Синтез, свойства, биологическая активность N-гетериламидов альфа-оксокислот и продуктов их химических превращений

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Синтез, свойства, биологическая активность N-гетериламидов б-оксокислот и продуктов их химических превращений

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Мокин Павел Александрович

Пермь - 2007

Работа выполнена на кафедре фармацевтической технологии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: кандидат химических наук, доцент Пулина Наталья Алексеевна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Коркодинова Любовь Михайловна ГОУ ВПО ПГФА Росздрава

кандидат химических наук, доцент Пименова Елена Валентиновна ГОУ ВПО «Пермский государственный университет»

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Общеизвестно, что одной из важных задач фармацевтической науки является синтез и поиск новых высокоэффективных химических соединений, обладающих низкой токсичностью, превосходящих по силе действия применяемые медицинские препараты. Научные исследования, традиционно проводимые в Пермской государственной фармацевтической академии, показывают, что соединения, полученные на основе превращений ацилпировиноградных кислот, обладают выраженным фармакологическим действием, зачастую, с сочетанием нескольких видов активности. Ранее был разработан простой препаративный метод синтеза амидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых (ароилпировиноградных) кислот (АрПК) на основе взаимодействия 5-арил-2,3-дигидрофуран-2,3-дионов (5-АФД) и соответствующих аминов ациклического и гетероциклического строения. В этом ряду наименее изучены N-гетериламиды АрПК, которые представляют практический интерес, благодаря наличию в своей структуре нескольких реакционных центров 1,3-дикетонного и гетероциклического фрагментов. Введение в молекулу исходных соединений потенциально биологически активных гетероциклических синтонов позволяет в определенной степени прогнозировать фармакологическое действие новых химических веществ. Интересным объектом для сравнительного изучения химического поведения гетероциклических аминов с 2,3-диоксогетероциклами является 2,3-дигидробензо[b]фуран-2,3-дион (кумарандион - КД). Образованные на его основе N-гетериламиды 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой (о-гидроксифенилглиоксалевой) кислоты (о-ГФГК) могут обладать значительными синтетическими возможностями для получения биологически активных соединений различного строения, в том числе, растворимых в воде.

Среди важных в препаративном отношении реакций N-гетериламидов АрПК, имеющих теоретическое и практическое значение, особое место занимают их нуклеофильные превращения, при этом взаимодействие с гидразонами кетонов и замещенными гидразинами ранее не изучено. В настоящее время значительно повысился интерес к химической модификации биологически активных веществ путем комплексообразования с эсенциальными металлами. Это позволяет усиливать терапевтическое действие лигандов, выходить на новые виды биологической активности и, в ряде случаев, снижать их токсичность. Реакции N-гетериламидов АрПК и о-ГФГК с солями одно- и двухвалентных металлов ранее также не исследованы. В связи с этим, изучение синтеза, химических свойств N-гетериламидов б-оксокислот, а также поиск биологически активных соединений среди продуктов химических превращений является актуальным.

Цель работы. Целью данного исследования является синтез новых биологически активных соединений в ряду N-гетериламидов б-оксокислот и на основе их взаимодействия с нуклеофильными реагентами и солями одно-, двухвалентных металлов.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Осуществить синтез N-гетериламидов б-оксокислот, содержащих в своем составе гетроциклический фрагмент с одним, двумя или тремя гетероатомами.

2. Провести сравнительное изучение химического поведения N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот и 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты в реакциях комплексообразования с дихлоридами меди, цинка, кадмия, ртути.

3. Получить водорастворимые соединения на основе реакции б-оксокислот с N-гетероциклическими аминами, а также взаимодействия N-гетериламидов 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты с натрия карбонатом.

4. Изучить взаимодействие N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот с гидразонами бензофенона и 9-флуоренона, этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты.

5. Изучить физико-химические свойства и особенности строения неописанных ранее продуктов синтеза.

6. На основании полученных результатов фармакологического скрининга синтезированных соединений выявить вещества, обладающие высокой противомикробной, противовоспалительной и анальгетической активностью, а также изучить взаимосвязь их строения с биологическим действием.

Научная новизна. Установлено, что 2-амино-5-R-1,3,4-тиадиазолы и 2-аминобензимидазол раскрывают цикл 5-АФД с образованием N-гетериламидов АрПК, находящихся в растворе в виде таутомерных кетоенольной и в-дикетонной форм. Показано, что направление реакции не меняется при взаимодействии N-гетероциклических аминов с КД, в результате чего выделены N-гетериламиды 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты. Установлено, что при взаимодействии 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой с гетериламинами образуются 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтаноаты гетериламмония. Впервые осуществлен синтез комплексных соединений на основе N-гетериламидов АрПК с дихлоридами меди, цинка, кадмия, ртути и установлено, что исходные реагенты координируются металлами как бидентатные О-О лиганды. Установлено аналогичное химическое поведение N-гетериламидов о-ГФГК в реакциях с дихлоридами цинка и кадмия, а также получены водорастворимые 2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]феноляты натрия. Изучены реакции N-гетериламидов АрПК с гидразонами бензофенона и 9-флуоренона и обнаружено наличие трех таутомерных форм в растворах полученных соединений. Установлено, что при взаимодействии N-гетериламидов АрПК с этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты образуются соответствующие производные 3-арил-2-этоксикарбонилметил-2,3-дигидропиразол-5-карбоновых кислот, которые, в случае N-[2-(5-R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов, существуют в растворах в виде двух таутомерных форм. По результатам биологических исследований комплексных соединений поданы две заявки на выдачу патента РФ на изобретения (регистрационный № 2006144010 от 11.12.2006 и № 2007128301 от 23.07.2007).

Практическая значимость. Усовершенствованы или предложены новые методы синтеза N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот, N-гетериламидов 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты, 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов гетериламмония, 2-(2-гидроксифениламино)-2-оксоэтаноатов гетериламмония, бис[3-арил-1-(N-гетерил)карбоксамидо-1,3-пропандионато] меди, цинка, кадмия, ртути, 2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]фенолятов натрия, бис{2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]фенолятов} цинка и кадмия, N-гетериламидов 4-арил-2-дифенилметиленгидразино-4-оксо-2-бутеновых кислот, N-гетериламидов 4-арил-4-оксо-2-флуоренилиденгидразино-2-бутеновых кислот, N-гетериламидов 3-арил-2-этоксикарбонилметил-2,3-дигидропиразол-5-карбоновых кислот, которые просты по выполнению и могут быть использованы как препаративные при синтезе новых биологически активных соединений.

В процессе работы синтезировано 119 неописанных в литературе соединений. Установлены некоторые закономерности биологической активности от химического строения, которые могут быть использованы в дальнейшем поиске БАВ в ряду производных N-гетериламидов б-оксокислот.

Публикации. Материалы диссертационной работы отражены в 17 работах: 2 статьях в центральной печати, 5 статьях в сборниках и материалах научных конференций различного уровня и 10 тезисов докладов научных конференций.

Апробация работы. Результаты работы доложены на 70-й юбилейной итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2005), на VI, VII Международных научно-практических конференциях «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2005, 2006), на Международной научно-практической конференции «Фармация и здоровье» (Пермь, 2005), на Международной конференции «Приоритеты фармацевтической науки и практики» (Москва, 2006), на 61,62 Региональных конференциях по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2006, 2007), на научной Юбилейной конференции «Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования» (Уфа, 2006), на VII конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2006), на научно-практической конференции «Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, медицина)» (Ростов-на-Дону, 2006), на Российско-Китайской интернациональной научной конференции по фармакологии «Фундаментальная фармакология и фармация - клинической практике» (Пермь, 2006), на XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), на 3-й Всероссийской научно-методической конференции «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ» (Воронеж, 2007).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава» (№ государственной регистрации 01.9.50 007419)

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа общим объемом 146 страниц машинописного текста состоит из введения, литературного обзора по синтезу, строению, свойствам и биологической активности N-гетериламидов ацилпировиноградных кислот (глава 1), обсуждения собственных исследований (глава 2), экспериментальной химической части (глава 3), изучения результатов биологической активности N-гетериламидов б-оксокислот и продуктов их превращений (глава 4), выводов, литературы, приложения. Список литературы включает 160 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация содержит 28 таблиц.

На защиту выносятся:

1. Результаты синтеза новых N-гетериламидов б-оксокислот и их производных на основе взаимодействия с солями с одно-, двухвалентных металлов, гидразонами бензофенона и 9-флуоренона, этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты.

2. Установление структуры полученных соединений на основании данных спектров ЯМР¹Н-, ИК-, и масс-спектроскопии.

3. Изучение взаимосвязи строения и фармакологической активности синтезированных соединений, а также выявление перспективных веществ для дальнейших биологических испытаний.

Содержание работы

1. Синтез и строение N-гетериламидов б-оксокислот

1.1 Синтез и строение N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот

Для получения исходных соединений нами была использована известная реакция 5-АФД 1а-г с гетероциклическими аминами в среде инертного растворителя при эквимолярном соотношении реагентов, при комнатной температуре. В качестве гетериламинов при получении новых соединений были взяты: 2-амино-1,3,4-тиадиазол, 2-амино-5-метил-1,3,4-тиадиазол, 2-амино-5-этил-1,3,4-тиадиазол, 2-аминобензимидазол. В результате реакции выделены N-гетериламиды 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот (метод А) (2а-ч):

1: R=Н (а), СН₃ (б), Cl (в), Br (г);

2: Ht=2-С₅Н₄N, R=Н (а), Cl (б), Br (в); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (г), Cl (д); Ht=2-С₅Н₃BrN, R=Н (е), Cl (ж); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (з), Cl (и), Br (к); Ht=С₁₁Н₁₁N₂О, R=Н (л), Cl (м); Ht=С₂Н₁N₂S, R=Н (н), Cl (о), CН₃ (п); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (р), Cl (с), CН₃ (т); Ht=С₄Н₅N₂S, R=Н (у), Cl (ф), CН₃ (х); Ht=С₇Н₅N₂, R=Н (ц), Cl (ч).

Где: Ht=2-С₅Н₄N (2-пиридил), С₅Н₃BrN [2-(5-бромпиридил)], 3-С₅Н₄N (3-пиридил), С₃Н₂NS (2-тиазолил), С₂Н₁N₂S [2-(1,3,4-тиадиазолил)], С₃Н₃N₂S [2-(5-метил-1,3,4-тиадиазолил)], С₄Н₅N₂S [2-(5-этил-1,3,4-тиадиазолил)], С₇Н₅N₂ (2-бензимидазолил), С₁₁Н₁₁N₂О [4-(2,3-диметил-5-оксо-1-фенил-3-пиразолин)].

Соединения 2н-ч были синтезированы нами впервые. По данным спектров ЯМР¹Н гетериламиды 2ф-ч в растворе ДМСО-d₆ енолизованы нацело и содержат 100% кетоенольной формы А, в то время как гетериламиды 2н-у содержат еще 8-11% в-дикетонной формы Б.

N-[2-(5-R-1,3,4-Тиадиазолил)]амиды 2р,у получены нами также в результате реакции метилового эфира АрПК 3 с соответствующими гетероциклическими аминами (метод Б):



R=Me (р), Et (у).

Вещества, синтезированные двумя методами, были идентичны по физико-химическим и спектральным характеристикам, значению R_f при ТСХ. Однако выход соединений 2р,у значительно ниже, чем в методе А, что связано, по видимому, с конкурентной реакцией образования продуктов по группе С²=О эфира 3. Таким образом, данный способ уступает классическому способу раскрытия 5-АФД аминами и в дальнейшем для синтеза целевых N-гетериламидов АрПК нами не использовался.

1.2 Синтез и строение N-гетериламидов 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты

Известно, что циклическим аналогом 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой (о-гидроксифенилглиоксалевой) кислоты (о-ГФГК) 4 является кумарандион 5. В продолжение изучения химического поведения 2,3-диоксогетероциклов в реакции с гетериламинами, нами исследовано взаимодействие КД 5 с гетероциклическими аминами различного строения в условиях, аналогичных образованию соединений 2, в результате чего выделены соответствующие N-гетериламиды 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты (6а-з):

6: Ht=С₅Н₃BrN (а), 3-С₅Н₄N (б), 4-С₅Н₄N (в), С₃Н₂NS (г), С₂Н₁N₂S (д), С₃Н₃N₂S (е), С₄Н₅N₂S (ж), С₇Н₅N₂ (з).

Спектральные характеристики соединений 6а-з свидетельствует об их существовании в форме с ВВС Н-хелатного типа. По-видимому, образование соединений 6а-з происходит в результате нуклеофильной атаки аминогруппы исходного гетериламина на наиболее электроотрицательный атом углерода С² кумарандиона с последующим раскрытием лактонного кольца до производного о-ГФГК.

2. Взаимодействие б-оксокислот с гетероциклическими аминами

2.1 Синтез и строение 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов гетериламмония

Ранее было показано, что при синтезе гетериламидов АрПК на основе 5-АФД, в зависимости от строения гетероцикла и присутствия воды в реакционной смеси, в качестве сопутствующих соединений образуются соли АрПК. С целью получения биологически активных водорастворимых соединений нами изучено прямое взаимодействие АрПК 7а-в с 2-амино-5-R-1,3,4-тиадиазолами и 2-аминобензимидазолом, в результате чего выделены 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноаты гетериламмония (8а-о) (метод А):

8: Ht=C₂H₁N₂S, R=Н (а), Cl (б), CH₃ (в); Ht=C₃H₃N₂S, R=H (г), Cl (д), CH₃ (е); Ht=C₄H₅N₂S, R=H (ж), Cl (з), CH₃ (и); Ht=С₂Н₁N₂S₂, R=H (к), Cl (л); Ht=C₇H₅N₂, R=H (м), Cl (н),CH₃ (о).

В процессе синтеза бутеноатов 8а-о установлено, что выход соединений зависит от последовательности добавления реагентов. Так, прибавление суспензии амина к суспензии АрПК в хлороформе при интенсивном перемешивании приводит к значительному повышению выхода продукта и не требует нагревания реакционной среды, как предлагалось ранее.

Как и у гетериламидов 2н-у, во всех спектрах ЯМР¹Н солей 8а-и,м-о присутствует синглет протонов метиленовой группы слабой интенсивности, что свидетельствует о их существовании в растворе ДМСО-d₆ в виде таутомерных форм В и Г с преобладанием кетоенольной формы В (92-96%). В тоже время, в спектрах ЯМР¹Н соединений 8к,л, помимо сигналов протонов в ожидаемых областях, наблюдается уширенный синглет протона NH группы в слабом поле и отсутствует сигнал протона SH-группы, что свидетельствует об их существовании в формах Ж и З, имеющей ВВС Н-хелатного типа, и противоречит возможным формам Д, Е:

При сплавлении сухой смеси кислоты 7а и гетериламинов в соотношении 1:1, наряду с продуктами неустановленной структуры, с выходами 16-24% были выделены соли 8а,г,ж (метод Б). Следует отметить, что по данным ТСХ в реакционной смеси также присутствуют соответствующие N-гетериламиды АрПК 2.

2.2 Синтез и строение 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтаноатов гетериламмония

В продолжение изучения химического поведения гетероциклических аминов в реакциях с б-оксокислотами и с целью синтеза БАВ нами исследовано взаимодействие о-ГФГК 4 с 2-, 4-аминопиридинами, 2-аминотиазолом и 2-амино-5-R-1,3,4-тиадиазолом, в результате чего выделены соответствующие 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтаноаты гетериламмония (9а-д):

9: Ht=2-С₅Н₄N (а),4-С₅Н₄N (б),С₃Н₂NS (в),С₂Н₁N₂S (г),С₃Н₃N₂S (д).

В виду значительного осмоления реакционной смеси нам не удалось выделить соответствующие соли на основе 2-амино-5-бромпиридина и 2-амино-5-этил-1,3,4-тиадиазола. При плавлении солей 9б,в, и выдерживании их при температуре плавления не более 10 минут, по данным ТСХ образуются соответствующие N-гетериламиды 6в,г.

3 Получение металлорганических комплексных соединений на основе N-гетериламидов б-оксокислот

Комплексные соединения широко представлены в биологических системах и также применяются в качестве лекарственных препаратов. Однако реакции N-гетериламидов АрПК и о-ГФГК с солями металлов ранее не изучены.

3.1 Синтез и строение бис[3-арил-1-(N-гетерил)карбоксамидо-1,3-пропандионато] меди, цинка, кадмия и ртути

Нами установлено, что N-гетериламиды 2а-д,ж-л,р,у-х взаимодействуют с дихлоридами меди, цинка, кадмия, ртути в соотношении лиганд-металл 2:1 в мягких условиях, в среде спирта этилового с образованием бис[3-арил-1-(N-гетерил)карбоксамидо-1,3-пропандионато] меди (10а-м), цинка (11а-з), кадмия (12а-л) и ртути (13а-г):

10: Me=Сu, Ht=2-С₅Н₄N, R=H, (а), Br (б); Ht=С₅Н₃BrN, R=H (в); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (г), Ht=С₃Н₂NS, R=Н (д), Br (е); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (ж), Сl (з); Ht=С₄Н₅N₂S, R=Н (и), Сl (к), СН₃ (л); Ht=С₁₁Н₁₁N₂О, R=Н (м).

11: Ме=Zn, Ht=2-С₅Н₄N, R=H, (а), Сl (б); Ht=С₅Н₃BrN, R=Cl (в); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (г), Cl (д); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (е), Cl (ж); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (з).

12: Ме=Сd, Ht=2-С₅Н₄N, R=H, (а), Сl (б); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (в), Cl (г); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (д), Сl (е); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (ж); Ht=С₄Н₅N₂S, R=Н (з), Сl (и), СН₃ (к); Ht=С₇Н₅N₂, R=Н (л).

13: Ме=Нg, Ht=2-С₅Н₄N, Сl (а); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (б), Cl (в); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (г).

На наш взгляд, для соединений 10-13 наиболее вероятными структурами продуктов реакции являются И, К, Л.

В пользу структуры И свидетельствует наличие полос поглощения NH-групп в ИК спектрах соединений 10-13, а также наличие сигнала протонов NH-групп в спектрах ЯМР¹Н. В случае структуры Л данные сигналы должны отсутствовать. Кроме того, установлено, что в ИК спектрах комплексных соединений 10-13 полоса поглощения карбонильных групп С⁴=О смещена в область низших частот на 10-15 см^-1, по сравнению с исходными N-гетериламидами 2, что свидетельствует об участии этих групп в образовании более прочной координационной связи. Для структуры К и Л следовало ожидать наличие в ИК спектре хелатов высокочастотной полосы поглощения данного кетонного карбонила. Таким образом, согласно спектральным данным, N-гетериламиды 2 в реакции комплексообразования координируются металлами как бидентатные О-О лиганды и образуют с ними продукты со структурой И.

3.2 Синтез и строение 2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]фенолятов натрия, бис {2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]фенолятов} цинка и кадмия

С целью получения водорастворимых биологически активных соединений нами изучена реакция N-гетериламидов о-ГФГК 6а,б,д,ж с натрия карбонатом, в результате чего выделены 2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]феноляты натрия (14а-г):

14: Ht=С₅Н₃BrN (а), 3-С₅Н₄N (б), С₂Н₁N₂S (в), С₄Н₅N₂S (г).

Установлено, что при взаимодействии N-гетериламидов 6г,е-з с дихлоридами цинка и кадмия при соотношении лиганд - металл 2:1 образуются бис{2-[2-(N-гетериламино)-2-оксоацетил]феноляты} цинк (15) и кадмий (16а-г):

16: Ht=С₃Н₂NS (а), С₃Н₃N₂S (б), С₄Н₅N₂S (в), С₇Н₅N₂ (г).

Спектральные характеристики подтверждают строение полученных соединений и свидетельствуют о депротонизации лиганда в ходе реакции комплексообразования. В процессе эксперимента нам не удалось получить медные и цинковые хелаты при взаимодействии соответствующих солей с N-гетериламидами 6г,д,е, так как в ходе реакции происходило сильное осмоление смеси. Также не удалось выделить ртутные хелаты и натриевый фенолят в реакции N-(2-тиазолил)амида 6г с Nа₂CO₃.

4. Взаимодействие N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот с гидразонами кетонов

Нами установлено, что N-гетериламиды АрПК 2б,г,д,з,и,л-о,р,с,у-ц взаимодействуют с гидразонами бензофенона и 9-флуоренона с образованием соответственно N-гетериламидов 4-арил-2-дифенилметиленгидразино-4-оксо-2-бутеновых кислот (17а-п) и N-гетериламидов 4-арил-4-оксо-2-флуоренилиденгидразино-2-бутеновых кислот (18а-о):

17: Ht=2-С₅Н₄N, R=Сl (а); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (б), Сl (в); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (г), Сl (д); Ht=С₂Н₁N₂S, R=Н (е), Сl (ж); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (з), Сl (и); Ht=С₄Н₅N₂S, R=Н (к), Сl (л), СН₃ (м); Ht=С₁₁Н₁₁N₂O, R=Н (н), Сl (о); Ht=С₇Н₅N₂, R=Н (п).

18: Ht=2-С₅Н₄N, R=Сl (а); Ht=3-С₅Н₄N, R=Н (б), Сl (в); Ht=С₃Н₂NS, R=Н (г), Сl (д); Ht=С₂Н₁N₂S, R=Н (е), Сl (ж); Ht=С₃Н₃N₂S, R=Н (з), Сl (и); Ht=С₄Н₅N₂S, R=Н (к), Сl (л), СН₃ (м); Ht=С₁₁Н₁₁N₂O, R=Н (н), Сl (о).

При изучении спектров ЯМР¹Н соединений 17,18, снятых в ДМСО-d₆ и CDCl₃, установлено наличие Z-кетоенгидразинной (Z-KEГ), Е-кетоенгидразинной (Е-КЕГ) и ?-кетогидразонной (?-КГ) форм в растворе этих соединений:

нуклеофильный реагент фармакологический скрининг

R¹=R²=С₆H₅, СR¹R²=С₁₃H₈.

Нами установлено, что состав таутомерных форм в растворе определяется, в первую очередь, природой растворителя, а также строением гетероциклического и гидразинного фрагментов. В меньшей степени на содержание форм оказывает влияние заместитель в ароильном радикале. Так, в растворе ДМСО-d₆ соединений 17,18 форма Z-КЕГ наблюдается у всех изученных соединений, за исключением производного 18з, и составляет 32-100% для соединений 17 и 15-80% для соединений 18. Минорная форма Е-КЕГ обнаруживается в растворе ДМСО-d₆ у соединений 17к (48%) и 18и,к,н,о (15-28%). Содержание формы ?-КГ в растворе ДМСО-d₆ у соединений 17 составляет 15-50%, в то время как у соединений 18 - 50-100%. Следует отметить, что форма Е-КЕГ присутствует в таутомерном равновесии трех форм только в растворе ДМСО-d₆, а в растворе CDCl₃ - только в равновесии с Z-КЕГ со значительным преобладанием последней. Введение электроноакцепторного заместителя в ароильный фрагмент производных 17,18 приводит к сдвигу таутомерного равновесия в сторону большего содержания формы Z-КЕГ только в растворах ДМСО-d₆.

5. Взаимодействие N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот с этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты

Установлено, что при взаимодействии N-гетериламидов 2д,н,р,с,у-х с этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты образуются соответствующие N-гетериламиды 3-арил-2-этоксикарбонилметил-2,3-дигидропиразол-5-карбоновых кислот (19а-з):

19: Ht=3-С₅Н₄N, Ar=4-C₆H₄Cl (а); Ht=С₂Н₁N₂S, Ar=C₆H₅ (б), 4-ClC₆H₄ (в); Ht=С₃Н₃N₂S, Ar=C₆Н₅ (г), Сl (д); Ht=С₄Н₅N₂S, Ar=C₆H₅ (е), 4-СlC₆H₄ (ж), 4-СН₃C₆H₄ (з).

Обнаружено, что соединения 19б-з обладают ярко-голубой флуоресценцией при облучении УФ-светом, что использовалось нами в процессе детектирования пятен на пластинках «Silufol UV 254» при контроле реакции методом ТСХ.

При изучении спектров ЯМР¹Н производных N-[2-(5-R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов 19б-з, снятых в ДМСО-d₆ и СDCl₃, нами установлено наличие таутомерных форм М и Н в растворе этих соединений:

R=H, Me, Et

Таутомерное равновесие этих форм зависит от природы растворителя, а также от характера заместителя в арильном и гетерильном фрагментах молекулы. Так, при снятии спектров ЯМР¹Н соединений 19г,д в разных растворителях установлено, что при введении заместителя в арильный фрагмент наблюдаются обе формы с преобладанием формы Н в ДМСО-d₆ и формы М в СDCl₃, в то время как отсутствие заместителя способствует их 100% содержанию в соответствующем растворителе. При анализе спектров соединений 19в-з, снятых в ДМСО-d₆, выявлено, что соединения 19г,е существуют в форме Н (100%), в то время как их замещенные аналоги 19в,д,ж,з существуют в виде равновесных форм Н:М (43-62%: 38-57%).

Механизм образования соединений 19а-з, по видимому, включает первоначальную атаку первичной аминогруппы замещенного гидразина на карбонильную группу С²=О субстрата. Образующийся при этом карбиноламин (I₁) элиминирует воду и превращается в енгидразин (I₂), который циклизуется в пиразол за счет внутримолекулярной атаки вторичной аминогруппы гидразина на карбонильную группу С⁴=О субстрата c отщеплением воды.

6. Изучение биологической активности N-гетериламидов б-оксокислот и продуктов их превращений

N-гетериламиды б-оксокислот и продукты их превращений были подвергнуты биологическим испытаниям с целью поиска БАВ с противовоспалительной, анальгетической, противомикробной активностью, а также влияющих на свертывающую систему крови. Испытания проводились в ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава» на кафедрах фармакологии с курсом иммунологии, микробиологии, физиологии с основами анатомии.

6.1 Острая токсичность.

Установлено, что большинство производных б-оксокислот являются малотоксичными веществами. Так, LD₅₀ соединений 2п, 6г,ж, 8ж, 10м, 11а, 12а,в,д, 13б,в, 16а составляет 500-3000 мг/кг при внутрибрюшинном способе введения. Таким образом, изученные соединения имеют определенные преимущества в плане их безопасности перед препаратами сравнения.

6.2 Противовоспалительная активность (ПВА).

ПВА полученных соединений в дозе 50 мг/кг изучали на модели острого воспалительного отека, вызванного субплантарным введением 0,1 мл 1% водного раствора каррагенина белым крысам обоего пола массой 170-200 г. Соединения вводили перорально в дозе 50 мг/кг в виде взвеси в 2% крахмальном растворе за 1 час до введения флогогенного агента. Препаратом сравнения служил диклофенак (10 мг/кг). Результаты испытаний наиболее активных соединений представлены в таблице 1.

Выявлено, что в ряду N-[2-(5-R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов 2 при увеличении алкильной цепи в 5 положении гетероцикла наблюдается значительное уменьшение ПВА, вплоть до ее потери и наибольшую активность показывают производные 2п,т. В меньшей степени активны производные с бензимидазольным гетероциклом (2ц,ч). Также установлено, что не зависимо от строения гетероцикла, электронодонорные заместители в ароильном кольце увеличивают ПВА, а электроноакцепторные, как правило, незначительно влияют на данный вид активности.

Установлено, что N-гетериламиды о-ГФГК 6, по сравнению с N-гетериламидами АрПК 2, проявляют более выраженную ПВА. Кроме того, в данном ряду производных отмечается прямая зависимость влияния заместителя в 5 положении 1,3,4-тиадиазолила на ПВА, которая увеличивается при увеличении алкильной цепи, и наиболее высокую активность проявляет гетериламид 6ж. На пике воспаления он практически не уступает диклофенаку и его эффективная доза от LD₅₀ составляет 0.03. Таким образом, соединение 6ж превосходит по широте терапевтического действия препарат сравнения в 5 раз. Обнаружено значительное повышение ПВА у амида 6з, содержащего в качестве гетероцикла 2-бензимидазол, по сравнению со структурными аналогами - производными АрПК 2ц,ч.

В ряду бутеноатов 8 наибольшую активность проявили соединения 8ж,и,м,о содержащие 5-этил-1,3,4-тиадиазолильный и бензимидазольный заместители, однако их ПВА не превышает препарат сравнения.

При переходе от N-гетериламидов АрПК 2 к их комплексным соединениям 10-13 на ПВА, в большей степени, влияет характер металла и строение гетероцикла.

Нами установлено, что за исключением соединения 11в на основе N-[2-(5-бромпиридил)]амида 2ж, происходит значительное увеличение активности хелатов, по сравнению с исходными амидами 2. Наибольшую активность проявили соединения 12в и 13б, содержащие 3-пиридильный заместитель. При этом кадмиевый хелат 12в на пике воспаления незначительно уступает диклофенаку, но его его эффективная доза от LD₅₀ составляет 0.03, что свидетельствует об определенных его преимуществах перед препаратом сравнения.

При оценке влияния природы металла на проявление ПВА в ряду соединений 10-13 выявлена следующая закономерность и наиболее активные соединения обнаружены среди кадмиевых производных:

[L]₂Cd > [L]₂Hg > [L]₂Zn > [L]₂Cu

Переход от N-2-тиазолиламида о-ГФГК 6г к соответствующему кадмиевому хелату 16а также приводит к значительному увеличению ПВА до уровня диклофенака.

Таблица 1

Данные по ПВА наиболее активных соединений

Соединение (LD50 мг/кг)	Торможение каррагенинового отека в %
	1 час	3 часа	5 часов
	29,1±1,5*1 **2	46,7±2,1**1 *2	40,6±5,6**1 *2
2т	49,5±17***1 ***2	35,9±0,9**1 ***2	35,9±0,9**1 ***2
6а	34,9±8,9	42,9±2,3***1	27.5±3.8**1
6в	48,0±5,3***1 ***2	45,0±4,2***2	33,0±4,1***2
	69,0±0,3***1 ***2	52,4±3,8***1 *2	54,5±2,5***1
6з	57,6±2,6***1 ***2	35,9±0.9*1 **2	27.2±2.0*1 **2
8и	33,9±7,4	35,1±6,3**1	41,4±8,0**1
	63,55,3***1	42,11,5**1 **2	38,24,9**1 **2
	58,011,3**1	28,06,0**1	33,01,5**1
16а	65,75,9***1 *2	62,3±3,5***1	47,8±5,7**1 ***2
17а	58,5±1,6***1 ***2	36,6±2,6**1 *2	29,7±2,6***1 ***2
17к	47,0±3,6**1	36,5±6,1***1	42,7±5,9***1
18д	33,8±5,8*1	23,7±5,8*1 ***2	31,8±6,7**1 **2
19д	12,7±1,5	39,5±4,3**1 ***2	48,9±1,4***1 *2
Диклофенак	40.2±4.8	65.6±4.3***1	60.1±4.7***1

* = p < 0,05, ^** = p< 0,01, ^*** = p < 0,001

1? по сравнению с контролем; 2 - по сравнению с диклофенаком.

Введение во второе положение исходных N-гетериламидов 2-дифенилметиленгидразинового фрагмента также приводит к увеличению ПВА. Наибольшую активность в этом ряду проявили соединения 17а,к, содержащие в качестве гетероциклических заместителей 2-пиридил и 2-(5-этил-1,3,4-тиадиазолил) соответственно. В случае 2-производных N-[2-(5-R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов увеличение ПВА наблюдается с возрастанием алкильной цепи в положении 5 гетероцикла и уменьшается при введении в арильный фрагмент электроакцепторного заместителя. Меньшее влияние на этот вид активности оказывает введение флуоренилиденгидразинового заместителя в молекулу исходных N-гетериламидов. Целенаправленное введение потенциально биологически активного фрагмента 4-аминоантипирила в молекулу гидразонопроизводных 17,18 не принесло ожидаемого результата. Так, соединения 17н,о и 18н,о не дали высокой активности, а у соединения 18о даже проявился провоспалительный эффект.

Установлено, что введение этоксикарбонилметильного заместителя во 2 положение пиразола у соединений 19, по сравнению с известными производными 3-пиразол-5-карбоновых кислот, не имеющих этого заместителя, приводит к значительному увеличению ПВА. Выявлено, что с увеличением алкильной цепи в положении 5 гетероцикла и при введении электроакцепторного заместителя в арильный фрагмент у соединений 19б-з активность, как правило, возрастает.

6.3 Анальгетическая активность (АА).

АА определяли на мышах обоего пола массой 16-22 г по методике «горячая пластинка». Исследуемые вещества вводили перорально в дозе 50 мг/кг в виде взвеси в 2 % крахмальном растворе. Препаратом сравнения служил метамизол натрия (50 мг/кг) и диклофенак (10 мг/кг). Результаты испытаний наиболее активных соединений представлены в таблице 2.

Установлено, что также как и при изучении ПВА, у N-2-[5-(R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов АрПК 2 анальгетическое действие уменьшается с увеличением алкильной цепи в 5 положении гетероцикла. Однако высокоактивных соединений в этом ряду не обнаружено. Среди производных N-гетериламидов о-ГФГК 6 наибольшей активностью обладает соединение 6ж, чуть уступающее по силе действия диклофенаку, но имеющее меньшую токсичность.

При переходе от исходных N-гетериламидов АрПК 2 к их хелатным комплексам и бутеноатам существенного увеличения АА не выявлено. Только бутеноат 8к и кадмиевые хелаты 12в,л проявили активность на уровне метамизола натрия, но уступающем по действию диклофенаку.

Введение во второе положение исходных N-гетериламидов 2 дифенилметиленгидразинового фрагмента приводит к увеличению АА. Так наибольшей активностью, превышающей действие диклофенака, обладает соединение 17к. Меньшее влияние оказывает флуоренилиденгидразиновый заместитель, за исключением соединения 18б. Введение заместителя в ароильный радикал соединений 17,18 приводит к снижению АА, а увеличение алкильной цепи у производных N-2-[5-(R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов, как правило, приводит к увеличению данного вида активности. Производные 17,18, содержащие антипирильный заместитель, проявили активность, не превышающую препараты сравнения. Производные N-гетериламидов пиразол-5-карбоновых кислот 19 обладают слабой АА, за исключением соединения 19ж.

Таблица 2

Данные по АА наиболее активных соединений

Соединение	Время оборони-тельного рефлекса, в сек.	Соединение	Время оборони-тельного рефлекса, в сек.
6ж	23.0±1.7***1	8к	17.3±1.3***1
12в	17.5±1.4***1	12л	18.0±0.7***1 ***2
17а	16.7±1.05***1	17в	18.3±1.05***1 ***2
17к	27.0±1.2***1	17л	17.6±0.9***1 ***2
18б	21.0±0.4***1 ***2	18к	16.0±0.6***1 ***2
19ж	16.3±0.8***1 ***2	Контроль Метамизол натрия Диклофенак	10.0±0.5 16.4±3.0*1 26.2±0.6***1

* = p < 0,05, ^** = p< 0,01, ^*** = p < 0,001

1? по сравнению с контролем; 2 - по сравнению с диклофенаком.

6.4 Влияние соединений на свертывающую систему крови.

Исследования проводили с помощью коагулометра «Минилаб 701» с использованием цитратной (3.8 %) крови собаки (9:1). Соединения вводили в концентрации 1 мг/мл. В качестве эталона сравнения гемостатической активности использовали этамзилат в концентрации 1мг/мл, а в качестве эталона антикоагулянтной активности - раствор гепарина в концентрации 1 ЕД/мл крови

Показано, что только бутеноат 8а, не имеющий заместителей в ароильном радикале и в 5 положении 1,3,4-тиадиазолильного фрагмента, обладает слабой гемостатической активностью. Соединения 8г,ж оказывают слабое, а бутеноат 8з - выраженное антикоагулянтное действие. Соли 9б-д и феноляты натрия 14а-г показывают различное по характеру действие, но не превышающее препараты сравнения.

6.5 Противомикробная активность (ПМА).

ПМА по отношению к штаммам St. aureus АТСС 6538-Р и E. coli АТСС 25922 определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде. Для всех исследуемых соединений определяли минимальные ингибирующие концентрации (МИК) в мкг/мл. Препаратами сравнения служили этакридин и гидроксиметилхиноксилиндиоксид (диоксидин). Результаты испытаний наиболее активных соединений представлены в таблице 3.

При изучении ПМА N-гетериламидов АрПК 2 и о-ГФГК 6 установлено, что они оказывают слабое действие. МИК для соединений 2 составляет: 62-500 / 125-1000 мкг/мл, а для соединений 6: 500-1000 / 125-1000 мкг/мл.

При изучении биологической активности бутеноатов 8а-о нами установлено, что они обладают ПМА на уровне, чуть превышающем этакридин, но уступающем диоксидину по отношению к эталонным штаммам микроорганизмов. Таким образом, при переходе «гетериламид-ароилпируват» существенного увеличения антимикробной активности не происходит.

Химическая модификация N-гетериламидов АрПК 2 и о-ГФГК 6 до комплексных соединений 10-13 и 15,16 приводит к значительному увеличению ПМА. Установлено, что антимикробный эффект зависит, в первую очередь, от природы металла и характера гетероцикла. Так, среди медных хелатов 10 не выявлено веществ с высокой антимикробной активностью. Обнаружено, что соединения 11а, 12а,д,е, 13б,в, превышают по противомикробной активности этакридин по отношению к золотистому стафилококку в 16-2000 раз и к кишечной палочке - в 512-1000 раз. Отношение МИК (мкг/мл) к токсичности ЛД₅₀ (мг/кг) у соединений 11а, 12а,д,е, 13б,в, составляет для стафилококка 0,0003-0,01 и для кишечной палочки 0,0025-0,008, в то время как у этакридина эти показатели значительно уступают.

При изучении металлорганических комплексов 15,16 установлено, что в данном ряду наибольшую активность проявили кадмивые хелаты 16б-г. При этом кадмиевые производные показывают активность, не зависящую от строения гетероцикла и значительно превышающие диоксидин.

Введение во второе положение исходных N-гетериламидов 2 дифенилметиленгидразинового и флуоренилметиленгидразинового фрагментов не привело к значительному увеличению ПМА. Так, при сравнении влияния гидразонового заместителя на данный вид активности наибольший эффект проявили флуоренилиденгидразинопроизводные 18, по сравнению с соединениями 17. Выявлено, что их активность находится на уровне этакридина.

Установлено, что при переходе от N-гетериламидов АрПК 2 к производным пиразол-5-карбоновых кислот 19 не происходит существенного увеличения ПМА и их активность соответствует действию этакридина, но не превышает эффект диоксидина.

Таблица 3

Данные по ПМА наиболее активных соединений

Соединение	МИК, мкг/мл	Соединение	МИК, мкг/мл
	St. aureus / Е.coli		St. aureus / Е.coli
11а 3000 мг/кг	31.0/3.9	11б	31.0/62.0
12а 1500 мг/кг	2.0/2.0	12б	250/31.0
12в	15.6/62.0	12д 500 мг/кг	2.0/3.9
12е	1.0/1.0	12з	250/62.0
13б 800 мг/кг	3.9/7.8	13в 800 мг/кг	0.25/2.0
15	125/62.0	16б	2.0/3.9
16в	2.0/3.9	16г	2.0/3.9
Этакридин	500/2000	Диоксидин	62,5-1000/ 3,9-62,5

Выводы

1. Реакцией дециклизации 5-арил-2,3-дигидрофуран-2,3-дионов и 2,3-дигидробензо[b]фуран-2,3-диона под действием N-гетериламинов получены N-гетериламиды б-оксокислот, имеющие в структуре потенциально биологически активные циклы 2-,3-,4-пиридина, 5-бром-2-пиридина, 2-тиазола, 5-R-1,3,4-тиадиазола и 2-бензимидазола.

2. Впервые разработан способ синтеза комплексных соединений Cu²⁺, Zn²⁺, Cd²⁺, Hg²⁺ на основе N-гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых и 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислот и установлено, что исходные реагенты координируются металлами как бидентатные О-О лиганды.

3. Получены водорастворимые соединения на основе реакции б-оксокислот с гетероциклическими аминами, а также взаимодействием N-гетериламидов 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты с натрия карбонатом.

4. Изучено взаимодействие N-гетериламидов АрПК с гидразоном бензофенона и 9-флуоренона и установлено наличие таутомерного равновесия Z-КЕГ, Е-КЕГ и в-КГ форм в растворах полученных соединений, количественное содержание которых определяется природой растворителя, строением гетероциклического и гидразинного фрагментов.

5. Установлено, что взаимодействие N-гетериламидов АрПК с этиловым эфиром гидразинэтановой кислоты приводит к образованию соответствующих производных 3-арил-2-этоксикарбонилметил-2,3-дигидропиразол-5-карбоновой кислоты. При этом выявлено, что в случае N-[2-(5-R-1,3,4-тиадиазолил)]амидов, целевые продукты существуют в растворах в виде двух таутомерных форм за счет миграции протона амидного фрагмента к атому азота гетероцикла.

6. На основе разработанных или усовершенствованных методов синтеза получено 119 новых соединений, структура которых подтверждена данными спектров ЯМР¹Н, ИК- и масс-спектроскопии, индивидуальность - данными ТСХ.

7. Установлены некоторые закономерности биологической активности от химического строения соединений, которые могут быть использованы в дальнейшем поиске биологически активных веществ в ряду производных N-гетериламидов б-оксокислот.

8. Выявлены наиболее перспективные соединения для дальнейших исследований:

§ N-[2-(5-этил-1,3,4-тиадиазолил)]амид 2-(2-гидроксифенил)-2-оксоэтановой кислоты (6ж), обладающий противовоспалительной и анальгетической активностью

§ бис{3-фенил-1-[N-(3-пиридил)карбоксамидо]-1,3-пропандионато} кадмий, ртуть (12в, 13б), обладающие противовоспалительной и противомикробной активностью.

Основное содержание диссертации представлено в работах

1. Синтез металлорганических соединений на основе производных ароилпировиноградных кислот и изучение их антимикробной активности / П.А. Мокин, Л.Н. Шелепенькина, Е.С. Еловикова [и др.] // Вопросы теоретической и практической медицины: Тез. докл. 70-й юбилейн. итог. Республ. науч. конф. молодых ученых.- Уфа, 2005.- С. 52-53.

2. Синтез биологически активных соединений на основе взаимодействия о-гидроксифенилглиоксалевой кислоты с гетериламинами / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, А.Е. Рубцов [и др.] // Фармация и здоровье: Мат. Междунар. науч.- практ. конф.- Пермь, 2005.- С.81-82.

3. Синтез биологически активных производных пиразол-5-карбоновой кислоты на основе эфиров и амидов ароилпировиноградных кислот / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, П.А. Мокин [и др.] // Здоровье и образование в XXI веке: Материалы VI междунар. науч.-практ. конф.- М: РУДН, 2005.- С. 415.

4. Мокин, П.А. Изучение противоспалительной активности среди производных гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот / П.А. Мокин, К.В. Яценко // Науки о человеке: Тез. докл. VII конгр. мол. ученых и специалистов.- Томск, 2006.- С. 14-143.

5. Биологическая активность гетериламидов ароилпировиноградных кислот и их солей / В.В. Юшков, Н.А. Пулина, П.А. Мокин [и др.] // Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация): Материалы науч.- практ. конф.- Ростов-н/Д, 2006.- С.60-61.

6. Пулина, Н.А. Биологически активные соединения на основе взаимодействия о-гидроксифенилглиоксалевой кислоты с гетериламинами / Н.А. Пулина, П.А. Мокин // Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация): Материалы научн.- практ. конф.- Ростов-н/Д, 2006.- С.39-40.

7. Pulina, N.A. Synthesis, antiinflammatory and antibacterial activity of a series of novel metal-organic complexes / N.A. Pulina, Р.А. Мокin, К.V. Yасеnkо // 2-nd Russian-Chinese international scientific conferenсe оn pharmacologi: «Fundomental pharmacologi and pharmacy - сlinical practice».- Perm, 2006.- Р.134.

8. Изучение синтеза и фармакологической активности, производных гетериламидов о-гидроксифенилглиоксалевой кислоты / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, В.В. Залесов [и др.] // Здоровье образование в XXI веке: материалы VII междунар. науч.-практ. конф.- М: РУДН.- 2006.- С.408-409.

9. Синтез биологически активных металлоорганических соединений на основе производных ароилпировиноградных кислот / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, П.А. Мокин [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / ПятГФА.- Пятигорск, 2006.- Вып. 61.- С.282-284.

10. Синтез биологически активных соединений на основе взаимодействия гетериламидов ароилпировиноградных кислот с гидразонами бензофенона и 9-флуоренона / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, В.В. Залесов [и др.] // Приоритеты фармацевтической науки и практики: материалы заоч. Междунар. конф.- М.: РУДН, 2006.- С.268-270.

11. Синтез и поиск биологически активных водорастворимых веществ в ряду производных гетериламидов б-оксокислот / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, Ф.В. Собин [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана.- 2006.- Т.4, №1.- С.200-202.

12. Гетериламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот в синтезе новых биологически активных веществ / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, В.В. Залесов [и др.] // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных соединений: материалы 3-й Всерос. науч.- метод. конф.- Воронеж, 2007.- С.294-296.

13. Гетериламиды б-оксокислот в синтезе биологически активных соединений / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, В.В. Юшков, П.А. Мокин… // Вестник Перм. гос. фарм. акад.- Пермь, 2007.- №2.- С.89-92.

14. Изучение антимикробной активности комплексных соединений на основе гетериламидов 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, П.А. Мокин [и др.] // Человек и лекарство: Сб. материалов. XIV Росс. национ. конгр.: М., 2007.- С.868.

15. Поиск биологически активных солей гетероциклических аминов и гетериламидов на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот / Н.А. Пулина, П.А. Мокин, В.В. Залесов [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фарм. продукции: сб. научн. тр.- Пятигорск: ПятГФА, 2007.- Вып. 62.- С.533-534.

16. Поиск биологически активных соединений среди производных о-гидроксифенилглиоксалевой кислоты / Н.А. Пулина, В.В. Юшков, В.В. Залесов, П.А. Мокин… // Фармация.- 2007.- №5.- С.35-38.

17. Пулина, Н.А. Взаимодействие гетериламидов 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеновых кислот с хлоридами двухвалентных металлов / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, П.А. Мокин // Баш. хим. журн.- 2007.- Т.14, №3.- С. 52-56.

Размещено на Allbest.ru

...