Определение бисопролола в лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Краткое сообщение ______________ Сафронова И.А., Шафигулин Р.В., Васильева М.В. и Буланова А.В.

Размещено на http://www.allbest.ru/

70 _______________ http://butlerov.com/ ______________ ©--Butlerov Communications. 2012. Vol.30. No.5. P.68-70.

Краткое сообщение Тематический раздел: Физико-химические исследования.

Регистрационный код публикации: 12-30-5-68 Подраздел: Хроматография.

68 __________ ©--Бутлеровские сообщения. 2012. Т.30. №5. _________ г. Казань. Республика Татарстан. Россия.

Определение бисопролола в лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Сафронова Ирина Анатольевна,⁺ Шафигулин Роман Владимирович,

Васильева Мария Владимировна и Буланова Анжела Владимировна*

Кафедра общей химии и хроматографии. Самарский государственный университет. Ул. Академика Павлова, 1. г. Самара, 443011. Россия. Тел.: (846) 334-54-47. E-mail: irinasa2007@yandex.ru

Аннотация

Разработана методика качественного и количественного анализа бисопролола с использова-нием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены опти-мальные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять опреде-ление подлинности препарата “Бисогамма”.

Ключевые слова: бисопролол, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), качественный и количественный анализ.

Введение

В настоящее время базовым методом анализа качества субстанций и готовых лекарст-венных препаратов в странах с развитой фармацевтической промышленностью (США, Англия, Япония, страны ЕС) является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) [1].

Разработчики новых лекарств активно включают ВЭЖХ метод в соответствующие разделы фармакопейных статей и технологических регламентов. Однако в обзоре публикаций за последние 10-12 лет по анализу многокомпонентных лекарственных препаратов методом ВЭЖХ [2] нет упоминаний о применении данного метода для анализа готовых лекарственных препаратов, таких как бисопролол, который используется для лечения артериальной гипертензии и ишемической болезни сердца [3].

Бисопролол является селективным в-адре-ноблокатором; он избирательно действует на в₁-адренергические рецепторы, обладает эффектом так называемой кардиоселективности, снижает частоту и силу сердечных сокращений, замедляет атриовентрикулярную проводимость, незначи-тельно уменьшает тонус гладкой мускулатуры [3]:

Структурная формула бисопролола (1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси]метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанол) представлена на рис. 1.

Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения бисопролола в субстанции и готовых лекарственных препаратах.

Экспериментальная часть

Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром-1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спектро-фотометрическим детектором при длине волны 224 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм.

В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различ-ного состава. Скорость потока элюента составляла100 мкл/мин. Объем вводимой пробы - 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. фирмы Криохром (Россия).

Исследовали лекарственный препарат, выпускающийся фирмой WORWAG PHARMA GmbH&Co (Германия) под оригинальным названием “Бисогамма”, содержащий бисопролол. Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже “ч.д.а”.

Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистиллированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 мОм/см. В качестве образца сравнения опреде-ляемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отде-лом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной доку-ментации (НД).

В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия дву-замещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления 0.136 г фосфата калия двузамещен-ного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1; добавляли воду до объема 1000 мл и перемешивали.

Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок двух таблеток “Бисогамма” растворяли в 20 мл фосфатного буферного раствора с рН 2.5 и охлажденный раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полученного раствора доводили до 25 мл фосфатным буфером и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным.

Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарст-венных препаратов.

Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных “МультиХром” 1.52v (Ampersand Ltd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле:

где S_и и S_ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; т_ст, т_с и т_н - соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.

Результаты и их обсуждение

В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики определения исследуемых соединений. Для этого проводили хроматографи-рование РСО вещества, который содержится в субстанции в виде бисопролола фумарата. На хроматограмме получили 2 пика, соответствующих фумаровой кислоте и бисопрололу (табл. 1). лекарственный хроматография жидкостный бисопролол

Как видно из таблицы, с увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода исследуемых веществ, но разделяющая способность системы уменьшается.

Наименьшей эффективностью разделения обладает подвижная фаза, в которой концент-рация ацетонитрила равна 50%, в этом случае фумаровая кислота и бисопролол не разделяя-ются.

Табл.1. Времена удерживания t_R бисопролола и фумаровой

кислоты при использовании различных подвижных фаз

Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и ацетонитрила для исследуе-мых веществ составили - 75:25 по объему, поэтому количественный хроматографический анализ РСО бисопролола и препарата “Бисогамма” проводили с использованием этой под-вижной фазы. По формуле определили количественное содержание бисопролола в препарате “Бисогамма”. Методом внутренней нормализации находили общее содержание фумаровой кислоты в таблетках.

Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата “Бисогамма”. Аналитическая длина волны 224 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 75/25 об. %.

Пики по времени удерживания: 1 - фумаровая кислота, 2 - бисопролол.

Хроматограмма образца препарата “Бисо-гамма” приведена на рис. 2.

В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматогра-фического разделения для образца лекарствен-ного препарата “Бисогамма”.

Результаты количественного анализа ле-карственного препарата представлены в табл. 3.

Табл. 3. Результаты количественного анализа лекарственного препарата

Выводы

Предложена методика качественного и количественного анализа бисопролола с исполь-зованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пока-зано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соот-ветствует требованиям нормативных документов по показателю “Количественное опреде-ление”.

Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-токсикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фармацевтическом контроле.

Литература

[1] Барам Г.И., Рейхарт Д.В., Гольдберг Е.Д., Родиненко М.О., Хазанов В.А. Фарматека. 2002. №4. С.71-74.

[2] Костарной А.В., Голубицкий Г.Б., Басова Е.М., Будко Е.В., Иванов В.М. Журнал аналитической химии. 2008. Т.63. №6. С.566-580.

[3] Чазов Е.И., Беленков Ю.Н. Рациональная фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей. М.: Литтерра. 2005. 972с.

Размещено на Allbest.ru