Гемотрансмиссивные вирусные инфекции: выявляемость, специфика метаболизма, связь с групповой принадлежностью крови

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Гемотрансмиссивные вирусные инфекции: выявляемость, специфика метаболизма, связь с групповой принадлежностью крови

14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика

Карслян Лиля Степановна

САРАТОВ - 2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Гильмиярова Фрида Насыровна.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Захарова Наталья Борисовна;

доктор медицинских наук, профессор Рубин Владимир Иванович.

Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ижевская государственная меди-цинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Защита состоится «____» _____________2007 г. в ___ часов на заседа-нии диссертационного совета К 208.094.01 при Государственном образова-тельном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Большая Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Автореферат разослан «____» ______________2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Бородулин В.Б.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время, учитывая постоянное увели-чение количества ВИЧ-инфицированных среди населения всего мира, а также эпидемиологическую настороженность в отношении парентеральных гепатитов В и С, возрастающую необходимость и востребованность донорской крови и ее компонентов, актуальным становится вопрос повышения вирусной безопасности гемотрансфузий (Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., 1992; Кудрявцева Е.Н.с соавт., 2000; Покровский В.В.с соавт., 2000; Воробьев П.А., 2006).

Особая опасность вирусных гепатитов В и С объясняется широким распространением, высокой инфекционностью и частыми случаями хронизации инфекций. В мире насчитывается от 300 до 500 млн хронически инфицированных вирусными гепатитами. Вирусы гепатитов В и С обладают большой вирулентностью, устойчивостью и чрезвычайной мутабельностью (Патрушева Н.Б. с соавт., 2001; Суздальцев А.А.с соавт., 2003; Аммосов А.Д., 2004; Донсков С.И., 2006).

Широкое распространение получили микст-инфекции вирусов иммунодефицита человека и гепатита С в связи с общими путями передачи. Распространенность вируса гепатита С среди ВИЧ-инфицированных варьирует от 33 до 59 % (Jaeckel E., 2001; Boctor F.N., 2003; Kamal S.M.,2004). В связи с этим актуален вопрос улучшения диагностики трансмиссивных вирусных инфекций, расширения спектра исследуемых параметров (Нетесова И.Г., 2000; Меньшиков В.В., 2002).

На сегодняшний день совершенствование молекулярно-генетических технологий при диагностике социально-значимых инфекций, выявление склонности человека к инфицированию вирусами иммунодефицита человека, гепатитов В и С являются вопросами, требующими научного подхода (Гаврилов А.О. с соавт., 2005; Куандыкова Р.Ж. с соавт., 2005).

Изучение отклонений в метаболизме у вирусоносителей и больных ге-патитами В и С в зависимости от групповой принадлежности крови поможет найти оптимальный комплекс профилактических и диагностических мероприятий, обеспечит индивидуальный подход в лечении.

Цель настоящего исследования заключается в улучшении выявляемости инфицирования вирусами иммунодефицита человека и гепатитов В и С с учетом специфики метаболизма и групповой принадлежности крови.

Задачи исследования

1. Определить на популяционном уровне характер распределения групп крови в системе АВО и резус-фактора у клинически здоровых жителей региона.

2. Изучить инфицированность вирусами иммунодефицита человека и гепатитов В и С на большом массиве донаций донорской крови с использованием иммуноферментного анализа, а также полимеразной цепной реакции для выявления патогена в фазе серонегативного «окна».

3. Проанализировать характер распределения вирусоносительства ВИЧ-инфекции, вирусов гепатитов В и С и их сочетаний по группам крови для выявления возможной взаимосвязи инфицированности с генетически детерминированными факторами.

4. Изучить содержание общего белка и его фракций, холестерина, в-липопротеидов, глюкозы, мочевины, креатинина, билирубина и тимоловой пробы, активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гамма-глутамилтранспептидазы, щелочной фосфатазы в крови носителей вирусов гепатитов В и С для обоснования метаболических маркеров вирусоносительства.

распределения носителей ВИЧ-инфекции, вирусов гепатитов В и С с групповой принадлежностью крови; новые данные об особенностях метаболического синдрома у вирусоносителей и у больных вирусными гепатитами В и С. Изучен спектр распределения групп крови по системе АВО у клинически здоровых жителей региона: среди мужчин с первой группой крови выявлено 32,9 %, со второй - 34,3 %, с третьей - 22,9 %, с четвертой - 9,9 %; среди женщин с первой группой крови выявлено 33,3 %, со второй - 34,1%, с третьей - 23,4 %, с четвертой - 9,2 %. По резус-фактору определено следующее соотношение, не зависящее от пола: с положительным

5. Для выявления зависимости характера и степени выраженности метабо-лических нарушений от специфики возбудителя и группы крови провести сравнительную оценку показателей азотистого обмена у вирусоносителей гепатитов В и С. Оценить интенсивность процессов трансаминирования, содержание конечных продуктов белкового обмена в группе клинически здоровых лиц для выяснения метаболических предпосылок к инфицированию, связанных с групповой принадлежностью крови.

6. Исследовать показатели пигментного обмена и уровень гиперферментемии у больных с гепатитами В и С при различной степени виремии для обоснования метаболических критериев степени тяжести заболевания. вирусоносительство гепатит кровь

Научная новизна. Получен блок новых сведений, раскрывающих взаимосвязь характера резус-фактором - 85%, с отрицательным - 15 %. Достоверность полученных данных обусловлена популяционным уровнем исследований контингента.

Новым является применение наряду с иммуноферментным методом молекулярно-генетического метода - полимеразной цепной реакции, что позволило при обследовании 32 908 доноров выявить носителей вирусов иммунодефицита человека и гепатита С в фазу серонегативного «окна». Такое методическое обеспечение диагностического процесса способствовало улучшению выявляемости вирусоносительства и тем самым повысило безопасность донорской крови.

Получены новые сведения, раскрывающие ассоциированность групповой принадлежности крови с частотой инфицированности вирусом иммунодефицита человека, гепатитами В и С. Среди ВИЧ-инфицированных преобладают лица с первой группой крови, с гепатитом В или С - со второй группой крови, сочетанное носительство ВИЧ-инфекции и гепатита С чаще встречается у лиц с первой группой крови.

Новыми являются данные, раскрывающие особенности метаболизма при гепатите В и С, обусловленные спецификой возбудителя и групповой принадлежностью крови по системе АВО. Впервые охарактеризован метаболический синдром на доклинической стадии вирусных гепатитов. При вирусоносительстве гепатита В при всех группах крови повышено содержание гамма-глобулинов, что не характерно для гепатита С, за исключением доноров с В(ІІІ) группой крови. У них отмечены самый высокий уровень общего белка, креатинина, гипоальбуминемия. Установлена однотипная тенденция к увеличению содержания общего белка, креатинина, билирубина, значения тимоловой пробы, активности аланиаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гамма-глютамилтранспептидазы. Эти результаты свидетельствуют о метаболических нарушениях у носителей гепатитов В и С в доклинической фазе. Новыми является сведения о возможных метаболических предпосылках инфицирования у лиц с В (III) группой крови: наиболее низкий уровень общего белка и иммуноглобулинов по сравнению с обследованными с другими группами крови. Установлена отчетливая зависимость между степенью виремии, видом возбудителя гепатитов и степенью структурно-метаболических нарушений у больных гепатитами В и С.

Научно-практическая значимость. Вкладом в фундаментальную науку является развитие представлений о роли генетически обусловленных факторов, ассоциированных с групповой принадлежностью крови по системе АВО, в развитии трансмиссивных вирусных заболеваний, таких как ВИЧ-инфекция, гепатиты В и С. Аргументирована целесообразность применения сочетания иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции для выявления носителей вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С. Это позволяет выявлять патогены в крови доноров в серонегативной фазе, что обеспечивает базу для безопасного использования крови и изготавливаемых из нее препаратов.

Более высокая выявляемость ВИЧ-инфекции у лиц с О(І) группой крови, гепатита В - с А(ІІ) группой крови позволяет сделать поиск носителей данных вирусов более целенаправленным.

Практически важное значение имеет характеристика метаболических изменений в доклинической стадии вирусных гепатитов В и С у носителей ви-русов этих инфекций. Показано диагностическое значение гиперпротеинемии, гиперкреатининемии, умеренной гиперферментемии аланинаминотрасферазы, аспартатаминотрансферазы в выявлении вирусоносителей.

Представлен новый взгляд на такие показатели, как концентрация общего белка, повышение которого, возможно, связано с включением нуклеиновых кислот вирусов гепатитов В и С в геном клетки человека и индуцированием синтеза необходимых для развития вирусов белков.

Приведенные в работе данные об изменениях метаболизма у больных вирусными гепатитами В и С в зависимости от выраженности виремии дополняют критерии степени тяжести заболевания, среди которых снижение содержание альбумина и холестерина, повышение значения тимоловой пробы.

В результате проведенных молекулярно-генетических исследований получена информация об инфицированности доноров региона социально-значимыми вирусными инфекциями: ВИЧ, гепатитами В и С.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Диагностические возможности иммуноферментного анализа, иммунного блотинга, полимеразной цепной реакции для обеспечения вирусной безопасности крови и ее препаратов. Значение молекулярно-генетического метода исследования для выявления у вируносителей с первых дней инфицирования ВИЧ-инфекцией и вирусами гепатитов В и С.

2. Характер распределения клинических здоровых лиц, носителей ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С в зависимости от группы крови по системе АВО и резус-фактору: преобладание О(І) группы крови при ВИЧ-инфекции, А(ІІ) группы крови при инфицировании вирусом гепатита В. Одинаковое с донорами распределение инфицированных вирусными гепатитами В и С по резус-фактору: Rh «+», Rh «-» - 8,5: 1,5 %, при ВИЧ-инфекции - соотношение 9:1.

3. Особенности метаболического синдрома у носителей вирусов гепатитов В и С, определяемые видом вируса и ассоциированные с группой крови. При гепатите В при всех группах крови повышено содержание гамма-глобулинов, что не характерно для гепатита С, за исключением доноров с В(ІІІ) группой крови. Метаболической предпосылкой инфицирования у лиц с этой группой крови может служить наиболее низкий уровень общего белка и иммуноглобулинов по сравнению с обследованными с другими группами крови.

4. Взаимосвязь характера нарушений метаболизма со степенью виремии у больных с вирусными гепатитами В и С. Общие закономерности и особенности, связанные со спецификой возбудителя. Диагностические признаки начальной стадии и критерии степени тяжести заболевания. Уровень гиперферментемии, гипоальбуминемии, гиперпротеинемии, гипохолестеринемии, пропорциональный степени виремии.

Внедрение в практику. Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», в работе клинико-диагностической лаборатории клиник Самарского государственного медицинского университета, Самарской областной станции переливания крови.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на XXV межрегиональном съезде врачей, посвященном 155-летию Самарской губернии «Управление качеством здравоохранения через инновации», Самара-Тольятти, 2005; IX Международной научной конференции «Здоровье семьи ?XXI веке» (Далянь, Китай, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005); VI Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2005); X Международной научной конференции «Здоровье семьи в XXI веке» (Бангкок - Патайя, Таиланд, 2006); VII международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006); Аспирантских чтениях Самарского государственного медицинского университета «Аспирантский вестник Поволжья», Самара, 2005,2006; на совместном заседании кафедры общей, бионеорганической и биоорганической химии и кафедры фундаментальной и клинической биохи-мии с лабораторной диагностикой СамГМУ (Самара, 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию объекта и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 176 страницах, иллюстрирована 13 рисунками, содержит 37 таблиц. В работе использовано 308 литературных источников, из них 142 отечественных, 166 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объект и методы исследования:

всего обследовано 32 908 человек: здоровые доноры обоего пола - 30560, из них 200 человек составили контрольную группу; вирусоносители - 1 915, в том числе: ВИЧ-инфекции - 76 человек; вируса гепатита В - 322 человека; вируса гепатита С - 1 479 человек; ВИЧ-инфекция + гепатит С - 38 человек; больные гепатитом - 433 человека: гепатитом В - 185 человек; гепатитом С - 248 человек. Всего обследовано 100 893 донации.

Этапы исследования:

выявление доноров, инфицированных трансмиссивными вирусными инфекциями методами ИФА и ПЦР;

выяснение характера распределения по группам крови здоровых доноров и инфицированных лиц;

изучение метаболических особенностей носителей вирусов гепатитов В и С в связи с групповой принадлежностью крови;

определение нарушений метаболизма у больных гепатитами В и С при различной степени виремии.

Исследования проводились на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой (зав. кафедрой - заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Ф.Н. Гильмиярова) ГОУ ВПО «СамГМУ Россздрава» и в Самарской областной станции переливания крови (главный врач - кандидат медицинских наук А.И.Косов).

Для выявления инфицированных ВИЧ - инфекций и гепатитами В и С использовали гетерогенный метод иммуноферментного анализа (ELISA) (Приказ МЗ РФ № 364 от 14 сентября 2001 г). Данным методом проводились первичный скрининг; повторный скрининг; подтверждающий тест для гепатитов В и С; иммунный блотинг для ВИЧ-инфекции. Обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека - 1 и вирусу иммунодефицита человека - 2 и ВИЧ - антигена в крови производилось с помощью тест-систем «ДЖЕНСКРИН ПЛЮС ВИЧ АГ-АТ» («BIO-RAD», Франция); определение анти-ВИЧ антител - методом иммунного блотинга. НВsAg определяли при помощи тест-систем «ИФА-HBsAg/м» (НПО «Диагностические системы», Россия) и тест-систем «ВектогепВ-HBs-антиген/авто» («Вектор-Бест», Россия), «ИФА-НВsAg-подтверждающий тест» и «Вектогеп В-НВs-антиген-подтверждающий тест-стрип». Суммарные антитела к вирусу гепатита С (аnti-HCV IgM и IgG) определяли при помощи тест-системы «ИФА-АНТИ-НСV» (НПО «Диагностические системы») и «РекомбиБест анти-ВГС/авто» («Вектор-Бест», Россия), «ИФА-АНТИ-НСV-СПЕКТР-GМ» и «РекомбиБест анти-ВГС подтверждающий тест» тех же производителей. Данные исследования выполнены на спектрофотометрах: Sunrise (фирма «Tecan», Швейцария) и Sanofi (фирма «Bio-rad» PR 1100, Франция), автоматизированном ИФА анализаторе Genesis RМP 150 («Tecan», Швейцария).

Качественная полимеразная цепная реакция использовалась для выявления лиц, находящихся в стадии серонегативного «окна». РНК вируса иммунодефицита человека определяли при помощи тест-систем «АмплиСенс РНК-ВИЧ/ВКО-48» и РНК вируса гепатита С - «АмплиСенс РНК-ВГС/ВКО-48» производства ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ на автоматизированной станции Genesis RSP 150 («Tecan», Швейцария). Для амплификации использовали амплификаторы 2720 Thermal Cycler и GeneAmp PCR System 9700 («Applied Biosystems»,США). Детекция продуктов амплификации проводилась с помощью гибридизационного ферментного анализа.

Правильность результатов иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции подтверждена участием в Федеральной программе контроля качества (2006 г.).

Количественная полимеразная цепная реакция использовалась для оценки степени виремии. Для этого после выделения патогена получали разведения ДНК или РНК вирусов с помощью буфера в соотношениях: 1:1, 1:100, 1:1000, 1:10 000. Далее проводили амплификацию с использованием оборудования фирмы «Roch-Diagnostics» (Япония). Детекцию проводили методом электрофореза в геле.

Содержание общего белка, глюкозы, мочевины, креатинина, холестерина, общего билирубина, прямого билирубина, значение тимоловой пробы, активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гамма-глютамилтранспептидазы, щелочной фосфатазы определяли на биохимическом анализаторе «Hitachi-902» (Япония). Электрофорез белковых фракций выполнен на установке для электрофореза «Астра» (Россия).Тимоловую пробу определяли турбидиметрическим методом.

Определение группы крови и резус-фактора осуществлялось перекрестным способом со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами производства Самарской ОСПК и с помощью цоликлонов (ООО «Гематолог», г.Москва). Определение резус-принадлежности крови проводили с помощью экспресс-метода на плоскости.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью специализированной статистической программы SPSS 11.5 (2006 г.) Рассчитывали среднюю арифметическую (М), стандартную ошибку средней арифметической (m), медиану (Ме) и интервал значений - 95 %. Для сравнения показателей различных групп использовали U-критерий Манна-Уитни-Вилкоксона (непараметрическая альтернатива t-критерию Стьюдента) (Боровиков В.,2001, Юнкеров В.И., Григорьев С.Г., 2002).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На популяционном уровне, изучив карты 30 960 здоровых доноров, нами получен спектр распределения групп крови по системе АВО у клинически здоровых жителей региона: среди мужчин лица О(І) группой крови составили 32,9%, с А(ІІ) - 34,3 %, с В(ІІІ) - 22,9 %, с АВ(ІV) - 9,9 %; среди женщин с О(І) - 33,3 %, с А(ІІ) - 34,1%, с В(ІІІ) - 23,4 %, с АВ(ІV) - 9,2 %. По резус-фактору определено следующее соотношение, не зависящее от пола: Rh «+» - 85 %, Rh «-» - 15 %.

Нами проведены анализ выявляемости вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С среди 32 908 доноров, а также их распределение в зависимости от групповой принадлежности крови, резус-фактора (табл.1).

Скрининговое исследование по выявлению ВИЧ-инфицированных донаций проводилось в два этапа: первичное, а затем пробы, оказавшиеся дважды серопозитивными в иммуноферментном анализе, проходили подтверждение на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека или антигена с помощью метода иммунного блота. Антитела к белкам ВИЧ-инфекции обнаружены у 160 лиц.

Инфицированных вирусом гепатита В с положительной реакцией на HBsAg оказалось 322 человека. Серопозитивных по суммарным антителам к вирусу гепатита С были 1 479 человек. Одновременно оценивался факт возможного микст-инфицирования доноров. Серопозитивных по двум инфекциям (ВИЧ-инфекция и гепатит С) было 38 человек.

С помощью метода полимеразной цепной реакции обнаружены лица, находящиеся в стадии серонегативного «окна», т.е. в стадии отсутствия или недостаточного количества патогена для выявления методом иммуноферментного анализа: с ВИЧ-инфекцией обнаружен 1 человек, с вирусом гепатита С - 34 человека.

Установлено, что среди ВИЧ-инфицированных преобладают лица с О(І) группой крови - 40,3 %; среди носителей вирусов гепатита В с А(ІІ) - 40,4 %; гепатита С, а также с А(ІІ) - 36,0 %; сочетанное носительство ВИЧ-инфекции и гепатита С обнаружено у лиц с О(І) группой крови - 36,9 %, с B (ІІІ) группой крови - у 31,3 %.

Таблица 1. Распределение по группам крови по системе АВО здоровых доноров и носителей вирусных инфекций (%)

Для уточнения метаболических маркеров вирусоносительства изучены показатели метаболизма у носителей вирусов гепатитов В и С с учетом групповой принадлежности крови (табл.2).

Нами выявлены изменения метаболизма у вирусоносителей, связанные со спецификой возбудителя и таким генетически обусловленным фактором, как групповая принадлежность крови. Наиболее показательно специфичное влияние на метаболизм вирусов гепатитов В и С проявилось в отношении содержания общего белка в крови. При инфицировании вирусом гепатита С у всех обследованных независимо от группы крови содержание общего белка превышало уровень 75 г/л. У лиц с В(ІІІ) группой крови отмечено максимально высокое содержание - 85,2±2,1 г/л. (+17,1%, р < 0,001). Обращает на себя внимание, что при вирусоносительстве гепатита В имеет место не только повышение концентрации общего белка, но и снижение, в частности, у лиц с В(ІІІ) и АВ(ІV) группами крови концентрация общего белка в крови ниже 72 г/л встречалось практически у каждого третьего обследованного.

У вирусоносителей процентное содержание альбумина чаще имело тенденцию к снижению. При гепатите В его среднее значение равнялось 48,5±0,29%, что ниже 95 %-ного интервала в контрольной группе, равного 51,4-53,5 %.Ниже этого интервала содержание альбумина встречалось у всех вирусоносителей с АВ(ІV) группой крови и у каждого второго из обследованных с другими группами крови. При гепатите С у каждого третьего вирусоносителя содержание альбумина было выше. Согласно полученным результатам, альбуминсинтезирующая функция печени в большей степени снижена при вирусоносительстве гепатита В, особенно у лиц с АВ(ІV) группой крови.

Таблица 2. Протеинограмма у инфицированных вирусами гепатитов В и С в зависимости от групповой принадлежности крови (М±m, Ме)

Примечание: * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001 - достоверность по отношению к показателям контрольной группы

Еще одной общей закономерностью изменений метаболизма можно назвать увеличение процентного содержания г-глобулинов, которые, как известно, синтезируются В-лимфоцитами в лимфоидной ткани. Это отражает включение гуморального звена иммунной системы в инфекционный процесс у вирусоносителей. У лиц, инфицированных вирусами гепатита В и С, показатель был увеличен в 50-83 % случаев. Необходимо отметить, что в контрольной группе у лиц с В(ІІІ) группой крови содержание иммуноглобулинов было наименьшим, что могло быть предпосылкой инфицирования.

У вирусоносителей содержание других глобулиновых фракций в сыворотке крови изменялось разнонаправленно. У инфицированных вирусом гепатита В содержание б-1глобулинов чаще было снижено, в частности, у лиц с О(І) группой крови - в 45,5 % случаев. Инфицирование вирусом гепатита С сопровождалось уменьшением данного показателя у 33 % лиц. Содержание б-2-глобулинов снижалось наиболее существенно у носителей вируса гепатита В, наиболее часто у лиц с АВ(ІV) группой крови - в 80 % случаев. Складывается впечатление, что инфицирование вирусами гепатитов В и С нарушает способность гепатоцитов синтезировать белки с антипротеазной активностью.

О диспротеинемии свидетельствует также увеличение показателя тимоловой пробы, более выраженное у лиц с АВ(ІV) группой крови (медиана - 5,10 Ед). Обращает внимание, что у инфицированных гепатитом С с АВ(ІV) группой крови повышения тимоловой пробы не отмечено (медиана - 2,3 Ед).

Другие показатели белкового метаболизма представлены в таблице 3.

Таблица 3. Показатели метаболизма у инфицированных вирусами гепатитов В и С в зависимости от групповой принадлежности крови(М±m, Ме)

Примечание: * р < 0,05, ** р < 0,01 - достоверность по отношению к показателям контрольной группы

В наших исследованиях отмечено повышение содержания креатинина у вирусоносителей. При носительстве вируса гепатита В показатель был повышен в 50-75 % случаев, особенно значительное повышение содержания креатинина отмечено при гепатите С у лиц с В(ІІІ) группой крови (+41,6, р < 0,01), среднее значение составило 122,6±5,68 мкмоль/л Известно, что креатинин не реабсорбируется в почках и концентрация его в крови отражает состояние клубочковой фильтрации. В литературе есть данные, что вирусы гепатитов В и С размножаются не только в клетках печени, но и в других тканях, в частности в слюнных железах (Желтякова О.В., 2002). Возможно, имеет место их паразитирование в почках, мышцах.

Содержание общего билирубина, отражающего катаболизм гемопротеинов, у носителей вируса гепатита С со А(ІІ) группой крови было выше нормы - 29,46±12,15 мкмоль/л. Повышение значения билирубина выше 12,0 мкмоль/л у лиц с О(І) группой крови отмечено в 50 % случаев, с АВ(ІV) группой крови - в 20 % случаев. У носителей вируса гепатита В наибольшее значение содержания билирубина было у лиц с В(ІІІ) группой крови: среднее значение было равно 35,79±8,58 мкмоль/л, медиана - 30,05 мкмоль/л.

Согласно полученным результатам, инфицирование вирусами гепатитов В и С (табл.4) сопровождается повышением активности аланинаминотрансферазы. У носителей вирусов гепатита В и С гиперферментемия свыше 20,3 Е/л обнаружена в 70-80 % случаев. Активность аспартатаминотрансферазы повышалась у лиц с А(ІІ) группой крови: у носителей вируса гепатита В - 77,8 % случаев, у инфицированных вирусом гепатита С - в 76,5 % случаев. У инфицированных вирусом гепатита С повышение активности гамма-глютамилтранспептидазы в большем проценте случаев отмечено у лиц с АВ(ІV) группой крови (70 %). Активность щелочной фосфатазы существенно не выходила за пределы референтных значений, что свидетельствует об отсутствии синдрома холестаза у носителей вирусов гепатитов В и С.

Таблица 4. Показатели активности ферментов у вирусоносителей гепатитов В и С в зависимости от групповой принадлежности крови (М±m, Ме)

Примечание: * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001 - достоверность по отношению к показателям контрольной группы

Далее, у больных вирусными гепатитами В и С мы изучили показатели метаболизма в зависимости от концентрации циркулирующего в крови вируса (табл.5). ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С определяли с помощью полимеразной цепной реакции количественным методом в сыворотке крови с различной степенью разведения - с титрами от 1:1 до 1:10 000.

Таблица 5. Метаболические показатели крови больныхгепатитами В и С с разным уровнем виремии (М±m, Ме)

Примечание: * р < 0,05 - достоверность по отношению к показателям контрольной группы

У больных гепатитом В с минимальным уровнем виремии (с титром 1:1) достоверно повышена концентрация прямого билирубина (+345,0%, р<0,05), активность аланинаминотрансферазы (+71,5%, р<0,05), аспартатаминотрансферазы (+265,0, р<0,05). Показатель тимоловой пробы, общего билирубина был повышен в единичных случаях. Содержание общего белка, альбумина, в-липопротеидов, б-1глобулинов, г-глобулинов существенно не отличаются от показателей контрольной группы. Следовательно, даже при низкой виремии развивается синдром цитолиза, что сопровождается нарушением дезинтоксикационной функции печени, что, на наш взгляд, зависит от исходного состояния гепатоцитов.

У пациентов с максимально выраженной виремией при титре 1:10000 заболевание протекает по сравнению с предыдущей группой с высокой гипербилирубинемией (+291,0%; р<0,05), у них в 2,7 раза (р< 0,05) выше активность аланинаминотрансферазы, в 2,2 раза (р< 0,05) - аспартатаминотрансферазы, в 6,1 раз (р< 0,05) - г-глютамилтрансферазы, что отражает тяжесть инфекционного процесса. Это сопровождается более выраженными метаболическими нарушениями, реакцией иммунной системы, что проявляется увеличением процентного содержания г-глобулинов до 22,8±3,14 % (р< 0,05).

Обращает на себя внимание, что степень повышения тимоловой пробы не соответствует выраженности виремии: при низком содержании ДНК вируса гепатита В показатель повысился в среднем до 6,80±1,98 Ед, при высокой виремии - до 4,44±0,98 Ед, при этом значения медианы были близки 4,95 Ед и 4,09 Ед соответственно. На наш взгляд, показатель тимоловой пробы в меньшей степени отражает степень инфицирования вирусом гепатита В, а в большей степени ответную реакцию поврежденных клеток печени.

Необходимо отметить, что обратно пропорционально виремии изменяется содержание холестерина в крови: при низкой степени виремии среднее значение составляет 4,17±0,35 ммоль/л, при высокой - до 3,61±0,22 ммоль/л. Следовательно, понижение содержания холестерина в крови при вирусном гепатите В прогностически неблагоприятно.

У больных вирусным гепатитом С при минимальной виремии значительно повышена активность аланиаминотрансферазы (+641,5, р < 0,05), гамма-глютамилтранспептидазы (+236,0, р<0,05), повышено содержание прямого билирубина в 6,3 раза (р < 0,05). При аналогичном уровне виремии при гепатите В активность гамма-глютамилтранспептидазы имела тенденцию к снижению, что можно использовать для дифференциальной диагностики гепатитов В и С.

У больных гепатитом С с максимально высокой степенью виремии (с титром 1:1000 и 1:10000) заболевание протекает с выраженной гипербилирубинемией (+508 %; р<0,05), концентрация прямого билирубина повышена в 21 раз (р<0,05). У них в 2,7 раза (р < 0,05) выше активность аланинаминотрансферазы, в 2,2 раза (р < 0,05) аспартатаминотрансферазы, в 6,1 раз (р < 0,05) г-глютамилтранспептидазы. При высокой концентрации вируса гепатита С в крови снижено содержания альбумина до 42,10±2,51 % (-19,7%, р<0,05) и повышена фракция г-глобулинов до 27,75±2,75 % (+47,6%, р<0,05), повышено среднее значение тимоловой пробы до 13,1±3,6 Ед (медиана 7,65 Ед).

Сравнительный анализ биохимических показателей сыворотки крови больных вирусными гепатитами В и С показал, что при виремии с титром разведения сыворотки крови, равном 1:10000 у пациентов с гепатитом С по сравнению с гепатитом В на 21,7% (р<0,05) выше концентрация г-глобулинов, в 2,9 раз выше значение тимоловой пробы, в 5,1 раза - уровень активности аланинаминотрансферазы, в 2,2 раза - активности аспартатаминотрансферазы, в 1,7 раза г-глютамилтранспептидазы (+39,5 %, р ?0,05). Выше содержание общего белка, б-2глобулинов, значение тимоловой пробы, активности аланинаминотрансферазы, г-глютамилтранспептидазы, общего и прямого билирубина. Содержание альбумина при гепатите С, напротив ниже. Следовательно, выраженность метаболических нарушений при одинаковой степени виремии зависит от типа вируса гепатита. Синдром цитолиза с нарушением альбуминсинтезирующей функции печени более выражен при гепатите С.

Таким образом, использование генамплификационых методов в серонегативную фазу по ИФА позволило дополнить список вирусоносителей гепатитов В, С и ВИЧ-инфекции. Обнаруженную связь вирусной инфекции с групповой принадлежностью крови по системе АВО можно объяснить обсуждаемым в литературе явлением «антигенной мимикрии», при которой детерминанты вирусов похожи на детерминанты, определяющие групповую принадлежность крови (Кузнецов А.В., 2000). Есть основание полагать, что включение ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С в геном клеток организма человека приводит к нарушению метаболизма, прежде всего белков, в связи с чем гиперпротеинемию и гиперферментемию можно рассматривать как признаки вирусоносительства. Специфичность влияния вирусов гепатитов В и С на метаболизм прослеживается и у больных вирусными гепатитами, согласуясь с выраженностью виремии.

ВЫВОДЫ

На популяционном уровне получен спектр распределения групп крови по системе АВО у клинически здоровых жителей региона: среди мужчин О(І) - 32,9 %, А(ІІ) - 34,3 %, В(ІІІ) - 22,9 %, АВ(ІV) - 9,9 %; среди женщин О(І) - 33,3 %, А(ІІ) - 34,1%, В(ІІІ) - 23,4 %, АВ(ІV) - 9,2 %. По резус-фактору определено следующее соотношение, не зависящее от пола: Rh «+» - 85 %, Rh «-» - 15 %.

При анализе 100 893 донаций с использованием методов ИФА и ПЦР среди 32 908 доноров установлено носительство ВИЧ-инфекции у 76 человек (0,23%), вируса гепатита В - у 167 (0,51 %), вируса гепатита С - у 836 (2,54 %), сочетанное носительство ВИЧ-инфекции и гепатита С - у 38 (0,12%) человек. Включение метода ПЦР позволило выявить в фазе серонегативного «окна» 34 человека, инфицированных вирусом гепатита С, и 1 донора с ВИЧ-инфекцией.

Установлено, что среди ВИЧ-инфицированных преобладают лица с О(І) группой крови - 40,3 %, при гепатите В с А(ІІ) - 40,4 %, при гепатите С с А(ІІ) - 36,0 %, сочетанное носительство ВИЧ-инфекции и гепатита С - О(І) - 36,9 %. По резус-фактору при вирусоносительстве гепатитов В и С определено соотношение Rh «+» : Rh «-» - 8,5 : 1,5; при ВИЧ-инфекции -9:1.

Охарактеризован блок метаболических нарушений у носителей вирусов гепатита В и С в доклинической фазе. Установлена однотипная тенденция к увеличению содержания общего белка, креатинина, общего билирубина, значения тимоловой пробы, активности аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гамма-глютамилтранспептидазы.

При вирусоносительстве гепатитов В и С выявлены особенности метаболизма, обусловленные спецификой возбудителя и групповой принадлежностью крови по системе АВО. При гепатите В при всех группах крови повышено содержание гамма-глобулинов, что не характерно для гепатита С, за исключением доноров с В(ІІІ) группой крови. У них отмечен самый высокий уровень общего белка (+17,1 %), креатинина (+41,6 %), гипоальбуминемия, не зависящие от типа возбудителя. Метаболической предпосылкой инфицирования у лиц с этой группой крови может служить наиболее низкий уровень общего белка и иммуноглобулинов по сравнению с обследованными с другими группами крови.

При гепатите В с минимальной виремией (титр 1:1) наблюдается повышение активности аланиаминотрансферазы в 1,7 раза, аспартатаминотрансферазы - в 2,6 раза. При высокой степени виремии (титр 1:1000 и 1:10000) активность аланиаминотрансферазы повышена в 4,7 раза, аспартатаминотрансферазы - в 5,8 раза, гаммаглютамилтранспептидазы - в 2,9 раза, содержание прямого билирубина увеличивается в 17,6 раз, общего билирубина - в 3,9 раза.

При гепатите С при виремии с титром 1 : 1 активность аланиаминотрансферазы повышена в 7,4 раза, гамма-глютамилтранспептидазы - в 3,4 раза и уровень прямого билирубина возрастает в 6,3 раза. При высокой виремии повышение активности ферментов сопровождается снижением уровня альбумина, увеличением содержания г-глобулинов и значения тимоловой пробы. Прослеживается тенденция к повышению содержания общего белка, снижению содержания холестерина, пропорциональная степени виремии.

В результате исследований нарушений метаболизма при инфицировании вирусными гепатитами В и С у носителей и больных определено, что их характер определяется спецификой возбудителя, зависит от степени виремии и групповой принадлежности крови.

Практические рекомендации

Для обеспечения вирусной безопасности крови и изготовленных из нее препаратов необходимо исследовать донации генамплификационными методами, позволяющие выявлять вирусы иммунодефицита человека и гепатитов В и С с первых дней инфицирования в серонегативную фазу.

При формировании групп риска вирусоносительства ВИЧ и гепатитов В и С необходимо учитывать принадлежность донора к определенной группе крови по системе АВО: преобладание среди ВИЧ-инфицированных или с сочетанием ВИЧ-инфекции и гепатита С лиц с О (I) группой крови и среди носителей вирусов гепатита В ? лиц с А (II) группой крови.

Для улучшения выявляемости инфицированных вирусами гепатитов В и С лиц необходимо учитывать наличие метаболических маркеров, к которым относится повышение содержание общего белка выше 75 г/л и активности аланинаминотрансферазы свыше 20 Е/л, аспартатаминотрансферазы свыше 30 Ед/л, г-глютамилтранспептидазы свыше 40 Е/л, которое отмечается у каждого второго вирусоносителя.

У доноров с В (III) группой крови, отличающейся наименьшим уровнем иммуноглобулинов, содержания общего белка, имеются метаболические предпосылки к инфицированию вирусами гепатитов В и С. У вирусоносителей отмечены наибольшие структурно-метаболические нарушения, которые проявляются повышением активности аланинаминотрансферазы: в 75 % случаев при гепатите В и в 53 % случаев при гепатите С.

При оценке степени тяжести вирусных гепатитов В и С необходимо учитывать следующие метаб...