Роль нейтрофилов в деструкции сосудистого эндотелия при операциях реваскуляризации миокарда в условиях искусственного кровообращения
Исследование бактерицидной активности нейтрофилов периферической крови и выраженности сосудистого эндотелиального повреждения у больных ишемической болезнью сердца до и после операции аортокоронарного шунтирования в условиях искусственного кровообращения.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 01.12.2018 |
| Размер файла | 22,0 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Роль нейтрофилов в деструкции сосудистого эндотелия при операциях реваскуляризации миокарда в условиях искусственного кровообращения
Новицкий В.В., Чумакова С.П., Уразова О.И., Сибирский государственный медицинский университет; Шипулин В.М., Емельянова Т.В., НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН
Аннотация
С целью исследования зависимости деструкции эндотелия от функциональной активности нейтрофилов обследовано 42 больных ишемической болезнью сердца (ИБС) до и через 6 и 24 ч после аортокоронарного шунтирования (АКШ) в условиях искусственного кровообращения. Оценивали содержание активных форм кислорода (АФК) в нейтрофилах крови, их рецепторный аппарат (CD18-, Fc- и С3b-рецепторы), дегрануляцию и выраженность десквамации эндотелия. Показано, что течение ИБС сопровождается стимуляцией продукции нейтрофилами АФК и переваривающей способности клеток, угнетением экспрессии рецепторов на нейтрофилах и выраженной деструкцией эндотелия. После операции АКШ выявленные нарушения усугубляются, отмечается дегрануляция нейтрофилов. Взаимосвязь продукции АФК нейтрофилами с альтерацией эндотелия отмечалась только через 6 ч после хирургического вмешательства.
Ключевые слова: нейтрофилы, искусственное кровообращение, эндотелий.
Abstract
Aimed at studying endothelial destruction dependence on functional activity of neutrophils, 42 patients with ischemic heart disease (IHD) were examined before, 6 and 24 hours after coronary artery bypass grafting (CABG) under extracorporeal circulation. Level of active forms of oxygen (AFO) in blood neutrophiles, their receptor apparatus (CD18-, Fc- and C3b-receptors), degranulation and desquamation expression of endothelium were estimated. Clinical course of IHD was shown to be accompanied by the stimulation of AFO production by neutrophils as well as cellular digestion ability, by depression of neutrophils receptors expression and marked endothelial destruction. After CABG, the revealed disorders aggravated, degranulation of neutrophils was noted. Interrelation between neutrophils' AFO production and endothelial alteration was observed only 6 hours after the surgery.
Key words: neutrophils, cardiopulmonary bypass, endothelium.
Введение
Несмотря на успехи современной кардиологии, прямая реваскуляризация миокарда остается наиболее эффективным методом лечения ишемической болезни сердца (ИБС) [9]. Большая часть операций аортокоронарного шунтирования (АКШ) проводится в условиях искусственного кровообращения (ИК), которое сопряжено с гемодилюцией, гипергидратацией, централизацией кровообращения, а следовательно, гипоксией в тканях, для компенсации которой используют гипероксигенацию крови. Контакт крови с синтетическими поверхностями магистралей аппарата ИК и механическое повреждение ее форменных элементов запускают активацию системы комплемента и экспрессию адгезивных молекул на поверхности лейкоцитов, тромбоцитов и эндотелиальных клеток [4, 9, 10].
Результатом такого вмешательства является поступление в циркуляцию различных метаболитов и медиаторов, определяющих развитие системного воспалительного ответа в раннем послеоперационном периоде [10-13]. Последний является защитной реакцией организма, направленной на утилизацию и репарацию поврежденных собственных тканей, а также на ограничение экспансии патогенных микроорганизмов и условно-патогенной микрофлоры человека. Однако чрезмерная выраженность описанных реакций может способствовать вторичной альтерации тканей продуктами дегрануляции активированных нейтрофилов. В этом случае первым страдает сосудистый эндотелий, десквамация которого инициирует тромбообразование, шунтирование крови и регионарную гипоксию, что при системности процесса формирует полиорганную недостаточность [3].
Напротив, подавление воспалительного каскада может трансформироваться в несостоятельность иммунной системы (в первую очередь - естественной резистентности) противостоять возросшей антигенной нагрузке, что может стать причиной инфекционных послеоперационных осложнений [10].
Цель работы - изучение бактерицидной активности нейтрофилов и выраженности эндотелиального повреждения у больных ИБС до и после операции АКШ в условиях искусственного кровообращения.
1. Материал и методы
Материалом исследования служила периферическая кровь 42 больных ИБС в возрасте от 37 до 69 лет со стенокардией напряжения II-IV функциональных классов. ИК проводилось на аппарате «Gambro» (Швеция) с применением мембранных оксигенаторов «Baxter» (США) в условиях нормотермии ((35,21,4)С) и кровяной кардиоплегии. Перфузионный индекс составил (2,4 0,2)мл/(кгч), длительность ИК -- (93,514,2)мин, время ишемии миокарда -- (71,812,1)мин. Исследования выполнялись до операции, через 6 и 24ч после операции. В контрольную группу вошли 25 практически здоровых доноров аналогичного возраста.
В цельной крови изучали функциональную активность нейтрофилов. О содержании активных форм кислорода (АФК) судили по числу диформазан-положительных нейтрофилов в спонтанном тесте восстановления нитросинего тетразоля (НСТ-тест) [2]. Бактерицидность микрофагоцитов оценивали по доле переваренных микробных тел (St.aureus Н-209), выраженной в процентах, -- показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) [4]. Для изучения рецепторного аппарата выделение нейтрофилов из цельной крови производили на двойном градиенте плотности (1,077 и 1,109г/см3), концентрацию клеток в суспензии доводили до (23)106/мл. Долю нейтрофилов, экспрессирующих Fc- и С3b-рецепторы, определяли методом розеткообразования [6]. Для этого к 0,25мл суспензии нейтрофилов добавляли равный объем 0,5%-й суспензии эритроцитов барана, обработанных антителами (для Fc-рецепторов) или нагруженных комплементом (для С3b-рецепторов). В первом случае смесь сразу центрифугировали при комнатной температуре 10мин при 60g, а затем инкубировали еще 15мин при той же температуре, после чего ресуспендировали и учитывали результат в препарате раздавленной капли. Во втором случае смесь нейтрофилов и эритроцитов инкубировали 15 мин при 37С и, не центрифугируя, оценивали результат аналогичным образом. За нейтрофилы, экспрессирующие соответствующие рецепторы, принимали клетки, присоединившие не менее трех эритроцитов [6]. Процент CD18-положительных микрофагоцитов определяли методом люминесцентной микроскопии с использованием FITC-меченных антител против CD18-антигена (лейкоцитарный интегрин) (ООО «НПЦ „МедБиоСпектр“», г. Москва). О степени дегрануляции нейтрофилов судили по содержанию лактоферрина (маркерного белка специфических гранул нейтрофилов) в плазме крови, образцы которой хранили при температуре -20С не более 2мес. Концентрацию лактоферрина определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов лактоферринстрип D4156 (ЗАО «Вектор-Бест», г.Новосибирск).
Для изучения концентрации десквамированных эндотелиальных клеток в крови ее стабилизировали гепарином (25ЕД/мл) и сразу же после забора центрифугировали 10мин при 200g, затем 2мл плазмы смешивали с 0,4мл натриевой соли аденозиндифосфата (АДФ-Na) в концентрации 1мг/мл и встряхивали 10мин, после чего центрифугировали в прежнем режиме для удаления агрегатов тромбоцитов [7]. Супернатант центрифугировали при 200g в течение 15мин, потом надосадок удаляли, а осадок ресуспендировали в 50мкл 0,9%-м NaCl. Полученной смесью заполняли камеру Горяева, подсчитывали эндотелиоциты на площади 1 сетки и с учетом объема камеры и степени концентрации умножали результат на 104/л. Цитологический контроль исследуемой клеточной популяции осуществляли методом люминесцентной микроскопии с использованием FITC-меченных антител против CD31-антигена (Caltag Laboratories, США).
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с применением пакета программ Statistica 6.0. Рассчитывали среднюю величину показателя Х и ее ошибку m. Оценку уровня статистически значимых различий средних величин осуществляли с помощью критериев Стьюдента, Манна-Уитни (для независимых выборок) и Вилкоксона (для зависимых выборок). В целях выявления взаимосвязей между изучаемыми показателями рассчитывали коэффициент корреляции Спирмана rS.
бактерицидный нейтрофил сердце кровообращение
2. Результаты и обсуждение
Анализ функциональной активности нейтрофилов показал, что у больных ИБС до операции отмечалось увеличение значений спонтанного НСТ-теста и показателя завершенности фагоцитоза (таблица), между которыми обнаруживалась прямая зависимость (rS=0,59, р<0,05). Вероятно, это служит свидетельством определяющей роли окислительных процессов в реализации микробицидного эффекта нейтрофилов. Нормальное содержание лактоферрина в крови у пациентов с ИБС подтверждало отсутствие интенсификации процессов дегрануляции нейтрофилов. Рецептор-экспрессирующая способность нейтрофилов у больных ИБС до операции была ниже таковой в контрольной группе (таблица), что, очевидно, отражает наличие вторичного иммунодефицита при данной патологии [9, 10].
Как известно, основным звеном патогенеза атеросклероза является повреждение клеточных и соединительнотканных структур сосудистой стенки артерий, поэтому зарегистрированное увеличение содержания десквамированных эндотелиальных клеток в крови у пациентов с ИБС ((7,931,20)104/л при норме (3,730,54)104/л, р<0,05) представляется закономерным. Интересным оказался тот факт, что данный показатель отрицательно коррелировал лишь с количеством C3b+-нейтрофилов (rS=-0,47, р<0,05) и не обнаруживал связи с уровнем продукции АФК в микрофагах. Вероятно, развитие деструктивных изменений в эндотелии зависит не только от функциональной активности циркулирующих нейтрофилов, но и от других факторов [5]. Депрессия рецепторного аппарата нейтрофилов в условиях снижения тромбоциторезистентности интимы сосудов, возможно, носит защитно-приспособительный характер, препятствуя тромбообразованию. Так CD18+ представляет собой рецептор для адгезивных молекул ICAM-1, ICAM-3 (экспрессируемых эндотелиоцитами) и для С3bi-компонента комплемента, который служит «мостиком» между нейтрофилом и эндотелиальной клеткой, имеющей на своей поверхности С3b-рецептор [8].
Таблица 1. Показатели функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных ишемической болезнью сердца до и после операции аортокоронарного шунтирования в условиях искусственного кровообращения
|
Показатель |
Здоровые доноры |
Больные ИБС |
|||
|
До операции |
Через 6 ч после операции |
Через 24 ч после операции |
|||
|
НСТ-тест, % |
17,131,95 |
25,331,87 рк<0,01 |
28,861,65 рк<0,001 |
29,572,19 рк<0,001 |
|
|
ПЗФ, % |
62,710,94 |
73,001,01 рк<0,05 |
76,580,90 рк<0,001 р<0,01 |
76,870,69 рк<0,001 р<0,01 |
|
|
Fc+-нейтрофилы, % |
40,543,12 |
25,661,84 рк<0,001 |
26,542,92 рк<0,01 |
26,602,54 рк<0,01 |
|
|
С3b+-нейтрофилы, % |
47,643,51 |
29,162,82 рк<0,001 |
21,522,61 рк<0,01 р<0,05 |
23,422,68 рк<0,001 |
|
|
CD18+-нейтрофилы, % |
75,172,26 |
66,542,35 рк<0,05 |
55,153,05 рк<0,05 р<0,05 |
51,843,51 рк<0,001 р<0,01 |
|
|
Лактоферрин, нг/мл |
451,1846,07 |
559,0558,45 |
743,5749,54 рк<0,001 р<0,05 |
1207,65208,17 рк<0,05 р<0,05 |
Примечание. ПЗФ - показатель завершенности фагоцитоза. рк - уровень статистической значимости различий между группой больных ИБС и здоровых доноров; р - уровень статистической значимости различий по отношению к дооперационным значениям в группе больных ИБС.
Существуют данные об активации системы комплемента у больных с ИБС, что может усиливать адгезию нейтрофилов к поврежденной интиме сосуда и способствовать дальнейшей его альтерации [5]. Очевидно, что степень активации комплемента пропорциональна площади сосудистого русла, поэтому обнаруженная обратная взаимосвязь между численностью десквамированных эндотелиоцитов и экспрессией С3b-рецептора, возможно, отражает распространенность атерогенеза и является защитно-приспособительной реакцией, направленной на снижение деструктивного потенциала нейтрофилов (путем шединга или интернализации рецепторов) и прогрессирования патологии.
В этом случае негативная взаимосвязь десквамации эндотелия и количества C3b+-нейтрофилов может быть компенсаторной реакцией, проявляющейся угнетением экспрессии С3b-рецептора по принципу отрицательной обратной связи, и отражать распространенность атеросклеротического процесса.
В течение суток после операции уровни продукции АФК и экспрессии Fc-рецепторов нейтрофилами оставались на предоперационном уровне. Бактерицидность полиморфноядерных лейкоцитов и концентрация лактоферрина в крови возрастали, отражая формирование воспалительного ответа на оперативное вмешательство [9-13]. Доля CD18+- и C3b+-нейтрофилов снижалась. По данным I.Risnes и соавт. (2003) [13], АКШ с применением ИК сопровождается активацией системы комплемента (как по классическому, так и по альтернативному пути) и увеличением концентрации С3bi-компонента, что могло спровоцировать шединг или интернализацию рецепторов [3].
Через 6ч после операции бактерицидность нейтрофилов не зависела от содержания АФК, однако устанавливалась положительная корреляция показателя завершенности фагоцитоза в нейтрофилах (rS=0,60, р<0,05) с возросшим (до (15,472,08)104/л, р<0,001) количеством десквамированных эндотелиоцитов, что могло быть отражением деструктивного влияния продуктов оксидативного взрыва нейтрофилов на интиму сосудов. Кроме того, на фоне угнетения экспрессии C3b-рецептора и CD18 обнаруживалась прямая связь CD18+-нейтрофилов с численностью слущенных эндотелиальных клеток (rS=0,63, р<0,05). CD18, как известно, относится к группе лейкоцитарных интегринов, которые состоят из двух - и двух -субъединиц, синтезируемых независимо друг от друга. В комплексе Гольджи одна и та же -субъединица может соединяться с разными -субъединицами. Так, установлено, что CD18-рецептор имеет в своем составе 2-субъединицу и три варианта -субъединиц: LFA-1 (CD11a/CD18) связывается с ICAM-1 и ICAM-3, Mac-1 (CD11b/CD18) является лигандом для ICAM-1 и С3bi-компонента комплемента, p150, 95 (CD11c/CD18) -- для С3bi и gp63 [1]. Таким образом, альтерация сосудистого эндотелия, обусловленная CD18, при отсутствии ее связи с уровнем экспрессии нейтрофилами C3b-рецепторов, могла быть вызвана усиленной экспрессией или конформационными изменениями CD11a/CD18.
Через сутки после операции концентрация десквамированных эндотелиоцитов возвращалась к предоперационным значениям, коррелируя, как и до хирургического вмешательства, только с числом C3b+-нейтрофилов (rS=-0,59, р<0,05). Подобная динамика носит, вероятно, благоприятный характер, свидетельствуя о завершении постоперационных деструктивных процессов в эндотелии и начале периода реабилитации.
Таким образом, течение ИБС сопровождается усиленной продукцией нейтрофилами АФК и активацией переваривающей функции нейтрофильных гранулоцитов при одновременном угнетении их CD18, Fc- и С3b-экспрессирующей функции, а также выраженной деструкцией сосудистого эндотелия. В течение первых суток после операции АКШ в условиях ИК отмечается еще более выраженная депрессия рецепторного аппарата нейтрофилов, стимуляция их переваривающей способности, рост концентрации десквамированных эндотелиоцитов по сравнению с таковым до операции, увеличивается содержание лактоферрина в крови. У больных ИБС на дооперационном этапе показана существенная роль генерации АФК в реализации микробицидности нейтрофилов и отсутствие таковой в альтерации эндотелия. Через 6 ч после хирургического вмешательства деструкция сосудистого эндотелия обусловливается продуктами оксидативного взрыва в нейтрофилах.
Литература
1. Козлов И.Г., Горлина Н.К., Чередеева А.Н. Рецепторы контактного взаимодействия // Иммунология. 1995. №4. С.14-24.
2. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В. Меньшикова, Л.Н. Делекторской, Р.П. Золотницкой и др. М.: Медицина, 1987. 368 с.
3. Лейдерман И.Н. Синдром полиорганной недостаточности. Метаболические основы // Вестн. интенсив. терапии. 1999. №2. С.8-13.
4. Меньшугин И.Н. Искусственное кровообращение у детей в условиях ганглионарной блокады и пульсирующего потока. СПб.: Специальная медицина, 1998. 304 с.
5. Насонов Е.Л. Современные иммунологические концеп- ции в кардиологии // Терапевт. арх. 1986. Т.58. №10. С.7-14.
6. Новиков Д.К., Новикова В.И. Клеточные методы иммунодиагностики. Минск: Беларусь, 1979. 222с.
7. Петрищев Н.Н., Беркович О.А., Власов Т.Д. и др. Диагностическая ценность определения десквамированных эндотелиальных клеток в крови // Клинич. лаборатор. диагностика. 2001. №1. С.50-52.
8. Редчиц Е.Г., Гузева В.О. Адгезия нейтрофилов: патогенетические и методические аспекты: Обзор // Лаборатор. дело. 1991. №5. С.4-8.
9. Чечеткин А.В., Николаева О.А., Волков А.М., Жибурт Е.Б. Иммунологические нарушения у больных при хирургическом лечении ишемической болезни сердца // Вестн. хирургии. 2002. Т.161. №2. С. 106-110.
10. Шумаков В.И., Сускова В.С., Ермакова Л.П. и др. Состояние иммунной системы у кардиохирургических больных при искусственном кровообращении // Вестн. трансплантологии и искусств. органов. 2003. №3. С.41-45.
11. Fromes Y., Gaillard D., Ponzio O. et al. Reduction of the inflammatory response following coronary bypass grafting with total minimal extracorporeal circulation // Ibid. 2002. V.22. P.527-533.
12. Paparella D., Yau T.M., Young E. Cardiopulmonary bypass induced inflammation: pathophysiology and treatment. An update // Eur. J. of Cardio-Thoracic Surgery. 2002. V.21. P. 232-244.
13. Risnes I., Ueland T., Lundblad R. et al. Changes in the cytokine network and complement parameters during open heart surgery // Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 2003. V.2. P. 19-24.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Операция, которая применяется для лечения ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда. Продолжительность и программа реабилитации на всех этапах после аортокоронарного шунтирования. Риск развития легочных осложнений после проведения операции.
презентация [1,4 M], добавлен 10.04.2017Влияние окислительных условий на динамику фагоцитарной реакции нейтрофилов. Получение полиморфноядерных гранулоцитов из периферической крови. Оценка изменения динамического состояния мембраны нейтрофилов после инкубации в окислительных условиях.
дипломная работа [6,5 M], добавлен 25.04.2012Исторические вехи участия хирургов в лечении стенокардии. Новое направление коронарной хирургии - операция аутовенозного аортокоронарного шунтирования. Современное состояние проблемы. Основные разновидности операции прямой реваскуляризации миокарда.
реферат [27,2 K], добавлен 03.11.2014Лечение больных хронической ишемической болезнью сердца. Основные стандарты лечения пациентов. Повышение толерантности к физическим нагрузкам и уменьшение признаков недостаточности кровообращения. Проведение основных диагностических мероприятий.
презентация [98,6 K], добавлен 25.10.2016Особенности состава и свойств крови у детей. Состав периферической крови в первые дни после рождения. Симптомы малокровия и его профилактика. Роль воспитателя. Анатомические особенности органов кровообращения. Работа сердца. Тренировка детского сердца.
контрольная работа [17,4 K], добавлен 19.03.2014Задачи холтеровского мониторирования при обследовании больных с ишемической болезнью сердца. Проявления ишемии миокарда и методы её выявления. Соотношение между потребностью миокарда в кислороде и его доставкой, уровня нагрузки и коронарного резерва.
презентация [3,2 M], добавлен 17.10.2013Этиология, патогенез и лечение панкреонекроза. Нейтрофилы: жизненный цикл, морфология, функции, метаболизм. Биолюминесцентный метод определения активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в нейтрофилах. Активность лактатдегидрогеназы нейтрофилов крови.
курсовая работа [175,0 K], добавлен 08.06.2014Инфаркт миокарда как одна из клинических форм ишемической болезни сердца. Периферический тип инфаркта миокарда с атипичной локализацией боли. Астматический вариант инфаркта миокарда и особенности его протекания. Понятие аортокоронарного шунтирования.
презентация [1,5 M], добавлен 28.05.2014Частота мозговых осложнений в зависимости от срока выполнения и вида кардиохирургических вмешательств. Основные механизмы повреждения мозга во время операции. Изучение факторов риска развития неврологических осложнений после кардиохирургических операций.
презентация [1,8 M], добавлен 03.02.2014Особенности анестезии у больных ишемической болезнью сердца, при которой снабжение миокарда кислородом не должно уменьшаться, а потребление кислорода не должно повышаться. Мониторный и электрокардиографический контроль, анестезиологические концепции.
реферат [29,6 K], добавлен 19.04.2010Анализ осложнений и летальности в ближайшем послеоперационном периоде после сочетанных операций ТМЛР и АКШ. Интраоперационное повреждение миокарда при воздействии лазером. Эффективность вмешательств ТМЛР+АКШ у больных ИБС с поражением коронарных артерий.
магистерская работа [7,3 M], добавлен 19.05.2011Холтеровское мониторирование ЭКГ при обследовании больных с ишемической болезнью сердца. Классификация показаний к применению методов лечения. Показания к холтеровскому мониторированию ЭКГ для оценки ишемии миокарда. Патофизиологические основы метода.
презентация [3,2 M], добавлен 27.09.2013Сущность метода искусственного кровообращения. Современные насосы автономного искусственного кровообращения. Характеристики технических устройств, временно заменяющих оксигенирующую функцию легких и обеспечивающих ИК. Специфика проведения операции.
реферат [159,0 K], добавлен 19.02.2010Анализ нейтрофилов как клеток крови, случаи их патологического изменения. Методы изучения нейтрофилов. Экспериментальная апробация способа получения гематологических характеристик, которые могут быть использованы как признаки патологии нейтрофилов.
курсовая работа [1,3 M], добавлен 29.02.2012Сравнительное исследование влияния низкомолекулярной фракции кордовой крови и фармакологического препарата актовегина на показатели фагоцитарной активности нейтрофилов трансфузионной лейкоцитарной массы и кислород-зависимых бактерицидных механизмов.
дипломная работа [131,5 K], добавлен 17.08.2011Лабораторное исследование периферической крови у детей. Функции эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Качественные изменения нейтрофилов. Скорость оседания эритроцитов. Белковый состав плазмы крови. Нормальные показатели у детей различного возраста.
презентация [3,2 M], добавлен 22.09.2016Понятие психической ригидности и ее теоретические основания при ишемии, степень и формы выраженности. Экспериментальное исследование роли ригидности действия в формировании устойчивого патологического состояния, приводящего к ишемической болезни сердца.
дипломная работа [86,4 K], добавлен 05.05.2011Механизм восстановления кровообращения. Проведение тестового исследования на восстановление кровообращения и чувствительность. Распределение значений и выявление зависимости времени восстановления кровообращения от времени восстановления осязания.
практическая работа [99,6 K], добавлен 10.02.2010Общие принципы строения сердца, механизмы развития артериальной гипертонии, повреждение миокарда при ишемической болезни сердца. Антропометрические методы исследования, расчет индекса массы тела, талиево-бедренного коэффициента, биохимические методы.
дипломная работа [152,9 K], добавлен 27.04.2010Гранулярный состав и продукты секреции полиморфноядерных гранулоцитов. Определение спонтанной активности MPO нейтрофилов периферической крови человека с целью проведения всех стадий анализа в растворе для спектофотометрической оценки результатов.
курсовая работа [3,2 M], добавлен 06.07.2012
