Изучение наносубстанций с магнитоуправляемыми свойствами в биотесте in vitro

Размещено на http://www.allbest.ru/

Изучение наносубстанций с магнитоуправляемыми свойствами в биотесте in vitro

Калениченко А.С., Малоштан Л.Н., Левитин Е.Я., Чан Т.М.

Национальный фармацевтический университет

61002, г. Харьков, ул. Пушкинская, 53, тел/факс (0572) 47-01-64

Известен целый ряд магнитных лекарственных препаратов, таких как магнитные жидкости, магнитореологические суспензии, магнитные микрокапсулы, пластыри, суппозитории [1]. Магнитным наполнителем этих препаратов являются высокодисперсные частицы магнитного материала, чаще ферритов различного состава [2].

Широкое внедрение в эксперимент альтернативных методов исследования, в том числе и культуральных клеток, дает возможность не использовать животных в экспериментальных исследованиях.

С помощью клеточных объектов, высокочувствительных к действию малых количеств исследуемых веществ, можно изучать их эффективность и цитотоксичность.

В экспериментальных исследованиях наиболее часто для определения токсической активности лекарственных средств и нанообъектов используется модифицированный метод Шрека [5]. Согласно этому методу используют нативные клетки красного костного мозга крыс, которые получают путем вымывания физиологическим раствором на холоду. В начале эксперимента растворы, которые исследуются с помощью дозатора помещают в планшетку и раститровуют, уменьшая дозы в 2, 4, 16, 64 раза. Затем вносят равные объемы клеточной суспензии красного костного мозга крыс. Контроль цитотоксического эффекта исследуемых средств, проводят через 15, 30, 60 и 90 минут методом световой микроскопии.

Учитывая, что образцы магнитных наносубстанций имеют густую консистенцию черного цвета и не растворяются в физиологическом растворе, для решения этой проблемы образец магнитной наносубстанции, подвергают внешнему воздействию поля постоянного магнита в течение 2 - 20 минут до расслоения прозрачной и непрозрачной фаз.

Расслаивания образцов магнитных наносубстанций и клеточной суспензии красного костного мозга крыс с помощью постоянного магнита основано на особых магнитных свойствах магнитных лекарственных средств. Время, необходимое для расслаивания образцов магнитных лекарственных средств и клеточной суспензии красного костного мозга крыс с помощью постоянного магнита, определяется экспериментально и зависит от магнитных характеристик постоянного магнита и магнитных лекарственных средств.

В Проблемной лаборатории морфофункциональных исследований НФаУ с помощью биотестов клеток костного мозга in vitro исследовались следующие образцы:

№ 1 - комплексное магнитоуправляемое рентгеноконтрастное средство на основе синтезированных частиц барий гексаферрита, модифицированных р-ром пектина в препарате "Триомбраст";

№ 2 - система частиц синтезированного барий гексаферрита [7]

№ 3 - препарат "Триомбраст" (ОАО Фармак, Украина) [8]

№ 4 - пектин (ГОСТ 29186-91) [9]

Клеточную суспензию красного костного мозга наслаивали на эти образцы и через 15, 30, 60 и 90 минут, планшетки ставили на постоянный магнит Н35В-М, который имел форму призмы размером 50 ммЧ30 ммЧ10 мм.

Контроль цитотоксического эффекта проводили методом световой микроскопии. Полученные экспериментальные результаты статистически обрабатывали с помощью программы Statistica 6,0 for Windows для ПК.

Анализ полученных результатов позволил сделать выводы:

1. Все исследуемые образцы не проявили цитотоксического эффекта.

2. Количество клеток, которые окрасили в образцах № 2, № 4 были на уровне контроля в зависимости от времени контакта с клетками.

3. Полученные результаты при исследовании образцов № 1 и № 3 свидетельствуют в пользу цитопротективного действия последних на клетки красного костного мозга крыс. В контрольных пробах, где клетки были суспендированы в физиологическом растворе, в зависимости от времени контакта наблюдалось увеличение поврежденных клеток: через 15 мин. - 2,4 ± 0,3, через 30 мин. - 3,5 ± 0,5, через 60 мин. - 5,1 ± 0,8, а через 90 мин. - 6,7 ± 0,7. В то же время клетки, которые были суспендированы в исследованных образцах № 1 и № 3, оставались невредимыми в течение 30 минут, и только через 60 минут биоконтакта были зафиксированы клетки, которые повредились.

Таким образом, исследуемые образцы проявляют цитопротекторные свойства, не оказывая повреждающего действия в опытах in vitro. Для уточнения эффективности действия данных наносубстанций необходимо провести исследования их биопроницаемости.

магнитный лекарственный наносубстанция биотест

Литература

1. Wilfried A. Magnetism in medicine / А. Wilfried, W. Andrд, H. Nowak. - Berlin: Wiley-VCH, 2006. - Р.320-331.

2. Беликов В.Г. Получение и медико-биологическое использование магнитных полей и носителей / В.Г. Беликов, А.Г. Курегян // Хим.-фарм. журн. - 2001. - Т.35, № 2. - С. 27-34.

3. Blaauboer B.J. Toxicodynamic modelling and the interpretation of in vitro toxicity data. / / Toxicology Letters - 2001 - Vol. 120 - P. 117 -123.

4. Малышева М.В., Р.А.Рязанова. Клеточные культуры - модельная тест-система в токсиколого-гигиенических исследованиях. / / Тезисы докладов. 1-ый съезд токсикологов России 17-20 ноября 1998г. / Под ред. проф. Б.А.Курляндского. - М.-1998. - С. 297.

5. Маркова В.М. Модификация метода Шрека для определения антитоксической активности препаратов и вновь синтезированных соединений // Тез. Докл. III сьезда фармацевтов Туркменской ССР. - Ашхабад, 1987. - С. 225226.

6. Пат. № 90577 Україна, МПК (2009) А61К 49/04. Магнітокерований рентгеноконтрастний засіб / Є.Я. Левiтiн, А.О. Коваль, Т.О. Онопрiєнко, І.О. Ведерникова, О.Л. Алтухов; НФаУ. - Заявл. 28.07.2008; опубл. 11.05.2010, Бюл. № 9.

7. Левитин Е.Я., Коваль А.А., Цихановская И.В. и др. Изучение реакции получения гексаферрита бария - основного компонента магнитных коллоидов для фармацевтической промышленности // Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. - М.: ЗГМУ. - 2006. - Вып. ХV, Т.1. - С. 161-166.

8. Компендиум. Лекарственные препараты 2007 / Под ред. В.Н. Коваленко, А.П. Викторова. - К.: МОРИОН, 2007. - Т.2. - С. С-158.

9. Лазарева Е.Б., Меньшиков Д.Д. Опыт и перспективы использования пектиновая в лечебной практике // Антибиотики и химиотерапия. - 1999. - № 2. - С. 37-40.

10. Теория вероятностей и статистические методы обработки результатов наблюдений / Б.В. Горбуненко, Ф.Г. Дягилева, Г.В. Жиронкина и др.. - М.: Изд-во НФаУ: Золотые страницы, 2002. - С. 95-100.

11. Пат. 66526 Україна, МПК А61N2/06 (2006.01), А61N 2/12, (2006.01), G01N 33/15 (2006/01) Спосіб визначення цитотоксичної дії лікарських засобів з магнітокерованими властивостями / Коваль А.О., Левітін Є.Я., Малоштан Л.М. (Україна); Нац. Фарм. унiверситет. - № u 2011 07008; Заявл. 03.06.2011; Опубл. 10.01.2012, Бюл.№1. - 8c.

Размещено на Allbest.ru