Особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов и их агрегационной способности у здоровых людей и у больных с воспалительными заболеваниями пародонта

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Актуальность проблемы.

Несмотря на большой интерес к изучению болезней пародонта они до сих пор остаются недостаточно изученными. Среди них особое место занимают заболевания воспалительного характера, прежде всего гингивит и хронический генерализованный пародонтит (Иванов В.С. и соавт., 1982, 1984, 1989, 1998; Цепов Л.М. и соавт., 1992, 1994, 1995, 1996, 2002; Грудянов А.И. и соавт., 1997, 1999, 2000, 2001; Безрукова И.В., 2005).

Изменения микроциркуляции занимают одно из ведущих мест в нарушениях гомеостаза организма человека (Чернух А.М., Александров О.В., 1975; Киричук В.Ф., 1999, 2002, 2005). Роль нарушений в различных звеньях системы гемостаза и гемореологических расстройств хорошо известна в патогенезе микроциркуляторных нарушений (Чернух А.М., Александров П.А., Алексеев О.В., 1975; Schmid-Schonbein H., 1988).

Расстройство микроциркуляции играет ключевую роль в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта и коррелирует со степенью их тяжести. Изменения в сосудах пародонта и нарушения кровотока служат верным диагностическим признаком на ранних этапах нарушения трофики в тканях пародонта. По мере прогрессирования и генерализации патологического процесса нарушения микроциркуляции нарастают, а изменения в сосудах приобретают генерализованный характер (Рисованный С.И., 2001; Орехова Л.Ю., Кудрявцева Т.В., Кучумова Е.Д. и соавт., 2005). В микроциркуляторном русле пародонта методом реопародонтографии выявлено снижение показателя тонуса сосудов, индексов периферического сопротивления и эластичности сосудов (Золотарев Ю.Б., Гусева И.Е., 2001; Камилов Х.П., 2002). Повреждение эндотелиоцитов сопровождается развитием сладж-синдрома, что подтверждается наличием значительного количества тромбоцитов, располагающихся не только в просвете сосудов, но и в собственно слизистой оболочке десны (Михалева Л.М., Бархана Т.Г., Шаповалов В.Д. и соавт., 2001).

В настоящее время имеются лишь единичные работы, посвященные состоянию микроциркуляторного звена системы гемостаза (функциональной активности тромбоцитов и тромборезистентности эндотелия сосудистой стенки) у больных гингивитом и хроническим генерализованным пародонтитом (Киричук В.Ф., Лепилин А.В., Апальков И.П. и соавт., 2002, 2003; Апальков И.П., 2004; Киричук В.Ф., Широков В.Ю. и соавт., 2005; Киричук В.Ф., Голосеев С.Г., 2005; Голосеев С.Г., 2007).

В тоже время известна роль гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов, взаимодействующих со специфическими агонистами в осуществлении их функциональной активности - адгезии, агрегации и секреции (Мазуров А.В., Васильев С.А., 1994; Бышевский А.Ш. и соавт., 1999; Киричук В.Ф., 1999, 2002, 2005; Шитикова А.С., 2000; Кузник Б.И., 2004; Fitzgerald L.А., Phillips D.R., 1987). Важное значение при этом имеет состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок (Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000; Киричук В.Ф., Ребров А.П., Кошелева Н.А., 2002; Грякалова Е.В., Киричук В.Ф., Ребров А.П., 2004). Однако не изучено значение рецепторного аппарата тромбоцитов, в частности, состава их углеводного компонента у больных с воспалительными заболеваниями пародонта, приводящими к изменению функциональной активности тромбоцитов и связанного с этим нарушением внутрисосудистого компонента микроциркуляции.

Цель работы: изучить особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у практически здоровых лиц, его изменения у больных с воспалительными заболеваниями пародонта и определить роль нарушения состава гликопротеиновых рецепторов в функциональной активности тромбоцитов при указанной патологии пародонта.

Для достижения этой цели решали следующие задачи:

1. Изучить роль состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран в агрегационной активности тромбоцитов у практически здоровых лиц.

2. Определить особенности состава гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок у больных различными формами локализованного и генерализованного гингивита в фазе обострения заболевания.

3. Установить характер изменений в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных различными формами локализованного и генерализованного гингивита в фазе ремиссии заболевания.

4. Выяснить состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок в фазе обострения различной степени тяжести у больных локализованным и генерализованным хроническим пародонтитом.

5. Определить состав гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных локализованным и генерализованным хроническим пародонтитом различной степени тяжести в фазе ремиссии заболевания.

6. Выяснить особенности состава гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов в фазе обострения и ремиссии у больных агрессивными формами пародонтита.

7. Установить степень нарушений в агрегационной активности тромбоцитов при воспалительных заболеваниях пародонта в зависимости от характера изменений в составе углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается содержанием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводном остатке их гликопротеиновых рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.

2. В фазе обострения у больных различными формами локализованного и генерализованного гингивита в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов увеличивается содержание преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы.

3. В фазе ремиссии различных форм локализованного и генерализованного гингивита происходит восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, характерного для практически здоровых лиц.

4. При обострении различной степени тяжести локализованного и генерализованного хронического пародонтита в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов больных увеличивается содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы.

5. В фазе ремиссии локализованного и генерализованного хронического пародонтита у больных с легкой степенью тяжести заболевания происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, у пациентов средней и тяжелой степенями тяжести - лишь частичное.

6. Наибольшее изменение в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов за счет увеличения содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в b-D-галактозы наблюдается у пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом. В фазе ремиссии указанного заболевания не происходит восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов.

7. Усиление процесса агрегации тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы в отличие от практически здоровых лиц, у которых он обеспечивается наличием в их рецепторах преимущественно b-D-галактозы.

Научная новизна.

Установлено, что у практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов обусловлен наличием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы, в меньшей степени - N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.

Впервые показано, что нарушения функциональной активности кровяных пластинок, сопровождающиеся усилением их способности к агрегации, у больных в фазе обострения различных форм воспалительных заболеваний пародонта обусловлены изменением состава их углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов за счет возрастания содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. Восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов происходит только в фазе ремиссии различных форм локализованного и генерализованного гингивита и легкой степени тяжести локализованного и генерализованного хронического пародонтита.

Наибольшие изменения в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов наблюдаются у больных с быстропрогрессирующим пародонтитом, тяжелой и средней тяжестью локализованного и генерализованного хронического пародонтита.

Практическая значимость.

Установленное патогенетическое значение изменения состава углеводной детерминанты гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов при воспалительных заболеваниях пародонта в нарушении внутрисосудистого компонента микроциркуляции в зависимости от формы и тяжести заболевания может быть использовано в клинической практике как дополнительный тест для определения степени тяжести указанной патологии пародонта. В комплексном лечении больных с воспалительными заболеваниями пародонта для восстановления нарушений в микроциркуляции должны использоваться лекарственные препараты, влияющие на процесс агрегации тромбоцитов за счет восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов.

Внедрение результатов.

Основные положения диссертации используются при обследовании больных воспалительными заболеваниями пародонта в стоматологическом отделении №2 Клинической больницы №3 ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».

Полученные результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах нормальной физиологии, хирургической стоматологии и терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».

Апробация работы.

Результаты работы доложены и обсуждены на 8-й Всероссийской научной конференции «Новые технологии в стоматологии и имплантологии» (Саратов, 2006); VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в ХХI веке» (Москва, 2006); II Всероссийской научной конференции с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2006); VI Международной конференции «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)» (Ярославль, 2007).

По материалам диссертации опубликовано 7 работ, одна из них в реферируемом журнале, рекомендованная к печати ВАК.

1. Характеристика объектов исследования

гингивит гомеостаз кровяной генерализованный

Для решения цели и задач исследования под нашим наблюдением находились 267 больных с заболеваниями пародонта, из них 85 пациентов с гингивитом, 182 - с пародонтитом. Больные находились на амбулаторном лечении в стоматологической поликлинике 3-й клинической больницы ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава»; стоматологическом отделении областного госпиталя ветеранов войн (г.Саратов); стоматологической клинике «Дента-Мед» (г.Саратов).

При постановке диагноза заболеваний пародонта учитывалась классификация, принятая на ХVI Пленуме Всесоюзного общества стоматологов (1983г.) с изменениями и дополнениями Президиума секции пародонтологии Российской академии стоматологии (2001г.).

Контрольные исследования проведены на 30 практически здоровых лицах обоего пола, у которых при обследовании не было выявлено какой-либо патологии челюстно-лицевой области. Все лица этой группы давали письменное согласие на проведение обследования. Средний возраст практически здоровых лиц составил 48,3±1,9 года.

Возраст больных с заболеваниями пародонта колебался от 17 до 68 лет, средний возраст составил 49,7±2,1 года. Среди обследованных лиц с заболеваниями пародонта мужчин было 56,2%, женщин - 43,8%.

В фазе обострения гингивита были обследованы 85 пациентов. Из них у 30,6% был выявлен хронический генерализованный гингивит, у 25,9% - острый локализованный катаральный гингивит, у 22,3% - хронический генерализованный язвенный гингивит и у 21,2% - острый локализованный язвенный гингивит.

Из общего количества больных пародонтитом (182 пациента) 66 человек имели хронический локализованный пародонтит (36,3%), 75 - хронический генерализованный пародонтит (41,2%), 41 - быстропрогрессирующий пародонтит (22,5%). Среди 41 пациента с быстропрогрессирующим пародонтитом у 18 больных (43,9%) был возраст от 17 до 26 лет, т.е. тип А, у 23 больных (56,1%) - в возрасте от 26 до 35 лет тип Б.

Распределение больных хроническим локализованным и генерализованным пародонтитом в зависимости от тяжести заболевания показало, что у 18 (27,3%) больных хроническим локализованным пародонтитом была легкая степень заболевания; у 22 (33,3%) - средняя, а у 26 (39,4%) - тяжелая степень тяжести хронического пародонтита. Из 75 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом у 24 больных (32,0%) была легкая степень тяжести заболевания, у 27 (36,0%) - средняя, а у 24 (32,0%) - тяжелая степень хронического генерализованного пародонтита.

Следовательно, у больных хроническим локализованным пародонтитом преобладали средняя и тяжелая степени заболевания (72,7%), в то время как у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом все три степени тяжести заболевания выражены примерно в равной мере.

Методы исследования.

1. Специальные методы исследования тканей пародонта.

Для объективной оценки состояния тканей пародонта обследование больных хроническим генерализованным пародонтитом проводилось по следующим показателям: определение гигиенического индекса (Грин-Вермильон, 1969); индекса гингивита (Lцe и Silness, 1967); папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (Parma C., 1960); пародонтального индекса (Russel А., 1956); индекса периферического кровообращения (Дедова Л.Н., 1981); пробы функциональной стойкости капилляров (Кулаженко В.И., 1967); определение кровоточивости десны при зондировании (Барер Г.М., Лемецкая Т.И., 1996); измерение глубины пародонтальных карманов, степени подвижности зубов (Гаврилов А.И., 1954); рентгенологическое исследование (панорамная рентгенография, ортопантомография), реопародонтография, а также клинический и биохимический анализы крови.

2. Исследование системы гемостаза.

Исследование микроциркуляторного (тромбоцитарно-сосудистого) звена системы гемостаза проводилось в лаборатории гемостаза и реологии крови на кафедре нормальной физиологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава» (заведующий кафедрой заслуженный деятель науки РФ, профессор В.Ф.Киричук).

Микроциркуляторное звено системы гемостаза оценивали по функциональной активности тромбоцитов.

Метод исследования агрегационной функции тромбоцитов.

Основным методом исследования агрегационной функции тромбоцитов является метод светорассеяния, предложенный Борном (1963), применившим графическую регистрацию изменения оптической плотности раствора.

Принцип метода заключается в регистрации оптической плотности (светопропускания) обогащенной тромбоцитами плазмы. Измерения проводятся в условиях перемешивания клеток до и после добавления веществ - индукторов агрегации. Изменение оптических свойств исследуемой плазмы крови в процессе агрегации тромбоцитов происходит за счет рассеивающей поверхности клеток в результате их склеивания друг с другом.

По мере агрегации тромбоцитов интенсивность света, прошедшего через суспензию клеток, увеличивается.

Характер агрегационной кривой зависит от концентрации тромбоцитов в плазме, скорости перемешивания плазмы и концентрации добавляемого индуктора агрегации.

Нами определялась агрегация тромбоцитов методом, предложенным в 1989 году З.А. Габбасовым и соавт., разработанным в КНЦ АМН РФ, при помощи лазерного анализатора агрегации «Биола 230», сопряженного через интерфейс с IBM-совместимым компьютером. Метод основан на создании потока тромбоцитов через оптический канал прибора и статистическом анализе флуктуации светопропускания, вызванных случайными изменениями числа частиц в канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему радиусу и размеру микроагрегатов и использовалась нами для исследования кинетики агрегации. Метод отличается от классического метода Борна (1962) в модификации О'Брайена (1966) высокой чувствительностью.

Данный метод изучения агрегации тромбоцитов достаточно физиологичен, так как тромбоциты находятся в естественной среде обитания - плазме крови, в которой сохраняются основные компоненты системы гемостаза, оказывающие в условиях целостного организма влияние на процесс агрегации тромбоцитов.

Функциональную активность кровяных пластинок определяли в богатой тромбоцитами плазме и суспензии отмытых тромбоцитов. Богатую тромбоцитами плазму получали путем центрифугирования стабилизированной крови. Суспензию отмытых тромбоцитов получали по методу H. Patcheke (1981) с изменениями (Виноградов Д.В., Власик Т.Н., Агафонова Т.Г. и соавт., 1991). Тромбоциты дважды отмывали растворами Тироде - цитрат (рН=6,5), затем суспензировали в модифицированном растворе Тироде - Hepes (рН=7,35) с добавлением СаСl2 1 мМ, MgCl2 1 мМ.

Индукторами агрегации отмытых тромбоцитов были растительные лектины: конканавалин А (Соn А), лектин зародышей пшеницы (WGA) и фитогемагглютинин Р - РНА-Р (фирма «Лектинотест», Украина). При исследовании агрегации к 300 мкл отмытых тромбоцитов после минутного термостатирования при 37єС добавляли Соn А, WGA и РНА-Р по 10 мкл в концентрации 32 мкг/мл (Лахтин В.М., 1995; Самаль А.Б., Тимошенко А.В., Лойко Е.Н. и соавт., 1998).

Лектины для настоящего исследования были выбраны с учетом их различной углеводной специфичности (Лахтин В.М., 1995) с целью наиболее точной и полной идентификации углеводных компонентов тромбоцитарных гликопротеиновых рецепторов, опосредующих их агрегацию. Так, РНА-Р взаимодействует почти со всеми углеводными компонентами гликопротеиновых рецепторов, хотя преимущественно он связывается с участками b-D-галактозы (Луцик А.Д., 1988). WGA специфически реагирует с N-ацетил-D-глюкозамином, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой (Луцик А.Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д., 1989), Con А - с маннозасодержащими участками (Хомутовский О.А., Луцик М.Д., Передерий О.Ф., 1986).

Агрегацию тромбоцитов исследовали при стандартных условиях термостатирования 37єС и скорости перемешивания магнитной мешалки 800 об/мин. Индуктор добавлялся на 30-й секунде от исследования. Длительность регистрации процесса агрегации тромбоцитов составляла 15 мин.

При помощи IBM-совместимого компьютера и специализированной MS-Windows-cовместимой программы «Aggr» производилась запись кривых, отражающих процесс агрегации, индуцируемый различными лектинами, - агрегатограммы, которые и подвергались последующему анализу.

За начальный уровень агрегации (0%) принималось светопропускание обедненной тромбоцитами плазмы. Калибровка прибора проводилась заново для каждого образца крови.

Специализированная MS-Windows-cовместимая программа «Aggr» (НПФ «Биола», Россия) позволяла определять две группы показателей: а) характеризующие изменение светопропускания ОТП (собственно агрегацию); б) характеризующие изменение среднего размера тромбоцитарных агрегатов.

При объяснении результатов, полученных при анализе агрегатограммы, принимались во внимание их общепринятые трактовки (Киричук В.Ф., Шварц Ю.Г., 1998; Баркаган З.С., Момот А.П., 1999; Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000; Kirichuk V., Voskoboy I., 1997).

Методы математического анализа полученных данных.

Анализ полученных результатов клинических исследований проводился методами математической статистики с помощью пакета прикладных программ «STATGRAPHICS Plus 5.1.», разработанных Statistical Graphics Corp. в 1994-2001 гг.

Тест Колмогорова-Смирнова и критерий согласия ч2 показали, что все предложенные случайные величины в основном распределены по нормальному закону, с достоверностью не менее 95%. Для данных, закон распределения которых имеет отклонения от нормального, были использованы методы, не чувствительные к виду распределения. При статистической обработке были вычислены основные вероятные характеристики случайных величин (среднее значение, среднее квадратичное отклонение, доверительный интервал), которые, согласно функции распределения погрешностей Стьюдента, имели достоверность не менее 95% (Р-значение ? 0,05). Для анализа данных были использованы следующие методы математической статистики: t-критерий Стьюдента, критерий Фишера, метод контрастов множественного сравнения с процедурой H.Schtffe, дисперсионный анализ, множественный пошаговый регрессионный анализ, выборочная регрессия, дискриминантный анализ («STATGRAPHICS Plus 5.1.», 2001).

2. Результаты исследований и их обсуждение

гингивит гомеостаз кровяной генерализованный

1. Особенности состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов практически здоровых людей.

Процессы адгезии и агрегации кровяных пластинок определяются функциональным состоянием их рецепторного аппарата - гликопротеиновых рецепторов (Мазуров А.В., Васильев С.А., 1994; Бышевский А.Ш. и др., 1999; Киричук В.Ф., 1999, 2002, 2004; Шитикова А.С., 2000; Кузник Б.И., 2004; Fitzgerald L.А., Phillips D.R., 1987), которое обусловлено биохимическим составом их О- и N-гликанов (Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000).

Исследование действия лектинов на тромбоциты показало, что некоторые из них способны индуцировать агрегацию тромбоцитов и секрецию тромбоцитарных гранул, а также агрегацию эритроцитов и нейтрофильных лейкоцитов (Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000, 2004). Предполагается, что действие лектинов может моделировать эффекты классических агонистов тромбоцитов, таких как тромбин, АДФ и др. (Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000; Ganguly P. et al., 1979; 1980; 1985; Torti et al., 1995). Подобные свойства лектинов позволяют использовать их не только для анализа структуры углеводных цепей тромбоцитарных гликопротеидов, но и для изучения участия этих белков в процессах активации и агрегации тромбоцитов (Смирнова И.В. и соавт., 1998).

Как видно их данных, представленных в таблицах 1, 2, 3 и на рис. 1 фитогемагглютинин Р (РНА-Р), лектин зародышей пшеницы (WGA) и конканавалин А (Con A) в дозе 32 мкг/мл индуцируют агрегацию тромбоцитов практически здоровых людей, о чем свидетельствует наличие в агрегатограмме таких показателей агрегации тромбоцитов, как максимальная степень их агрегации, время достижения максимальной степени агрегации, максимальная скорость агрегации тромбоцитов, время достижения максимальной скорости образования тромбоцитарных агрегатов, причем наибольшее значение эти показатели имеют при использовании в качестве индуктора агрегации фитогемагглютинина Р, меньшее - лектина зародышей пшеницы WGA. Наименьшее значение указанных показателей агрегатограмм наблюдается при использовании как агрегата - конканавалина А [Con A] (рис. 1).

Рис. 1. Агрегатограммы здоровых лиц, вызванные лектинами РНА - Р, WGA, Соn A в дозах 32 мкг/мл.

Представленные данные свидетельствуют о том, что процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается наличием в их гликопротеиновых рецепторах b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводной детерминанте гликопротеидов тромбоцитов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в N-гликанах тромбоцитов как индуктора их агрегации незначительна. Аналогичные данные получены другими авторами (Киричук В.Ф., Воскобой И.В., 2000, 2004).

2. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов у больных гингивитом.

Результаты проведенных нами исследований свидетельствуют о том, что нарушение агрегационной способности тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлены изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок.

Так, в фазе обострения острого катарального локализованного гингивита в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов больных увеличено содержание b-D-галактозы (табл. 1), N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты (табл.2), маннозы (табл.3) по сравнению с данными практически здоровых лиц из группы контроля. Степень возрастания различных углеводных детерминант в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов неодинакова: возрастание агрегационной активности тромбоцитов у данной категории пациентов обусловлено в большей степени за счет увеличения в гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, меньше - за счет маннозы; в меньшей мере это относится к b-D-галактозе.

В фазе ремиссии острого катарального локализованного гингивита в гликопротеиновых рецепторах тромбоцитов восстанавливается физиологическое содержание b-D-галактозы, N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы, характерного для практически здоровых лиц контрольной группы. Это приводит к нормализации функционального состояния рецепторного аппарата кровяных пластинок и их агрегационной способности (табл. 1, 2, 3).

Таблица 1. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	33,5±1,22	254,2±11,8	28,2±1,19	50,8±2,1
В фазе обострения (n=22)	36,7±1,07 Р1<0,05	232,6±9,4 Р1<0,05	31,8±1,01 Р1<0,05	44,4±1,6 Р1<0,05
В фазе ремиссии (n=19)	32,7±1,04 Р1>0,05 Р2<0,02	249,9±10,7 Р1>0,05 Р2<0,05	27,4±1,31 Р1>0,05 Р2<0,02	51,7±1,9 Р1>0,05 Р2<0,01

Примечание: Р1 - по сравнению с контролем, Р2 - по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 2. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	12,26±1,15	130,4±11,4	7,02±0,65	46,6±1,2
В фазе обострения (n=22)	14,98±1,12 Р1<0,05	109,0±8,7 Р1<0,05	8,47±0,58 Р1<0,02	41,7±0,98 Р1<0,01
В фазе ремиссии (n=19)	12,47±1,19 Р1>0,05 Р2<0,05	127,7±9,7 Р1>0,05 Р2<0,05	6,98±0,72 Р1>0,05 Р2<0,02	45,9±1,2 Р1>0,05 Р2<0,02

Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 3. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной ConA, у больных острым катаральным локализованным гингивитом (М±m)

Показатели / Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	7,2±0,23	150,3±24,1	4,22±0,14	44,8±7,1
В фазе обострения (n=22)	8,4±0,32 Р1<0,01	122,2±12,4 Р1<0,05	4,89±0,12 Р1<0,02	32,5±2,8 Р1<0,05
В фазе ремиссии (n=19)	7,0±0,42 Р1>0,05 Р2<0,01	148,8±16,8 Р1>0,05 Р2<0,05	4,13±0,16 Р1>0,05 Р2<0,02	42,9±3,7 Р1>0,05 Р2<0,01

Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в фазе обострения.

Аналогичные изменения в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов нами выявлены у больных в фазе обострения острого язвенного локализованного гингивита, хронического катарального и язвенного генерализованного гингивита, то есть в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов возрастает содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы, приводящее к возрастанию агрегационной активности тромбоцитов больных при указанных заболеваниях.

Сравнительный анализ показал, что наибольшее усиление способности тромбоцитов к агрегации и изменение состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов за счет возрастания в них преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы происходят в фазе обострения хронического язвенного генерализованного гингивита.

В фазе ремиссии острого язвенного локализованного гингивита, хронического катарального генерализованного гингивита происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран кровяных пластинок, соответствующее показателям практически здоровых лиц из группы контроля. Одновременно с этим происходила нормализация функциональной активности тромбоцитов. В то же время у пациентов в фазе ремиссии хронического язвенного генерализованного гингивита не произошло полного восстановления состава углеводного компонента рецепторного аппарата, что сопровождается сохранением повышенной агрегационной активности тромбоцитов.

Представленные данные свидетельствуют о том, что у больных различными формами гингивита нарушение функциональной способности тромбоцитов обусловлено изменением состава углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов. Кроме того, необходимо отметить тот факт, что если у практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов осуществляется за счет наличия в гликопротеиновых рецепторах b-D-галактозы, то нарушение агрегационной способности кровяных пластинок у больных различными формами гингивита обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеидного рецептора преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы.

3. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов у больных пародонтитом.

Нами проанализировано также соотношение между способностью тромбоцитов к агрегации и изменением состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных хроническим локализованным и генерализованным пародонтитом различной степени тяжести в фазе обострения и ремиссии заболевания.

Так, в большей степени повышение агрегационной активности тромбоцитов у больных хроническим локализованным пародонтитом в фазе обострения заболевания наблюдается за счет увеличения содержания в их гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, чем D-галактозы и маннозы (табл. 4, 5, 6). Имеется значительно выраженная закономерность: чем тяжелее степень хронического локализованного пародонтита, тем более повышается содержание в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов не только N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, но и D-галактозы и маннозы (табл. 7, 8, 9).

Таблица 4. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у больных хроническим локализованным пародонтитом легкой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	33,5±1,22	254,2±11,8	28,2±1,19	50,8±2,1
В фазе обострения (n=18)	35,9±1,11 Р1<0,05	248,7±10,2 Р1>0,05	30,4±0,91 Р1>0,05	43,2±1,8 Р1<0,05
В фазе ремиссии (n=14)	34,2±1,16 Р1>0,05 Р2>0,05	258,4±10,9 Р1>0,05 Р2>0,05	27,8±0,85 Р1>0,05 Р2<0,05	52,1±1,7 Р1>0,05 Р2<0,05

Примечание: Р1 - по сравнению с контролем, Р2 - по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 5. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у больных хроническим локализованным пародонтитом легкой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	12,26±1,15	130,4±11,4	7,02±0,65	46,6±1,2
В фазе обострения (n=18)	15,07±0,89 Р1<0,05	106,0±7,9 Р1<0,05	8,85±0,74 Р1<0,05	42,2±1,1 Р1<0,05
В фазе ремиссии (n=14)	13,49±1,18 Р1>0,05 Р2>0,05	122,7±8,8 Р1>0,05 Р2<0,05	8,02±0,65 Р1>0,05 Р2>0,05	44,7±1,3 Р1>0,05 Р2>0,05

Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 6. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной Con А, у больных хроническим локализованным пародонтитом легкой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	7,2±0,23	150,3±24,1	4,22±0,14	44,8±7,1
В фазе обострения (n=18)	7,47±0,36 Р1>0,05	138,4±9,9 Р1>0,05	4,79±0,12 Р1<0,05	40,3±2,2 Р1>0,05
В фазе ремиссии (n=14)	7,02±0,42 Р1>0,05 Р2>0,05	143,9±8,6 Р1>0,05 Р2>0,05	4,14±0,16 Р1>0,05 Р2<0,05	42,6±3,1 Р1>0,05 Р2>0,05

Примечание: Р1- по сравнению с контролем, Р2- по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 7. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной РНА-Р, у больных хроническим локализованным пародонтитом тяжелой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	33,5 ± 1,22	254,2 ± 11,8	28,2 ± 1,19	50,8 ± 2,1
В фазе обострения(n=26)	38,8 ± 1,14Р1 < 0,01	204,0 ± 10,4Р1 < 0,02	33,7 ± 1,14Р1 < 0,01	37,6 ± 1,2Р1 < 0,001
В фазе ремиссии(n=24)	36,9 ± 1,02Р1 < 0,05Р2 < 0,05	212,6 ± 10,9Р1 < 0,05Р2 > 0,05	31,2 ± 1,07Р1 < 0,02Р2 < 0,05	39,9 ± 1,6Р1 < 0,001Р2 > 0,05

Примечания: Р1 - по сравнению с контролем, Р2 - по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 8. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной WGA, у больных хроническим локализованным пародонтитом тяжелой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	12,26 ± 1,15	130,4 ± 11,4	7,02 ± 0,65	46,6 ± 1,2
В фазе обострения(n=26)	16,72 ± 1,14Р1 < 0,001	93,8 ± 10,6Р1 < 0,001	9,24 ± 0,67Р1 < 0,02	40,1 ± 0,98Р1 < 0,01
В фазе ремиссии(n=24)	16,14 ± 0,96Р1 < 0,01Р2 > 0,05	122,7 ± 7,9Р1 < 0,01Р2 < 0,05	8,46 ± 0,45Р1 < 0,02Р2 < 0,05	41,3 ± 1,13Р1 < 0,01Р2 > 0,05

Примечания: Р1 - по сравнению с контролем, Р2 - по сравнению с данными в фазе обострения.

Таблица 9. Показатели агрегации тромбоцитов, индуцированной Con А, у больных хроническим локализованным пародонтитом тяжелой степени тяжести (М±m)

Показатели/ Больные	Максимальная степень агрегации, %	Время достижения максимальной степени агрегации, с	Максимальная скорость агрегации, % мин	Время достижения максимальной скорости агрегации, с
Контроль (n=30)	7,2 ± 0,23	150,3 ± 24,1	4,22 ± 0,14	44,8 ± 7,1
В фазе обострения(n=26)	8,24 ± 0,19Р1 < 0,001	126,7 ± 9,9Р1 > 0,05	5,27 ± 0,16Р1 < 0,001	37,7 ± 2,2Р1 > 0,05
В фазе ремиссии(n=24)	8,02 ± 0,14Р1 < 0,001Р2 > 0,05	141,2 ± 8,8Р1 > 0,05Р2 > 0,05	9,03 ± 0,12Р1 < 0,001Р2 > 0,05	42,6 ± 2,7Р1 > 0,05Р2 > 0,05

Примечания: Р1 - по сравнению с контролем, Р2 - по сравнению с данными в фазе обострения.

В фазе ремиссии хронического локализованного пародонтита у больных легкой степенью тяжести происходит полное восстановление содержания в углеводной детерминанте гликопротеиновых рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, D-галактозы и маннозы, соответствующее данным практически здоровых людей (табл. 4, 5, 6). В то же время у пациентов со средней степенью тяжести заболевания происходит полное восстановление содержания только b-D-галактозы, но не нормализуется содержание в гликопротеиновых рецепторах N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы до уровня практически здоровых лиц. У больных хроническим локализованным пародонтитом тяжелой степени тяжести в фазе ремиссии заболевания не происходит полного восстановления всех указанных компонентов гликопротеиновых рецепторов до уровня практически здоровых лиц (табл. 7, 8, 9), как это наблюдается при легкой и частично средней степени тяжести заболевания. При этом сохраняется способность тромбоцитов к усиленной агрегации.

У больных хроническим генерализованным пародонтитом в фазе обострения заболевания изменения в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов такие же, как и у пациентов с хроническим локализованным пародонтитом, причем наиболее выраженные сдвиги наблюдаются у пациентов с тяжелой степенью заболевания. В фазе ремиссии заболевания у больных легкой степенью тяжести заболевания происходит полная нормализация в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов всех углеводных детерминант, а у пациентов средней и тяжелой степенями тяжести - лишь частичное.

При быстропрогрессирующем пародонтите типа А и Б в фазу обострения заболевания в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов также наблюдаются изменения состава их углеводного компонента за счет увеличения в большей степени содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и в меньшей мере - за счет b-D-галактозы и маннозы, причем указанные изменения в составе гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов при данном заболевании более выражены, чем при других воспалительных заболеваниях пародонта. В фазе ремиссии быстропрогрессирующего пародонтита обоих типов не происходит нормализации в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов; при этом сохраняется их повышенная способность к агрегации.

Сравнительный анализ показал, что наиболее выраженное изменение состава гликопротеиновых рецепторов за счет увеличения в их углеводном компоненте прежде всего N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты происходит в фазе обострения у больных средней и тяжелой степнями тяжести хронического локализованного и генерализованного пародонтита, и особенно быстропрогрессирующего пародонтита. Менее значимые сдвиги в рецепторном аппарате кровяных пластинок выявлены у пациентов с хроническим локализованным и генерализованным пародонтитом легкой степени тяжести в фазе обострения заболевания.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что у больных с воспалительными заболеваниями пародонта усиление способности тромбоцитов к агрегации обусловлено изменением состава углеводного компонента их гликопротеиновых рецепторов. В отличие от практически здоровых лиц, у которых процесс агрегации тромбоцитов обеспечивается наличием в углеводном компоненте рецепторов b-D-галактозы, у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта он обусловлен не только b-D-галактозой, но прежде всего N-ацетил-D-глюкозамином, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой и в меньшей степени - маннозой. Нарушение микроциркуляции, выявленное у больных с воспалительными заболеваниями пародонта и обусловленное, в том числе, усиленной способностью тромбоцитов к агрегации за счет изменения состава их гликопротеиновых рецепторов, диктует необходимость включения в состав комплексного лечения больных с указанной патологией лекарственных препаратов, нормализующих состав гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок и связанное с этим восстановление нарушенных функциональных свойств тромбоцитов.

Заключение

ВЫВОДЫ:

1. У практически здоровых лиц процесс агрегации тромбоцитов в основном обеспечивается содержанием в углеводном компоненте их гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы. Меньшее значение в механизме агрегации кровяных пластинок имеет наличие в углеводном остатке рецепторов N-ацетил-D-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. Роль маннозы в рецепторах тромбоцитов в процессе их агрегации незначительна.

2. В фазе обострения у больных различными формами локализованного и генерализованного гингивита в составе углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов увеличивается содержание преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы.

3. В фазе ремиссии различных форм локализованного и генерализованного гингивита происходит восстановление углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, характерного для практически здоровых лиц.

4. При обострении различной степени тяжести локализованного и генерализованного хронического пародонтита в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов больных увеличивается содержание N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и в меньшей степени b-D-галактозы. Наиболее значимые изменения в углеводных компонентах - при тяжелой и средней степенях тяжести заболевания.

5. В фазе ремиссии локализованного и генерализованного хронического пародонтита у больных с легкой степенью тяжести заболевания происходит полное восстановление состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, у пациентов со средней и тяжелой степенями тяжести - лишь частичное. Наибольшие изменения в составе гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов за счет увеличения содержания N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, маннозы и b-D-галактозы наблюдаются у пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом. В фазе ремиссии указанного заболевания не происходит восстановления состава их гликопротеиновых рецепторов. Усиление процесса агрегации тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта обусловлено возрастанием содержания в углеводном компоненте гликопротеиновых рецепторов преимущественно N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты и маннозы в отличие от практически здоровых лиц, у которых он обеспечивается наличием в их рецепторах преимущественно b-D-галактозы.

Практические рекомендации:

1. У больных с различными формами воспалительных заболеваний пародонта для дополнительного выявления степени тяжести гингивита и пародонтита необходимо исследовать состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов с использованием современных гистохимических методов и применением различных лектинов как структурных и функциональных зондов клеточных мембран.

2. Нарушение микроциркуляции, выявленное у больных с воспалительными заболеваниями пародонта, и обусловленное усиленной способностью тромбоцитов к агрегации за счет изменения состава их гликопротеиновых рецепторов, диктует необходимость включения в состав комплексного лечения больных с указанной патологией лекарственных препаратов, нормализующих состав гликопротеиновых рецепторов кровяных пластинок и связанное с этим восстановление нарушенных функций тромбоцитов.

Литература

1. Парфенова, С.В. Значение рецепторного аппарата кровяных пластинок в нарушении их функций у больных агрессивными формами пародонтита /С.В. Парфенова, В.Ф. Киричук, Н.В. Булкина// Новые технологии в стоматологии и имплантологии: Материалы 8-й науч. конф. - Саратов, 2006. - С.158.

2. Парфенова, С.В. Роль гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена системы гемостаза у больных гингивитом /В.Ф. Киричук, С.В. Парфенова, Н.В. Булкина// Здоровье и образование в ХХI веке: Материалы VII Международной науч.-практ. конф. - М.., 2006. - С. 237.

3. Парфенова, С.В. Особенности гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у больных хроническим пародонтитом /В.Ф. Киричук, С.В. Парфенова, Н.В. Булкина// Здоровье и образование в ХХI веке: Материалы VII Международной науч.-практ. конф. - М.., 2006. - С. 238.

4. Парфенова, С.В. Особенности гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у больных агрессивными формами пародонтита /В.Ф. Киричук, С.В. Парфенова, Н.В. Булкина// Микроциркуляция в клинической практике: Материалы II Всерос. науч. конф. с международным участием. - М., 2006. - С. 41.

5. Парфенова, С.В. Роль рецепторов тромбоцитов в нарушении их функций у больных гингивитом /С.В. Парфенова, В.Ф. Киричук, Н.В. Булкина// Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям): Материалы VI международной конф. - Ярославль, 2007. - С. 127.

6. Парфенова, С.В. Роль изменений состава гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена гемостаза у больных агрессивными формами пародонтита /В.Ф. Киричук, С.В. Парфенова, Н.В. Булкина// Актуальные проблемы стоматологии: Материалы ХVI Всерос. науч.-практ. конф. - М., 2007. - С. 314.

7. Парфенова, С.В. Значение гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов в нарушении микроциркуляторного звена гемостаза у больных хроническим генерализованным пародонтитом /В.Ф. Киричук, С.В. Парфенова, Н.В. Булкина// Российский стоматологический журнал. - 2007. - № 5. - С. 35.

Размещено на Allbest.ru

...