Молекулярно-генетические предикторы осложненного клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции у женщин

При сопоставлении уровней экспрессии цитокинов в крови женщин с УГХИ органов малого таза и пациенток с вторичным (трубным) бесплодием достоверных отличий в содержании цитокинов - предикторов развития осложненного течения УГХИ (IL2, IFNг, TNFб и IL10) установлено не было. Это свидетельствует о сходных тенденциях изменения уровня цитокинов в крови женщин с осложненным течением УГХИ и у женщин с нарушениями репродуктивной функции. Показатели, полученные при исследовании цервикального секрета женщин, имели нескоько иные тенденции, чем показатели, полученные по результатам исследования крови, и если уровень экспрессии цитокинов IL2, IL4, IL10, GM-CSFв церивкальном секрете был сопоставим с уровнем экспрессии тех же цитокинов, определявшихся в крови, то уровень в цервикальном секрете таких цитокинов, как IL6, IL8, TNFб и INFг был значительно выше, чем в крови во всех группах обследованных женщин. В целом, для пациенток с УГХИ нижних отделов урогенитального тракта были характерными наиболее высокие концентрации цитокинов IL6, TNFб и INFг (р<0,05) по сравнению с группой сравнения, что подтверждало важную роль этих цитокинов в развитии местной воспалительной реакции при развитии УГХИ.

Сравнение показателей экспрессии цитокинов в цервикальном секрете у женщин 1 и 2 групп позволило выявить достоверное повышение уровня IL2 у больных с осложненным течением УГХИ (5,06±0,99 пг/мл) в сравнении с больными УГХИ нижних отделов мочеполового тракта (2,75±0,49 пг/мл) (р<0,05); также выявлен достоверно более низкий уровень IFNг у пациенток 2 группы (16,06±2,17 пг/мл) в сравнении с пациентками 1 группы (39,25±11,03 пг/мл). Достоверных отличий в концентрации данных цитокинов между женщинами 2 и 3 групп установлено не было, что позволило рассматривать данные показатели в качестве вероятных предикторов развития осложнений УГХИ у женщин.

Таким образом, при исследовании крови и цервикального секрета были установлены иммунологические маркеры развития осложнений УГХИ: содержание IL2 выше 2,83 пг/мл, IL10 выше 4,07 пг/мл, TNF-б выше 3,31 пг/мл, IFN-г выше 9,4 пг/мл - в крови; IL2 выше 4,07 пг/мл, IFN-г ниже 18,23 пг/мл - в цервикальном секрете.

В результате анализа распределения концентрации цитокинов IL2, IL10, TNF-б, IFN-г в установленных ранее диапазонах у обследованных женщин были определены наиболее значимые иммунологические факторы риска развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции (Таблица 7).

Таблица 7

Распределение частоты изменения концентраций цитокинов в крови обследованных женщин (абс (%)).

* р<0,05

Как следует из приведенных данных, одним из значимых иммунологических факторов риска развития осложнений УГХИ являлась концентрация IL2 в крови выше 2,83 пг/мл (у 21,8% обследованных). Наиболее часто этот показатель встречался у больных вторичным бесплодием (у 50,0% обследованных) и больных хламидийной инфекцией органов малого таза (у 30,0% обследованных), в то время, как среди здоровых женщин этот показатель не выявлялся (р<0,05). При этом концентрация IL2 в крови выше указанного уровня регистрировалась достоверно реже у пациенток 1 группы (у 11,1% обследованных) в сравнении с пациентками 3 группы (р<0,05).

Изменения уровня концентрации IL10 выше 4,07 пг/мл в крови регистрировались в крови 19,5% обследованных женщин и достоверно чаще у пациенток 2 и 3 групп (у 30,0% и 40,0% обследованных соответственно), чем у пациенток 1 группы (у 3,7% обследованных) (р<0,05).

Концентрация IFN-г в крови выше 9,4 пг/мл наиболее часто регистрировалась больных с вторичным бесплодием (у 40,0% обследованных), что статистически достоверно выше, чем у больных хламидийной инфекцией нижних отделов мочеполового тракта (у 13,8% обследованных) и здоровых женщин (у 5,0% обследованных) (р=0,001 и 0,02 соответственно).

Несмотря на то, что концентрация TNF-б выше 3,31 пг/мл в крови, регистрировалась у обследованных женщин с такой же частотой, как и IFNг (у 13,8% обследованных), статистически достоверных различий между группами выявлено не было.

В цервикальном секрете изменения концентрации INFг ниже 18,23 пг/мл и IL2 выше 4,07 пг/мл регистрировались у 49 (56,3%) и 18 (20,7%) обследованных женщин соответственно, при этом статистически достоверных различий между группами выявлено не было.

Таким образом, в результате поведенных исследований было устновлено, что наиболее значимыми иммунологическими факторами риска развития осложнений УГХИ являются изменения концентраций в крови IL2, IL10 и IFNг. Изменения концентрации INFг ниже 18,23 пг/мл и IL2 выше 4,07 пг/мл в цервикальном секрете могут считаться дополнительными иммунологическими факторами риска развития осложнений УГХИ.

Результаты изучения взаимосвязи генотипов c. Trachomatis с различными вариантами клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции

В целях установления возможной взаимосвязи между генетическими вариантами C. trachomatis и особенностями клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции было проведено изучение вариабельности генов ompА, ct135, tarр C. trachomatis, полученных от больных урогенитальной хламидийной инфекцией нижних отделов мочеполового тракта (20 человек) и хламидийной инфекцией органов малого таза (20 человек).

В результате типирования штаммов C.trachomatis по гену ompА было установлено, что наиболее часто выявлялись серовары: Е (47,5% изученных образцов ДНК C.trachomatis), G (20,0% образцов) и D (17,5% образцов); менее часто - серовары J (10,0%, образцов), F (2,5% образцов) и K (2,5% образцов) (Рис.2).

Рисунок 2.

Распределение сероваров C. trachomatis, полученных от больных УГХИ (%, n=40).

Наиболее распространенный серовар Е C. trachomatis значительно чаще выявлялся у женщин с хламидийной инфекцией нижних отделов мочеполового тракта (у 65,0% обследованных) по сравнению с больными УГХИ органов малого таза (у 30,0% обследованных) (Рис.3).

Рисунок 3.

Распределение сероваров C. trachomatis при хламидийной инфекции у женщин в зависимости от особенностей клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции (%).

Выявленные достоверные различия в частоте идентификации серовара Е в группах пациенток с неосложненным и осложненным течением УГХИ (OR=4.33±2.93; ч²=4.91228; p<0,05) позволяют говорить о наличии ассоциации между выявлением серовара Е и неосложненным характером клинического течения УГХИ у женщин.

Серовары G, D, J у больных хламидийной инфекцией нижних отделов мочеполового тракта выявлялись достоверно реже (у 25,0% обследованных), чем у больных хламидийной инфекцией органов малого таза (у 70,0% обследованных).

Выявленные достоверные различия в частоте идентификации сероваров C.trachomatis G, D и J в группах пациенток с неосложненным и осложненным течением УГХИ (OR=0.14±0.10; ч²=8.12; p<0,01) позволяют говорить о наличии ассоциации между выявлением относительно редко встречающихся сероваров и осложненным клиническим течением УГХИ.

В результате секвенирования сероваров Е, F, J, K гена ompА C.trachomatis значимых мутаций, приводящих к заменам аминокислот и состава белка C. trachomatis, выявлено не было. В результате секвенирования серовара D гена ompА C. trachomatis в двух образцах были выявлены замены T на A в гене omp в положении 547, не приводящие к значимым заменам аминокислот и структуры белка C. trachomatis.

Значимые нуклеотидные замены были обнаружены только в образцах C. trachomatis, полученных от пациенток с осложненным течением урогенитальной хламидийной инфекции. При изучении вариабельности гена ct135 в 10% образцов были выявлены значимые замены G на A в положениях (593,939,981). Мутации гена ct135 в положениях 939, 981 были выявлены внутри серовара Е, в положении 593 G на А - внутри серовара J.

В результате секвенирования гена tarр C. trachomatis в исследованной выборке мутация была выявлена в лишь одном случае и заключалась в изменении числа тирозин-богатых повторов (3(4,3,4)) по сравнению с “диким” типом. Этот образец C. trachomatis был получен от пациентки с хламидийной инфекцией органов малого таза и относился к серовару G.

Таким образом, в результате молекулярно-генетического исследования генов ompА, ct135 и tarP C. trachomatis в образцах биологического материала, полученного от женщин больных урогенитальной хламидийной инфекцией, были выявлены достоверные ассоциации частоты распространения серовара Е с неосложненным клиническим течением УГХИ и частоты распространения относительно редко встречающихся сероваров C. trachomatis (G, D, J) с хламидийной инфекцией органов малого таза, что может рассматриваться как фактор риска развития осложнений УГХИ. Отмечено, что значимые мутации гена ompА в редко встречающихся сероварах C. trachomatis, а также генов ct135 и tarр чаще обнаруживались в образцах, полученных от женщин с ВЗОМТ хламидийной этиологии.

Рекомендации по ведению женщин, больных урогенитальной хламидийной инфекцией, на основании оценки индивидуального риска развития осложнений заболеваний, и определения генетических вариантов c. Trachomatis

Ведение пациенток с урогенитальной хламидийной инфекцией включает следующие этапы:

- выявление клинико-лабораторных признаков урогенитальной хламидийной инфекции (жалобы, результаты физикального обследования);

- идентификация C. trachomatis методом ПЦР;

- при выявлении клинических и инструментальных (УЗИ) признаков осложненного течения урогенитальной хламидийной инфекции пациенткам назначают терапию по схемам лечения осложненной урогенитальной хламидийной инфекции;

- при отсутствии объективных признаков осложненного течения урогенитальной хламидйиной инфекции осуществляется обследование пациенток на наличие молекулярно-генетических и иммунологических факторов индивидуального риска развития осложнений УГХИ;

-при наличии молекулярно-генетических и/или иммунологических факторов риска пациенткам проводится дополнительное обследование с целью диагностики осложнений УГХИ;

- при наличии молекулярно-генетических и/или иммунологических факторов риска и отсутствии объективных признаков осложненного течения УГХИ по результатам дополнительного обследования с пациенткой проводится беседа о наличии индивидуального риска развития осложнения инфекционного заболевания;

- при отрицательном результате обследования, направленного на выявление предикторов развития осложнений, пациенткам назначается терапия по схемам лечения неосложненной урогенитальной хламидийной инфекции (рис 4).

Рис 4. Алгоритм ведения женщин, больных урогенитальной хламидийной инфекцией, на основании оценки индивидуального риска развития осложнений заболевания

ВЫВОДЫ

1. Факторами риска развития осложненных форм урогенитальной хламидийной инфекции являются: воспалительное заболевания органов малого таза и заболевания слизистой оболочки шейки матки в анамнезе (р<0,05). Современное клиническое течение несоложненных форм урогенитальной хламидийной инфекции у женщин характеризуется отсутствием субъективных проявлений со стороны урогенитального тракта (у 66,7% обследованных), умеренными патологическими выделениями слизисто-гнойного характера (у 47,7% обследованных) и повышенным количеством лейкоцитов (более 10 в поле зрения) при исследовании отделяемого из цервикального канала (у 72,7% обследованных). Хламидийная инфекция органов малого таза характеризуется наличием субъективных проявлений заболевания со стороны урогенитального тракта (у 91,3% обследованных) и нормальными показателями лейкоцитарной реакции при исследовании отделяемого из цервикального канала (у 56,5% обследованных).

2. Молекулярно-генетическими предикторами развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции у женщин являются генотипы IL6*-174С/С, TGFв1*-915G/С, IL10*-592G/A, INFг*+874Т/Т. Молекулярная диагностика риска развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции у женщин основана на определении методом секвенирования генотипа СС гена IL-6 в позиции -174 и генотипа GC гена TGFв1 в позиции - 915.

3. Иммунологическими факторами индивидуального риска развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции у женщин являются: концентрации в крови IL2 выше 2,83 пг/мл, IL10 выше 4,07 пг/мл, INFг выше 9,4 пг/мл. Изменения концентрации INFг ниже 18,23 пг/мл и IL2 выше 4,07 пг/мл в цервикальном секрете являются дополнительными факторами риска развития осложнений.

4. В результате изучения генотипов C. trachomatis установлены достоверные ассоциации серовара Е C. trachomatis с неосложненным течением УГХИ и редко встречающихся сероваров G, D, J C. trachomatis с развитием осложнений УГХИ у женщин. Выявленные факторы могут рассматриваться в качестве молекулярно-генетических предикторов осложненного и неосложненного течения УГХИ.

5. Разработанная персонифицированная тактика ведения женщин, больных урогенитальной хламидийной инфекцией, основана на оценке индивидуальных иммунологических и молекулярно-генетических предикторов развития осложнений заболевания, а также определении генетических вариантов C. trachomatis.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Плахова К.И. Иммунные и генетические механизмы развития бесплодия и нарушений репродуктивной функции, ассоциированных с урогенитальной хламидийной инфекцией. / К.И. Плахова, М.Р. Рахматулина, Н.В. Фриго и др.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2010. - №6. - с.39-45

2. Кубанова А.А. Современные направления и перспективы развития лабораторной диагностики инфекций, передаваемых половым путем // А.А. Кубанова, Н.В. Фриго, С.В. Ротанов, В.С. Соломка, К.И. Плахова и др.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2011. - №5.- с. 54-64.

3. Фриго Н.В. Разработка протокола молекулярного типирования C. trachomatis на основе секвенирования генов ompa, pbpb, ct058, ct144, ct172. / Н.В. Фриго, В.С. Соломка, О.С. Кожушная, М.Р. Рахматулина, К.И. Плахова // Вестник дерматологии и венерологии. - 2011. - №5.- с. 91-98.

4. Плахова К.И. Анализ результатов клинико-лабораторного обследования пациенток с неосложненными и осложненными формами урогенитальной хламидийной инфекции. / К.И. Плахова, М.Р. Рахматулина, Н.В. Фриго и др. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2011. -№6. - с. 35-40.

5. Плахова К.И. Методология исследования молекулярных маркеров индивидуального генетического риска развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции. / К.И. Плахова, И.А. Волков, Р.Ф. Хайруллин и др. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2011. - №6.-с.41-48.

6. Рахматулина М.Р. Роль урогенитальных бактериальных инфекций в развитии патологических процессов шейки матки // М.Р. Рахматулина, К.И.Плахова // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии - 2011. - №6.- с.53-59.

7. Шаталова А.Ю. Анализ факторов риска и клинико-лабораторных особенностей воспалительных заболеваний мочеполового тракта у женщин репродуктивного возраста // А.Ю. Шаталова, М.Р. Рахматулина, К.И. Плахова.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2012.-№1. - с.37-44.

8. Рахматулина М.Р. Анализ показателей заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем, воспалительными заболеваниями органов малого таза и бесплодием в Российской Федерации и в ее субъектах // М.Р. Рахматулина, К.И. Плахова, О.Е. Литвин и др. // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. - 2012. - №1. - с.37-44.

9. Плахова К.И. Генетические варианты C. trachomatis и поиск факторов вирулентности / К.И. Плахова, О.С. Кожушная, М.Р. Рахматулина и др. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012. - №3. - с. 48-54.

10. Плахова К.И. О применении ИФА для диагностики урогенитального хламидиоза / К.И.Плахова, С.В.Ротанов, М.Р. Рахматулина и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - №9. - с. 84-85.

11. Плахова К.И. Современные представления о генетической вариабельности возбудителя урогенитальной хламидийной инфекции и влиянии C. trachomatis на развитие нарушений репродуктивной функции (обзор литературы) /К.И.Плахова, М.Р.Рахматулина, Д.В.Попов// Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. - 2012. - №3.- с. 52- 59.

12. Плахова К.И. Результаты молекулярно-генетического исследования генов ompA, ct135 и tarp штаммов C. trachomatis, полученных от больных урогенитальной хламидийной инфекцией. / К.И. Плахова, О.С.Кожушная, Н.В.Фриго // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012.- №4. - с. 48-54.

13. Рахматулина М.Р. Анализ факторов риска и современных клинико-лабораторных особенностей неосложненных и осложненных форм урогенитальной хламидийной инфекции у мужчин. / М.Р.Рахматулина, Д.В.Попов, И.А. Нечаева, К.И. Плахова // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012;- №4.- с. 55-63.

14. Плахова К.И. Иммунные предикторы осложнений урогенитальной хламидийной инфекции, приводящих к нарушениям репродуктивной функции. / К.И. Плахова, Н.В.Фриго, М.Р. Рахматулина и др.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2012.- №4.- с. 41-47.

15. Рахматулина М.Р. Современные представления об эпидемиологии, клинике, диагностике и терапии неосложненных и осложненных форм урогенитальной хламидийной инфекции у мужчин. / М.Р.Рахматулина, Д.В.Попов, К.И. Плахова // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012.- №6.- с. 35-41.

16. Плахова К.И. Первый опыт молекулярного типирования штаммов С. trachomatis в Российской Федерации. / К.И.Плахова, В.С. Соломка, Н.В.Фриго, М.Р.Рахматулина // Сборник тезисов 4 Всероссийский Конгресс дерматовенерологов. Санкт-Петербург, июль 2011, С. 311.

17. Plakhova K. Results of a molecular identification of strains of Chlamydia trachomatis in Russian Fedetation / K Plakhova, M Rakhmatulina, N Frigo, V Solomka. // 26th IUSTI-EUROPE Congress, September 2011, Riga, P.59.

18. Ротанов С.В. Клиническая информативность определения антител при диагностике урогенитального хламидиоза у женщин / С.В.Ротанов, К.И.Плахова, М.Р.Рахматулина, Р.Ф.Хайрулин // Сборник тезисов XII Всероссийский съезд дерматовенерологов и косметологов, Москва 2012, С. 53.

19. Плахова К.И. Распределение сероваров С. trachomatis в группе больных урогенитальным хламидиозом - жителей г. Москвы./ К.И. Плахова, О.С. Кожушная// Сборник тезисов XII Всероссийский съезд дерматовенерологов и косметологов, Москва 2012, стр. 47.

20. Плахова К.И. Цитокины в плазме крови пациенток с урогенитальной хламидийной инфекцией / К.И.Плахова, Н.В.Фриго, С.В.Ротанов // Сборник тезисов XII Всероссийский съезд дерматовенерологов и косметологов, Москва 2012, стр. 48.

21. Plakhova K.I. Cytokines of blood plasma of patients with genital C. trachomatis infection / K.I.Plakhova, N.V.Frigo, D.V.Popov, S.V. Rotanov //27th IUSTI-EUROPE Congress, Antalya, PP-13 (ref: 0317).

22. Plakhova K.I. C. trachomatis serovar distribution among patients attending State Scientific Centre for Dermatovenereology (Moscow) / K.I.Plakhova, M.R. Rakhmatulina, N.V.Frigo, O.S. Koghushnaya // 27th IUSTI-EUROPE Congress, Antalya, PP-12 (ref: 0313).

23. Плахова К.И. Генетические предикторы развития осложненного клинического течения урогенитальной хламидийной инфекции у женщин / К.И.Плахова, Н.В.Фриго, И.А.Волков, М.Р. Рахматулина, О.С. Кожушная // Первая всероссийская научная конференция молодых ученых-медиков “Инновационные технологии в медицине XXI века” (материалы конференции), г. Москва 2012, с. 241-243.

24. Плахова К.И. Изучение концентрации цитокинов в крови у пациенток с урогенитальной хламидийной инфекцией. /К.И.Плахова, Н.В.Фриго, М.Р.Рахматулина, С.В. Ротанов, Р.Ф. Хайрулин // Материалы VI съезда дерматовенерологов и косметологов республики Узбекистан, г. Ташкент 2012, с. 169.

25. Плахова К.И. Изучение роли полиморфизма генов, кодирующих цитокины, в развитии осложнений урогенитальной хламидийной инфкции у женщин /Плахова К.И.// Вестник дерматологии и венерологии. - 2013.-№4. - с.44-51.

26. Плахова К.И. Молекулярно-генетические маркеры развития осложнений урогенитальной хламидийной инфекции у женщин / К.И.Плахова, Н.В. Фриго, М.Р. Рахматуллина// Сборник тезисов V Всероссийский Конгресс дерматовенерлогов и косметологов, г. Казань, сентябрь 2013, с. 43-44.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ИФА - иммуноферментный анализ

ВЗОМТ - воспалительные заболевания органов малого таза

ИППП - инфекции, передаваемые половым путем

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

УГХИ - урогенитальная хламидийная инфекция

ПЦР - полмреазноцепная реакция

УЗИ - ультразвуковое исследование

SNP-single nucleotide polymorphism

ПМЯЛ - полиморфно-ядерные лейкоциты

Размещено на Allbest.ru