Размещено на http://www.allbest.ru/

Исследование

на тему

"Изучение свертываемости крови под действием кислотных агентов с последующим лизисом тромба"

Выполнили:

Новиков Никита Андреевич

Перфилова Ксения Алексеевна

Москва 2018

Содержание

• Аннотация
• Введение
• 1. Обзор литературы
• 2. Материалы и методы
• 2.1 Кровь, ее функции и состав
• 2.2 Типы тромба
• 2.3 Центрифугирование крови и анализ результатов
• 2.4 Создание тромба в лабораторных условиях, его изучение и лизис
• 3. Результаты
• 4. Анализ полученных результатов
• Выводы
• Список литературы
• Приложение 1
• Приложение 2


Аннотация

Данная исследовательская работа направленна на изучение свертываемости крови и процесса образования тромба. Чтобы лучше изучить данные процессы, мы провели два эксперимента с образцами крови. Первый эксперимент заключался в том, чтобы на практике разобраться, что такое кровь, и из чего она состоит. Было проведено центрифугирование для разделения плазмы и форменных элементов по плотности.

Чтобы изучить тромб и тромбообразование кровь была помещена в слабокислотную среду, что привело к коагуляции крови. Таким образом, мы создали тромб искусственным путем. После чего в пробирку с образцом крови был добавлен хлорид натрия для лизиса созданного тромба.

В результате данного исследования был создать тромб, изучен процесс свертываемости крови, а также определены условия лизиса тромба.

Введение

Ежегодно тысячи людей страдают от тромбоза. Это заболевание, при котором происходит формирование сгустков крови внутри кровеносных сосудов. Эти сгустки препятствуют свободному потоку крови и вызывают негативные последствия. Если тромб становится настолько большим, что перекрывает больше 70% площади поперечного сечения просвета сосуда, приток крови снижается и наблюдается гипоксия. В итоге это может привести к летальному исходу. Использование антикоагулянтов широкого спектра действия порой связано с серьезными экономическими затратами.

Актуальность нашего исследования состоит в том, чтоб изучить данную проблему и найти возможные пути экономичного решения.

Цель исследования - проведение лизиса тромба в лабораторных условиях, определение условий лизиса тромба. На основе полученных данных предложить способы решения данной проблемы.

Объект исследования - тромб, свертываемость крови.

Предмет исследования - образование тромба, условия его рассасывания.

Гипотеза исследования заключается в том, что при повышении кислотности среды произойдет свертывание частиц крови, а при добавлении веществ антикоагулянтов будет протекать лизис тромба.

Задачи:

1. Центрифугирование крови, разделение на фракции.

2. Анализ результата

3. Введение в образец крови гепарина, в качестве антикоагулянта.

4. Подобрать концентрацию кислоты для введения в образец.

5. Наблюдение за происходящей реакцией.

6. Введение средства для рассасывания тромбов.

7. Выдержка в течении нескольких часов.

8. Анализ результата.

Методы исследования - физико-химические методы анализа, наблюдение, центрифугирование, изучение соответствующей литературы. Данное исследование будет проходить на базе Первого Московского образовательного комплекса.

1. Обзор литературы

До недавнего времени при возникновении тромбоза вопрос о выборе антикоагулянтов решался довольно-таки просто. В неотложных ситуациях назначался препарат гепаринового ряда, при длительном применении - антагонисты витамина К. В последнее десятилетие изучение тромбоза и поиск новых антикоагулянтов стало важной задачей. Было найдено и синтезировано множество различных антикоагулянтов для различного вида тромбоза. Об этом пишет М.В. Котельников в своей книге "Антикоагулянтная терапия в профилактике и лечении тромбозов: международные рекомендации и реальная клиническая практика" [1]. В вопросах лечения тромбоза одним из ключевых этапов является своевременная диагностика и обнаружение небольших тромбов[2]. Небольшие тромбы подвержены влиянию не сильных препаратов и, соответственно, намного быстрее рассасываются. Такие тромбы не причиняют дискомфорта человеку. Важным условием здесь является вовремя обнаружить тромб и воздействовать на него препаратом. Именно в таком случае можно использовать локальный тромболизис. Исследование показало, что локальный тромболизис является высокоэффективным и малотравматичным методом лечения больных [3]. Соответственно, при проведении локального тромболизиса необходимо подобрать подходящий препарат. Выбор препарата будет обусловлен типом тромба, местом возникновения, его размерами. Таким образом, в данной работы мы рассматриваем условия локального тромболизиса, как наиболее перспективного метода лечения тромбоза.

2. Материалы и методы

Для проведения работы необходимо изучить теоретические аспекты тромбоза и лизиса тромбов. При проведении практической части использовались такие методы, как наблюдение, эксперимент, анализ.

2.1 Кровь, ее функции и состав

Кровь - это жидкая ткань, состоящая из плазмы и взвешенных в ней кровяных клеток. Кровь заключена в систему сосудов и находится в состоянии непрерывного движения. Кровь выполняет важнейшие функции в организме человека. Она транспортирует кислород из органов дыхания к тканям и углекислый газ в обратном направлении. Также с кровью переносятся питательные вещества (глюкоза, низкомолекулярные пептиды, аминокислоты, фруктоза, витамины, соли) от пищеварительного тракта к клеткам организма. Экскреторная функция крови проявляется в удалении ненужных и даже вредных для организма конечных продуктов метаболизма, избытка воды, минеральных и органических веществ, поступивших с пищей. В результате непрерывного движения и большой теплоемкости кровь способствует перераспределению тепла по организму и поддержанию температуры тела. Защищают организм от инфекций и повреждений лейкоциты, содержащиеся в крови. В процессе фагоцитоза они захватывают и переваривают твердые частицы, чужеродные для организма. Гомеостатическая функция заключается в участии и в поддержании постоянства внутренней среды организма.

Кровь состоит из плазмы и находящихся в ней в виде взвеси особых кровяных клеток. В среднем во взрослом человеке 4 -5 литров крови (6 - 7 % от массы тела). Половину всего объема занимает плазма, остальное приходится на форменные элементы: эритроциты, лейкоциты, тромбоциты.

Плазма - жидкая составляющая светло-желтого цвета, который обусловлен незначительным количеством желчного пигмента и других окрашенных частиц. Примерно на 90 % она состоит из воды и приблизительно на 10% из органических веществ и минералов, растворенных в ней. Ее состав не отличается постоянством и меняется в зависимости от принятой пищи, количества воды и солей.

Эритроциты - самые многочисленные красные клетки, которые придают крови красный цвет за счет находящегося в них гемоглобина. Они имеют вид дисков, двояковогнутых в центре. Главная функция эритроцитов - доставка кислорода из легких в ткани организма.

Лейкоциты - бесцветные клетки крови или белые тельца, защищающие организм от внешних инфекций в процессе фагоцитоза.

Тромбоциты - небольшие безъядерные бесцветные пластинки, которые представляют собой фрагменты клеток мегакариоцитов, находящихся в костном мозге. Тромбоциты выделяют вещества, принимающие участие в цепи реакций, которые запускаются при повреждении кровяного сосуда. В результате белок фибриноген превращается в нерастворимые нити фибрина, в которых запутываются элементы крови и образуется тромб.

2.2 Типы тромба

Тромб - сгусток крови в просвете кровеносного сосуда или в полости сердца, образующийся в результате активации системы свертывания крови и возникающий при повреждении сосуда. Образование тромбов направлено, прежде всего, на остановку кровотечений [4]. При самых незначительных травмах, царапинах, порезах в зоне повреждения ткани и стенок сосудов неизбежно происходит активация свертывания крови, чтобы предотвратить кровотечение. Для сохранения жидкого состояния крови существует противосвертывающая система. Посредством различных ферментов, она расщепляет фрагменты уже образованных тромботических масс, фибриновые комплексы и клеточные агрегаты.

Существует несколько типов тромбов: белый, красный и смешанный тромбы. кровь свертываемость тромб терапия

Белый тромб, состоящий из тромбоцитов, фибрина и лейкоцитов, образуется медленно, при быстром кровотоке, как правило, в артериях, между трабекулами эндокарда, на створках клапанов сердца при эндокардитах.

Красный тромб, в состав которого входят тромбоциты, фибрин и эритроциты, возникает быстро в сосудах с медленным током крови, в связи с чем встречается обычно в венах.

Смешанный тромб включает в себя тромбоциты, фибрин, эритроциты, лейкоциты и встречается в любых отделах кровеносного русла, в том числе и полостях сердца.

При разных заболеваниях системы кровообращения, патологии сосудистой стенки, гемостаза, нарушениях обменных процессов возникают предпосылки к тромбообразованию, тогда сгустки можно найти в венах, артериях и в полостях сердца.

Тромбы, находясь в просвете сосуда, затрудняют ток крови, а это способствует гипоксическим и ишемическим нарушениям в тканях. Выделяют несколько этапов образования тромба (приложение №2):

1. Агглютинация тромбоцитов. Выделение тромбоксана A2, обладающего сосудосуживающим действием и способствующий замедлению кровотока.

2. Коагуляция фибриногена, его трансформация в фибрин, формирование нерастворимого фибринового свертка, захватывающего форменные элементы и компоненты плазмы крови.

3. Агглютинация эритроцитов.

4. Преципитация плазменных белков.

Если тромб закрывает более 90% сосудистого просвета, то возможны инфаркты с некрозом клеток органа или ткани.

2.3 Центрифугирование крови и анализ результатов

Искусственное создание тромба происходит при изменении кислотности среды.

Методы: наблюдение, эксперимент, анализ.

Материалы: кровь, гепарин, раствор серной кислоты, хлорид натрия.

Оборудование: пробирка, ph-метр, колба, предметное стекло, микроскоп.

Ход эксперимента:

1) Добавление в пробирки с кровью гепарина для предотвращения коагуляции.

2) Приготовление раствора серной кислоты с ph~6,8.

3) Введение в пробирки приготовленного раствора для создания в крови слабокислой среды и образования тромба.

4) Через 20 минут после введения раствора в кровь невооруженным глазом наблюдалось свертывание крови.

5) Анализ скоагулированной крови под микроскопом.

6) Приготовление стандартного 0,9% раствора хлорида натрия.

7) Введение физраствора в пробирки со скоагулировавшей кровью.

8) Анализ полученного результата под микроскопом.

9) Сравнение полученного образца крови после лизиса, с образцом крови до введения кислоты.

3. Результаты

На снимках представлены результаты практической работы

1) Центрифугирование

2) Кровь до образования тромба.

3) Тромб

4) Кровь после проведения лизиса

4. Анализ полученных результатов

1. При центрифугировании кровь распределилась, согласно плотность, на плазму, обогащенную тромбоцитами, лейкоциты и эритроциты. Плазма занимает около 50 % общего объема, эритроциты 35 - 40 % общего объема, а лейкоциты примерно 10 - 15 %. - приложение №1.

2. Кровь имеет phсреды = 7,36. После изменения ph среды крови на слабокислую, под микроскопом видны образовавшиеся сгустки эритроцитов, и соединяющие их нити фибрина. В дальнейшем планируется провести образование тромба в щелочной среде.

3. При сравнении образца скоагулировавшей крови с образцом обычной крови под микроскопом видно, что искусственным путем удалось получить тромб.

4. При введении раствора хлорида натрия с концентрацией 0,9% происходит рассасывание тромба и возвращения крови к нормальному состоянию - лизис тромба.

5. Наблюдаемое явление происходит за счет осмоса частиц хлорида натрия в тромб.

6. При рассмотрении образца крови под микроскопом видно, что произошел распад фибриновых нитей, расщепление кровяных сгустков и возращение крови в нормальное состояние.

7. При сравнении образцов крови, видим, что кровь практически не отличается от образца чистой крови.

8. Определены следующие условия лизиса тромба: введение необходимого количества хлорида натрия и в заданной концентрации, выдержка в течении 1-2 ч. Данные рекомендации подойдут для влияния на небольшие тромбы при проведении локального тромболизиса.

Выводы

1) Для получения тромба в лабораторных условиях необходимо отклонить кислотность среды с нормальной на более кислую.

2) В образованном тромбе под микроскопом чётко видны структурные образования, коагуляция и нити фибрина.

3) В результате опыта, получилось осуществить лизис тромба методом введения физического раствора хлорида натрия с концентрацией 0,9%.

4) Условия локального лизиса тромба - введение хлорида натрия и выдержка в течении нескольких часов.

5) Данные результаты возможно использовать при изучении тромбоза в лабораторных условиях, постановки эксперимента и т.д.

6) Использование хлорида натрия возможно для осуществления локального тромболизиса, при условии соблюдения определенного размера тромба. Для тромбов большого размера необходимо введение антикоагулянтов.

7) Данный метод является наиболее экономически выгодным для лечения небольших тромбов.

8) Для использования человеком данной методики необходимы глобальные клинические исследования и анализ результатов.

Список литературы

1. Котельников М.В. - Рекомендации для лечения больных "Антикоагулянтная терапия в профилактике и лечении тромбозов: международные рекомендации и реальная клиническая практика", 2012

2. Ю.Л. Шевченко, Ю.М. Стойко, М.Н. Замятин, В.А. Батрашов, В.Г. Гудымович, И.В. Лемаева, А.В. Воробьев - "Диагностика и лечение тромбоза глубоких вен", Альманах клинической медицины, 2006

3. А.К. Гадеев, РК. Джорджикия, В.А. Луканихин, Л.Г Миндубаев, РА. Бредихин, М.К. Михайлов - "Локальный тромболизис при тромбозах шунтов и протезов артерий нижних конечностей", 2013 / Вестник современной клинической медицины, г. Казань.

4. Пантелеев М.А., Атауллаханов Ф.И. -"Свертывание крови: биохимические основы", 2008 / Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика

5. Анатомия человека В 2 т. Под ред. Сапина М.Р. 5-е изд., перераб. и доп. - М.: 2001. - Т.1 - 640с., Т.2 - 640с.

Приложение 1

Приложение 2

Размещено на Allbest.ru