Фармакокинетическое исследование нового отечественного лекарственного средства содержащего налтрексон

Размещено на http://www.Allbest.ru/

Размещено на http://www.Allbest.ru/

14.00.25 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тема:

Фармакокинетическое исследование нового отечественного лекарственного средства содержащего налтрексон

Гусейнова Саида Вахид Кызы

Волгоград - 2008

Работа выполнена в Филиале «Клиническая фармакология» ГУ Научного центра биомедицинских технологий РАМН

Научный руководитель: академик РАМН, профессор Кукес Владимир Григорьевич

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, доцент Иежица Игорь Николаевич

Доктор медицинских наук, профессор Яворский Александр Николаевич

Ведущая организация:

Государственное учреждение научно-исследовательский институт Фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета (по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.008.02, доктор медицинских наук, профессор Бабаева Аида Руфатовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Интенсивное изучение в последние годы антагонистов опиоидных рецепторов способствовало появлению новых подходов к лечению наркомании. Одним из перспективных препаратов данной группы является налтрексон [Иванец Н.Н., 2002; Marley R.J. et al, 1995]. Фармакодинамические и фармакокинетические свойства налтрексона характеризуют его как активного конкурентного антагониста опиатных рецепторов. После приема внутрь налтрексон быстро всасывается из ЖКТ; у большинства пациентов пик концентрации отмечается через час после введения препарата. В организме налтрексон быстро метаболизируется с образованием основного активного метаболита 6--налтрексола. Средняя концентрация налтрексона в плазме крови после перорального приема 100 мг составляет 18 нг/мл, а его метаболита 6--налтрексола 160 нг/мл. Выводится препарат и его метаболиты в основном с мочой. Препарат и его метаболиты не куммулируют при курсовом приеме [Wall M.E., et al, 1981; Meyer M.C., et al, 1984]. Важной особенностью препарата является отсутствие привыкания к его антагонистическому действию в течение года и более его регулярного применения. Зарубежный опыт использования налтрексона свидетельствует о его высокой эффективности и хорошей переносимости. Накопленные сведения позволяют предполагать, что использование налтрексона может быть расширенно, в том числе для лечения героиновых наркоманий, осложненных алкоголизмом; для лечения полинаркоманий [Miotto K., 1997; Volpicelli J.R., 1995].

На АОЗТ "НПК ЭХО" совместно с ЗАО "Феделити Капитал" (Россия) был создан препарат Продетоксон, представляющий собой таблетки для имплантации, содержащие 1,0 г налтрексона.

Исходя из вышесказанного для внедрения Продетокона в клиническую практику представляется актуальным изучение его фармакокинетических параметров, что определило цель и задачи исследования.

Цель и задачи исследования

Цель: провести фармакокинетическое исследование нового отечественного пролонгированного лекарственного средства, содержащего налтрексон.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

· разработать методику ВЭЖХ-анализа налтрексона и его метаболита 6-в-налтрексола в растворах и плазме крови;

· подобрать условия и провести изучение высвобождения налтрексона из новой пролонгированной формы в условиях in vitro (по тесту кинетика растворения);

· изучить динамику концентрации налтрексона в крови животных после имплантации препарата Продетоксон;

· оценить равновесную концентрацию налтрексона и его метаболита в плазме крови больных наркоманией после имплантации препарата Продетоксон.

Научная новизна

Проведено комплексное фармакокинетическое изучение высвобождения налтрексона из нового пролонгированного препарата Продетоксон в условиях in vitro и in vivo.

Впервые изучена динамика концентрации налтрексона и его метаболита после подкожной имплантации нового отечественного препарата Продетоксон у двух видах животных, и больных наркоманией. Доказано постепенное высвобождение налтрексона из новой лекарственной формы, обеспечивающее пролонгированный эффект.

Практическая значимость

Разработаны методики совместного ВЭЖХ-анализа налтрексона и его метаболита 6-в-налтрексола в плазме крови.

Определены уровни концентраций налтрексона и его активного метаболита в крови больных наркоманией после имплантации нового отечественного препарата Продетоксон.

Внедрение в практику

Методики количественного определения налтрексона и его метаболита 6-в-налтрексола в плазме крови используются в фармакокинетических исследованиях в Филиале «Клиническая фармакология» Научного центра биомедицинских технологий РАМН, Институте Клинической фармакологии НЦ ЭСМП.

Результаты исследований динамики концентрации налтрексона у животных и пациентов вошли в отчет по изучению нового отечественного препарата Продетоксон, на основании которого препарат был разрешен к медицинскому применению.

Апробация работы

Основные результаты доложены и обсуждены на совместной научно-практической конференции Филиала «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН, кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних заболеваний ММА имени И.М. Сеченова, Института клинической фармакологии НЦ ЭСМП (Москва, 2008 г.); на научно-практической конференции «Клиническая фармакология в России: достижения и перспективы» (Москва, 2004 г.); на II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, 2005 г.).

Публикация результатов исследования

По результатам исследований опубликовано 5 печатных работ.

Связь исследования с проблемным планом

Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным направлением «Оптимизация фармакотерапии заболеваний внутренних органов посредством разработки рациональных методов контроля клинически значимых параметров фармакокинетики лекарственных средств» (номер государственной регистрации - 01.206.110468).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработанная методика определения налтрексона и его метаболита в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ.

2. Высвобождение налтрексона из препарата Продетоксон в условиях in vitro.

3. Результаты фармакокинетического исследования нового препарата Продетоксон у животных.

4. Уровни концентрации налтрексона у пациентов после введения препарата Продетоксон.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы из 108 названий и приложения. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 12 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы, оборудование и реактивы

Количественное определение налтрексона и его метаболита проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе "Gilson" с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны, оснащенном инжектором ручного ввода "Rheodyne", петлей на 100 мкл и интегратором "Shimadzu".

При подборе условий разделения компонентов использовали готовые стальные обращеннофазные хроматографические колонки с различными марками сорбентов, типа Zorbax ODS, Bondapak^TMPhenyl 10 мкм, Диасорб 130-С16, 7 мкм и другие.

Исследования по тесту кинетика растворения проводили на приборе ЛОРТС производства «Гайот» (г.Санкт-Петербург, Россия).

Лабораторное оборудование и материалы, используемые для работы:

- центрифуга лабораторная, вибровстряхиватель, шейкер лабораторный, водяная баня, роторный испаритель с вакуумным насосом, весы аналитические, рН-метр, камера глубокой заморозки, бытовой холодильник;

- полипропиленовые пробирки с крышками, стеклянные колбы для упаривания, автоматические пипетки-дозаторы со сменными наконечниками (объемом 40-200 мкл и 200-1000 мкл), микрошприц на 25 и 100 мкл.

Все реактивы, используемые в работе, были марок "хч", "чда", или "для ВЭЖХ".

В работе использованы субстанции налтрексона гидрохлорида и 6--налтрексола, предоставленные АОЗТ «НПК ЭХО», Россия, а также препарат Продетоксон, таблетки для имплантации, содержащие 1,0 г налтрексона производства АОЗТ «НПК ЭХО», Россия по заказу ЗАО «Феделити Капитал», Россия.

Тактика исследования

Изучение высвобождения в условиях in vitro

Изучение высвобождения in vitro проводили по тесту «Растворение». В процессе разработки условий анализа использовали аппараты «вращающаяся корзинка» (USP I) и «лопастная мешалка» (USP II). При подборе среды растворения учитывали физико-химические характеристики налтрексона, а также рекомендации FDA по изучению биодоступности in vitro. Количественное определение высвободившегося налтрексона проводили методом спектрофотомерии.

Характеристика животных и тактика исследования

Работа, связанная с содержанием животных, имплантацией препарата и отбором проб крови, осуществлялась в Российском кардиологическом научно-производственном комплексе МЗСР РФ (Москва).

Исследование выполнено на крысах Вистар (самцы) с первоначальной массой тела 200-230 г и беспородных собаках (самцы) с первоначальной массой тела 14,2-15,3 кг.

Для изучения динамики концентрации налтрексона в крови животных отбирались пробы крови из подкожной вены голени в объеме 2,5-3,0 мл в стеклянные гепаринизированные пробирки до и через 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 18, 20, 25, 30, 45 и 60 дней после имплантации Продетоксона. Пробирки маркировались и направлялись в лабораторию Филиала «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН для определения концентрации налтрексона.

Характеристика пациентов и тактика исследования

Исследование проводили на 60 больных наркоманией (возраст 20-34 года, средний возраст 26,4 года; рост 167-190 см, средний рост 174,5 см; вес 60-90 кг, средний вес 72,7 кг). Работа с пациентами осуществлялась на базе Центральной клинической больницы и Национального научного центра наркологии (Москва), где проводилось комплексное лечение больных героиновой наркоманией.

После подкожной имплантации препарата Продетоксон у всех испытуемых проводили отбор проб крови через 1 неделю, 1 и 2 месяца после введения препарата для определения в них концентрации налтрексона и его активного метаболита - 6--налтрексола. Отбор проб крови проводили в утренние часы (9-11 часов утра). Кровь в количестве 5-7 мл отбирали из локтевой вены в гепаринизированные пробирки, центрифугировали, отбирали плазму крови, замораживали и хранили при -35⁰С до анализа.

Разработка методики количественного определения налтрексона и его метаболита

Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе “Gilson” (США), оснащенном инжектором Rheodyne и петлей ввода на 100 мкл, с УФ-спектрофотометрическим детектором при длине волны 214 нм и чувствительности 0,001 AUFS. После серии экспериментов были выбраны следующие хроматографические условия. В анализе использовали обращённофазную хроматографическую колонку: Supelco LC-18-DB 5мкм; 4,6*150 мм. Элюирование проводили подвижной фазой состава: ацетонитрил - ацетатный буфер (рН 5,0) в соотношении 95:5. Мобильную фазу перед использованием дегазировали под вакуумом. Скорость элюирования составляла 1,5 мл/мин. В указанных условиях давление на колонке не превышало 40 bar. Для регистрации пиков использовали интегратор "Shimadzu".

Стандартные рабочие растворы налтрексона и его метаболита готовили в ацетонитриле. фармакокинетический лекарственный метаболит налтрексон

Выделение налтрексона и его метаболита из плазмы крови проводили методом твердо-фазной экстракции с помощью патронов Oasis MAX, фирмы «Waters». Перед анализом патроны промывали 1 мл метанола и 1 мл дистиллированной воды. Затем 1 мл плазмы пропускали через патроны, которые затем промывали 1 мл 5% раствора метанола в 2% NH₄OH и 1 мл 20% раствора метанола в 2% NH₄OH. Далее пропускали 500 мкл 25% раствора метанола в 2% CH₃COOH, который собирали в колбы для упаривания, нагревали 45 минут при 70⁰С и аликвоту (100 мкл) наносили на колонку хроматографа.

Количественное определение налтрексона и 6--налтрексола в образцах проводили методом абсолютной калибровки по площади пиков. С этой целью к «чистой» плазме добавляли стандартные растворы налтрексона и его метаболита, встряхивали на vortex 5 секунд и оставляли на 30 минут при комнатной температуре. Далее проводили процедуру экстракции как описано выше. На рисунке 1 представлен калибровочный график зависимости площади пика от концентрации определяемых веществ в пробе.

На рисунке 2 представлены образцы хроматограмм налтрексона и его метаболита в плазме крови. Хроматографические характеристики методики количественного определения налтрексона и 6--налтрексола в плазме крови представлены в таблице 1. Полученные данные свидетельствуют об эффективности и селективности описанной методики.

Достоверность результатов количественного определения налтрексона и 6--налтрексола в плазме крови оценивали, рассчитывая метрологические характеристики представленной методики по результатам 6 параллельных измерений концентрации в трех образцах плазмы крови (таблица 2). Из данных, приведенных в таблице 2, следует, что относительная погрешность среднего результата (точность методики) составляет 7,4; 3,3; 2,9% и 7,9; 4,6; 2,7%, а стандартное отклонение среднего результата (воспроизводимость) составляет 0,15; 0,63; 1,16 и 0,15; 0,90; 1,05 соответственно для концентрации налтрексона и 6--налтрексола 5, 50 и 100 нг/мл. Истинное содержание налтрексона и 6--налтрексола в пробах находится в рассчитанных доверительных границах, а разработанная методика количественного определения налтрексона и 6--налтрексола в крови свободна от систематических ошибок.

Рисунок 1. Калибровочный график зависимости площади хроматографического пика налтрексона и 6--налтрексола от их содержания в образцах плазмы крови (у = -4,29767 + 0,008178 * х, r² = 0,9882 для налтрексона и у = 1,718851 + 0,001032 * х, r² = 0,9966 для его метаболита).

Таблица 1

Хроматографические характеристики методики количественного определения налтрексона и 6--налтрексола в плазме крови

а б в

Рисунок 2. Хроматограмма стандартного раствора налтрексона и его метаболита (а), «чистой» плазма (б) и плазмы, содержащей налтрексон и его метаболит (в).

Таблица 2

Метрологические характеристики представленной методики (Р 95%)

Изучение высвобождения налтрексона из новой лекарственной формы по тесту in vitro

Индивидуальные значения концентрации налтрексона в плазме крови испытуемых после подкожной имплантации налтрексона в дозе 1,0 г в виде таблеток для имплантации Продетоксон представлены на рисунке 5. При анализе полученных значений концентраций налтрексона отмечен большой разброс индивидуальных значений (CV до 75%).

Рисунок 5. Равновесная концентрация налтрексона в плазме крови пациентов после имплантации препарата Продетоксон

Индивидуальные значения концентрации 6--налтрексола в плазме крови испытуемых после подкожной имплантации налтрексона в дозе 1,0 г в виде таблеток для имплантации Продетоксон представлены на рисунке 6. При анализе полученных значений концентраций метаболита налтрексона отмечен большой разброс индивидуальных значений (CV до 89%).

Рисунок 7. Усредненные значения равновесной концентрации налтрексона и его метаболита в плазме крови пациентов

На рисунке 7 показана усредненная динамика концентрации налтрексона и его метаболита в крови пациентов после имплантации препарата Продетоксон. Как видно на данном рисунке в течение 60 дней препарат и его активный метаболит обнаруживаются в крови пациентов (за счет медленного постоянного высвобождения из лекарственной формы, что показано в выше описанных исследованиях), что и обеспечивает длительный фармакологический эффект. Учитывая, что метаболит налтрексона обладает аналогичной фармакологической активностью и уровень его концентрации к 60 дню еще достаточно высок, то после того как сам налтрексон окажется ниже терапевтического диапазона фармакологический эффект препарата еще будет сохраняться и лимитироваться выведением 6--налтрексола, поэтому рекомендуемый срок имплантации составил 8-10 недель.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана методика совместного определения налтрексона и его активного метаболита 6-в-налтрексола в растворах и плазме крови методом ВЭЖХ с УФ-детектором и твердо-фазной экстракцией.

2. Подобраны условия определения высвобождения налтрексона из новой пролонгированной формы в условиях in vitro (по тесту кинетика растворения). Оптимальными признаны - аппарат «вращающаяся корзинка», среда растворения - 900 мл воды.

3. По результатам высвобождения in vitro установлено, что налтрексон постепенно высвобождается из таблеток для имплантации Продетоксон. Полнота и скорость высвобождения налтрексона in vitro составляют 22% через 1 час, 61% через 2 часа и 85% через 6 часов.

4. Изучена динамика концентрации налтрексона в крови животных после имплантации препарата Продетоксон. Показано, что максимальное значение концентрации налтрексона достигается на 3 день после имплантации и составляет в среднем около 89+3 нг/мл. На 60 день налтрексон все еще определяется в крови животных (в среднем около 11+2 нг/мл).

5. Определена равновесная концентрация налтрексона и его активного метаболита 6--налтрексола в плазме крови больных наркоманией после имплантации препарата Продетоксон. В течение 60 дней налтрексон и его метаболит определяются в крови пациентов в терапевтическом диапазоне. При этом уровни концентрации метаболита значительно превышают уровни концентрации самого налтрексона.

6. Показано, что новые отечественные таблетки Продетоксон обладают длительным фармакологическим эффектом за счет постепенного высвобождения налтрексона, что обеспечивает длительное поддержание эффективных концентраций его и его активного метаболита и позволяет установить срок имплантации 8-10 недель.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сулимов Г.Ю., Гусейнова С.В. Эффективность применения препарата налтрексон для профилактики рецидивов героиновых наркоманий. // Материалы клинических исследований лекарственных средств. - 2004. - С. 249-250.

2. Раменская Г.В., Кукес В.Г., Гусейнова С.В., Демченкова Е.Ю. Определение налтрексона в плазме крови методом ВЭЖХ. // Клиническая фармакология в России: достижения и перспективы. - 2004. - С. 202-203.

3. Раменская Г.В., Гусейнова С.В., Кукес В.Г. Фармакокинетическое исследование налтрексона и его метаболита в оценке эффективности новой лекарственной формы. // Мат. II Всерос. съезда фармац. работников, г. Сочи, 2005. - С. 129.

4. Фармакокинетическое изучение новой отечественной пролонгированной формы налтрексона для имплантации - «продетоксон». / В.Г. Кукес, Г.В. Раменская, С.В. Гусейнова, Г.Ю.Сулимов. //Новые лекарственные препараты.- Москва, 2006.- Выпуск 2.- С.25-30.

5. Гусейнова С.В., Раменская Г.В., Кукес В.Г. Определение налтрексона в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. //Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - №1. - 2008. - С. 28-29.

Размещено на Allbest.ru