Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой
Освещение вопросов по изучению действующих веществ родиолы розовой и их фармакологических свойств. Описание методики получения сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой. Определение действующих веществ в сухом экстракте корней и корневищ.
Рубрика | Медицина |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 03.12.2018 |
Размер файла | 424,7 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Разработка методики ВЭЖХ для оценки содержания действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой
Грецкий Сергей Валерьевич,
Павлова Людмила Анатольевна,
Коваленко Алексей Евгеньевич,
Кардонский Дмитрий Александрович
Еганов Александр Анатольевич
Аннотация
В статье освещаются вопросы по изучению действующих веществ родиолы розовой и их фармакологических свойств. Описывается методика получения сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой. Ключевым аспектом исследования является разработка удобного для практического применения метода определения действующих веществ в сухом экстракте корней и корневищ родиолы розовой в условиях градиентной ВЭЖХ.
Введение
В современном обществе традиционно большое внимание уделяется спорту. Одной из важнейшей проблемой как профессионального, так и массового спорта является поиск эффективных и безопасных, даже при регулярном длительном приеме лекарственных средств, способствующих ускорению восстановительных процессов после физической нагрузки, снижению негативных последствий тренировочного стресса, а также повышающих качество жизни спортсменов. Особое место в решении этой проблемы занимают фитоадаптогены [6].
Одним из растений, обладающих адаптогенными и актопротекторными свойствами является родиола розовая (Rodiola Rosae). Это многолетнее травянистое растение семейства толстянковых (Crassulaceae). В качестве лекарственного сырья используются корневища с корнями родиолы розовой [2, 4]. родиола фармакологический экстракт
Подземные органы родиолы содержат фенольный спирт тирозол и его гликозид салидрозид; флавоноид трицин и его гликозиды; флавонолгликозиды (астрегалин, кемпферол), дубильные вещества (до 20%), галловую кислоту, антрахинон, эфирное масло, микроэлементы. Основными биологически активные веществами родиолы розовой являются тирозол, салидрозид и розавин [2, 4, 7].
Все основные соединения, входящие в состав корневищ с корнями родиолы розовой, проявляют высокую биологическую активность. Так, например, Птирозол корректирует нарушения ионного и окислительно-восстановительного клеточного гомеостаза. Механизм его защитного действия связан с кальций и НАД-Фзависимыми процессами, лежащими в основе миелотоксических эффектов ксенобиотиков, которые являются индукторами окислительного стресса. Салидрозид родиолы розовой обладает тонизирующим действием. Фенилпропаноид розавин - выраженной анксиолитической активностью. Флавоноиды родиолы розовой обладают адаптогенными и иммуностимулирующими свойствами, повышают работоспособность и сопротивляемость организма неблагоприятным воздействиям [1, 7].
Препараты из родиолы розовой повышают активность сократительных белков актина и миозина. Улучшают кровоснабжение мозга и мышц, снижают накопление в мышцах молочной кислоты за счет более раннего переключения с углеводного на липидный источник энергии, увеличивают синтез белка. Проявляют стимулирующее действие на умственную работоспособность человека, несколько улучшают память и внимание.
Экспериментальная часть
Учитывая высокую биологическую активность родиолы розовой возникла необходимость получения и стандартизации сухого экстракта родиолы розовой [3, 8], как основы для создания БАД и спортивного питания для спортсменов и лиц, занимающихся спортом.
На начальном этапе исследования была отработана методика получения сухого экстракта родиолы розовой. Для достижения поставленной задачи, сырье экстрагировали 40% этанолом. Полученные извлечения упаривали под вакуумом с использованием роторного испарителя Heidolph Laborota 4010 digital. Упаривание извлечения проводили до получения продукта с содержанием влаги 2535%. Следующей стадией технологического процесса было получение сухого экстракта с использованием сублимационной сушилки Heotrap CT 60e.
Сухой экстракт корневищ и корней родиолы розовой представляет собой аморфный, гигроскопичный порошок светлокоричневого цвета с тонким, специфическим запахом.
Далее был разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кислоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.
Результаты и их обсуждение
В фармакопеях (ГФ XII, BP, USP, EP) и в литературных источниках описаны методики определения перечисленных действующих веществ.
Для аскорбиновой кислоты описаны методы определения: титрование, спектрофотометрия.
Для определения дубильных веществ в лекарственных формах родиолы розовой используют методы титриметрии. Определение производных тирозола проводят методом УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ.
Разработку методики определения действующих веществ в родиоле розовой проводили с использованием стандартов фирмы Sigma. При подборе подвижной фазы для вышеуказанных веществ, на основе их растворимости, было установлено, что рутин необходимо определять отдельно, так как он не растворяется в подвижной фазе с ацетонитрилом. Поскольку кверцетин, кемпферол, ряд других флавоноидов, существенно отличаются по гидрофобности, их совместный анализ возможен только в условиях градиентной ВЭЖХ.
Далее в составе каждой группы анализировались индивидуальные соединения на предмет возможности их детектирования на УФдетекторе. Следующим этапом был подбор максимума поглощения (длины волны), обеспечивающего оптимальную чувствительность.
Проводился подбор градиента (соотношение растворителей в разные моменты времени) для наилучшего разделения анализируемых компонентов.
Градиент |
Время (мин) |
%А |
%В |
|
0.0 |
100 |
0 |
||
4.0 |
97 |
3 |
||
6.0 |
100 |
0 |
||
10 |
100 |
0 |
||
Объем инжекции |
10 мкл |
|||
Поток |
1 мл/мин |
|||
Температура колонки |
30 оС |
|||
Длина волны детектора |
260 нм |
Подобрав условия анализа, переходили к реальным экстрактам, содержащим наряду с анализируемыми веществами целый ряд соэкстрактивных веществ, в большинстве случаев мешающих определению целевых компонентов. На данном этапе, изменяя условия (градиент, температура колонки, скорость потока растворителей) добивались полного разделения компонентов сложной матрицы.
Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях: Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5 µm. Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - ацетонитрил.
Калибровку проводили по стандарту анализируемого вещества. Был приготовлен стандартный раствор с концентрациями: аскорбиновая кислота 10.0 мг в 10 мл воды. Для построения калибровочного графика анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.
Градиент |
Время (мин) |
% А |
% В |
|
0.0 |
97 |
|||
4.0 |
97 |
3 |
||
6.0 |
85 |
15 |
||
15 |
80 |
20 |
||
25 |
40 |
60 |
||
30 |
97 |
3 |
||
Объем инжекции |
10 мкл |
|||
Поток |
1.4 мл/мин |
|||
Температура колонки |
30 оС |
|||
Длина волны детектора |
330 нм |
Количественное определение хлорогеновой кислоты и кверцетина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:
Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm. Подвижная фаза:
А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде;
В - ацетонитрил.
Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы с концентрациями: хлорогеновой кислота 2.8 мг, кверцетин 2.8 мг в 10 мл смеси (50:50) мобильной фазы А и В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.
Количественное определение рутина проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:
Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm
Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.
Градиент |
Время (мин) |
%А |
%В |
|
0.0 |
60 |
40 |
||
15.0 |
0 |
100 |
||
20 |
60 |
40 |
||
Объем инжекции |
10 мкл |
|||
Поток |
1 мл/мин |
|||
Температура колонки |
30 оС |
|||
Длина волны детектора |
210 нм |
Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлен стандартный раствор с концентрацией рутина 7.1 мг в 10 мл подвижной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемого вещества последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора. Количественное определение анализируемого вещества осуществлялось с использованием данных калибровок стандартного раствора.
Количественное определение розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы проводили на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФдетектором 2487 при следующих условиях:
Колонка Symmetry C18, 4.6x150 mm, 5µm
Подвижная фаза: А - 0.1% трифторуксусная кислота в воде; В - метанол.
Градиент |
Время (мин) |
%А |
%В |
|
0.0 |
70 |
30 |
||
20.0 |
40 |
60 |
||
25.0 |
70 |
30 |
||
Объем инжекции |
10 мкл |
|||
Поток |
1 мл/мин |
|||
Температура колонки |
30 оС |
|||
Длина волны детектора |
254, 276 нм |
Калибровку проводили по стандартам анализируемых веществ. Были приготовлены стандартные растворы розарина, розавина, розина, салидрозида и тирозола с концентрацией каждого компонента 100 мкг/мл мобильной фазы В. Для построения калибровочных графиков анализируемых веществ последовательно инжектировали 5, 10, 15, 20 мкл стандартного раствора.
Результаты анализа сухого экстракта корневищ и корней родиолы розовой приведены в табл. 1, 2.
Табл. 1. Содержание основных биологически активных веществ в сухом экстракте родиолы розовой
Наименование образца |
Аскорбиновая кта мкг/мг |
Хлорогеновая кта мкг/мг |
Кверцетин мкг/мг |
Рутин мкг/мг |
Полисахариды |
Дубильные вещества |
|
Числовой показатель |
не обнаружена |
0.052 |
12.05 |
6.96 |
15.0% |
11.9% |
Табл. 2. Содержание розавина, розарина, розина, салидрозида и тирозола в экстракте родиолы розовой
Наименование образца |
Розавин мкг/мг |
Розарин мкг/мг |
Розин мкг/мг |
Салидрозид мкг/мг |
Тирозол мкг/мг |
|
Экстракт родиолы |
1.69 |
4.35 |
1.49 |
26.47 |
11.08 |
Таким образом, получен сухой экстракт родиолы розовой и разработан метод анализа ВЭЖХ, позволяющий одновременно определять несколько действующих веществ в сухом экстракте родиолы розовой.
Выводы
Разработан удобный для практического применения метод анализа сухого экстракта родиолы розовой, содержащего рутин, кверцетин, полисахариды, хлорогеновую, аскорбиновую кислоты, дубильные вещества, а также салидрозид, тирозол, розавин, розарин, розин.
Литература
1. Барнаулов О.Д., Лимаренко А.Ю., Куркин В.А. и др. Сравнительная оценка биологической активности соединений, выделенных из видов Rhodiola L. Химикофармацевтический журнал. 1986. №9. С.11071112.
2. Крендаль Ф.П., Козин С.В., Левина Л.В. Сравнительная характеристика препаратов из группы фитоадаптогенов - женьшеня, элеутерококка и родиолы розовой. М.: Профиль. 2007. 392с.
3. Быков В.А., Запесочная Г.Г., Куркин В.А. Родиола розовая (Rhodiola rosea L.), традиционные и биотехнологические аспекты получения лекарственных средств. Хим. фармац. ж. 1999. №1. С.2839.
4. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. М.: Медицина. 1984. 464с.
5. Государственная фармакопея российской федерации. "Издво "Научный центр экспертизы средств медицинского применения". 2008. 704с.
6. Адамчук Л.В. Адаптогенный эффект препаратов золотого корня при длительноых мышечных нагрузках. Материалы XVI Всесоюзной конференции по спортивной медицине. 1969. С.115116.
7. Аксенова Р.А. К фармакологии родиолозида. Дисс. …канд. биол. наук. Томск. 1968. С.9093.
8. Ежков В.Н. Исследование по разработке и стандартизации препаратов на основе корневищ родиолы розовой. Автореф. дис. … канд. фармац. наук. М. 2000. 23с.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Механизм действия ноотропов. Лекарственное растительное сырье, обладающее ноотропным действием. Ноотропы как средства, оказывающие специфическое действие. Фармакологические свойства и применение гинко двулопастного, барвинка малого и родиолы розовой.
курсовая работа [49,4 K], добавлен 06.03.2010Наперстянка пурпуровая: химический состав; применение в медицине; технология возделывания. Корневая система родиолы розовой. Корневища и корни мыльнянки, применение в медицине. Полезные свойства девясила. Фармакологические свойства барвинка малого.
контрольная работа [59,4 K], добавлен 12.07.2011Плоды рябины черноплодной: характеристика и применение в медицине. Физико-химические свойства антоцианов. Получение водно-спиртового экстракта из плодов аронии. Разделение на фракции экстракта плодов аронии, с использованием органических растворителей.
курсовая работа [722,5 K], добавлен 30.10.2014Изучение применения некоторых видов лекарственных растений семейства розоцветных. Фармакогностический анализ корней и корневищ кровохлебки лекарственной. Установление соответствия частей кровохлебки требованиям ГФ XI. Экстракция дубильных веществ.
курсовая работа [1,1 M], добавлен 29.06.2014Направления создания новых лекарственных веществ. Фракции каменноугольной смолы. Получение лекарственных веществ из растительного и животного сырья, биологического синтеза. Методы выделения биологически активных веществ. Микробиологический синтез.
реферат [43,7 K], добавлен 19.09.2010Выбор средства для дезинфекции изделий медицинского назначения, кожных антисептиков, обработки операционного и инъекционного поля, для проведения уборок. Минимальные концентрации действующих веществ в дезинфицирующих средствах при бактериальных инфекциях.
презентация [609,2 K], добавлен 15.02.2015Исследование основных свойств и способов получения алкалоидов. Витамины, кофермены и антивитамины, применяемые в качестве лекарственных веществ. Гормоны и их синтетические аналоги. История создания, классификация, способы получения и анализа антибиотиков.
реферат [49,2 K], добавлен 16.11.2010Виды и строение боярышника, районы его распространения и применение в медицине. Рациональные приемы сбора сырья; его первичная обработка, хранение и сушка. Химический состав действующих веществ. Диагностика подлинности лекарственных растительных средств.
курсовая работа [903,1 K], добавлен 23.05.2013Понятие и классификация фармацевтической несовместимости. Коагуляция коллоидных растворов. Адсорбция действующих веществ. Влияние относительной влажности воздуха на отсыревание порошков. Несовместимость витаминов с некоторыми лекарственными веществами.
курсовая работа [70,1 K], добавлен 29.05.2016Классификация и клинические проявления нарушений обмена веществ. Наследственные нарушения обмена веществ. Распространенность наследственных заболеваний обмена веществ с неонатальным дебютом. Клиническая характеристика врожденных дефектов метаболизма.
презентация [8,4 M], добавлен 03.07.2015Определение понятия и свойств ферментов. Рассмотрение примеров использования в медицине ферментных препаратов. Исследование принципов энзимодиагностики, измерения разных веществ в крови. Нарушения обмена веществ в основе наследственных энзимопатий.
презентация [1,5 M], добавлен 21.04.2015Понятие и особенности дубильных веществ как высокомолекулярных, генетически связанных между собой природных фенольных соединений, обладающих дубящими свойствами, их физико-химическое описание. Источники получения и условия использования данных веществ.
курсовая работа [96,9 K], добавлен 27.11.2014Задачи ферментов как веществ биологического происхождения, ускоряющих химические реакции. Организованная последовательность процессов обмена веществ. Особенности ферментативного катализа. Лекарственные препараты: ингибиторы и активаторы ферментов.
презентация [2,9 M], добавлен 27.10.2014Обмен веществ как сложный процесс превращения химических элементов в организме, обеспечивающих его рост, развитие и деятельность. Воздействие тренировок на метаболизм организма. Факторы, воздействующие на уровень метаболизма. Что ускоряет обмен веществ.
статья [18,8 K], добавлен 07.06.2010Классификация пролонгированных лекарственных форм. Методы продления действия лекарственных веществ. Иммобилизация живых клеток. Глазные пленки, их преимущества. Суспендирование растворимых лекарственных веществ. Заключение веществ в пленочную оболочку.
курсовая работа [496,1 K], добавлен 28.03.2012Нарушение обмена веществ при изменениях в работе щитовидной железы, гипофиза, надпочечников, половых желез и при общем голодании. Болезнь Гирке, фенилкетонурия, алкаптонурия, гиперхолестеринемия, подагра. Характеристика нарушений эндокринных функций.
презентация [547,3 K], добавлен 02.09.2014Признаки нарушения обмена веществ при диабете, возможность проведения оперативного вмешательства. Обоснование специального лечения нарушений обмена веществ, его корректировка в предоперационном, операционном периоде. Ведение больного после операции.
реферат [27,3 K], добавлен 23.01.2010Строение больших полушарий головного мозга. Кора больших полушарий головного мозга и ее функции. Белое вещество и подкорковые структуры мозга. Основные составляющие процесса обмена веществ и энергии. Вещества и их функции в процессе обмена веществ.
контрольная работа [59,2 K], добавлен 27.10.2012Организация правильного питания женщины в период беременности в целях обеспечения рационального поступления в организм всех питательных веществ. Роль питательных веществ в организме матери: витамины, минеральные вещества и микроэлементы. Дефицит веществ.
курсовая работа [22,2 K], добавлен 09.12.2010Комбинированное действие лекарственных веществ. Синергизм и его основные виды. Понятие антагонизма и антидотизма. Фармацевтическое и физико-химическое взаимодействие лекарственных средств. Основные принципы взаимодействия лекарственных веществ.
курсовая работа [157,9 K], добавлен 25.09.2014