Флавоноиды в траве Якорцев стелющихся
Сырье Якорцев стелющихся как перспективный образец для изучения. Исследование примера обнаружения флавоноидов методом ультра эффективной жидкостной хроматографии на хроматографе с тандемным квадрупольным MC-детектором. Вещества флафоноидной структуры.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 05.12.2018 |
| Размер файла | 1,9 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Флавоноиды в траве Якорцев стелющихся
Худенко П.Е., Морохина С.Л.,
Попов Д.М. и Терешина Н.С.
Аннотация
В данной статье нашему вниманию представлено сырье Якорцев стелющихся, как перспективный образец для изучения. Приведен пример обнаружения флавоноидов методом ультра эффективной жидкостной хроматографии/МС на хроматографе WatersAcquility с тандемным квадрупольным MC-детектором TQD (Waters).
Ключевые слова: ацетонитрил, якорцы стелющиеся - TribulusterrestrisL, MC-детектор TQD (Waters), анализ исследованного образца сырья, хроматограммы и спектры.
Введение
Якорцы стелющиеся - TribulusterrestrisL., cем. парнолистниковые - Zygophyllaceae - однолетнее коротко опушенное травянистое растение. Стебли простерты по земле, от основания ветвистые, длиной 10-120 (300) см. Листья супротивные, парноперистосложные, длиной 3-8 см, с 6-8 парами мелких продолговатых листочков. Цветки правильные желтые, диамет-ром до 1.2 см, одиночные, расположены в пазухах листьев. Околоцветник пентамерный, тычинок 10, гинецей ценокарпный из 5 сросшихся плодолистиков. Плод - ценокарпий, распадающийся при созревании на 5 звездчато-расположенных угловатых "плодиков", несущих на спинке 4 длинных, твердых и острых шипа, а также многочисленные бугорки.
В южной части ареала якорцы цветут в апреле-мае; близ северной границы - в июне-июле. В благоприятных условиях цветение продолжается все лето и в начале осени. Растение плодоносит с июня-июля до заморозков [1].
Ареал, культивирование. Якорцы стелющиеся произрастают обычно в сухих степях на юге европейской части России и стран СНГ (низовья Дона и Волги, Украина, Крым, Молдова), а также в полупустынях Средней Азии, в Казахстане, на Кавказе, Алтае, в Восточной Сибири (Даурия). Растения особенно часто встречаются в Сурхандарьинской, Самаркандской и Кашкадарьинской областях Узбекистана, Курган-Тюбинской и Кулябской областях Таджикистана, Чимкентской области Казахстана и в центральных районах республики Тува. В Туве, как и в других районах Сибири, а также в Дагестане я корцы растут в основном вдоль дорог и на сбитых выпасом песчаных почвах в пределах степного пояса. В Чимкентской области и в других районах Южного Казахстана, а также в Узбекистане, Туркмении и Таджикистане Якорцы стелющиеся растут преимущественно как сорное растение поливных культур (огурцов, бахчевых культур, помидоров, винограда, хлопчатника и др.). На неполивных землях они отмечены на стойбищах и как рудеральное растение. В высокогорных районах: встречаются редко, но в Таджикистане иногда поднимаются до 2800 м над уровнем моря [1].
Химический состав. В траве Якорцев стелющихся содержаться около 2.8% стероидных сапониновтакие как протодиосцин и гликозиды диосгенина, тигогенина, рускогенина. Одни-ми из сопутствующих соединений травы Якорцев стелющихся являются стерины: стигмастерин, кампестерин, р-ситостерин и стероиды диосгенин, тигогенин, неотигогенин, ямогенин и согласно исследованиям Tian-ShungWu, Li-ShianShi, Shang-ChuKu (Китай) алкалоиды террес-трибисамид, трибулустерин, обнаруженные методом масс-спектрометрии [5]. Известно, что в траве Якорцев стелющихся также имеются вещества флавоноидной структуры. Для определения данной группы БАВ используют методы ТСХ анализа [4], а так же методы УФ, ЯМР 13С и 1H спектроскопии и масс-спектрометрии [3].
флафоноид трава жидкостная хроматография
Экспериментальная часть
Объектом исследования служила трава однолетнего растения Якорцев стелющихся, собранная в различных районах Болгарии, в период плодоношения. Сырье представляет собой смесь бороздчатых стеблей с продолговатыми отдельными листочками сложного парноперистого листа с беловатым опушением, плодов 5-звездчатой формы, с морщинистой оболочкой и острыми твердыми шипами; реже встречаются отдельные сложные плоды с 2-мя и 4-мя шипами, цвет стеблей зеленовато-желтый, плодов светло-зеленый, листьев зеленый, запах сырья слабый, вкус водного извлечения сладковато-горький.
Около 2х грамм сырья, измельченного до размера частиц проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл 95% этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. После охлаждения до комнатной температуры фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, так чтобы сырье не попало на фильтр, фильтр промывают 10 мл 95% этанола и доводят объём раствора в колбе 95% этанолом до 100 мл.
Для предварительного обнаружения флавоноидов к спиртовому извлечению в пробирку добавляли спиртовой раствор алюминия хлорида и отмечали, что раствор окрашивался в зеленовато-желтый цвет.
Флавоноиды в траве Якорцев стелющихся определяли методом ультра эффективной жидкостной хроматографии/МС на хроматографе WatersAcquility с тандемным квадрупольным MC-детектором TQD (Waters).
Подвижная фаза. А (ПФ А). Смесь вода - ацетонитрил (95: 5) с муравьиной кислотой.
Подвижная фаза. В (ПФ В). Ацетонитрил с муравьиной кислотой.
Хроматографируют испытуемый раствор и растворы стандартов в следующих условиях:
объем пробы 5 мкл;
колонка 0.21х15.0 см AcuilityUPLCBEHC18 (1.7 мкм);
|
Время, мин |
ПФ А, % |
ПФ В, % |
|
|
0 |
95 |
5 |
|
|
30 |
50 |
50 |
|
|
32 |
0 |
100 |
|
|
33 |
95 |
5 |
|
|
36 |
95 |
5 |
температура колонки 35 oС;
скорость потока 0.3 мл/мин;
градиентный режим хроматографирования
формируется путем смешивания подвижных фаз А и В
по схеме, представленной в таблице.
Условия МС:
МС детекция в режиме позитивных ионов;
параметры детектора: напряжение на капилляре - +3 кВ; напряжение на конусе - 50 В; темпера-тура капилляра 450 oС; температура источника 120 oС; скорость потока осушающего газа 800 л/ч, скорость потока газа в конусе 50 л/ч и сканирование в диапазоне масс от 100 до 1500 ед.;
МС детекция в режиме негативных ионов;
параметры детектора: напряжение на капилляре - 3 кВ; напряжение на конусе - 30 В; температура капилляра 350 oС; температура источника 120 oС; скорость потока осушающего газа 500 л/ч, скорость потока газа в конусе 50 л/ч и сканирование в диапазоне масс от 100 до 1500 ед.
Результаты и их обсуждение
Анализ исследуемого образца экстракта Якорцов.
На хроматограмме при 360 нм наблюдается только 3 достаточно интенсивных пиков с массами молекулярных ионов в режиме
1 2
Рис.1. Хроматограммы и спектры смеси стандартов в режиме регистрации позитивных ионов
Рис.2. Хроматограммы и спектры экстракта Якорцы в режиме регистрации позитивных ионов
Рис.3. Хроматограммы и спектры экстракта Якорцы в режиме регистрации негативных ионов
регистрации позитивных ионов равными 611, 595 и 625, в режиме регистрации негативных ионов - 609, 593 и 623 и с временами удерживания 7.4, 8.8 и 9.1 мин. Пик с временем удерживания 7.4 мин массой 610 является рутинном (1), так как совпадает по спектрам и времени удерживания со стандартом. Пик с временем удерживания 8.8 мин имеет предположительно структуру 2, так как в спектре в режиме регистрации позитивных ионов имеет фрагменты с 287 (кемпферол) и 449, с потерей масс 148 и 162 аналогичных фрагментации рутина (611 до 303 и 465). Пик с временем удерживания 9.1 мин может иметь одну из структур 3, так как его молекулярный ион 625 фрагментируется на 479 и 317 (кверцетин, метилированный в одно из 4-х положений: рамнетин, изорамнетин, тамараксетин или аза-леатин), что также аналогично фрагментации рутина.
На рис.1 приведены хроматограммы и спектры смеси стандартов в режиме регистрации позитивных ионов на основании которых проводилось соотнесение данных хроматограмм и спектров экстракта Якорцы в режиме регистрации позитивных ионов (рис.2) и негативных ионов (рис.3).
Заключение
Таким образом, предложен специфический метод определения флавоноидов траве якорцев стелющихся. По результатам анализа в сырье установлены соединения - производные рутина: кемпферол-3-рутиносайд, рамнетин-3-рутиносайд, изорамнетин-3 - рутиносайд, аза-леатин-3 - рутиносайд, тамараксетин-3-рутиносайд. Данная методика может быть использована в нормативной документации для количественного определения биологически активных соединений в траве якорцев стелющихся.
Выводы
1. Оптимальным условием экстракции флавоноидов из травы Якорцев стелющихся является 70% этанол с соотношением сырья и экстрагента 1: 50, измельченность сырья - 2 мм, температурный режим - кипящая водяная баня с обратным холодильником, и временем экстракции 45 минут.
2. Флавоноиды в траве Якорцев стелющихся определяли и идентифицировали их структуру методом ультра эффективной жидкостной хроматографии/МС на хроматографе Waters Acquility. Установили, что трава Якорцев стелющихся содержит флавоноиды: кемпферол, кверцетин, рамнетин, изорамнетин, амараксетин, азалеатин.
Литература
[1] Худенко П.Е., Морохина С.Л. Сравнительный анализ нормативной документации на сырье Якорцев стелющихся. Итоговая всероссийская научная конференция с международным участием Медицинская Весна. Материалы конференции от 30 апреля 2014 года. C.217.
[2] Наумов А.В., Попов Д.М. Количественное определение флавоноидов в Траве Звездчатки Средней. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2014. №4. С.132-137.
[3] Тожибоев М.М., Ботиров Э.Х., Усманова Г.А. Ксантоны и флавоноиды GentianaAlgidaPall. Химия растительного сырья. 2010. №3. С.129-133.
[4] Куркин В.А., Акушская А.С., Авдеева Е.В., Вельмяйкина Е.И., Даева Е.Д., Каденцев В.И. Флавоноиды травы Эхинацеи пурпурной. Химия растительного сырья. 2010. №4. С.87-89.
[5] Tian-ShungWu., Li-Shian Shi., Shan-Chu Kuo. Alkaloids and other constituents from Tribulusterrestris. Phytochemistry. 1999.50. C.1411-1415.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Сущность и виды жидкостной хроматографии. Определения и расчёты общих параметров и применимых ко всем хроматографическим методам требований для пригодности системы. Контроль количественного и качественного анализа различных классов лекарственных средств.
реферат [308,1 K], добавлен 01.11.2014Основные характеристики и физико-химические свойства. Действие лекарственного средства на организм человека. Изолирование данного вещества из водного раствора методами твердофазной и жидкость-жидкостной экстракции. Выбор способа дериватизации баклофена.
курсовая работа [1,7 M], добавлен 28.11.2013Понятие природных флавоноидов, их классификация и типы: окисленные и восстановленные. Физико-химические свойства, методы выделения и идентификации, направления исследования данных соединений. Заготовка сырья, его сушка, хранение, растительные источники.
курсовая работа [54,5 K], добавлен 09.10.2014Сущность и основные свойства флавоноидов, их распространение и предназначение. Гепатопротекторное, желчегонное, антиоксидантное, противовоспалительное, гормоноподобное действие флавоноидов. Другие эффекты флавоноидов, их влияние на иммунитет апоптоз.
курсовая работа [58,8 K], добавлен 15.07.2011Хроматографический анализ как критерий однородности вещества. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), определение с ее помощью компонентов препарата "Бициллин-3". ВЭЖХ в анализе препаратов с пропифеназоном. Стандартизация препарата "Аданол".
реферат [746,0 K], добавлен 27.11.2013Место окислительного стресса в патогенезе поражений печени. Перспективность поиска новых гепатопротекторов среди флавоноидов. Влияние флавоноидов на основные метаболические и гемодинамические патогенетические процессы при токсических поражениях печени.
автореферат [528,6 K], добавлен 05.01.2010Виды бумажной хроматографии, методика ее проведения с целью анализа состава исследуемого образца. Подготовка аппаратуры, материалов и сорбентов. Идентификация лекарственного растительного сырья, содержащего кумарины, алкалоиды и антраценпроизводные.
контрольная работа [21,6 K], добавлен 30.05.2012Краткая характеристика исследуемых растений, входящих в состав профилактических чаев. Методика высушивания и хранения лекарственных растений. Определение количества флавоноидов и аскорбиновой кислоты в растительном сырье, в готовых профилактических чаях.
курсовая работа [623,5 K], добавлен 10.04.2015Классификация и способы получения эфирных масел, их лечебные свойства и применение. Химический состав растений рода полынь. Проведение товароведческого анализа лекарственного растительного препарата. Количественное определение суммы флавоноидов в сырье.
курсовая работа [596,9 K], добавлен 12.07.2019Проведение высокоэффективной жидкостной хроматографии с многоканальным детектированием. Сглаживающий фильтр Савицкого-Голея. Разбиение хроматограммы на отдельные пики. Оценка величины шума и ее использование при обработке хроматографического сигнала.
курсовая работа [815,2 K], добавлен 17.11.2011Состав жидкостного хроматографа. Детекторы и устройства для сбора данных. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе антибиотиков. Оценка препарата Рулид, Азитромицин с ее помощью. Расчет концентрации антибактериальных глазных капель.
курсовая работа [128,2 K], добавлен 05.01.2014Возможные органические примеси к листьям толокнянки и их отличительные внешние признаки. Определение понятия "флавоноиды" как группы биологически активных соединений, их распространение в растительном мире, локализация по органам и тканям растений.
контрольная работа [147,3 K], добавлен 06.02.2016Причины и условия, приводящие к изменению структуры лекарственного вещества. Значение показателя растворимость, прозрачность и степень мутности, цветность растворов для определения чистоты лекарственных веществ. Определение воды методом дистилляции.
контрольная работа [350,2 K], добавлен 23.01.2016Хвощ полевой: описание растения. Сбор и сушка сырья. Химический состав растения, фармакологические свойства, применение в медицине. Противопоказания и возможные побочные эффекты при применении. Основные биологические вещества и растворители в траве.
реферат [49,8 K], добавлен 27.01.2010Жироподобные вещества: воски, фосфолипиды, липопротеиды. Физико-химические свойства тио- и цианогликозидов. Методы анализа эфирных масел и флавоноидов. Выделение хромонов из сырья. Заготовка корней ревеня, травы пастушьей сумки, багульника болотного.
реферат [5,8 M], добавлен 12.11.2013Классификация, этиология, патогенез, диагностика и лечение мочекаменной болезни. Лекарственные растения, содержащие антрахиноны, сапонины, фенольные соединения, флавоноиды. Фармакологические свойства и применение в медицине лекарственных растений.
реферат [334,9 K], добавлен 20.11.2015Действующие вещества, обладающие кровоостанавливающим действием. Лекарственные растения, содержащие дубильные вещества: горец перечный; лагохилус опьяняющий. Лекарственные растения и сырье, содержащие витамин К: калина обыкновенная; крапива двудомная.
контрольная работа [37,6 K], добавлен 05.03.2010Исследование функционального состояния центральной нервной системы методом электроэнцефалографии. Формирование протокола обследования. Картирование электрической активности мозга. Исследование мозгового и периферического кровообращения методом реографии.
курсовая работа [19,4 M], добавлен 12.02.2016Общая характеристика, физико-химические свойства, химическое строение фенолгликозидов. Методы выделения и идентификации. Методики обнаружения фенолгликозидов. Качественное и количественное определение. Лекарственные растения содержащие феногликозиды.
курсовая работа [459,2 K], добавлен 11.06.2010Валидация методик анализа папаверина гидрохлорида в растворе для инъекций и других лекарственных формах. Химические и физические методы определения подлинности субстанции. Анализ содержания посторонних примесей методом тонкослойной хроматографии.
курсовая работа [644,4 K], добавлен 02.06.2014
