Влияние препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга и сердца после хирургической овариэктомии

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Влияние препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга и сердца после хирургической овариэктомии (экспериментальное исследование)

Харчилава Оксана Максимовна

Уфа - 2009



Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию .

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Валеева Лилия Анваровна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Зарудий Феликс Александрович

доктор медицинских наук, профессор Ларионов Леонид Петрович

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Защита диссертации состоится 2009 г. на заседании диссертационного совета Д 208. 006. 03. при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Автореферат разослан 2008г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Мирсаева Г.Х.



Общая характеристика работы

Актуальность темы

В последние десятилетия внимание исследователей привлекают вопросы заместительной гормональной терапии в период менопаузы. Дефицит женских половых гормонов вызывает расстройства, среди которых преобладают психоэмоциональные, нейровегетативные, сердечно- сосудистые и двигательные нарушения (Караченцев А.П., 2004). При патологическом течении периода менопаузы, а также у женщин, перенесших хирургическую овариэктомию в молодом возрасте, возникает необходимость в назначении препаратов женских половых гормонов (Акунц К.Б., 2004; Вихляева Е.М., 1997). В настоящее время имеется большой выбор препаратов женских половых стероидов. Одним из современных препаратов для проведения заместительной гормонотерапии является фемостон- 10 (“Solvay Pharma”), содержащий микронизированный 17в- эстрадиол (2 мг) в комбинации с дидрогестероном (10 мг) (Звычайный М.А., 2004).

На фоне терапии фемостоном отмечается уменьшение количества триглицеридов в крови и индекса атерогенности, не возникает активации свертывающей системы крови, улучшается эндотелийзависимая вазодилатация (Акунц К.Б., 2004, Подзолков В.И., 2004). Вместе с тем отмечены и отрицательные последствия гормонозаместительной терапии, такие как гиперплазия эндометрия, рак матки, мастопатии, гирсутизм, ожирение (Крыжановская И.О. с соавт., 2004, Эседова А.Э., 2006).

Молекулярные механизмы перечисленных эффектов препаратов женских половых гормонов недостаточно изучены. Установлено, что препараты женских половых стероидов, через внутриклеточные рецепторы эстрогенов и гестагенов способны воздействовать на экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов (Boose R. et al., 2001).

В нейрорегуляции мозга и сердца важную роль играют дофаминовые рецепторы. Располагаясь в сердце, в гладкой мускулатуре сосудов, в различных структурах головного мозга, они участвуют в регуляции психоэмоциональной сферы, краткосрочной и пространственной памяти (Малинина Е.П., 2001), локомоторной активности (Zyss, T.,1999), социальных взаимоотношений (Могилевский Д.А., 2004). Их стимуляция вызывает сосудорасширяющий эффект, влияет на коронарный кровоток, число сердечных сокращений (Сергеев П.В. с соавт., 1998).

Роль дофаминовых рецепторов в патогенезе сердечно- сосудистых и психических заболеваний в период менопаузы исследована недостаточно. Изучение дофаминовых рецепторов сердца и мозга после хирургической овариэктомии представляется важным для понимания молекулярных механизмов патогенеза овариэктомического синдрома и для оптимизации заместительной гормональной терапии в период менопаузы в норме и при инфаркте миокарда.

Цель исследования. Определить характер действия препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга и сердца крыс после хирургической овариэктомии и в динамике экспериментального инфаркта миокарда. половой гормон сердце инфаркт

Задачи исследования:

Определить уровень специфического связывания [3Н]- спиперона с мембранной фракцией гомогената головного мозга (МФГМ) при вытеснении блокатором дофаминовых рецепторов галоперидолом у крыс после ложной и истинной хирургической овариэктомии в сравнении.

Оценить влияние 17в - эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на уровень специфического связывания меченого лиганда с МФГМ овариэктомированных крыс.

Изучить динамику специфического связывания [3Н]- спиперона с дофаминовыми рецепторами головного мозга ложноовариэктомированных и овариэктомированных крыс в разные сроки после экспериментального инфаркта миокарда и после введения препаратов женских половых гормонов.

Определить динамику уровня специфического связывания [3Н]- спиперона с мембранной фракцией гомогената сердца (МФГС) при вытеснении галоперидолом у самок крыс после ложной овариэктомии и истинной хирургической овариэктомии.

Изучить уровень специфического связывания [3Н]- спиперона с МФГС у овариэктомированных крыс на фоне заместительной терапии препаратами женских половых стероидов.

Определить количество сайтов связывания [3Н]- спиперона в сердце ложноовариэктомированных и овариэктомированных крыс в разные сроки экспериментального инфаркта миокарда после введения 17в - эстрадиола, дидрогестерона и фемостона.

Научная новизна

Впервые изучено специфическое связывание [3Н]- спиперона с МФГС и МФГМ при вытеснении лигандом дофаминовых рецепторов галоперидолом у крыс после ложной и истинной овариэктомии. Установлено, что ложная операция понижает количество сайтов связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ в сердце и мозге. Билатеральное хирургическое удаление яичников оказывает противоположное действие. Количество мест связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ в мозге и сердце овариэктомированных крыс повышается. Выявлено модулирующее действие фемостона на дофаминовые рецепторы мозга и сердца у овариэктомированных самок. Исследовано состояние дофаминергической системы головного мозга и сердца у ложнооперированных и овариэктомированных крыс в разные сроки инфаркта миокарда. Установлено модулирующее действие 17в- эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на Д2- рецепторы сердца и мозга у кастрированных животных после инфаркта миокарда.

Научно- практическая ценность

Получены новые сведения о влиянии истинной и ложной овариэктомии, экспериментального инфаркта миокарда на дофаминовые рецепторы сердца и головного мозга. Полученные данные расширяют представление о роли дофаминовых рецепторов в регуляции деятельности сердца и головного мозга в норме и патологии, обосновывают возможность применения средств, действующих на дофаминергические синапсы, для фармакологической регуляции деятельности сердца и мозга в период менопаузы.

Выявлено модулирующее действие препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы сердца и головного мозга после хирургической овариэктомии, экспериментального инфаркта миокарда на фоне хирургической менопаузы, что вносит вклад в теоретическую фармакологию, раскрывая неизвестные аспекты механизма их действия.

Полученные данные могут быть использованы для преподавания фармакологии, кардиологии и гинекологии.

Основные положения, выносимые на защиту

При ложной овариэктомии понижается специфическое связывание [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ и с МФГС при вытеснении галоперидолом. Хирургическая овариэктомия, напротив, способствует увеличению количества мест связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ в мозге и сердце крыс.

Фемостон уменьшает количество дофаминовых рецепторов в головном мозге и сердце овариэктомированных крыс.

При экспериментальном инфаркте миокарда у крыс-самок изменяется уровень специфического связывания [3Н]- спиперона с МФГС и МФГМ. Динамика уровня связывания [3Н]- спиперона отличается у ложнооперированных и овариэктомированных крыс.

Препараты женских половых гормонов модулируют динамику уровня связывания [3Н]- спиперона с Д2 - рецепторами сердца и мозга овариэктомированных крыс в течение инфаркта миокарда.

Внедрение результатов работы в практику

Полученные данные используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии № 1 и № 2 Башкирского государственного медицинского университета. По результатам исследований получен патент РФ № 2326271 с приоритетом от 20.06.2008 г. «Средство для модуляции плотности Д2 рецепторов мозга при менопаузе».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 1 публикация в журнале рекомендуемом ВАК.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены на XII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии», Украина, Крым, Ялта- Гурзуф, 31 мая- 9 июня, 2004, 69-й республиканской итоговой научно- практической конференции студентов и молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием “Вопросы теоретической и практической медицины”, Уфа, 2004, первой конференции Российиской Ассоциации психонейроэндокринологов, Санкт- Петербург, 24-26 сентября 2008 г.

Апробация работы состоялась на межкафедральном заседании кафедр фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии, фармакологии № 2, ЦНИЛ в декабре 2008 г.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 168 страницах компьютерного набора текста, состоит из введения, обзора литературы, глав отражающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Работа иллюстрирована 32 рисунками. Библиогафия представлена 35 отечественными и 268 иностранными источниками.

Материалы и методы исследования

Опыты поставлены на 500 беспородных крысах - самках массой 140-160 г, содержавшихся в условиях вивария.

Менопаузу вызывали путем хирургической овариэктомии по Киршенблат (1969). Ежедневно, в течение 3-х недель, у крыс брали влагалищные мазки для контроля за эффективностью кастрации. На протяжении всего периода наблюдения клеточный состав мазков не изменялся и соответствовал фазе межтечки. Контрольных животных оперировали аналогичным способом, но яичники не удаляли.

Препараты женских половых гормонов: 17в- эстрадиол в дозе 20 мкг/сутки, дидрогестерон - 100 мкг/сутки, фемостон - комбинация эстрадиола и дидрогестерона в тех же дозах вводили крысам внутрь, с первого дня после овариэктомии, ежедневно, в течение двух недель. Контролем служили животные, подвергшиеся хирургической овариэктомии и получавшие плацебо. Через две недели часть животных, получавших препараты женских половых гормонов, подвергали операции коронароокклюзии.

Экспериментальный инфаркт миокарда (ИМ) у крыс вызывали путем перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии на 1,5 мм ниже ушка левого предсердия под эфирным наркозом (Коган А.Х., 1979). Для подтверждения ИМ у животных снимали ЭКГ в трех стандартных отведениях при скорости движения бумажной ленты 50 мм/с, 1 мВ - 10 мм до начала экспериментов, сразу после воспроизведения ИМ и в динамике. Измеряли стандартные зубцы, интервалы ЭКГ и вычисляли систолический показатель QRST/RR*100, величина которого косвенно отражает состояние сердечной мышцы. Измерение размеров зоны некроза миокарда после коронароокклюзии производили макрогистохимически по методике А.Х. Коган (1984) с использованием НСТ-теста. Контрольных животных оперировали аналогичным способом, но коронарную артерию не перевязывали, а лишь подводили под нее лигатуру.

Животных забивали декапитацией, выделяли сердце и мозг, гомогенезировали. Мембранную фракцию гомогенатов сердца и мозга получали методом дифференциального ультрацентрифугирования в гомогенной среде. Полученную фракцию гомогенатов сердца и мозга использовали для связывания [3Н] - спиперона (Lim D. K., 1989).

Для определения общего связывания мембранный препарат с конечным содержанием белка 0,3 - 1 мг/ мл инкубировали с [3Н] - спипероном (Amersham, UK, удельная радиоактивность 88 Ci/mmol) в концентрациях 0,5 и 2 нМ. Концентрация 0,5 нМ близка к Kd [3Н] - спиперона, а величина Kd лиганда характеризует его сродство или аффинность к рецепторам. При концентрации 2 нМ происходит насыщение мест связывания [3Н] - спиперона, и уровень связывания лиганда при этой концентрации может характеризовать количество дофаминовых рецепторов. Инкубацию проводили 40 мин. при 25єC в 50 мМ трис- HCl буфере, содержащем 5 мМ ЭДТА..

Неспецифическое связывание определяли точно также, но в присутствии 1000- кратного избытка немеченого галоперидола, блокатора рецепторов дофамина. Реакция была остановлена путем фильтрации проб через фильтры GFC. Фильтры просушивали и помещали во флаконы с 5 мл сцинтилиционной жидкости на основе диоксана. Через 48 часов радиоактивность раствора была измерена на счетчике импульсов Бета- 2.

Специфическое связывание вычисляли как разницу между общим и неспецифическим связыванием. Содержание мест связывания выражали в фемтомолях (10-15 М) лиганда, специфически связанного с мг белка (Ткачук В.А., 1983; Сергеев В.П., Шимановский Н.Л., 1987) и представляли в процентах.

Белок определяли по Лоури (Lowry et al, 1951).

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с применением критерия Стьюдента (Беленький М.Л., 1963), с использованием программы Microsoft Excel 2000.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Проведение ложной овариэктомии оказало влияние на уровень специфического связывания [3Н] - спиперона с МФГМ, что свидетельствует о действии ложной овариэктомии на дофаминовые рецепторы мозга.

Через 1 и 2 недели после операции отмечалось уменьшение уровня специфического связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ с препаратами головного мозга (рис. 1). Так как концентрация 0,5 нМ близка к Кd спиперона, а величина Кd характеризует аффинность рецепторов, снижение уровня специфического связывания радиолиганда в данной концентрации может указывать на значительное и стойкое снижение аффинности Д2 рецепторов головного мозга после ложной овариэктомии.

Ложная овариэктомия также приводит к снижению уровня связывания [3Н] - спиперона в концентрации 2 нМ через 1 неделю наблюдения.

Рис. 1 Уровень специфического связывания [3H]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ у крыс после ложной (2 недели) и хирургической овариэктомии (2 недели)

* достоверно по сравнению с интактными крысами (р< 0,05)

Так как концентрация [3Н] - спиперона 2 нМ близка к концентрации, при которой происходит насыщение дофаминовых рецепторов, уровень связывания радиолиганда в данной концентрации может характеризовать плотность дофаминовых рецепторов мозга. Поэтому можно считать, что ложная овариэктомия приводит к кратковременному снижению плотности дофаминовых рецепторов мозга. Таким образом, хирургическое вмешательство вызывает стойкое и значительное снижение аффинности и кратковременное снижение плотности дофаминовых рецепторов мозга самок крыс.

Билатеральное хирургическое удаление яичников у самок крыс привело к изменению уровня специфического связывания [3Н] - спиперона с мембранами мозга по сравнению с ложноовариэктомированными животными. Уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 нМ повысился в 3 раза по сравнению с контрольной группой, а в концентрации 2 нМ - возрос в 30 раз по сравнению с уровнем ложноовариэктомированных самок. Итак, у крыс-самок, подвергшихся двухстороннему удалению яичников, отмечается стойкое и резкое увеличение количества дофаминовых рецепторов мозга. При этом аффинность рецепторов повышается по сравнению с ложнооперированными крысами.

Ежедневное двухнедельное пероральное введение 17в- эстрадиола, дидрогестерона и фемостона кастрированным самкам оказало существенное влияние на количество сайтов связывания [3Н]- спиперона в головном мозге.

Все изученные препараты повысили более чем в 2 раза уровень связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ (рис.2).

Рис. 2 Изменение уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ у овариэктомированных крыс под действием препаратов женских половых гормонов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами, получавшими плацебо (р< 0,05)

Уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ 17в- эстрадиол и дидрогестерон повышают, а фемостон - уменьшает до уровня интактных крыс. Обобщая полученные данные можно утверждать, что 17-в- эстрадиол и дидрогестерон увеличивают аффинность и плотность Д2 рецепторов в головном мозге. Фемостон, напротив, более чем в семь раз уменьшает плотность и лишь в 2 раза повышает аффинность дофаминовых рецепторов. Следовательно, лишь комбинированный препарат фемостон, оказывает модулирующее действие на рецепторы дофамина головного мозга.

После экспериментального инфаркта миокарда у крыс самок, подвергшихся ложной овариэктомии уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 нМ изменяется неоднозначно (рис.3).

Рис. 3 Влияние экспериментального инфаркта миокарда на уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 и 2 нМ с МФГМ у ложноовариэктомированных крыс в динамике

* достоверно по сравнению с ложноовариэктомированными крысами (р< 0,05).

Характер изменений зависит от срока инфаркта миокарда. Повышение уровня связывания отмечается через 1 и 14 суток, а снижение - через 7 суток. Уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ повышается во все сроки наблюдения по сравнению с группой ложнооперированных животных без инфаркта миокарда.

В результате коронароокклюзии у овариэктомированных животных уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ резко повышается во все сроки наблюдения, что свидетельствует о повышении аффинности Д2 - рецепторов мозга при инфаркте миокарда на фоне овариэктомии (рис.4).

Рис. 4 Динамика уровня специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ у овариэктомированных крыс в разные сроки после коронароокклюзии

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами (р< 0,05).

Максимальный скачок аффинности рецепторов отмечается через сутки после коронарооклюзии, затем - небольшой спад через 3 суток с последующим повышением через 7 и 14 суток. Уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ повышается через 1, 3 и 7 суток и уменьшается через 14 суток. Следовательно, у кастрированных крыс с инфарктом миокарда изменяется не только аффинность, но и плотность Д2 рецепторов мозга.

Таким образом, при ИМ как у ложноовариэктомированных, так и кастрированных самок повышается плотность Д2 - рецепторов мозга.

Введение кастрированным самкам препаратов женских половых гормонов в течение двух недель до перевязки коронарной артерии оказало влияние на динамику экспериментального инфаркта миокарда. 17в-эстрадиол снижает связывание [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ лишь через 7 суток после коронароокклюзии (рис. 5). Дидрогестерон уменьшает связывание радиолиганда через 3 и 7 суток после ИМ, а фемостон - во все сроки после ИМ, кроме 7 суток. Максимальный эффект препарата проявляется через 3 дня после коронароокклюзии.

Таким образом, все изученные препараты действуют однонаправлено, снижают аффинность дофаминовых рецепторов мозга. Наиболее выраженный эффект вызывает фемостон, приближая аффинность Д2- рецепторов кастрированных крыс с ИМ к уровню кастрированных крыс без ИМ.

Рис. 5 Динамика уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ в разные сроки после коронароокклюзии у овариэктомированных крыс, получавших препараты женских половых стероидов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами с ИМ, получавшими плацебо (р< 0,05).

Препараты женских половых гормонов изменяли и динамику связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ (рис. 6).

Рис. 6 Динамика уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ в разные сроки после коронароокклюзии у овариэктомированных крыс, получавших препараты женских половых стероидов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами с ИМ, получавшими плацебо (р< 0,05).

17в- эстрадиол увеличивает количество Д2 рецепторов через 14 суток. Дидрогестерон уменьшает количество Д2-рецепторов через 3 и 7 суток после перевязки коронарной артерии и увеличивает через 1 и 14 суток. Таким образом, через 3, 7 и 14 суток после ИМ проявляется модулирующий эффект дидрогестерона. Фемостон повышает связывание [3Н]- спиперона через 1 и 14 суток после коронароокклюзии и не влияет через 3 и 7 суток.

Итак, все изученные препараты увеличивают количество Д2- рецепторов в головном мозге крыс через 14 дней после ИМ. В целом женские половые гормоны оказывают модулирующее действие на аффинность и плотность дофаминовых рецепторов головного мозга кастрированных крыс с ИМ. Наиболее выраженный эффект вызывают фемостон и дидрогестерон.

Следующая серия опытов была посвящена изучению дофаминергической системы сердца у крыс.

Ложная хирургическая овариэктомия уменьшает уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГС более чем в 3 раза по сравнению с контролем, что свидетельствует о снижении аффинности и плотности Д2 - рецепторов сердца после хирургического вмешательства (рис. 7). После удаления яичников уровень связывания радиолиганда в низкой концентрации повысился в 84 раза, а в высокой - в 5 раз по сравнению с ложнооперированными крысами. Таким образом, хирургическая овариэктомия приводит к повышению аффинности и плотности дофаминовых рецепторов в сердце кастрированных самок.



Рис. 7 Уровень специфического связывания [3H]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГС у крыс после ложной и хирургической овариэктомии

* достоверно по сравнению с интактными крысами (р< 0,05).

Изучение влияния 17в-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на дофаминовые рецепторы сердца у овариэктомированных самок показало следующее (рис.8).

Рис. 8 Изменение уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГС у овариэктомированных крыс под действием препаратов женских половых гормонов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами, получавшими плацебо (р< 0,05).

Эстрадиол и дидрогестерон уменьшают уровень связывания меченого лиганда в концентрации 0,5 нМ, а в концентрации 2 нМ - повышают в 4,6 и 11 раз. А фемостон, напротив, в низкой концентрации не оказывает влияния, а в высокой - значительно уменьшает. Таким образом, 17в- эстрадиол и дидрогестерон уменьшают аффинность, но повышают плотность дофаминовых рецепторов сердца. При этом дидрогестерон оказывает наиболее сильное действие, которое проявляется уменьшением уровня специфического связывания [3Н]- спиперона в низкой концентрации до уровня ложнооперированных животных.

После перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии уровень специфического связывания [3Н]- спиперона с МФГС ложноовариэктомированных крыс претерпевал изменения (рис. 9). Уровень связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ с мембранами сердца снижается через 1 сутки, и повышается через 3 и 7 суток после инфаркта миокарда. Уровень связывания меченого лиганда в высокой концентрации падает во все сроки наблюдения, что свидетельствует об уменьшении количества дофаминовых рецепторов в сердце.

Рис. 9 Влияние экспериментального инфаркта миокарда на уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 и 2 нМ с МФГС у ложноовариэктомированных крыс в динамике

* достоверно по сравнению с ложноовариэктомированными крысами (р< 0,05).

Исследуя специфическое связывание [3Н]- спиперона с МФГС кастрированных самок в разные сроки ИМ, мы установили, что уровень специфического связывания меченого лиганда в концентрации 0,5 нМ снижается во все сроки кроме 7 суток, а в концентрации 2 нМ - повышается, кроме 14 суток (рис.10).



Рис. 10 Динамика уровня специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГС у овариэктомированных крыс в разные сроки после коронароокклюзии

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами (р< 0,05).

В целом у кастрированных крыс резко понижается аффинность дофаминовых рецепторов в сердце через 1, 3 и 14 суток после моделирования ИМ на фоне небольшого повышения плотности рецепторов через 1, 3 и 7 суток после коронароокклюзии. Через 7 дней повышается аффинность и плотность Д2- рецепторов сердца.

Предварительное, ежедневное, двухнедельное, пероральное введение препаратов женских половых гормонов овариэктомированным крысам изменяло динамику уровня связывания [3Н]- спиперона с МФГС при экспериментальном инфаркте миокарда (рис.11).

Рис. 11 Динамика уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС в разные сроки после коронароокклюзии у овариэктомированных крыс, получавших препараты женских половых стероидов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами с ИМ, получавшими плацебо (р< 0,05).

Действие 17в-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона имеет сходный характер. Препараты повышают уровень связывания [3Н]- спиперона в концентрации 0,5 нМ в острейший, острый периоды и период формирования постинфарктного кардиосклероза, и снижают - в подострый период. Тем самым оказывают модулирующее действие на аффинность Д2- рецепторов сердца после ИМ.

Все исследованные препараты влияют на уровень специфического связывания в концентрации 2 нМ с МФГС кастрированных самок (рис.12). Они оказывают однонаправленное действие, уменьшают количество сайтов связывания [3Н]- спиперона через 3 дня и увеличивают в некоторые сроки исследования. Наиболее выраженное действие на количество Д2- рецепторов сердца оказывает фемостон.

Рис. 12 Динамика уровня специфического связывания [3H]- спиперона в концентрации 2 нМ с МФГС в разные сроки после коронароокклюзии у овариэктомированных крыс, получавших препараты женских половых стероидов

* достоверно по сравнению с овариэктомированными крысами с ИМ, получавшими плацебо (р< 0,05).



Выводы

Ложная овариэктомия приводит к стойкому снижению уровня специфического связывания [3H] - спиперона с мембранной фракцией головного мозга в концентрации 0,5 нМ и кратковременному - в концентрации 2 нМ. Истинная хирургическая овариэктомия, напротив, повышает уровень связывания радиолиганда в низкой и высокой концентрациях.

Препараты женских половых гормонов 17в- эстрадиол, дидрогестерон увеличивают количество сайтов связывания [3H] - спиперона в головном мозге кастрированных самок крыс в низкой и высокой концентрациях. Фемостон в 2 раза повышает уровень связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ и в 7 раз уменьшает - в концентрации 2 нМ.

Перевязка левой коронарной артерии вызывает увеличение количества мест связывания [3H] - спиперона в головном мозге крыс. У ложноовариэктомированных самок повышается уровень связывания радиолиганда, больше в концентрации 2 нМ, а у овариэктомированных крыс - в концентрации 0,5 нМ. Фемостон оказывает модулирующее действие на дофаминовые рецепторы мозга кастрированных крыс с экспериментальным инфарктом миокарда.

В сердце крыс с ложной овариэктомией уменьшается уровень специфического связывания [3H] - спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ. После хирургической овариэктомии уровень связывания радиолиганда в низкой и высокой концентрациях повышается.

17в- эстрадиол и дидрогестерон оказывают однонаправленное действие на дофаминовые рецепторы сердца: в концентрации 0,5 нМ уменьшают, а в концентрации 2 нМ - увеличивают уровень специфического связывания радиолиганда с мембранной фракцией гомогената сердца. Фемостон не влияет на уровень связывания радиолиганда в низкой концентрации, но уменьшает в высокой.

При экспериментальном инфаркте миокарда в сердце ложноовариэктомированных крыс уровень связывания [3H] - спиперона в концентрации 0,5 нМ понижается через 1 и 14 суток и повышается через 3 и 7 суток, а в концентрации 2 нМ понижается во все сроки исследования. У кастрированных самок уровень связывания радиолиганда в низкой концентрации понижается через 1, 3 и 14 суток, повышается через 7 суток, а в высокой концентрации повышается во все сроки, кроме 14 суток. Препараты женских половых гормонов оказывают модулирующее действие на уровень связывания радиолиганда в низкой концентрации в сердце овариэктомированных крыс.

Практические рекомендации

После оперативного вмешательства, овариэктомии и на фоне инфаркта миокарда необходимо учитывать состояние дофаминергической системы сердца и мозга при назначении средств, действующих на дофаминовые рецепторы.

Характер действия препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы сердца и мозга необходимо учитывать при их совместном назначении с Д2- агонистами и антагонистами.



Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Валеева, Л.А. Влияние стероидных гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Фармация. - 2008. - №6. - С. 52 - 52.

2. Валеева Л.А. Влияние женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы мозга у крыс с овариэктомией. Материалы заочной международной конференции / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Приоритеты фармацевтической науки и практики, Москва, 31 октября 2005 - 2006. - С. 339-342.

3. Харчилава О.М. Изменение плотности и аффинности дофаминовых рецепторов головного мозга на фоне хирургической овариэктомии и коррекция их женскими половыми гормонами / Л.А. Валеева, Ю.И. Кутуев, О.М. Харчилава // Медицинский вестник Башкортостана. 2006. - № 6. - С. 258 - 261.

4. Харчилава О.М. Изменение плотности и аффинности дофаминовых рецепторов сердца на фоне хирургической овариэктомии и коррекция их женскими половыми гормонами / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Медицинский вестник Башкортостана. 2006. - № 6. - С. 261 - 264.

5. Харчилава О.М. К молекулярному механизму действия препаратов женских половых гормонов / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Научный прорыв - 2007. - 2007. - С. 40-44.

6. Харчилава О.М. Влияние экспериментального инфаркта миокарда на дофаминовые рецепторы мозга у овариэктомированных крыс / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Научный прорыв - 2007. - 2007. - С. 44-48.

7. Харчилава О.М. Роль дофаминовых рецепторов в патогенезе менопаузального синдрома и в механизме действия женских половых гормонов / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Медицинский вестник Башкортостана. 2007. - № 1. - С.34-38.

8. Харчилава О.М. Действие женских половых стероидов на дофаминовые рецепторы головного мозга овариэктомированных самок крыс / Л.А. Валеева, О.М. Харчилава // Первая конференция Российиской Ассоциации психонейроэндокринологов, Санкт- Петербург, 24-26 сентября 2008 г.



Список сокращений

МФГС - мембранная фракция гомогената сердца

МФГМ - мембранная фракция гомогената мозга

ИМ - инфаркт миокарда

Размещено на Allbest.ru

...