Изучение полиморфизма RAGE-гена как фактора предрасположенности к развитию псориаза

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

Изучение полиморфизма RAGE-гена как фактора предрасположенности к развитию псориаза

14.00.11 - Кожные и венерические болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Шульман Анна Яковлевна

Москва 2008

Работа выполнена в отделении клинической дерматологии и отделе лабораторной диагностики ИППП и кожных болезней ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Всеволод Георгиевич Акимов

Научный консультант: кандидат медицинских наук Олег Александрович Терман

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, Ксения Николаевна Суворова профессор

Доктор медицинских наук, Андрей Николаевич Львов доцент

Ведущее научное учреждение: Российский Университет Дружбы Народов, Москва

Защита диссертации состоится «___» ________ 2008 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д208.115.01 при Федеральном Государственном Учреждении «Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» по адресу: 107076, г.Москва, ул. Короленко д.3, стр.6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ЦНИКВИ Росмедтехнологий»

Автореферат разослан « »__________________2008 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат медицинских наук Наталия Константиновна Иванова

полиморфизм ген псориаз диагностика

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Проблема псориаза является одной из самых актуальных в современной дерматологии. Это обусловлено высокой популяционной частотой, которая сегодня в подавляющем большинстве исследований оценивается в среднем в 3-5% со значительными колебаниями в зависимости от региона проживания и расовой принадлежности; хроническим, нередко тяжелым течением, неясностью этиологии и патогенеза, и, как следствие этого, несовершенством современных методов лечения (Суворова К.Н., 1990; Мордовцев В.Н., 1991; Скрипкин Ю.К., 1997; Аsumalahti K., 2003). Также следует отметить, что в последние десятилетия отмечается неуклонный рост заболеваемости псориазом, в том числе среди детей (Кубанова А.А., 2007; Мордовцев В.Н., 2002). К настоящему времени удельный вес больных псориазом среди всех больных дерматозами составляет 12-15% (Соколовский Е.В.,1999).

О медико-социальной актуальности проблемы псориаза свидетельствуют данные, приводимые Национальным фондом псориаза США (NPF - National Psoriasis Foundation): расходы на лечение составляют 1,6-3,2 млрд. долл. в год, ежегодно более 1,5 млн. человек обращаются за медицинской помощью по поводу псориаза, 10-15% случаев заболевания регистрируются у детей до 10 лет. Эти данные аналогичны таковым по Российской Федерации. В настоящее время число больных псориазом в России составляет приблизительно 3 млн. человек; отмечается тенденция к росту заболеваемости среди лиц трудоспособного возраста, увеличению числа тяжелых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания (Беляев Г.М., 2005). Сложившаяся ситуация предполагает поиск новых путей профилактики псориаза и создания методов прогнозирования его течения. Научной основой разработки системы медицинской профилактики считаются результаты эпидемиологических исследований. В связи с широким распространением неинфекционной патологии (сердечно-сосудистые, онкологические, кожные заболевания) с 50-х гг. двадцатого столетия термин «эпидемиология» стал применяться не только по отношению к инфекционным болезням. Для того чтобы программа клинической профилактики была эффективной, она должна быть целенаправленной (Оганов Р.Г., Хальфин Р.А., 2007), то есть профилактические мероприятия необходимо проводить в первую очередь в отношении лиц, имеющих генетическую предрасположенность к псориазу.

На современном этапе развития медицины разработка новых этиопатогенетических, фармакогенетических методов лечения заболеваний с генетической предрасположенностью, в том числе и псориаза, становится возможной в значительной мере благодаря выявлению изменений в организме больного на молекулярно - генетическом уровне (точечный нуклеотидный полиморфизм) (Новик А.А., 2001). Эти методы требуют внедрения новых высокотехнологичных методов исследования, какими являются методы ДНК-диагностики, в том числе, с использованием полимеразной цепной реакции. Благодаря этим технологиям появилась возможность изучать полиморфизм генов, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу. Кроме того, по данным литературы подобные исследования в Российской Федерации крайне малочисленны.

Настоящая работа представляет собой проблемно-ориентированное поисковое исследование, создающее научно-технический задел для реализации масштабных проектов в области молекулярно-генетических исследований мультифакториальных дерматозов и развития персонифицированной медицины.

Риск развития псориаза в зависимости от степени родства с больным пробандом составляет при первой степени родства - 5,6-6,3%, при второй степени - 3,1%, при третьей степени - 1,35% (Мутовин Г.Р., 2001). Эти данные получены с использованием популяционно-статистического, клинического и генеалогического методов исследования.

Методологический и технологический прорыв в развитии молекулярной генетики и постгеномных технологий последнего десятилетия позволил проводить исследования на новом - молекулярно-генетическом уровне.

К настоящему времени выявлен ряд генов и хромосом, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу (PSORS1- PSORS9, MICA, HLA-В13, HLA-В17, HLA-21 и другие).

Особый интерес представляет изучение RAGE-гена (Receptor of Advanced Glycation End Рroducts), который локализован в коротком плече 6-ой хромосомы (6р21.3) и участвует в регуляции воспалительного процесса, в том числе, при псориатическом артрите, экспрессии рецепторов апоптоза кератиноцитов, антиоксидантной активности клеток (Kankova K., 2001; Hofmann M.A., 1999).

Цель исследования.

Изучение нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена в российской популяции как фактора предрасположенности к псориазу с целью прогнозирования течения заболевания.

Задачи исследования:

1. Выявление клинически значимых генетических маркеров псориаза в RAGE-гене человека.

2. Анализ полиморфизма RAGE-гена и его роли в развитии псориаза.

3. Разработка молекулярного метода диагностики предрасположенности к псориазу на основе анализа полиморфизма RAGE-гена.

4. Разработка комплекса профилактических мер, направленных на снижение риска манифестации псориаза.

Научная новизна.

Впервые в Российской популяции изучался полиморфизм RAGE-гена. Предложен и апробирован метод определения генетических маркеров псориаза в соматических клетках (лейкоцитах крови) человека.

На основании анализа результатов клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетических методов исследования выявлены закономерности в клинических проявлениях псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена.

На основе полученных данных установлена диагностическая ценность определения полиморфизма RAGE-гена как фактора риска развития заболевания.

Предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к псориазу.

Практическая значимость.

Проведенные исследования обосновывают необходимость внедрения в клиническую практику молекулярных методов диагностики предрасположенности к псориазу. Была сконструирована тест-система для ДНК-диагностики мутаций в RAGE-гене и разработан метод генодиагностики мутаций RAGE-гена как фактора риска развития псориаза.

Внедрен в практику комплекс мер первичной профилактики псориаза, что позволяет снизить риск манифестации заболевания у лиц с генетической предрасположенностью к этому дерматозу.

Основные положения, выносимые на защиту:

Ш Достоверно значимым маркером псориаза в RAGE-гене является сайт 2184A/G.

Ш Ассоциированным с псориазом в сайте 2184A/G является аллель G.

Ш Тяжелая форма вульгарного псориаза, более раннее его начало и анамнестически отягощенная наследственность ассоциированы с аллелем G в сайте 2184A/G RAGE-гена.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии Самарского государственного медицинского университета, в научно-исследовательской работе и учебном процессе Центрального научно-исследовательского кожно-венерологического института.

Апробация работы.

Основные положения и выводы диссертации доложены и обсуждены:

· на научно-практической конференции ГУ «ЦНИКВИ Росздрава» г.Москва 20 мая 2005 года;

· на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов; Москва. 7-10 июня 2005;

· на научно-практической конференции, посвященной 50-летию кафедры кожных и венерических болезней ГОУ ВПО Тверской ГМА 19 мая 2006 года;

· на II Всероссийском конгрессе дерматовенерологов; Санкт-Петербург 25-28 сентября 2007 года.

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы и глав, содержащих материалы и методы исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, содержащего 129 источников, из них 35 отечественных и 94 иностранных. Работа изложена на 102 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 12 таблицами и 21 рисунком.

Этапы исследования.

· Клиническая характеристика и изучение личного и семейного анамнеза больных псориазом, формирование групп обследуемых;

· Выделение геномной ДНК из лейкоцитов человека, создание банка образцов ДНК;

· Синтез праймеров к 3 мишеням в RAGE-гене, конструирование тест-системы для проведения ПЦР;

· Постановка ПЦР, получение продуктов амплификации;

· Проведение рестрикционного анализа аллельного полиморфизма сайтов RAGE2184A/G, G82S и 1704 G/T с помощью специфических эндонуклеаз рестрикции;

· Статистическая обработка и анализ полученных данных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объем и методы исследований

Обследовано 115 человек в возрасте от 6 до 72 лет, из них мужчин было - 48 (41,7%), женщин - 67 (58,3%). Все обследуемые были разделены на 4 группы: I группа (основная) состояла из больных псориазом (52 человека); II группа (сравнения) - 17 человек, в том числе 9 больных атопическим дерматитом, 5 - красным плоским лишаем, 3 - ихтиозом; III группа состояла из здоровых родственников больных псориазом (39 человек); IV группу (контрольную) составили здоровые добровольцы (7 человек).

Родственники пробандов (больных псориазом, через которых осуществлялась регистрация обследуемой семьи), страдающие псориазом, были отнесены в первую группу.

Материалом для проведения молекулярно-генетических исследований была венозная кровь.

Методы исследования:

-клиническое обследование;

-генеалогический анализ;

-молекулярно-генетические методы: полимеразная цепная реакция, рестрикционный анализ, метод электрофореза в агарозном геле;

-статистические методы;

Каждому пациенту был поставлен диагноз с указанием формы псориаза, стадии, сезонности; для артропатического псориаза - с указанием формы и степени активности, рассчитан индекс PASI на момент осмотра. Подробно были изучены и проанализированы данные анамнеза заболевания (первые проявления, развитие заболевания, проведенное лечение).

Сбор генетической информации проводился путем опроса и клинического обследования членов семьи. При составлении родословной велась запись данных о каждом члене рода с указанием его родства по отношению к пробанду. В рамках метода мы устанавливали следующие сведения: фамилия, имя, отчество, дата рождения и смерти, возраст, национальность, место жительства, профессия, наличие перенесенных, хронических и наследственно-обусловленных заболеваний, причина смерти.

Для проведения анализа взаимосвязи между полиморфизмом RAGE-гена и предрасположенностью к псориазу на каждого пациента был составлен индивидуальный генетический паспорт, который включал клинико-анамнестические сведения об обследуемом лице и результаты изучения полиморфизма трех сайтов RAGE-гена (таблица 1).

Таблица 1

Генетический паспорт

№ пробы

Пол

Возраст

RAGE2184

RAGE82

RAGE1704

Группа

Род связи

Начало заболевания

Степень тяжести

Наследственность

Форма заболевания

аллель

аллель

аллель

аллель

аллель

аллель

1

М

40

А

А

G

G

G

T

Больной псориазом

Отец №3

18 лет

Легкая

Н-

Вульгарная

2

Ж

37

G

A

G

G

G

T

Родственник

Мать №3

Н-

3

Ж

16

G

A

G

G

G

T

Больной псориазом

Дочь №1,2

15 лет

Средняя

Н+

Вульгарная

4

М

32

G

G

G

G

G

T

Больной псориазом

Сын №5

12 лет

Тяжелая

Н+

Вульгарная

5

М

53

G

G

G

G

G

T

Больной псориазом

Отец №4

29 лет

Легкая

Н-

Вульгарная

Условные обозначения: М-мужчина, Ж-женщина, Н+-отягощенная наследственность по псориазу, Н--наследственность по псориазу не отягощена

Для определения полиморфизма RAGE-гена нами была сконструирована тест-система, основанная на полимеразной цепной реакции. В предложенной тест-системе профиль амплификации представлял собой 40 циклов, проводимых в следующем режиме:

1-й этап - денатурация геномной ДНК, выделенной из лейкоцитарной массы цельной крови после предварительной отмывки лейкоцитов раствором Канкеля при температуре 93°С (длительность шага 10 секунд);

2-й этап - отжиг (омелинг) праймеров который осуществлялся при температуре 64°С (длительность шага 10 секунд); При проведении ПЦР были использованы специально подобранные праймеры (1RAGE2184 (GGCCTCAGGACCAGGGAACCTACA), 8551-8574 п.о., и 2RAGE2184 (TTGGTCAGGCTGGTCTCGAACTCC), 8929-8952 п.о.), которые позволяли фланкировать участок ДНК, содержащий RAGE-ген и провести его амплификацию для последующего изучения методом рестрикции.

3-й этап - элонгация происходила при повышении температуры до 72° С (длительность шага 10 секунд).

Определение полиморфизма RAGE-гена на основе последовательности гена представленной в GenBank - D28769 проводилось с помощью метода рестрикционного анализа нуклеотидных последовательностей согласно методике, описанной V.Vasku со соавторами (2002). Сайт RAGE 2184A/G: рестрикцию продуктов амплификации мы проводили в присутствии эндонуклеазы BsmF1 из Bacillus stearothermophilus F (New England Biolabs) с целью получения фрагментов длиной 266 и 136 п.о. для аллели А и 174, 136 и 92 п.о. для аллели G. Продукты амплификации инкубировали при температуре 65°С в течение 4 часов, после чего осуществляли инактивация фермента в течение 20 минут при температуре 80° С.

Сайт RAGE 1704G/Т: рестрикцию проводили в присутствии эндонуклеазы ВfaI из Bacteroides fragilis (New England Biolabs). Продуктами рестрикции для аллеля G явились участки ДНК длиной 240, 143 и 42 п.о.; для аллеля Т: 240 и 185 п.о.

Продукты амплификации инкубировали в течении 5 часов при 37° С. Инактивацию фермента осуществляли в течение 20 минут при температуре 80° С. Сайт G82S: рестрикцию продуктов амплификации проводили в присутствии эндонуклеазы Аlu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs). При диком (немутантном) типе (GG) данного аллеля продуктами рестрикции были фрагменты ДНК длиной 123, 26, 248 п.о.; при мутантном типе (АG): 123, 26, 67 и 181 п.о.

Продукты амплификации инкубировали при температуре 37°С в течение 4 часов, после чего осуществляли инактивацию фермента в течение 20 минут при температуре 65° С. Анализ полиморфизма длины полученных рестрикционных фрагментов осуществляли с помощью горизонтального электрофореза в 3%-ном агарозном геле в присутствии маркеров молекулярных масс («CибЭнзим», Новосибирск) от 100 до 1000 п.о. (таблица 2)

Таблица 2

Условия проведения рестрикции и продукты рестрикции RAGE-гена

Сайт RAGE-гена	Эндонуклеаза	Продукты рестрикции (длины фрагментов)	Изучаемые аллели
2184А/G	BsmF1 из Bacillus stearothermophilus F (New England Biolabs)	266 п.о. 136 п.о.	А
		174 п.о. 136 п.о. 92 п.о.	G
1704 G/T	ВfaI из Bacteroides fragilis (New England Biolabs)	240 143 42	G
		240 п.о. 185 п.о.	Т
G82S	Аlu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs)	123 п.о. 26 п.о. 248 п.о	GG
		123 п.о. 26 п.о. 67 п.о. 181 п.о.	АG

Документирование гелей проводили с помощью оптической системы “BIORAD” (USA) и с использованием программы “Гель-Док” (рис. 1, 2,3,4).

Рис. 1 Продукты амплификации RAGE 2184 (402 п.о.)

Рис.2 Результаты рестрикционного анализа RAGE 2184 A/G

Рис. 3 Результаты рестрикционного анализа (аллельный полиморфизм RAGE G82S)

Рис. 4 Результаты рестрикционного анализа (аллельный полиморфизм RAGE 1704G/T

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Средний возраст в группе больных псориазом составил 33,7 года, в группе сравнения - 36,8 года, в контрольной группе - 33,3 года и в группе здоровых родственников 35,1 года. Среди больных псориазом было 22 мужчины и 30 женщин; в группе сравнения - 10 мужчин и 7 женщин; в контрольной группе - 2 мужчины и 5 женщин; в группе здоровых родственников - 14 мужчин и 25 женщин (таблица 3).

Таблица 3

Характеристика групп обследуемых

Группы	Кол-во	Возраст, лет
	М	Ж	Всего	Мин.	Макс.	Средний	Стандартное отклонение
I группа (больные псориазом)	22	30	52	7	75	33,7	15,2
II группа (сравнения)	10	7	17	6	61	36,8	16,3
Атопический дерматит	6	3	9	6	35	18,6	8,7
КПЛ	3	2	5	33	61	45,8	11,2
Ихтиоз	1	2	3	11	34	21,7	11,6
III группа (здоровые родственники)	14	25	39	6	79	35,1	16,2
IV группа (контрольная)	2	5	7	24	58	33,29	12,27

Псориаз легкой степени (PASI?12) тяжести наблюдался у 12,5% пациентов, средней степени тяжести (PASI от 13 до 45) - у 70,83% и тяжелой степени тяжести (PASI?46) - у 16,67% пациентов. Отягощенный по псориазу семейный анамнез был установлен у 40,48% пациентов (таблица 4).



Таблица 4

Характеристика группы больных псориазом

Изучаемый признак	Значения	%	Станд. ошибка
Степень тяжести	легкая	12,50	4,77
	ср/тяжелая	70,83	6,56
	тяжелая	16,67	5,38
Форма заболевания	вульгарная	82,35	5,34
	артропатическая	17,65	5,34
Наследственность	Отягощена	40,48	7,57
	Не отягощена	59,52	7,57

В 82,35% случаев была диагностирована вульгарная форма псориаза, в 17,65% - артропатическая форма (рис. 5).

Рис. 5 Частота встречаемости различных форм псориаза

Средний возраст начала заболевания у пациентов составил 19,1 года: у мужчин - 22,8 года, у женщин - 16,08 года (рис. 6).

Рис. 6 Гистограмма распределения возраста начала заболевания

Из находившихся под наблюдением 52 пациентов 25 больных связывали возникновение псориаза с длительным пребыванием в стрессовом состоянии или с воздействием нервно-психической травмы. Также среди провоцирующих факторов были выявлены: обострение хронических инфекций, прием лекарственных препаратов, вакцинация, травматизация кожи, смена климатических условий (таблица 5)

Таблица 5

Взаимосвязь средовых факторов с началом псориаза

Провоцирующий фактор	Абсолютное число больных	%
Стресс, нервно-психическая травма	25	48
Обострение хронической инфекции	6	11,5
Прием лекарственных препаратов	1	2
Вакцинация	1	2
Травматизация кожи	2	4
Смена климатических условий	1	2
Прочие, неизвестны	36	30,5

В результате проведенных генеалогических исследований было установлено, что большинство респондентов (98,3%) относятся к европеоидной расе.

При клиническом обследовании и генеалогическом анализе, проведенном у родственников пробандов было установлено:

-большая часть обследованных родственников имеет первую степень родства с пробандом (97, 3%);

-среди обследованных родственников пробандов больные псориазом составили 11,5%;

-у 64.8% из них заболевание началось в возрасте до 40 лет;

-среди родственников пробандов выявлены следующие сопутствующие заболевания, с наследственной предрасположенностью: эссенциальная гипертоническая болезнь (5,1%), ишемическая болезнь сердца (4,2%), сахарный диабет II типа (3,8%), атопический дерматит (3,6%).

С целью установления возможной взаимосвязи полиморфизма RAGE-гена с частотой возникновения псориаза и особенностями клинического течения заболевания проводилось изучение ассоциации между частотой регистрации различных аллелей трех сайтов RAGE-гена (2184A/G, 1704G/T и G82S), клиническими признаками псориаза и анамнестическими данными.

Установлено, что среди больных псориазом (основная группа) с наличием аллеля G в сайте RAGE 2184A/G тяжелая форма заболевания встречалась в 50% случаев, в отсутствии аллеля G - в 7,69%. Частота возникновения тяжелой формы псориаза в группе с наличием аллеля G выше с достоверностью 96,6% (уровень значимости р=0,034). Вульгарная форма псориаза у больных с аллелем G была диагностирована в 83,33% случаев, без аллеля G - в 79,31%. Отягощенная по псориазу наследственность у больных с наличием аллеля G в сайте RAGE 2184A/G установлена в 60% случаев, в то время как в отсутствии аллеля G - в 44%. Средний возраст начала заболевания в группе с аллелем G был несколько меньше, чем в группе без аллеля G: 16,6 и 19,92 года, соответственно (таблицы 6,7).



Таблица 6

Частота регистрации аллеля G в сайте RAGE 2184A/G у больных вульгарным псориазом тяжелой степени

	Тяжелая степень заболевания	Вульгарная форма заболевания
	%	Станд. ошибка	%	Станд. ошибка
аллель G (+)	50,00	20,41	83,33	15,21
аллель G (-)	7,69	5,23	79,31	7,52

Таблица 7

Частота регистрации аллеля G в сайте RAGE 2184A/G у больных псориазом с учетом данными анамнеза (возраст начала заболевания, наследственность)

	Отягощенная наследственность	Возраст начала заболевания
	%	Станд. ошибка	среднее знач	Станд. отклон
аллель G (+)	60,00	21,91	16,60	4,42
аллель G (-)	44,00	9,93	19,92	11,58

С достоверностью 84,1% (р=0,159) показано, что частота встречаемости аллеля 2184G выше в группе больных псориазом, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания (таблица 8).

Таблица 8

Взаимосвязь между генотипом по сайту RAGE 2184A/G и наличием псориаза

Генотип	A	G
	%	Станд. ошибка	%	Станд. ошибка
Псориаз (+)	88,89	5,24	16,67	6,21
Псориаз (-)	95,92	2,83	6,12	3,42

С достоверностью 86,1% (р=0,139) можно утверждать, что аллель 2184G ассоциирован с псориазом и не ассоциирован с дерматозами из группы сравнения (атопический дерматит, красный плоский лишай, ихтиоз). Достоверной разницы между частотой встречаемости аллеля А в сайте 2184A/G в основной группе и этим же показателем в других группах не выявлено.

Анализируя данные по сайту RAGE 1704G/Т, мы установили, что наличие или отсутствие псориаза не связано с аллелем G: ч2=0,109, что соответствует уровню значимости р>0,75; также наличие или отсутствие псориаза у обследованных лиц не связано с аллелем Т в данном сайте: ч2=0,022, что соответствует уровню значимости р>0,9 (таблица 9, 10)

Таблица 9

Взаимосвязь между генотипом по сайту RAGE 1704 G /Т и наличием псориаза

Генотип	Т	G
	%	Стандар. ошибка	%	Стандар. ошибка
Псориаз (+)	82,98	5,48	85,11	5,19
Псориаз (-)	85,96	4,60	80,70	5,23

Таблица 10

Частота регистрации аллелей сайтов RAGE 2184A/G и RAGE 1704 G/Т в группах обследуемых

Группа	2184A/G	1704G/T
	А	G	T	G
I руппа (больные псориазом)	88,9±5,2	16,7±6,2*	82,98±5,5	85,1±5,2
II группа (сравнения)	100,0	0,0	85.7±9.4	64,3±12,8
IV группа (контрольная)	100,0	0,0	100,0	85,7±13,2

* р?0,01

Мутантный генотип сайта RAGE G82S был выявлен у двух обследованных лиц: женщины 55 лет с наличием сахарного диабета второго типа, без клинических проявлений псориаза и у ее сына 23 лет, больного кожной формой псориаза, средней степени тяжести и отсутствием нарушения толерантности к глюкозе.

Таким образом, в RAGE гене относительно риска развития псориаза интерес представляет сайт 2184A/G. Аллель 2184G ассоциирован с псориазом и не ассоциирован с дерматозами из группы сравнения (атопический дерматит, красный плоский лишай, ихтиоз). Частота встречаемости аллеля 2184G достоверно выше в группе больных псориазом, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания, то есть его можно рассматривать как аллель повышенного риска развития псориаза. Установлена взаимосвязь между наличием аллеля G в сайте 2184A/G и развитием тяжелой вульгарной формой псориаза, более ранним возрастом его манифестации и анамнестически отягощенной по псориазу наследственностью. Корреляции между различными видами полиморфизмов сайтов 1704 G/Т и G82S и псориазом не выявлено. Следовательно, лиц с наличием аллеля G в сайте 2184A/G необходимо отнести в группу повышенного риска развития псориаза и рекомендовать им комплекс профилактических мер.

Для обеспечения целенаправленности профилактических мероприятий в группу скрининга на наличие генетических маркеров псориаза прежде всего должны входить родственники больных псориазом. При обнаружении у обследуемого генетических маркеров псориаза, в частности, аллеля G в сайте 2184A/G RAGE-гена, его относят в группу повышенного риска развития псориаза. В этом случае обследуемого информируют о возможности снижения риска манифестации псориаза, исходя из особенностей его образа жизни, профессии, данных о сопутствующих заболеваниях. С этой целью составляют индивидуальные рекомендации по мерам первичной профилактики псориаза, которые могут включать: профилактику травматизации кожи (физической, химической), санацию очагов хронической инфекции и профилактику респираторных инфекций в период сезонных эпидемий, своевременную медикаментозную коррекцию неврозов и неврозоподобных состояний, исключение токсического воздействия алкоголя, ограничение приема некоторых лекарственных средств, способных вызвать инициацию процесса (бета-адреноблокаторы, тиазидные диуретики, антагонисты кальция, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, препараты лития, иммунопрепараты, нестероидные противовоспалительные средства, противомалярийные препараты), рекомендации по рациональному питанию, контролю массы тела и уровня глюкозы крови и другие.

ВЫВОДЫ

1. Методами клинического обследования, генеалогического анализа и молекулярно-генетического исследования, проведенными у больных псориазом, их клинически здоровых родственников, а также в группе сравнения (всего - 115 человек) установлено, что в RAGE-гене клинически значимым генетическим маркером псориаза является сайт 2184A/G.

2. Выявлены закономерности клинических проявлений псориаза в зависимости от типа нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена. Установлено, что повышенный риск возникновения псориаза ассоциирован с аллелем G в сайте 2184A/G RAGE-гена. Частота возникновения тяжелой формы псориаза у больных с наличием аллеля G в сайте 2184A/G RAGE-гена в 6,5 раза превышает риск развития тяжелой формы дерматоза у больных псориазом с отсутствуем аллеля G: 50% и 7,69% соответственно. Имеется взаимосвязь между присутствием аллеля G в сайте 2184A/G и вульгарной формой псориаза, а также более ранним началом заболевания.

3. На основании полученных данных о корреляции между различными видами полиморфизма RAGE-гена, возникновением и типом течения псориаза предложен метод молекулярной диагностики предрасположенности к заболеванию этим дерматозом.

4. Разработан комплекс профилактических мер, направленных на уменьшение воздействия неблагоприятных средовых факторов, что будет способствовать снижению риска манифестации псориаза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Терман О.А. Кандидатные маркеры псориаза в RAGE гене человека / Терман О.А., Кухарева Е.Н., Суколин Г.И., Шульман А.Я. // Тез. науч. раб. IX Всерос. съезда дерматовенерологов. - М.,2005. - Т.1. - С.39-40.

2. Шульман А.Я. Изучение генетических маркеров псориаза как факторов предрасположенности к развитию заболевания / Шульман А.Я., Суколин Г.И., Терман О.А. // Тез. докл. XII Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство". - М.,2005.- С.814-815.

3. Терман О.А. Полиморфизм RAGE-гена у больных псориазом / Терман О.А., Шульман А.Я., Кухарева Е.Н. // Вестн. дерматол. венерол. - 2006. - №5. - С.62-65.

4. Шульман А.Я. RAGE-ген как генетический маркер псориаза / Шульман А.Я., Терман О.А., Суколин Г.И., Кухарева Е.Н. // Сб. ст., посвящ. 50-летию кафедры кож. и вен. болезней ТГМА. - Тверь,2006. - С.92-95.

5. Шульман А.Я. Генетические аспекты этиологии псориаза // Рос. журн. кож. вен. болезней. - 2006. - №5. - С. 37-38.

6. Шульман А.Я. Изучение полиморфизма RAGE-гена и его роли в предрасположенности к псориазу / Шульман А.Я., Терман О.А., Кухарева Е.Н., Акимов В.Г. // Тез. науч. раб. II Всерос. конгр. дерметовенерологов. - СПб.,2007. - С.110.

7. Терман О.А. Медико-генетическое консультирование при псориазе / Терман О.А., Шульман А.Я., Кухарева Е.Н. // Вестн. дерматол. венерол. - 2007. - №4. - С.21-22.

Размещено на Allbest.ru

...