, индексы гигиены имели довольно низкие значения, по сравнению с первоначальными. Индекс, характеризующий хронический воспалительный процесс в тканях десны - проба Шиллера-Писарева, достоверно отличается, начиная с показателей полученных через полгода после лечения (рис. 5). Такая же ситуация характерна для индекса кровоточивости (Р<0,02), РМА (Р<0,01), CPITN (Р<0,01).

Таким образом, анализируя результаты двухлетних наблюдений, можно заключить, что применение разработанного зубного эликсира в совокупности с традиционным лечением, способствовало стабилизации положительного клинического эффекта и сохранение его в течение длительного времени. Все определяемые клинические индексы имели более низкие значения в группах, где применялся РЗЭ-1, что наглядно прослеживалось в динамике наблюдений.

Рис. 5. Динамика изменений воспалительного процесса в тканях пародонта у детей 13-15 лет по индексу Шиллера-Писарева

На протяжении всего периода в основных группах показатели индексов сохранялись на низком уровне и, увеличение их с течением времени, происходило более плавно. У детей младшего возраста более низкую эффективность лечения можно объяснить тем, что в период сменного прикуса воспалительные изменения, наблюдаемые в тканях пародонта, в этом возрасте являются «физиологичными» и связаны с травмированием мягких тканей прорезывающимися постоянными или подвижными временными зубами. Это подтверждается более высокими изначально, по сравнению со старшими группами, значениями индексов кровоточивости, Шиллера - Писарева, РМА, CPITN, которые характеризуют длительность, тяжесть и нуждаемость в лечении воспалительного процесса и самыми высокими значениями индекса Грина-Вермильона, который свидетельствует о недостаточной гигиене полости рта в этом возрасте.

Целесообразность применения РЗЭ-2 для комплексного лечения катарального гингивита, основывалась на механизме его действия, главным из которых является нормализация нарушений микроциркуляции и проницаемости микрососудов за счет стабилизации мембран и улучшения метаболизма эндотелия, а так же его неспецифическое противовоспалительное действие. Выявленное в ходе исследований противовоспалительное действие РЗЭ-2 на ткани пародонта при хроническом катаральном гингивите оказывало выраженный терапевтическом эффекте и пролонгировало результаты лечения (рис. 6).

Рис. 6. Динамика изменений воспалительного процесса в тканях пародонта у детей 10 - 12 лет по индексу кровоточивости

Полученные данные свидетельствуют о том, что в исходном состоянии наличие воспалительных процессов в тканях десны существенно снижает электрофоретическую подвижность ядер и подвижность клеточных мембран КБЭ по сравнению с нормой. Показатели среднего значения амплитуды смещения ядер и плазмолем также снижаются по сравнению с нормой. После завершения курса лечения в основной группе отмечалось значительное увеличение клеток с подвижным ядром и клеточной оболочкой. Средний процент подвижности электроотрицательных ядер возрастал, в среднем, на 35,7% в соотношении с данным показателем до лечения, процент клеток с подвижной плазмолеммой увеличился на 48,9%, амплитуда смещения клеточных мембран увеличивалась в 2,9 раза.

В контрольной группе после базовой терапии вышеперечисленные показатели изменялись не существенно. Число электроотрицательных ядер увеличилось на 7,4%, процентное отношение клеток с подвижной клеточной оболочкой - на 15,2%, амплитуда смещения ядер - на 22,3%, амплитуда движения плазмолеммы - на 21,8%.

Через месяц после проведенного курса терапии, включающего полоскания разработанным зубным эликсиром, все электрофоретические показатели КБЭ у детей основной группы практически приблизились к значениям этих параметров здоровых детей. В контрольной группе через месяц после традиционной терапии процент электроотрицательных ядер и подвижных плазмолемм несколько увеличивался, однако, не достигал значений нормы этих показателей для здоровых детей. Применение разработанного зубного эликсира приводит к нормализации энергетических процессов в клетках слизистой оболочки полости рта, стабилизации ядерного и мембранного потенциалов клетки, что является показателем нормализации общего функционального состояния клетки и повышения иммунного статуса.

При изучении активности фосфатаз и нейтральной протеазы в обеих группах был установлен высокий уровень этих ферментов. Так как воспалительные процессы при гингивитах сопровождаются значительными нарушениями микроциркуляции, десквамацией эпителия, а нейтральная протеаза и щелочная фосфатаза секретируются клетками мелких слюнных желез слизистой оболочки полости рта, это приводит к повышению активности данных ферментов. Соответственно этой ситуации происходит снижение рН ротовой жидкости, что, свою очередь, ведет к прогрессированию воспалительных реакций в тканях пародонта и созданию кариесогенной ситуации в полости рта.

Изменения концентрации белка в жидкой части смешанной ротовой жидкости детей с катаральным гингивитом при комплексном лечении с применением разработанного зубного эликсира-1, носили сходный характер с изменениями активности ферментов. Так, после лечения наблюдается снижение повышенного уровня белка в ротовой жидкости, особенно выраженное в основной группе. Проведенное лечение гингивита способствовало снижению активности всех изучаемых ферментов. Однако в основной группе был отмечен более выраженный положительный эффект. В ротовой жидкости детей прошедших курс полосканий РЗЭ-1, выявлено наиболее выраженное снижение активности ферментов по сравнению с контрольной группой.

Активность нейтральной протеазы в слюне снизилась после проведенного курса в среднем в 2,3 раза, кислая фосфатаза и щелочная фосфатаза - в 1,6 раз. Обнаружены достоверные отличия между изучаемыми биохимическими показателями ротовой жидкости детей, прошедших базовую терапию и детей получавших на фоне основной терапии полоскания РЗЭ-1. Исходя из этого, можно заключить, что применение РЗЭ-1 в комплексном лечении гингивитов повышает эффективность лечения и пролонгирует достигнутые результаты.

Исследование ротовой жидкости детей было проведено в динамике - через 6 месяцев и через 1 год. При этом было установлено, что изменение уровня белка и активности ферментов в ротовой жидкости имеет однотипный характер. В ротовой жидкости детей, применявших РЗЭ-1, при изучении концентрации белка и активности щелочной и кислой фосфатаз не обнаружено достоверных отличий с этими показателями полученными после лечения, что свидетельствовало о длительности сохранения положительного эффекта примененной терапии.

Повышение содержания белка и активности ферментов в ротовой жидкости детей контрольной группы уже через 6 месяцев после традиционного лечения, говорит о кратковременном положительном эффекте. По истечении данного срока биохимические параметры опять изменяются и достоверно отличаются от соответствующих показателей у детей основной группы. Подтверждением эффективности предложенного метода лечения хронического катарального гингивита с использованием РЗЭ-1 являются исследования рН ротовой жидкости. Известно, что развитие воспалительного процесса в полости рта, в частности, хронический катаральный гингивит, оказывает влияние на величину рН ротовой жидкости, сдвигая ее в кислую сторону. Более стабильной и показательной характеристикой состояния слизистой оболочки полости рта, отражающей реактивность и способность организма поддерживать гомеостаз в полости рта, является отклонение величины рН, усредненного по нескольким заборам. Это отклонение обозначено как рН.

Исследования рН ротовой жидкости детей показало, что с этой точки зрения традиционные методы лечения менее эффективны, чем комплексная терапия, включающая применение РЗЭ-1. В первом случае, в контрольной группе рН снижается в среднем в 1,7 раза, а в основной группе - в 2,4 раза. Представленные результаты свидетельствуют о том, что снижение рН и стабилизация рН ротовой жидкости под влиянием РЗЭ-1 характерна для обеих возрастных групп. У детей основной группы 10-12 лет отмечено снижение рН более, чем в 1,5 раза, в группе 13-15 лет - в 1,8 раза по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, можно заключить, что проводимое лечение не только снижало уровень воспалительных процессов в ротовой полости, но и обеспечивало постоянство внешней среды для зубов, что является немаловажным фактором для поддержания резистентности твердых тканей к кариесу. Исследования рН ротовой жидкости, проведенные через 1 месяц после лечения показали, что значения этого параметра значительно снизились во всех группах. Исследования, проведенные спустя 6 месяцев после лечения, показали значительную разницу между уровнями рН ротовой жидкости в основной и контрольной группах. Значительно повысились показатели рН ротовой жидкости в контрольной группе, что говорит о кратковременном эффекте базисного лечения. Наряду с этим в основной группе обоих возрастов данный показатель практически оставался на прежнем низком уровне, что говорит о пролонгированном положительном эффекте воздействия РЗЭ-1.