Исследование механизмов проникновения вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей в клетку в реальном времени
Изучение механизмов проникновения вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей в эмбриональные клетки почки человека. Подбор эффективного способа включения в вирусную частицу люциферазы как наиболее подходящего фермента для определения слияния вируса.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 28.09.2018 |
| Размер файла | 992,0 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Выводы
1. Присоединение люциферазы к С-концу оболочечного белка MLV вируса через линкерный пептид Glu-Phe обеспечивает эффективное включение люциферазы в вирусную частицу, что позволяет использовать эту конструкцию для измерения проникновения вируса в клетку в реальном времени.
2. Для проникновения вируса MLV в клетку необходим оболочечный белок дикого типа, так как добавление этого белка к белку, слитому с ферментом, приводит к получению интактного вируса с целостной мембраной и повышает его титр до титра вируса дикого типа.
3. Разработан новый, универсальный и чувствительный метод, с помощью которого подтверждено, что вирусы VSV и MLV входят в клетку через специфичный рецептор-зависимый механизм.
4. При использовании искусственного кодона инициации трансляции, который предшествовал открытой рамке считывания, кодирующей белки Е3-Е1, впервые получен псевдотип вируса ВЭЛ, имеющий высокий титр (106 к.ф.е./мл) и несущий на своей поверхности нативные эпитопы, узнаваемые моноклональными антителами к вирусу дикого типа.
5. Впервые установлено, что присоединение люциферазы к оболочечному белку вируса ВЭЛ с помощью удлиненного полилинкера, состоящего из 3-х копий НА-эпитопа, позволяет включить люциферазу в псевдотип вируса ВЭЛ. Добавление оболочечного белка дикого типа оказалось необходимым для получения вируса с ненарушенной мембраной и позволило количественно измерять проникновение ВЭЛ псевдотипа в клетку в реальном времени.
6. Впервые показано, что ВВЭЛ проникает в клетки с помощью клатрин-зависимого эндоцитоза и нуждается в функционально активных ранних и поздних эндосомах, причем процесс проникновения не зависит от холестерина.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Тикунова Н. В., Колокольцов А. А. и Чепурнов А. А. (2001) Рекомбинантные моноклональные человеческие антитела против вируса Эбола// Доклады Академии Наук, 378, 195-197.
2. Kolokoltsov, A. A. and Davey, R. A. (2004) Rapid and sensitive detection of retrovirus entry by using a novel luciferase-based content-mixing assay// Journal of Virology, 78, 5124-5132.
3. Kolokoltsov, A. A., Weaver, S. C. and Davey, R. A. (2005) Efficient functional pseudotyping of oncoretroviral and lentiviral vectors by Venezuelan equine encephalitis virus envelope proteins// Journal of Virology, 79, 756-763.
4. Kolokoltsov, A. A., Fleming, E. H. and Davey, R. A. (2006a) Venezuelan equine encephalitis virus entry mechanism requires late endosome formation and resists cell membrane cholesterol depletion// Virology, 347, 333-342.
5. Kolokoltsov, A. A., Wang, E., Colpitts, T. M., Weaver, S. C. and Davey, R. A. (2006b) Pseudotyped viruses permit rapid detection of neutralizing antibodies in human and equine serum against Venezuelan equine encephalitis virus// The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 75, 702-709.
6. Saeed, M. F., Kolokoltsov, A. A. and Davey, R. A. (2006) Novel, rapid assay for measuring entry of diverse enveloped viruses, including HIV and rabies// Journal of Virological Methods, 135, 143-150.
Список используемых сокращений
ВВЭЛ - вирус венесуэльского энцефаломиелита лошадей
ВИЧ - вирус иммунодифицита человека
к.ф.е. - колонию формирующая единица
Л/НЛ - соотношение люциферазной активности лизированного вируса к активности нелизированного
о.е.с. - относительная единица света
ПЦР - полимеразная цепная реакция
293 HEK - эмбриональные клетки почки человека
env - оболочечный белок вируса
env-luc - оболочечный белок вируса, слитый с люциферазой
GFP - зеленый флюоресцирующий белок
luc - люцифераза
MLV - вирус лейкоза мышей
MOI - множественность заражения
RRV - вирус долины реки Росс
SFV - вирус леса Семлики
SINV- вирус Синдбис
TM - трансмембранный фрагмент
VSV - Вирус Везикулярного Стоматита
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Строение вируса папилломы человека. Процесс проникновения вируса в клетку. Множественные кондиломы шейки матки. Причины, которые способствуют развитию заболевания при попадании папилломовирусной инфекции в организм. Возникновение необратимой неоплазии.
презентация [2,2 M], добавлен 08.12.2011Этапы проникновения инфекционных агентов в клетку. Присоединение вирионов к рецепторам клеточной мембраны. Взаимодействие с корецепторами посредниками проникновения вируса в клетку. Механизмы перемещения его генома и сопутствующих белков в мембране.
курсовая работа [384,1 K], добавлен 14.02.2011Описание стадий адсорбции вириона на поверхности клетки. Особенности процесса проникновения вируса в чувствительные к нему клетки. Специфика скрытой фазы инфекционного вируса. Синтез компонентов и формирование зрелых вирионов. Репродукция вирусов.
реферат [17,8 K], добавлен 26.12.2011Изучение бешенства в XIX веке. Варианты вируса бешенства. Очистка и концентрация культурального вируса. Размножение вируса бешенства. Химическая структура и биологическая активность субвирусных компонентов. Инкубационный период и стадии заболевания.
реферат [1,7 M], добавлен 23.12.2010Понятие о репродукции. Первая фаза репродукции. Адсорбция вириона на поверхности клетки. Проникновение вируса в клетку. Формирование зрелых вирионов. Процесс "сборки" вируса. Выход зрелых вирионов из клетки. Механизм действия вирусных ингибиторов.
реферат [520,7 K], добавлен 12.10.2015Понятие вируса папилломы как эпителиотропного вируса, способного поражать клетки эпителия эктодермального происхождения, его типы и формы. Этапы и клиническая картина протекания заболевания, его диагностика и подходы к лечению, этиология и патогенез.
реферат [359,5 K], добавлен 01.06.2015Определение понятия вируса иммунодефицита человека. Изучение обусловленности данного заболевания у детей. Характеристика поведения вируса в организме человека, культуральные свойства. Эпидемиология и патогенез болезни. Клиника внутриутробной инфекции.
презентация [1,8 M], добавлен 28.12.2015Вирус иммунодефицита и его структура. ВИЧ-инфекция как причина заболевания. Действие вируса внутри белых клеток. Особенности строения мембраны вируса, его способность к мутациям. Распространение вируса через инфицированную кровь, попадающую в организм.
курсовая работа [58,9 K], добавлен 11.01.2010Биология вируса иммунодефицита человека. Группы высокого риска инфицирования ВИЧ. Стадии, лабораторная диагностика и клиническая классификация ВИЧ-инфекции. Поражение нервной системы человека. Факторы, влияющие на распространение вируса половым путем.
реферат [33,3 K], добавлен 10.05.2009Строение цитомегаловируса и пути его проникновения в клетку. Способы передачи вируса, их особенности. ЦМВ-инфекция у беременных. Врожденная и приобретенная ЦМВ-инфекция у детей. Диагностика, профилактика и методы лечение цитомегаловируса у беременных.
презентация [995,0 K], добавлен 14.05.2016Географическое распределение генотипов вируса гепатита В. Мутантные формы вируса. Методы современной диагностики инфекции. Выявление клинико-биохимических, иммунологических особенностей хронического вирусного гепатита В у детей с различными генотипами.
магистерская работа [121,5 K], добавлен 31.07.2015Изучение особенностей распространения вируса гепатита В, его устойчивости во внешней среде. Исследование механизма развития инфекции, обусловленной вирусом гепатита. Характеристика общих симптомов заболевания, методов профилактики и защиты от вируса.
презентация [1022,5 K], добавлен 22.05.2012Строение вируса иммунодефицита человека. Способы заражения и методы профилактики. Вероятность передачи вируса от матери к ребенку. Группы повышенного риска. Пути, которыми ВИЧ не передается. Миф о "СПИД-терроризме". Воздействие ВИЧ на организм человека.
презентация [2,5 M], добавлен 15.03.2011Энтеральные и парентеральные вирусные гепатиты. Этиология и эпидемиология вируса TTV (transfusion-transmitted virus). Влияние данного вируса на возникновение гепатоцеллюлярной карциномы. Методы изучения степени распространения TTV, особенности лечения.
презентация [482,7 K], добавлен 16.02.2015Характеристика методики выявления дезоксирибонуклеиновой кислоты вируса Эпштейна-Барр у больных с различной инфекционной патологией. Определение чувствительности и специфичности выявления ДНК вируса Эпштейна-Барр у больных инфекционным мононуклеозом.
дипломная работа [2,0 M], добавлен 17.11.2013Профилактика внутрибольничного инфицирования: уменьшение числа парентеральных вмешательств, использование стерильного оборудования. Лечение инфекций, передающихся половым путем, и вируса иммунодефицита человека. Просветительская работа в больницах.
презентация [153,3 K], добавлен 31.03.2015Открытие первого вируса, поражающего человека, его проникновение в клетку. Этапы развития вирусологии. Использование лабораторных мышей и куриных эмбрионов для культивирования вирусов. Строение и химический состав вириона. Выход вирионов из клетки.
презентация [7,3 M], добавлен 17.01.2014Понятие вируса и синдрома. Типы вирусов ВИЧ (вирус иммунодефицита человека). Высокая частота генетических изменений, возникающих в процессе самовоспроизведения вируса. Теории происхождения ВИЧ. Пути передачи ВИЧ-инфекции, стадии развития заболевания.
презентация [2,7 M], добавлен 08.11.2015Изучение вируса табачной мозаики. Горизонтальный перенос генов. Электронная микрофотография бактериофагов, инфицирующих клетку. Определение вич-инфекции, его влияние на иммунную систему организма человека. Классификация и особенность строения вирусов.
презентация [849,1 K], добавлен 05.12.2014Папилломовирусная инфекция - хроническое инфекционное заболевание: возбудители и симптомы. Пути передачи вируса папилломы, типы заболевания. Специфика бовеноидного папулеза. Проявление вируса папилломы у мужчин и у женщин. Диагностика и лечение болезни.
презентация [5,0 M], добавлен 13.11.2012
