Состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза и состав жирных кислот мембран митохондрий тромбоцитов при хронической обструктивной болезни легких

Размещено на http://www.allbest.ru/

состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза и состав жирных кислот мембран митохондрий тромбоцитов при хронической обструктивной болезни легких

Ю.К. Денисенко, Т.П. Новгородцева, Н.В. Бочарова

Владивостокский филиал ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» - Научно-исследовательский институт медицинской климатологии и восстановительного лечения, г. Владивосток

Цель исследования: установить особенности тромбоцитарного звена системы гемостаза и патогенетические особенности состава жирных кислот (ЖК) мембран митохондрий тромбоцитов у больных ХОБЛ разной степени тяжести. Материалы и методы: обследовано 48 больных ХОБЛ стабильного течения легкой и средней степени тяжести. В контрольную группу вошли 29 практически здоровых лиц, не курящих, с нормальной функцией внешнего дыхания. Состояние системы гемостаза изучали по уровню фибриногена; морфологическим тромбоцитарным параметрам - количеству тромбоцитов, их средний объем, широта распределения тромбоцитов, тромбокрит. Исследовали скорость оседания эритроцитов (СОЭ). Оценивали модификацию состава ЖК мембран митохондрий в тромбоцитах методом газожидкостной хроматографии. Результаты: с утяжелением заболевания отмечается прогрессирование нарушений в тромбоцитарном звене системы гемостаза, повышение коагуляционной активности крови за счет увеличения фибриногена, показателя СОЭ; в мембране митохондрий тромбоцитов нарастает дефицит насыщенных ЖК (14:0, 16:0, 18:0), полиненасыщенных ЖК семейства n-3 (18:3n-3, 20:5n-3, 22:5n-3, 22:6n-3). Одним из механизмов изменения гемостатического баланса и функциональной активности тромбоцитов является нарушение состава ЖК мембран митохондрий кровяных пластинок. Выявленный дисбаланс в составе жирных кислот верифицирует изменение физико-химических свойств субклеточной мембраны, нарушение функционирования мембраносвязанных транспортных систем, ферментов и рецепторов, процессов окислительного фосфорилирования. Заключение: дисбаланс в составе ЖК митохондриальной мембраны, формирующийся в условиях ХОБЛ, приводит к существенной перестройке архитектоники крист митохондрий, нарушая, тем самым, структурно-функциональные свойства тромбоцитов и процессов свертывания крови.

Ключевые слова: тромбоцит, митохондрии, жирные кислоты, болезни органов дыхания

Y.K. Denisenko, T.P. Novgorodtseva, N.V. Bocharova

PLATELET COMPONENT OF HEMOSTASIS SYSTEM AND THE FATTY ACID COMPOSITION OF THE MITOCHONDRIAL MEMBRANES OF PLATELETS IN CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE

Vladivostok Branch of Far Eastern Scientific Center of Physiology of Respiration - Research Institute of Medical Climatology and Rehabilitation Treatment, Vladivostok, Russia

The aim of study: establish the features of platelet hemostasis system and of the fatty acid (FA) composition of the mitochondrial membranes of platelets in patients with COPD of varying severity. Materials and methods: 48 patients with stable mild and stable moderate COPD were examined. The control group included 29 healthy people, non-smokers, with normal respiratory function. We studied the state of hemostatic system by the level of fibrinogen; platelet morphological parameters - the number of platelets, the mean platelet volume, platelet distribution width, thrombocrit. We studied the erythrocyte sedimentation rate (ESR). Modification of the FA composition of the mitochondrial membranes of platelets was evaluated by gas-liquid chromatography. Results: progression of irregularities in platelet component of hemostasis system, increasing blood coagulation activity by elevation fibrinogen level and ESR; enhancement in deficit saturated FA (14:0, 16:0, 18:0) and polyunsaturated FA of family n-3 (18:3n-3, 20:5n-3, 22:5n-3, 22:6n -3) of mitochondrial membranes of platelets were noted with a worsening of the disease. One of the mechanisms of the change of hemostatic balance and functional activity of platelets is a violation of the FA composition of mitochondrial membranes of platelets. Identified imbalance of the FA composition verifies the changes in the physicochemical properties of subcellular membrane, disruption of the functioning of membrane-bound transport systems, enzymes and receptors, processes of oxidative phosphorylation. Conclusion: the imbalance of the FA composition of the mitochondrial membrane, which is formed under the conditions of chronic respiratory diseases, results in a significant restructuring of architectonic cristae of mitochondria, disturbing thereby the structural and functional properties of platelets and blood clotting.

Key words: platelet, mitochondria, fatty acids

For correspondence: Bocharova N.V., e-mail: NatellaV@inbox.ru

Conflict of interests. The authors are declaring absence of conflict of interests.

Financing. The study had no sponsor support

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) является одной из ведущих причин заболеваемости и смертности в современном обществе и представляет собой значительную экономическую и социальную проблему [1]. Несмотря на систематическое изучение ХОБЛ в нашей стране и за рубежом, многие аспекты патогенеза заболевания остаются недостаточно ясными. Отчасти это связано с отсутствием единой патогенетической концепции, которая могла бы показать иерархию основных факторов развития ХОБЛ. В свете современных представлений определенное значение в патогенезе ХОБЛ придают нарушениям в системе свертывания крови и, в частности, изменениям структурно-функциональных свойств тромбоцитов [2-6]. На фоне патологии респираторной системы отмечается уменьшение количества кровяных пластинок и изменение их морфологических характеристик [3]. При обострении ХОБЛ увеличивается риск развития венозных тромбозов и тромбоэмболии легочной артерии, частота которых составляет около 15%, при этом большинство эпизодов обнаруживаются случайно, а клинически они протекают бессимптомно. Известно, что бронхиальное воспаление, гипоксия и оксидативный стресс у таких больных играют существенную роль в изменении интенсивности внутрисосудистого свертывания крови [2]. Следовательно, тромбоцитам отводится важное значение в реализации патогенетических механизмов бронхолегочных процессов. Однако интерпретация данных различными группами ученых неоднозначна и нередко противоречива. Отсутствует комплексное изучение пула тромбоцитов во взаимосвязи с внутриклеточными процессами кровяных пластинок при ХОБЛ.

Наряду с традиционными функциями тромбоцитов в поддержании агрегатного состояния крови, тромбоцитарные клетки активно участвуют в координации межклеточных взаимодействий, в реакциях иммунного ответа [4]. Кровяные пластинки содержат в своих гранулах субстанции, как активирующие, так и тормозящие активность воспалительного процесса, а также несут на своей поверхности рецепторы к иммуноглобулинам. Исследования последних лет в этой области показали, что ключевую роль в изменении функциональной активности тромбоцитов, в стимуляции реакций свертывания крови и подготовке к процессам тромбооброзования играют митохондрии кровяных пластинок [7, 8]. Цепь последовательных событий, начиная от интенсивного поглощения кальция митохондриями и заканчивая деструкцией митохондриальной мембраны и выходом в цитоплазму кальция, активных форм кислорода способствует сверхактивации процессов свертывания и привлечению к месту тромбооброзования иммунокомпетентных клеток. В свою очередь эффективное функционирование митохондрий тромбоцитов связано с интегральной целостностью их мембранных структурных компонентов. Структурно-функциональное состояние мембраны митохондрии определяют фосфолипиды и входящие в их состав жирные кислоты (ЖК) [9, 10]. Известно, что модификация липидного состава мембран митохондрий влечет за собой изменение работы транспортных систем, ферментов дыхательной цепи, процессов фосфорилирования и биоэнергетики клетки. Основной пул ЖК вовлечен в окислительные энергетические процессы и поддержание мембранного гомеостаза митохондрий [11]. Можно предположить, что в ответ на изменение концентрации и соотношения ЖК происходит реорганизация липидного состава мембраны, которая и детерминирует повышение проницаемости мембраны митохондрии и соответственно нарушение свойств тромбоцитов.

Цель исследования: установить особенности тромбоцитарного звена системы гемостаза и состава жирных кислот (ЖК) мембран митохондрий тромбоцитов у больных хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) разной степени тяжести.

Материалы и методы

В исследование на условиях добровольного информированного согласия были включены 48 больных ХОБЛ стабильного течения легкой и средней степени тяжести (30 мужчин и 18 женщин; средний возраст 62±4 года). Диагностику ХОБЛ осуществляли на основании критериев Глобальной стратегии: диагностика, лечение и профилактика ХОБЛ (GOLD, 2014) [1]. С учетом степени тяжести ХОБЛ сформированы группы наблюдения: 27 человек с легкой степенью тяжести (GOLD I), 21 человек со средней степенью тяжести (GOLD II). Критериями исключения из исследования явилось наличие у пациентов острых инфекционных заболеваний, хронических заболеваний внутренних органов в фазе обострения, хронической сердечной недостаточности в стадии декомпенсации. В контрольную группу вошли 29 практически здоровых лиц, не курящих, с нормальной функцией внешнего дыхания, среднего возраста 37±5 лет. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации «Рекомендации для врачей по биомедицинским исследованиям на людях» (2013). Исследование было одобрено этическим комитетом Владивостокского филиала ДНЦ ФПД - НИИМКВЛ.

Показатели легочной вентиляции определялись с использованием спирометрии (спирограф “FUKUDA”, Япония) с выполнением бронхолитического теста. Анализировали следующие параметры: объем форсированного выдоха за 1-ю секунду (ОФВ1), форсированная жизненная емкость легких (ФЖЕЛ), индекс ОФВ1/ФЖЕЛ исходно и после 400 мкг сальбутамола.

Состояние системы гемостаза оценивали по уровню маркера внутрисосудистого свертывания крови - фибриногена, морфологическим тромбоцитарным параметрам - количество тромбоцитов (PLT), средний объем тромбоцитов (MPV), широта распределения тромбоцитов (PDW), тромбокрит (PCT). Уровень фибриногена определяли с помощью Тех-Фибриноген-теста на полуавтоматическом коагулометре КC1 Amelung, Германия. Параметры тромбоцитов исследовали на автоматическом гематологическом анализаторе MINDRAY BC-3000 Plus, Китай. Исследовали скорость оседания эритроцитов (СОЭ) на анализаторе СОЭ SRT10/II, Австрия.

Тромбоциты для анализа состава жирных кислот выделяли из гепаринизированной крови [12]. Мембраны митохондрий из тромбоцитов получали стандартным методом дифференциального центрифугирования в среде, содержащей сахарозу в концентрации 0,75М, 0,5% раствора бычьего сывороточного альбумина (BSA), 0,01М раствор фосфатного буфера [13].

Экстракцию липидов из мембран митохондрий тромбоцитов осуществляли, используя систему растворителей хлороформ - метанол в соотношении 1:2, затем добавляли по 1 объему хлороформа, метанола и 0,9 % раствора хлористого натрия до полного расслоения фаз. Анализ состава жирных кислот проводили методом газожидкостной хроматографии после их метилирования [14-16]. Метиловые эфиры ЖК получали с помощью транс-метилирования липидов 1% раствором натрия в метаноле и затем 5% НСl в метаноле. Метиловые эфиры экстрагировали гексаном. Гексановый раствор метиловых эфиров ЖК очищали с помощью микротонкослойной хроматографии в бензоле. Зону метиловых эфиров на силикагеле определяли по стандарту или с помощью паров йода. Эфиры элюировали хлороформом, раствор упаривали в вакууме на роторном испарителе (Венгрия). Перерастворенные в гексане метиловые эфиры анализировали на газожидкостном хроматографе Shimadzu GC-2010 (Япония), снабженном пламенно-ионизационным детектором, капиллярной колонкой (0.25 мм х 30 м) с привитой фазой Supelcowax 10. Температура колонки и детектора 210Со, температура испарителя 240Со. Газ-носитель - гелий. Расчет площади хроматографических пиков и обработку результатов проводили на станции Z-Chrom. Идентифицировали метиловые эфиры ЖК по времени удерживания с использованием стандартов и по значениям «углеродных чисел». Результаты выражали в относительных % от общей суммы ЖК.

Для анализа полученных данных использовали прикладную программу «Statistiсa», версия 6,1 (серия 1203С для Windows). Проверку нормальности распределения осуществляли с применением коэффициента Колмогорова-Смирнова. Данные представлены в виде средней (М) и ошибки средней (м). Оценку различий проводили с использованием t-критерия Стьюдента.

Полученные результаты. Оценка морфофункционального статуса тромбоцитов исследуемых групп больных ХОБЛ в стадии ремиссии не выявила отклонений от нормальных значений. В то же время по сравнению с контрольной группой отмечалось увеличение общего количества тромбоцитов (р<0,01) и тенденция к снижению среднего объема тромбоцитов у больных ХОБЛ легкой степени тяжести. При утяжелении заболевания увеличивалась скорость оседания эритроцитов в 3 раза (р<0,001 для обеих групп больных ХОБЛ). Исследование коагуляционных свойств крови показало значительное увеличение уровня фибриногена у пациентов с ХОБЛ относительно группы контроля (р<0,001 для обеих групп больных ХОБЛ). При этом, если у пациентов ХОБЛ легкой степени тяжести концентрация фибриногена была высокой и находилась на верхней границе нормальных значений, то при ХОБЛ средней степени тяжести значение данного параметра превышало показатели нормы (449,6 мг/л). Выявленные изменения в тромбоцитарной системе гемостаза (повышение фибриногена) у больных ХОБЛ в стадии ремиссии свидетельствуют о нарушении коагуляционных свойств крови, приводящему к повышенному тромбообразованию. Причем с утяжелением заболевания отмечалось прогрессирование нарушений гемостаза. Одновременно повышение уровня маркера внутрисосудистого свертывания крови и СОЭ указывают на наличие воспалительного процесса у обследованных пациентов в стадии клинической ремиссии.

Результаты исследования состава жирных кислот мембраны митохондрий тромбоцитов пациентов с хроническими заболеваниями органов дыхания представлены в таблице 2. У пациентов с бронхолегочной патологией наблюдалось уменьшение содержания некоторых насыщенных ЖК (НЖК) в мембране митохондрий тромбоцитов. У больных ХОБЛ не зависимо от степени тяжести отмечалось уменьшение доли миристиновой (14:0), пальмитиновой кислот (16:0). При этом у пациентов ХОБЛ средней степени тяжести также снижался уровень лауриновой кислоты (12:0) относительно группы контроля. Выявленные изменения в содержании насыщенных ЖК в мембране митохондрий тромбоцитов у пациентов с ХОБЛ отразились в уменьшении суммы НЖК.

Оценка количественного состава моноеновых ЖК (МЖК) показала однонаправленные изменения у пациентов ХОБЛ. Установлено снижение уровней 16:1n-9, 16:1n-7, 18:1n-9, 18:1n-7 относительно контрольной группы. Максимальное снижение 16:1n-9 было выявлено в группе пациентов ХОБЛ средней степени тяжести. У больных с ХОБЛ показатель сумма МЖК снижался. При этом различий в суммарном содержании моноеновых ЖК между группами с ХОБЛ выявлено не было.

В исследуемых группах существенные различия были обнаружены среди основных полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) как n-6, так и n-3 семейств. В частности, в мембране митохондрий тромбоцитов пациентов с ХОБЛ выявлены высокие значения уровня линолевой кислоты (18:2n-6) на фоне снижения доли б-линоленовой кислоты (18:3n-3). Причем с утяжелением заболевания дефицит 18:3n-3 усиливался. У лиц с ХОБЛ похожая картина выявлялась и в содержании других ПНЖК n-3 (20:5n-3, 22:5n-3, 22:6n-3). Динамика в уровнях ПНЖК n-6 выражалась значительным повышением доли арахидоновой кислоты (20:4n-6) у всех пациентов с ХОБЛ по сравнению с контрольной группой. Уровень 22:4n-6 повышался только у больных ХОБЛ легкой степени тяжести. Обобщая изменения, выявленные в относительном содержании индивидуальных ПНЖК, можно отметить, что с утяжелением бронхолегочной патологии усугубляется дефицит ПНЖК n-3 на фоне повышения доли некоторых ПНЖК n-6 (20:4n-6). Суммарное значение процентного содержания ПНЖК n-3 в мембране митохондрий у лиц с ХОБЛ было пониженным, тогда как сумма ПНЖК n-6 - повышалась более чем в два раза.

Анализ липидома митохондрий тромбоцитов указывает на модификацию состава ЖК митохондриальных мембран кровяных пластинок при хронических заболеваниях органов дыхания. Изменение структурной составляющей митохондриальной мембраны логичным образом будет влиять на функциональную активность митохондрий и на способность адекватно выполнять присущие ей функции. Причем перераспределение в соотношениях ЖК митохондриального аппарата кровяных пластинок идентифицировалось у всех пациентов с ХОБЛ не зависимо от степени тяжести заболевания. Это свидетельствует о том, что нарушения структурной составляющей органелл тромбоцитов проявляются уже на начальных этапах патогенеза заболевания.

Обсуждение. Совокупность результатов исследования свидетельствуют о нарушении функции тромбоцитарного звена системы гемостаза у лиц с бронхолегочной патологией в стадии ремиссии, повышении коагуляционной активности крови за счет увеличения фибриногена и СОЭ. Одним из механизмов изменения гемостатического баланса и функциональной активности тромбоцитов является модификация состава ЖК мембран митохондрий кровяных пластинок. Оценка состава ЖК мембраны митохондрии у лиц с ХОБЛ позволила выявить основные нарушения в ультраструктуре митохондрий. Показано, что у пациентов с ХОБЛ по мере утяжеления заболевания нарастает дефицит насыщенных ЖК в мембране митохондрий. Как известно для митохондрий основным источником энергии и предпочтительными для окисления субстратами являются короткоцепочечные от 6:0 до 10:0, среднецепочечные 12:0, 14:0 и 16:0 насыщенные жирные кислоты [11]. При недостатке этих жирных кислот митохондрии в качестве субстрата для в-окисления начинают использовать глюкозу. Снижение насыщенности митохондриальной мембраны всегда свидетельствует об энергетическом дефиците клетки в целом [11]. Недостаток субстрата для синтеза АТФ приводит к нарушению процесса окислительного фосфорилирования, активации на его фоне перекисного окисления липидов, фосфолиполиза, что в свою очередь приводит к повреждению мембранной структуры митохондрий и апоптозу клетки [7]. У больных ХОБЛ происходили значительные изменения в содержании ПНЖК n-6 и n-3 в мембранах митохондрий тромбоцитов, характеризующиеся повышением доли ПНЖК n-6 на фоне недостатка ПНЖК n-3. Причем дефицит ПНЖК n-3 нарастал по мере утяжеления заболевания ХОБЛ. Выявленный дисбаланс в составе длинноцепочечных ненасыщенных жирных кислот верифицирует изменение физико-химических свойств субклеточной мембраны, нарушение функционирования мембраносвязанных транспортных систем, ферментов и рецепторов, что детерминирует структурно-функциональную несостоятельность как митохондрии, так и всей клетки в целом. Обеднение митохондриальной мембраны важнейшими структурными компонентами, такими как насыщенные и n-3 полиненасыщенные жирные кислоты делает ее уязвимой к деструкции. Доказано, что именно разрушение митохондриального аппарата тромбоцитов и последующий за этим апоптоз клетки является конечным этапом в сигнальном механизме повышенного тромбообразования [8]. Этот процесс был назван митохондриальный некроз (клеточная смерть) тромбоцитов. Следовательно, изменение ультраструктуры митохондрий, проявляющееся в том числе и в модификации состава ЖК, детерминирует нарушение функции тромбоцитов и системы гемостаза в целом.

В работе [17] показано, что хронические патологические процессы в органах дыхания приводят к изменению функциональной активности митохондрий. Отмечено, что в фазе стабильного течения ХОБЛ отклонения в ферментном статусе митохондрий клеток нередко сохраняются. Как в исследованиях других авторов [18] так и в нашей работе показана прямая между активацией тромбоцитов и степенью тяжести ХОБЛ.

Заключение

Дисбаланс в составе ЖК митохондриальной мембраны, формирующийся в условиях хронических заболеваний органов дыхания, приводит к существенной перестройке архитектоники крист митохондрий, нарушая, тем самым, структурно-функциональные свойства тромбоцитов и процессов свертывания крови. Модификация жирнокислотного состава мембран митохондрий тромбоцитов играет важную роль в механизме нарушения гемостаза крови и формирования ХОБЛ.

Исследование поддержано грантом по программе «Дальний Восток» (проект №15-I-5-013).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование. Исследование проводилось без привлечения спонсорских средств.

Литература / references

1. Глобальная стратегия диагностики, лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (пересмотр 2014 г.) Пер. с англ. под ред. А. С. Белевского. М: Российское респираторное общество; 2014; 80 с.

Global strategy for the diagnosis, treatment and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: 2014 update. Belevskogo A. S., eds. Moscow: Rossiyskoe respiratornoe obshchestvo; 2014; (in Russian)

2. Шелест Е.А., Попова Л.В., Шуганов А.Е., Бокарев И.Н. Интенсивность внутрисосудистого микросвертывания крови при хронической обструктивной болезни легких, атеротромбозе и тромбофилии. Клин. медицина. 2013; 11: 4-7.

Shelest E.А., Popova L.V., Shuganov А.E., Bokarev I.N. Intensivnost' vnutrisosudistogo mikrosvertyvaniya krovi pri khronicheskoj obstruktivnoj bolezni legkikh, aterotromboze i trombofilii. Klin. meditsina. 2013; 11: 4-7.

3. Fimognari F.L., Scarlata S., Conte M.E., Incalzi R.A. Mechanisms of atherothrombosis in chronic obstructive pulmonary disease. Int. J. Chron. Obstruct. Pulmon. Dis. 2008; 3(1): 89-96.

4. Kamaeva E.R. Lipid peroxidation in platelets, vascular-platelet hemostasis in patients with chronic obstructive pulmonary disease: Candidate of Medical Sciences sci. diss. Ufa; 2008 (in Russian).

5. Aibar М., Laborda К., Conget F., Cornudella R. Hypercoagulability state and endotelial injury in stable chronic obstructive pulmonary disease patients. An. Sist. Sanit. Navar. 2010; 33(1): 43-50.

6. Lekka А., Dalamaga M., Triantafilli M., Sotiropoulos G., Poulo D. Correlation of coagulation markers, platelet parameters and respiratory indexes in patients with chronic obstructive pulmonary disease. Haematologica. 2008; 93(s1): 409; 1031.

7. Obydennyy S.I., Sveshnikova A.N., Ataullakhanov F.I., Panteleev M.A. Dynamics of calcium spiking, mitochondrial collapse and phosphatidylserine exposure in platelet subpopulations during activation. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2016; 14 (9): 1867-1881.

8. Sveshnikova А.N., Ataullakhanov F.I., Panteleev M.A. Compartmentalized calcium signaling triggers subpopulation formation upon platelet activation through PAR1. Mol. BioSyst. 2015; 11: 1052-1060.

9. Денисенко Ю.К., Виткина Т.И., Новгородцева Т.П. и др. Спектр жирных кислот мембран митохондрий тромбоцитов больных хроническим необструктивным бронхитом. Бюл. физиол. и патол. дыхания. 2013; 50: 34-38.

Denisenko Yu.K., Vitkina T.I., Novgorodtseva T.P. et al. The range of fatty acids of platelet mitochondrial membranes in patients with chronic nonobstructive bronchitis. Byul. fiziol. i patol. dykhaniya. 2013; 50: 34-38. (in Russian)

10. Денисенко Ю.К., Новгородцева Т.П., Кондратьева Е.В. и др. Морфофункциональное состояние митохондрий клеток крови при бронхиальной астме. Клиническая медицина. 2015; 10: 47-52.

Denisenko Yu.K., Novgorodtseva T.P., Kondrat'eva E.V. et al. Morphofunctional state of blood cell mitochondria in bronchial asthma. Klin. meditsina. 2015; 10: 47-52. (in Russian)

11. Титов В.Н. Функция митохондрий, карнитин, коэнзим-А, жирные кислоты, глюкоза, цикл Рендла и инсулин (лекция). Клиническая лаб. диагностика. 2012; 2: 32-42.

Titov V.N. The function of mitochondria, carnitine, coenzyme A, fatty acids, glucose, the Randle cycle and insulin (lecture). Klin. lab. diagnostika. 2012; 2: 32-42. (in Russian)

12. Клестова В.И., Шабанова Л.И., Рябов Н.В., Ипатов С.Г. Получение чистой фракции тромбоцитов из периферической крови доноров. Гравитационная хирургия крови. Под ред. О.К. Гаврилова. М.: Медицина; 1983; 154-155.

Klestova V.I., Shabanova L.I., Ryabov N.V., Ipatov S.G., Gavrilova O.K. ed. Preparation of platelet pure fraction from peripheral blood of donors. Gravitational Blood Surgery. Moscow: Meditsina; 1983; 154-155. (in Russian)

13. Davis J.T. A technique for the isolation of mitochondria from bovine lymphocytes. Methods in Enzymology. 1967; 10: 114-117.

14. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification. Can. J. Biochem. Physiol. 1959; 37: 911-917.

15. Carreau J.P., Duback J.P. Adaptation of a macroscale method to the microscale for fatty acid methyl transesterification of biological lipid extract. J. Chromatogr. 1978; 151(3): 384-390.

16. Christie W.W. Equivalent chain-lengths of methyl ester derivatives of fatty acids on gas-chromatography - a reappraisal. J. Chromatogr. 1978; 447(2): 305-314.

17. Мурзова О. А., Григанов В. И. Ферментативная активность нейтрофилов и моноцитов у детей, больных бронхиальной астмой. Педиатрия. 2008; 87(4): 38--41.

Murzova O. A., Griganov V. I. The enzymatic activity of neutrophils and monocytes in children with asthma. Pediatriya. 2008; 87(4): 38--41. (in Russian)

18. Линькова Ю. А. Изменения структурно-функциональных свойств тромбоцитов и их коррекция при атопической бронхиальной астме у детей: автореф. дис. Иваново, 2005. 107 с.

Lin'kova Yu. A. Changes in the structural and functional properties of platelets and their correction in children with atopic asthma: author's abstract. Ivanovo, 2005. 107. (in Russian)

Приложение

тромбоцит гемостаз жирный кислота

Таблица 1

Показатели тромбоцитарного звена системы гемостаза пациентов с ХОБЛ (М+m)

Примечание: (*) статистическая значимость различий относительно контрольной группы; * - р<0,01; ** - р<0,001. (+) - статистическая значимость различий относительно пациентов с ХОБЛ легкой степени тяжести. + - р<0,01; ++ - р<0,001.

Таблица 2

Состав жирных кислот мембран митохондрий тромбоцитов у пациентов с ХОБЛ (М+m)

Примечание: (*) статистическая значимость различий относительно контрольной группы; * - р<0,01; ** - р<0,001. (+) - статистическая значимость различий относительно пациентов с ХОБЛ легкой степени тяжести. + - р<0,01; ++ - р<0,001.

Сведения об авторах

Денисенко Ю.К. Denisenko Y.K., д.б.н., заведующая лабораторией биомедицинских исследований Владивостокского филиала ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» ? Научно-исследовательского института медицинской климатологии и восстановительного лечения, Владивосток, ул. Русская 73г, e-mail: karaman@inbox.ru;

Новгородцева Т.П. Novgorodtseva T.P., д.б.н., профессор, заместитель директора по НИР Владивостокского филиала ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» ? Научно-исследовательского института медицинской климатологии и восстановительного лечения, Владивосток, ул. Русская 73г, e-mail: nauka@niivl.ru

Бочарова Н.В. Bocharova N.V., к.б.н., младший научный сотрудник лаборатории биомедицинских исследований Владивостокского филиала ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» ? Научно-исследовательского института медицинской климатологии и восстановительного лечения, Владивосток, ул. Русская 73г, e-mail: NatellaV@inbox.ru

Размещено на Allbest.ru