Иммуно-патогенетическая характеристика эффективности применения полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Иммуно-патогенетическая характеристика эффективности применения полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С

Общая характеристика работы

Актуальность работы: Вирусный гепатит С является актуальной проблемой современного здравоохранения в связи с распространенностью в популяции, высокой частотой формирования цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, развитием внепеченочных проявлений, определяющих трудности диагностики заболевания и его лечения (Радченко В.Г., 2004; Chang K.M., 2003; Hoofnagle J.H., 2002; Matsuzaki К. et al., 2007).

Важной особенностью HCV-инфекции является способность вируса к длительной персистенции в организме хозяина (Argentini С. et al., 2009). Генетическая вариабельность HCV, высокая скорость мутаций, подавление иммунного ответа под действием структурных и неструктурных белков вируса, а также инфицирование вирусом иммунокомпетентных лимфоидных клеток, являются факторами, способствующими хронизации инфекции (Argentini С. et al., 2009; Blackard J.T. et al., 2008; Yan F. et al., 2000). Персистенция вируса гепатита С в клетках, выполняющих функцию иммунного надзора, может сопровождаться морфологической и функциональной дезорганизацией иммунной системы, наиболее значимым проявлением которой являются количественные и функциональные нарушения клеток, участвующих в иммунных реакциях (Буеверов А.О. с соавт., 2000; Радченко В.Г., 2004; Серов В.В., 2004). Несмотря на многочисленные исследования в этой области, многие аспекты иммунопатогенеза HCV-инфекции остаются недостаточно изученными.

Трудной и до конца не решенной проблемой современной медицины является лечение хронического вирусного гепатита С (ХВГС), которое предполагает комплексный подход и включает два основных направления: базисное и этиотропное (Соринсон С.Н., 1998). Этиотропная терапия ХВГС предусматривает использование препаратов рекомбинантных интерферонов-б в сочетании с синтетическими аналогами нуклеозидов. Базисное лечение включает в себя охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию (Блюм Х.Е., 2005; Богословская Е.В. с соавт., 2007; Shepherd J. et al., 2004). В настоящее время в дополнение к базисному и этиотропному лечению ХВГС используют иммуномодулирующую терапию рекомбинантными интерлейкинами (ронколейкин, беталейкин), ростовыми и колониестимулирующими факторами, индукторами интерферонов (Лобзин Ю.В. с соавт., 2001; Конусова В.Г. с соавт., 2003; Романцов М.Г. с соавт., 2008). Однако, резистентность некоторых пациентов к интерферонам и иммуномодулирующим препаратам, наличие множества противопоказаний к их назначению, побочные эффекты, недостаточная эффективность, длительность терапии и высокая ее стоимость (Ивашкин В.Т. с соавт., 2007; Крель П.Е., 2000) привели к необходимости поиска новых эффективных средств терапии.

Одним из возможных подходов к эффективному патогенетически обоснованному лечению пациентов с ХВГС является включение в комплексную терапию биокорректоров. Среди природных соединений несомненный интерес представляют полисахариды, выделенные из морских бурых водорослей, обладающие противовоспалительными, цитокининдуцирующими, иммуномодулирующими, гепатозащитными, антивирусными, антиоксидантными свойствами (Запорожец Т.С., 2006; Кузнецова Т.А. с соавт., 2003; Cumashi А. et al., 2007; Alekseyenko T.V. et al., 2007; Mandal P. et al., 2007; Lee J. et al., 2004; Хотимченко М.Ю., 2011). Настоящая работа посвящена исследованию возможности коррекции дисфункции иммунной системы у пациентов с ХВГС при включении в комплекс терапевтических мероприятий биологически активной добавки к пище (БАД) «Фуколам» на основе полисахаридов из бурых водорослей.

Цель исследования: изучить влияние полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С для оптимизации базисной терапии.

Задачи исследования:

1. Исследовать состояние системы врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации

2. Исследовать состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации

3. Оценить иммуно-патогенетическую эффективность применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации

4. Исследовать влияние полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в печени

Научная новизна: установлены особенности дисфункции иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в изменении функциональной активности лимфоцитов (нарушение процессов активации, продукции цитокинов), нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) на фоне нормальных количественных параметров субпопуляционного состава и активации гуморальных факторов иммунитета. Установлено иммуномодулирующее действие полисахаридов из бурых водорослей, применяемых в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С: изменение процессов активации лимфоцитов периферической крови; нормализация баланса Th1- и Th2-цитокинов, уровня иммуноглобулинов и иммунных комплексов; стимуляция фагоцитарной активности нейтрофилов; восстановление баланса между процессами перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. В экспериментальных и клинических исследованиях доказано, что полисахариды из бурых водорослей Тихого океана снижают воспалительный процесс в печени.

Практическая значимость: Обоснована целесообразность применения полисахаридов из бурых водорослей для коррекции иммунной дисфункции, нормализации свободнорадикальных процессов и снижения воспалительного процесса в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.

Разработана и внедрена в практическое здравоохранение Приморского края (ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница») методика применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, определена перспектива ее практического использования при гепатитах различной этиологии, представлены методические рекомендации «Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С» (утверждены Департаментом здравоохранения администрации Приморского края), определены наиболее информативные критерии оценки степени выраженности иммунных нарушений у пациентов с ХГВС (уровень экспрессии активационных антигенов на поверхности лимфоцитов крови).

Апробация материалов работы: Результаты работы были представлены на научно - практических конференциях и симпозиумах международного, российского и регионального уровня: XII Международной научной конференции с международным участием «Здоровье семьи - XXI век» и III Международной научной конференции «Онкология - XXI век» (г. Эйлат, Израиль, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Иммуномодуляторы природного происхождения» (Владивосток, 2009), V научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2010), III Съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации «Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010), VIII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010), научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010), III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011), V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов «(Новосибирск, 2011), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Абакан, 2011), Ч Региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии» (Владивосток, 2012).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации основных положений диссертации.

Объем и структура диссертационной работы: Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 310 источников, из них 161 отечественных и 149 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 7 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Состояние иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности характеризуется нарушением процессов активации лимфоцитов, дисбалансом сывороточных цитокинов, сниженной интерферонпродуцирующей и фагоцитарной функцией клеток крови, активацией гуморальных факторов иммунитета.

2. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает иммуномодулирующее действие на показатели цитокинового статуса, гуморальные и клеточные факторы адаптивного и врожденного иммунитета, способствуя коррекции метаболической иммуносупрессии.

3. Полисахариды из бурых водорослей снижают воспалительный процесс в печени - нормализуют биохимические и морфометрические показатели печени, восстанавливают баланс системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты.

Личный вклад автора: Анализ данных отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, комплексное исследование иммунного статуса пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, ретроспективный анализ историй болезни пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, статистическая обработка полученных результатов и их анализ, подготовка основных публикаций, написание диссертации выполнено лично автором. Отдельные исследования выполнены совместно со специалистами ФГБУН ТИБОХ им. Г.Б. Елякова ДВО РАН, что нашло отражение в совместных публикациях.

Содержание, результаты и обсуждение работы

вирусный гепатит иммунитет

Экспериментальные и клинические исследования проведены в лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (заведующая лабораторией д.м.н. Кузнецова Т.А.), а также на базе ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока (главный врач, к.м.н. Шкляр Г.М.). Отдельные разделы работы выполнены совместно с лабораторией химии ферментов ФГБУН Тихоокеанского института биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН (заведующая лабораторией д.х.н. Звягинцева Т.Н.). Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (протокол №6 от 17.04.2007 г.)

Контингент, материалы и методы: Обследовано 57 пациентов с ХВГС (37 женщин и 20 мужчин в возрасте от 18 до 49 лет), находящихся на лечении в ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока в период с 2008 по 2010 годы. Диагноз ХВГС устанавливали на основании клинико-эпидемиологических и биохимических данных и подтверждали выявлением у пациентов специфических серологических маркеров инфицирования методом иммуноферментного анализа (ИФА) (наличие анти-НСV-сум., анти-HCV-IgG, анти-HCV-IgM, анти-HCV-NS (3-5), обнаружением RNA-HCV в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также данными УЗИ органов брюшной полости и фибросканирования печени. Критерии включения: ХВГС в фазе реактивации (репликации вируса), низкая или умеренная степень биохимической активности гепатита, информированное согласие пациента на участие в проведении исследования. Критерии исключения: ХВГС в стадии фиброза или цирроза печени, наличие хронической алкогольной интоксикации, употребление наркотических и психотропных средств, включение в комплекс лечения пациентов с ХВГС противовирусных и иммуномодулирующих препаратов. Исследование было рандомизированным, обеспечивающим случайное распределение пациентов в однородные группы. Все больные были разделены на 2 группы: контрольная группа (30 человек) - пациенты, получавшие только базисное лечение, включающее охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию; опытная группа (27 человек) - пациенты, получавшие в комплексе с базисной терапией БАД «Фуколам»¹ по 1 капсуле, содержащей 100 мг фукоидана из Fucus evanescens и 400 мг солей альгиновых кислот из бурых водорослей, внутрь два раза в сутки в течение 21 дня. С целью сравнения исследуемых показателей использовали кровь 22 здоровых доноров. Исследования выполнялись дважды: до начала лечения и после его окончания.

Экспериментальная часть работы выполнена на 40 мышах линии (СВАхС57В1/6) F₁, а также на 80 неинбредных мышах массой 18-20 граммов, полученных из питомника РАМН «Столбовая», находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (Страсбург, 1986).

Таблица 1. Направления, методы и объем проведенных исследований

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью прикладной программы «Statistica 7.0». Использовали следующие методы статистического анализа: проверку нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений (W-критерий Шапиро-Уилка), проверку гипотез о равенстве дисперсий (F-критерий Фишера), кластеризацию признаков методом К-средних. Для оценки значимости различий при нормальном распределении количественных признаков использовали t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и для двух связанных между собой вариационных рядов), при распределении, отличающемся от нормального - критерий Вилкоксона (W) для связанных вариационных рядов и критерий Манна-Уитни (U) для несвязанных меду собой выборок. Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: среднее арифметическое (М), стандартное отклонение (у), медиана (Me), нижний и верхний квартили (LQ-UQ), объем анализируемой группы (n), достигнутый уровень значимости (р). Уровень доверительной вероятности был задан равным 95%.

Результаты и их обсуждения:

I. Адаптивный иммунитет при ХВГС и его коррекция полисахаридами из бурых водорослей

Результаты исследования показали, что до начала терапии у пациентов с ХВГС показатели, характеризующие субпопуляционный состав ЛПК, значимо не отличались от таковых в группе здоровых доноров и находились в пределах средне-нормальных значений (рис. 1).

Рис. 1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови здоровых доноров и пациентов с ХВГС до начала лечения

В результате проведенного лечения в контрольной и опытной группах показатели субпопуляционного состава ЛПК значимо не изменялись. В тоже время, реактивация хронического гепатита С, связанная с репликацией вируса, отражалась на процессах активации лимфоцитов. Так, у 37% пациентов с ХВГС уровень экспрессии активационных антигенов CD25, CD95 и HLA-DR на ЛПК был повышен, у 34% пациентов - находился в пределах средне-нормальных значений и у 29% пациентов - снижен. Полученные результаты указывают на индивидуальные особенности реакции иммунной системы пациентов с ХВГС: высокий уровень экспрессии активационных антигенов свидетельствует об адекватной реакции на вирусный антиген и эффективном иммунном ответе, низкий уровень активации лимфоцитов отражает супрессию иммунного ответа. Иммунный ответ пациентов со средне-нормальными значениями уровня экспрессии активационных антигенов является неадекватным в условиях персистенции HCV и недостаточным для подавления активности вируса. В результате применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, у пациентов с исходно высокими значениями активированных лимфоцитов показатели снижались до уровня нормы, с исходно средними значениями активированных лимфоцитов - значимо не менялись, с исходно низкими значениями активированных лимфоцитов - увеличивались. У пациентов контрольной группы, получавших только базисное лечение, подобной закономерности выявлено не было, уровень экспрессии активационных антигенов значимо не менялся по отношению к показателям до начала лечения (табл. 2). Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови пациентов с ХГВС до начала терапии (IgM (2,75±1,5 г/л), IgG (20,5±4,6 г/л) и IgА (2,58±0,86 г./л) значимо превышало соответствующие показатели у здоровых лиц (IgM - 1,3±0,4 г/л, р=0,000; IgG - 10,1±3,2 г/л, р=0,000; IgА - 1,8±0,4 г/л, р=0,000), свидетельствуя об активации гуморального звена иммунитета. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением у пациентов с ХВГС оказывало положительный корригирующий эффект на показатели гуморального звена иммунитета, отражая снижение степени выраженности воспалительного процесса: концентрация IgM в сыворотке крови пациентов контрольной и опытной групп снижалась с 2,4 (1,7-3,1) г/л до 1,8 (1,1-2,3) г/л, р=0,000 и с 2,5 (1,4-4,2) г/л до 1,1 (0,7-1,8) г/л, р=0,000 соответственно, однако уровень IgM в группе пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, снижался в большей степени, чем в контрольной группе (р₁=0,05). Уровень IgА у пациентов опытной группы нормализовался (с 2,5 (1,8-3,2) г/л до 2,1 (1,5-2,6) г/л, р=0,028), в то время как в контрольной группе значимо не менялся (2,67 (2-3,1) г/л и 2,7 (2,1-3,3) г/л, р=0,313). Изменений концентрации IgG после лечения в обеих группах выявлено не было (р>0,05).

Таблица 2. Динамика показателей активационных антигенов ЛПК в зависимости от их исходного уровня у пациентов с ХВГС

Согласно современным представлениям, иммунный баланс при ХВГС смещается в сторону Th2-лимфоцитов, сопровождаясь усилением продукции противовоспалительных цитокинов, что может приводить к снижению противоинфекционной защиты и утяжелению течения заболевания (Gao Q.J. et al., 2009).

В наших исследованиях у пациентов с ХВГС в фазе реактивации до начала терапии наблюдалось снижение концентрации INF-б в сыворотке крови, увеличение IL-4, уменьшение соотношения INF-г/IL-4, свидетельствующее о девиации баланса цитокинов в сторону Th2, недостаточности клеточного звена иммунитета и преобладании гуморального иммунного ответа (табл. 3).

Таблица 3. Динамика уровня цитокинов в сыворотке крови пациентов с ХВГС

По окончании лечения у пациентов опытной группы содержание IL-4 в сыворотке крови снижалось до уровня средне-нормальных значений, сопровождаясь увеличением соотношения INF-г/IL-4, тогда как у пациентов контрольной группы после базисного лечения содержание IL-4 не менялось, не изменялось также и соотношение INF-г/IL-4 (табл. 3).

Поскольку системный уровень цитокинов не всегда адекватно отражает тяжесть состояния (так как цитокины являются локальными медиаторами, имеют короткий период полураспада в сыворотке крови, способны активно связываться с растворимыми рецепторами к ним (Демьянов А.В. с соавт., 2003), мы оценили способность клеток цельной крови пациентов с ХВГС, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, к продукции цитокинов in vitro.

Полученные результаты свидетельствовали о сохранении резервных возможностей клеток периферической крови пациентов с ХГВС в отношении продукции про- и противовоспалительных цитокинов на фоне снижения интерферонпродуцирующей функции: до начала терапии у пациентов с ХВГС способность клеток периферической крови к спонтанной продукции IL-6, TNF-б, IL-10 и IL-4 была усилена, способность к выработке INF-б и INF-г - снижена - по сравнению с показателями у здоровых доноров; митогенстимулированная продукция TNF-б, IL-6, IL-10, и IL-4 у пациентов с ХГВС значимо превышала соответствующие показатели стимулированных лимфоцитов у здоровых доноров, в то время как концентрация INF-г и INF-б в супернатантах стимулированных лимфоцитов пациентов с ХВГС снижалась (табл. 4).

В супернатантах ЛПК пациентов контрольной группы после базисного лечения было отмечено незначительное снижение концентрации TNF-б, однако этот показатель значимо превышал таковой у пациентов опытной группы. Продукция IL-6 значимо не изменялась и сохранялась на высоком уровне. Наблюдалось незначительное увеличение спонтанной продукции INF-г, не достигающее уровня нормальных показателей. Спонтанная и митогениндуцированная продукция INF-б значимо не изменялась, способность клеток крови к продукции IL-10 и IL-4 оставалась повышенной (табл. 4).

Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией способствовало снижению и нормализации уровня спонтанной продукции провоспалительных цитокинов TNF-б и IL-6, индуцированной продукции TNF-б, а также противовоспалительных цитокинов IL-10 и IL-4 и усилению интерферонпродуцирующей функции клеток периферической крови пациентов с ХВГС (табл. 4). Таким образом, полисахариды из бурых водорослей оказывают иммунорегулирующее действие на измененные показатели цитокинового статуса у пациентов с ХВГС: нормализуют баланс цитокинов Th1- и Th2-лимфоцитов за счет снижения концентрации противовоспалительных цитокинов и усиления интерферонпродуцирующей функции клеток крови, снижают уровень провоспалительных цитокинов.

Таблица 4. Спонтанная и митогениндуцированная продукция цитокинов ЛПК у здоровых доноров и пациентов с ХВГС по окончанию лечения

III. Состояние врожденного иммунитета у пациентов с ХВГС и его коррекция полисахаридами из бурых водорослей

Воздействие различных инфекционно-токсических агентов, в том числе вирусов, может служить причиной изменения активности гуморальных и клеточных факторов врожденного иммунитета. Мы исследовали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, уровень ЦИК и их размеры у пациентов с ХВГС, а также влияние полисахаридов из бурых водорослей на эти факторы. При оценке фагоцитарной системы у пациентов с ХВГС было установлено снижение функциональной активности нейтрофилов периферической крови (ФП - 65,6±6,6%, ФЧ - 3,8±0,7) по сравнению с показателями у здоровых доноров (ФП - 80±5,0%; р=0,000, ФЧ - 4,5±0,5; р=0,010 соответственно). На фоне проводимой терапии у пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением, наблюдалось значимое увеличение ФП (с 68 (59-69)% до 74 (68-78)%; р=0,003) и ФЧ (с 3,9 (2,9-4,5) до 4,6 (3,6-5,7); р=0,007), в то время как в контрольной группе у пациентов, получавших только базисную терапию, эти показатели не изменялись и сохранялись на сниженном уровне (ФП с 68 (62-72)% до 69 (62-71)%; р=0,117; ФЧ с 3,5 (3,1-4,5) до 3,7 (3,1-4,6); р=0,157). Нарушение равновесия процессов формирования и нейтрализации ЦИК, необходимых для удаления чужеродных антигенов, способствует длительной персистенции иммунных комплексов в организме, фиксации их в тканях и, следовательно, развитию иммунокомплексных повреждений (Дранник Г.Н., 2003; Серов В.В., 2004). При исследовании уровня ЦИК в сыворотке крови пациентов с ХВГС до начала лечения было выявлено увеличение концентрации иммунных комплексов (157,4±46 ед. ОП; у здоровых доноров - 62,4±5,4 ед. ОП, р=0,000) с преобладанием иммунных комплексов мелких размеров, менее эффективно активирующих систему комплемента и длительно циркулирующих в крови. Под влиянием проведенной терапии у пациентов опытной группы отмечено снижение уровня ЦИК в сыворотке крови (с 148 (129-158) ед. ОП до 107 (94-131) ед. ОП, р=0,0003) с уменьшением количества низкомолекулярных и увеличением крупномолекулярных ЦИК. В контрольной группе, получавших базисную терапию, концентрация ЦИК сохранялась на высоком уровне (с 153 (125-202) ед. ОП до 154 (119-181) ед. ОП, р=0,850), изменения в качественном составе иммунных комплексов выявлено не было. Таким образом, полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с ХВГС обладают регулирующим эффектом на измененные факторы врожденного иммунитета: снижают уровень ЦИК в сыворотке крови, увеличивают их молекулярную массу, нормализуют измененные показатели активности фагоцитарной системы.

IV. Оценка влияния полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в печени

Наличие репликации HСV в гепатоцитах, а также клетках иммунной системы, циркуляция иммунных комплексов, снижение продукции альфа-интерферона, прямое угнетающее влияние возбудителя на факторы врожденного и адаптивного иммунитета играют важную роль в патогенезе хронического гепатита, приводя к повреждению печеночной паренхимы с развитием воспалительной реакции, цитолитического синдрома и формированием фиброза печени. В предыдущих разделах работы мы установили способность полисахаридов бурых водорослей корригировать нарушения клеточных и гуморальных факторов врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с ХВГС, отражающие степень выраженности воспалительного процесса в печени. В этой связи нам представилось целесообразным оценить влияние полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в органе-мишени (печени). С этой целью мы исследовали влияние полисахаридов из бурых водорослей на биохимические и морфометрические показатели печени и процессы ПОЛ-АОЗ у пациентов с ХВГС в фазе реактивации.

Анализ биохимических показателей крови у пациентов с ХВГС до начала лечения выявил высокий уровень аминотрансфераз (AлАТ - 132,5 (97,0-195,0) МЕ/л, АсАТ - 101,0 (83,0-151,0) МЕ/л) по сравнению с показателями у здоровых лиц (AлАТ - 25,0 (20,0-31,0) МЕ/л; р=0,000; АсАТ - 20,8 (18,4-23,5) МЕ/л; р=0,000), свидетельствующий о наличии цитолитического синдрома у обследуемых. В результате проведенного лечения наблюдалось снижение активности аминотрансфераз в опытной (AлАТ c 133,0 (90,0-198,0) МЕ/л до 54,0 (46,0-73,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c 101,0 (83,0-139,0) МЕ/л до 53,0 (42,0-57,0) МЕ/л, р=0,000) и контрольной (AлАТ c 131,0 (99,0-172,0) МЕ/л до 88,0 (66,0-108,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c 100,0 (83,0-144,0) МЕ/л до 82,0 (65,0-99,8) МЕ/л, р=0,000) группах, однако у пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением, уровень этих показателей был значимо ниже, чем у пациентов в контрольной группе (р₁=0,001; р₁=0,000 соответственно). Увеличение размеров печени, выявленное при объективном осмотре и свидетельствующее об усилении активности воспалительного процесса, подтверждали данные ультразвукового исследования органов брюшной полости (сагиттальный размер печени по срединно-ключичной линии (17,3±1,3 см) значимо превышал показатели у здоровых доноров - 10,5±1,5 см; р=0,000). На момент окончания терапии у большинства пациентов опытной группы размеры печени уменьшились (с 17,4 (16,2-18) см до 14,0 (12,8-14,9) см, р=0,000), в то время как в контрольной группе нормализации размеров печени выявлено не было (с 17,4 (16,3-18,0) см до 17,0 (16,9-17,9) см, р=0,287).

Нарушения процессов ПОЛ и АОЗ играют важную роль в развитии патологического процесса при хронических вирусных гепатитах (Choi J. et al., 2004), смещая окислительно-восстановительный баланс в сторону активации процессов ПОЛ и приводя к развитию синдрома липидной пероксидации, связанного с накоплением активных форм кислорода и липидных радикалов, участвующих в повреждении биомембран гепатоцитов (Нагоев Б.С., 2003; Choi J., 2006). В наших исследованиях до начала лечения у пациентов с ХВГС в фазе реактивации выявлено высокое содержание МДА (7,2±1,7 мкмоль/гНв) в эритроцитах крови и сниженный уровень АОА плазмы (75,4±13,4%) по сравнению с показателями у здоровых доноров (5,6±0,64 мкмоль/гНв, р=0,000; 82±7,1%, р=0,043 соответственно), свидетельствующие о смещении окислительно-восстановительного баланса в сторону активации процессов ПОЛ. После применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов опытной группы наблюдалась нормализация показателей системы ПОЛ/АОЗ: уровень МДА в эритроцитах крови снизился с 6,7 (6,0-7,6) мкмоль/гНв до 5,7 (5,4-6,6) мкмоль/гНв; р=0,001, показатель АОА плазмы крови повысился до средне-нормальных значений (с 79 (68-85)% до 87 (78-91)%; р=0,004). В контрольной группе пациентов после базисной терапии изменений показателей ПОЛ/АОА выявлено не было. Окислительно-восстановительный баланс был смещен в сторону процессов липопероксидации, что проявлялось высоким уровнем МДА в эритроцитах крови (до лечения - 6,8 (6,2-8,3) мкмоль/гНв, после лечения - 6,6 (6,0-7,3) мкмоль/гНв; p=0,175) и сниженными показателями АОА плазмы (до лечения 80 (68-85)%, после лечения - 78 (76-85)%; р=0,750).

Таким образом, полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с ХВГС способствуют снижению воспалительного процесса в печени: уменьшают уровень аминотрансфераз, нормализуют размеры печени, оказывают регулирующее действие на процессы липопероксидации, восстанавливая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты. С целью доказательства универсальности действия полисахаридов из бурых водорослей на воспалительные процессы в печени, мы оценили влияние фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на биохимические и морфометрические показатели печени у мышей с хроническим токсическим гепатитом, индуцированным тетрахлорметаном. Индукция токсического гепатита у мышей сопровождалась статистически значимым увеличением массы печени, содержания аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы и общего билирубина в сыворотке крови по сравнению с показателями у интактных животных, свидетельствующим о развитии цитолитического синдрома и нарушении пигментообразующей функций печени. Данные магнитно-резонансной томографии свидетельствовали об увеличении линейных размеров печени, края долей были неровными, просматривались нечетко, строма и паренхима печени были резко деформированы.

^_____- интактная группа; - - - - профилактическая схема;

…… контрольная группа; - лечебная схема

Рис. 2. Влияние фукоидана на биохимические показатели крови, массу и линейные размеры печени у мышей с хроническим токсическим гепатитом (по отношению к контролю, принятому за 100% (различия показателей у интактных животных и животных опытных групп статистически значимы по отношению к показателям у животных контрольной (ССl₄) группы (p<0,05)

У животных, получавших фукоидан по лечебной и профилактической схемам, содержание аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы и общего билирубина снижалось, приближаясь к показателям у интактных здоровых мышей, нормализовалась масса печени, уменьшались линейные размеры (рис. 2). Края печени были ровными, паренхима и строма печени не деформированы, желчные протоки не изменены.

Таким образом, проведенное исследование выявило нарушения факторов врожденного, адаптивного иммунитета, цитокинового статуса и системы перекисного окисления липидов / антиоксидантной защиты у пациентов у пациентов с ХВГС в фазе реактивации. Оценка влияния полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в печени у пациентов с ХВГС позволила обосновать целесообразность их применения для оптимизации базисной терапии.

Выводы

1. Установлены особенности дисфункции иммунной системы у пациентов с ХГВС в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в активации гуморальных факторов иммунитета, изменении функциональной активности нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) и лимфоцитов (нарушение процессов активации) на фоне нормальных количественных параметров их субпопуляционного состава.

2. Состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности характеризуется дисбалансом сывороточных цитокинов с доминированием медиаторов Th2-лимфоцитов, а также снижением интерферонпродуцирующей функции клеток периферической крови на фоне гиперпродукции про- и противовоспалительных цитокинов.

3. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает иммуномодулирующее действие на факторы врожденного и адаптивного иммунитета, сопровождающееся изменением процессов активации лимфоцитов, зависящим от исходного состояния клетки, нормализацией уровня основных классов иммуноглобулинов, ЦИК и их качественного состава, увеличением фагоцитарной активности нейтрофилов.

4. Полисахариды из бурых водорослей в составе базисной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С регулируют цитокиновый баланс, нормализуя соотношение сывороточных цитокинов, продуцируемых Th1/Th2-лимфоцитами. Усиление интерферонпродуцирующей функции клеток крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, получавших полисахариды из бурых водорослей и снижение секреции про- и противовоспалительных цитокинов, отражает снижение активности инфекционного воспалительного процесса.

5. Полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С способствуют снижению воспалительного процесса в печени, нормализуя функциональную активность и морфометрические показатели печени, восстанавливая баланс системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты.

6. Фукоидан из Fucus evanescens снижает проявления воспалительного процесса в печени у экспериментальных животных с индуцированным хроническим токсическим гепатитом - нормализует морфометрические показатели и функциональную активность печени.

Рекомендации для внедрения в медицинскую науку и практику

1. Выявленные наиболее информативные показатели иммунного статуса у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (уровень экспрессии активационных антигенов на поверхности ЛПК - CD25, CD95, HLA-DR), рекомендовано использовать для оценки степени выраженности иммунных нарушений, а также эффективности их коррекции в лечебных мероприятиях.

2. На основании оценки иммуно-патогенетической эффективности полисахаридов из бурых водорослей рекомендовано включение БАД «Фуколам» в состав базисной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С с целью коррекции дисфункции иммунной системы и нормализации функциональной активности печени. Режим приема - по 1 капсуле 2 раза в день в течение 30 дней в комплексе с базисной терапией.

Список опубликованных научных работ по теме диссертации

1. Функциональная активность лимфоцитов периферической крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С при включении в комплекс лечения фукоидана из Fucus evanescens / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева, М.И. Кусайкин // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2010. - №3. - С. 55-58.

2. Гепатопротекторные свойства фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens / Т.А. Кузнецова, И.Г. Агафонова, Т.С. Крохмаль, Т.Н. Звягинцева, Н.В. Филонова // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2010. - №4. - С. 32-35.

3. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели цитокинового статуса у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева, М.И. Кусайкин // Цитокины и воспаление. - 2011. - Т.10, №4. - С. 105-110.

4. Клинико-биохимическая эффективность применения БАД «Фуколам» в комплексной терапии больных с ХВГС / Н.В. Филонова, Н.Н. Беседнова, С.А. Ермолицкая, М.В. Маковкина, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева // Материалы XII Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век», Эйлат, Израиль, 29 апреля - 07 мая. - 2008. - С. 332-333.

5. Влияние фукоидана на экспрессию активационных антигенов лимфоцитами периферической крови при хроническом вирусном гепатите С / Н.В. Филонова, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2009. - №3. - С. 138.

6. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели иммунного и цитокинового статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С при включении в комплекс лечебных мероприятий / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2010. - №2/1. - С. 215-216.

7. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели антиоксидантной системы у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, С.А. Ермолицкая, Л.В. Лебедева, И.А. Пожидаева, Т.Н. Звягинцева // Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации: труды Третьего съезда военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации. - СПб. - 2010. - С. 160.

8. Филонова, Н.В. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на гуморальные факторы естественной резистентности у больных хроническим вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Т.Н. Звягинцева // Журнал инфекционной патологии. - 2010. - Т.17. - №3. - С. 203.

9. Коррекция нарушений интерферонпродуцирующей способности клеток крови у пациентов с хроническим гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Л.А. Иванушко, Т.Н. Звягинцева, С.П. Ермакова // Инфекционные болезни. - 2011. - Т.9, Приложение 1. - С. 337.

10. Филонова, Н.В. Влияние фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на факторы врожденного иммунитета у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Т.Н. Звягинцева // Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов: Материалы Пятой Всероссийской научно-практической конференции, Новосибирск, 12-14 апреля. - 2011. - С. 225-226.

11. Филонова, Н.В. Коррекция цитокинпродуцирующей функции клеток периферической крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С фукоиданом из морских бурых водорослей / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Т.Н. Звягинцева // Дни иммунологии в Сибири: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Абакан, 27-28 апреля. - 2011. - С. 216-217.

12. Клинико-патогенетическое обоснование применения фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens в комплексной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, А.К. Гажа, Л.А. Иванушко, Т.П. Смолина, Т.Н. Звягинцева // Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии: Материалы Ч Региональной научно-практической конференции, Владивосток, 19 апреля. - 2012. - С. 54-58.

13. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / Н.В. Филонова, Т.С. Запорожец, Г.М. Шкляр, Т.Н. Звягинцева // Методические рекомендации. Владивосток. - 2012. 16 с.

Размещено на Allbest.ru