Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой

Размещено на http://www.allbest.ru/

Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой

Грецкий Сергей Валерьевич,

Павлова Людмила Анатольевна,

Коваленко Алексей Евгеньевич,

Кардонский Дмитрий Александрович

Еганов Александр Анатольевич

Аннотация

В статье освещаются вопросы по изучению действующих веществ родиолы розовой и их фармакологических свойств. Описывается методика получения сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой. Ключевым аспектом исследования является разработка удобного для практического применения метода определения действующих веществ в сухом экстракте корней и корневищ родиолы розовой в условиях градиентной ВЭЖХ.

Введение

В современном обществе традиционно большое внимание уделяется спорту. Одной из важнейшей проблемой как профессионального, так и массового спорта является поиск эффективных и безопасных, даже при регулярном длительном приеме лекарственных средств, способствующих ускорению восстановительных процессов после физической нагрузки, снижению негативных последствий тренировочного стресса, а также повышающих качество жизни спортсменов. Особое место в решении этой проблемы занимают фитоадаптогены [6].

Одним из растений, обладающих адаптогенными и актопротекторными свойствами является родиола розовая (Rodiola Rosae). Это многолетнее травянистое растение семейства толстянковых (Crassulaceae). В качестве лекарственного сырья используются корневища с корнями родиолы розовой [2, 4]. родиола фармакологический экстракт

Подземные органы родиолы содержат фенольный спирт тирозол и его гликозид салидрозид; флавоноид трицин и его гликозиды; флавонолгликозиды (астрегалин, кемпферол), дубильные вещества (до 20%), галловую кислоту, антрахинон, эфирное масло, микроэлементы. Основными биологически активные веществами родиолы розовой являются тирозол, салидрозид и розавин [2, 4, 7].

Все основные соединения, входящие в состав корневищ с корнями родиолы розовой, проявляют высокую биологическую активность. Так, например, Птирозол корректирует нарушения ионного и окислительно-восстановительного клеточного гомеостаза. Механизм его защитного действия связан с кальций и НАД-Фзависимыми процессами, лежащими в основе миелотоксических эффектов ксенобиотиков, которые являются индукторами окислительного стресса. Салидрозид родиолы розовой обладает тонизирующим действием. Фенилпропаноид розавин - выраженной анксиолитической активностью. Флавоноиды родиолы розовой обладают адаптогенными и иммуностимулирующими свойствами, повышают работоспособность и сопротивляемость организма неблагоприятным воздействиям [1, 7].

Препараты из родиолы розовой повышают активность сократительных белков актина и миозина. Улучшают кровоснабжение мозга и мышц, снижают накопление в мышцах молочной кислоты за счет более раннего переключения с углеводного на липидный источник энергии, увеличивают синтез белка. Проявляют стимулирующее действие на умственную работоспособность человека, несколько улучшают память и внимание.

Экспериментальная часть

Учитывая высокую биологическую активность родиолы розовой возникла необходимость получения и стандартизации сухого экстракта родиолы розовой [3, 8], как основы для создания БАД и спортивного питания для спортсменов и лиц, занимающихся спортом.

На начальном этапе исследования была отработана методика получения сухого экстракта родиолы розовой. Для достижения поставленной задачи, сырье экстрагировали 40% этанолом. Полученные извлечения упаривали под вакуумом с использованием роторного испарителя Heidolph Laborota 4010 digital. Упаривание извлечения проводили до получения продукта с содержанием влаги 2535%. Следующей стадией технологического процесса было получение сухого экстракта с использованием сублимационной сушилки Heotrap CT 60e.

Сухой экстракт корневищ и корней родиолы розовой представляет собой аморфный, гигроскопичный порошок светлокоричневого цвета с тонким, специфическим запахом.

Далее был разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кислоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.

Результаты и их обсуждение

В фармакопеях (ГФ XII, BP, USP, EP) и в литературных источниках описаны методики определения перечисленных действующих веществ.

Для аскорбиновой кислоты описаны методы определения: титрование, спектрофотометрия.

Для определения дубильных веществ в лекарственных формах родиолы розовой используют методы титриметрии. Определение производных тирозола проводят методом УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ.

Разработку методики определения действующих веществ в родиоле розовой проводили с использованием стандартов фирмы Sigma. При подборе подвижной фазы для вышеуказанных веществ, на основе их растворимости, было установлено, что рутин необходимо определять отдельно, так как он не растворяется в подвижной фазе с ацетонитрилом. Поскольку кверцетин, кемпферол, ряд других флавоноидов, существенно отличаются по гидрофобности, их совместный анализ возможен только в условиях градиентной ВЭЖХ.

Далее в составе каждой группы анализировались индивидуальные соединения на предмет возможности их детектирования на УФдетекторе. Следующим этапом был подбор максимума поглощения (длины волны), обеспечивающего оптимальную чувствительность.

Проводился подбор градиента (соотношение растворителей в разные моменты времени) для наилучшего разделения анализируемых компонентов.

Подобрав условия анализа, переходили к реальным экстрактам, содержащим наряду с анализируемыми веществами целый ряд соэкстрактивных веществ, в большинстве случаев мешающих определению целевых компонентов. На данном этапе, изменяя условия (градиент, температура колонки, скорость потока растворителей) добивались полного разделения компонентов сложной матрицы.

Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях: Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5 µm. Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - ацетонитрил.

Калибровку проводили по стандарту анализируемого вещества. Был приготовлен стандартный раствор с концентрациями: аскорбиновая кислота 10.0 мг в 10 мл воды. Для построения калибровочного графика анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Количественное определение хлорогеновой кислоты и кверцетина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm. Подвижная фаза:

А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде;

В - ацетонитрил.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы с концентрациями: хлорогеновой кислота 2.8 мг, кверцетин 2.8 мг в 10 мл смеси (50:50) мобильной фазы А и В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Количественное определение рутина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm

Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлен стандартный раствор с концентрацией рутина 7.1 мг в 10 мл подвижной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора. Количественное определение анализируемого вещества осуществлялось с использованием данных калибровок стандартного раствора.

Количественное определение розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:

Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm

Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.

Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола с концентрацией каждого компонента 100 мкг/мл мобильной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.

Результаты анализа сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой приведены в табл. 1, 2.

Табл. 1. Содержание основных биологически активных веществ в сухом экстракте родиолы розовой

Табл. 2. Содержание розавина, розарина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы розовой

Таким образом, получен сухой экстракт родиолы розовой и разработан метод анализа ВЭЖХ, позволяющий одновременно определять несколько действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой.

Выводы

Разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кислоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.

Литература

1. Барнаулов О.Д., Лимаренко А.Ю., Куркин В.А. и др. Сравнительная оценка биологической активности соединений, выделенных из видов Rhodiola L. Химикофармацевтический журнал. 1986. №9. С.11071112.

2. Крендаль Ф.П., Козин С.В., Левина Л.В. Сравнительная характеристика препаратов из группы фитоадаптогенов - женьшеня, элеутерококка и родиолы розовой. М.: Профиль. 2007. 392с.

3. Быков В.А., Запесочная Г.Г., Куркин В.А. Родиола розовая (Rhodiola rosea L.), традиционные и биотехнологические аспекты получения лекарственных средств. Хим. фармац. ж. 1999. №1. С.2839.

4. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. М.: Медицина. 1984. 464с.

5. Государственная фармакопея российской федерации. "Издво "Научный центр экспертизы средств медицинского применения". 2008. 704с.

6. Адамчук Л.В. Адаптогенный эффект препаратов золотого корня при длительноых мышечных нагрузках. Материалы XVI Всесоюзной конференции по спортивной медицине. 1969. С.115116.

7. Аксенова Р.А. К фармакологии родиолозида. Дисс. …канд. биол. наук. Томск. 1968. С.9093.

8. Ежков В.Н. Исследование по разработке и стандартизации препаратов на основе корневищ родиолы розовой. Автореф. дис. … канд. фармац. наук. М. 2000. 23с.

Размещено на Allbest.ru