Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Разработка технологических основ получения ферментированных напитков на основе растительных экстрактов

Введение

чайный гриб ферментированный лекарственный

В наше время увеличивается тенденция употребления натуральных продуктов. Данный сегмент продуктового ассортимента способствует сохранению здоровья и профилактике заболеваний, обусловленных неполноценным и несбалансированным питанием. Поэтому разработка технологий производства напитков на натуральной основе, обогащенных дополнительными пищевыми ингредиентами, является перспективным направлением. Симбиотическая культура Medusomyces gisevii может быть использована в качестве продуцента для получения подобных напитков, которые могут стать альтернативой сладким газированным напиткам.

Medusomyces gisevii - также в быту просто «чайный гриб» - симбиоз дрожжей и уксуснокислых бактерий. Штаммы микроорганизмов, составляющие тело «гриба», могут меняться в зависимости от места происхождения. Гриб представляет собой толстую слоистую слизистую плёнку, плавающую на поверхности жидкой питательной среды (сладкого чая, сока); состоит из культуры находящихся в симбиотических отношениях микроорганизмов: дрожжеподобных грибов и бактерий. Дрожжи сбраживают сахар с образованием спирта и углекислоты, а бактерии окисляют этиловый спирт в уксусную кислоту. Жидкость превращается в кисло-сладкий слегка газированный напиток - «чайный квас».

Мелисса лекарственная (лат. Melissaofficinalis) - многолетнее эфиромасличное травянистое растение, вид рода Мелисса (Melissa) семейства Яснотковые (Lamiaceae). Мелисса лекарственная более 2000 лет успешно используется в народной и научной медицине многих стран мира. Широкий спектр терапевтического действия препаратов мелиссы лекарственной обусловлен содержанием различных биологически активных веществ. Данной характеристикой обусловлен выбор именно этого растения, который разнообразит вкус «чайного кваса», лимонно мятными нотками.

Целью данной работы является разработка технологических основ получения ферментированных напитков на основе растительных экстрактов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести маркетинговое исследование рынка безалкогольных напитков г. Бийска

2. Изучить динамику кислотных показателей в процессе его ферментации.

3. Изучить процесс накопления витамина С при ферментации чайным грибом на экстракте мелиссы.

4. Определить количество сахаров потребляемых чайным грибом.

5. Изучить микробиологические показатели: изменение массы гриба и накопления дрожжевых клеток.

6. Определить органолептические показатели в готовом продукте.

7. Разработать аппаратурно-технологическую схему производства напитка.

8. Рассчитать себестоимость продукта по сырью.

1. Аналитический обзор

1.1 Ферментированные напитки

Современные напитки сложно назвать полезными для здоровья - чай, кофе, газированные и алкогольные напитки и даже фруктовые соки - всех их стоит избегать, как содержащие кофеин, концентрированные сахара, либо алкоголь в большом количестве. Чаще всего ферментированные напитки содержат разбавленные соки, семена, орехи и йогурт и все их полезные свойства усиливаются процессом лактоферментации, что делает более доступными микроэлементы и обогащает ЖКТ молочной кислотой и лактобактериями. Более насыщенные напитки из зерен и орехов можно рассматривать как еду, остальные же скорее как освежающие напитки и напитки - помощники пищеварению. возможно, что любовь к алкогольным и газированным напиткам восходит к древней родовой памяти о лактоферментированных напитках, которые и сейчас еще можно найти в кухнях традиционных сообществ. Такие напитки дают силы уставшему телу, поставляя ему ионы минералов, которые теряются с потом, и способствуют более легкому и полному усвоению пищи благодаря лактобактериям, молочной кислоте и ферментам (энзимам) [1].

Обзор народных напитков разных этносов показывает, что ферментация зерен и фруктов для приготовления освежающих и полезных напитков практически повсеместна. Обычно такие напитки слегка алкогольны, из-за ферментации, в результате которой получается алкоголь (действие дрожжей на сахар) и молочная кислота (действие лактобактерий на сахар) [1].

И современные безалкогольные и алкогольные напитки - и даже простая вода - не могут сравниться с этими целебными напитками. Принимаемые с едой они способствуют легкому и полному перевариванию пищи, принимаемые при физических нагрузках они способстуют подъему сил, заменяя потерянные с потом ионы минералов и тем самым обновляя резервы тела [1].

1.2 Чайный гриб. Описание

Medusomycesgisevi, также в быту просто «гриб» - симбиоз дрожжей и уксуснокислых бактерий. Медузомицет выглядит как толстая плёнка бело-жёлто-коричнево-розового цвета, плавающая на поверхности питательной жидкости - настоя сладкого чая.

Исследователи доказали, что чайный гриб не потребляет ароматические, дубильные и другие вещества, но чувствителен к их отсутствию. С помощью кофеина в чае, медузомицет стимулирует производство целлюлозных волокон, так же при использовании других настоев, он не синтезирует аскорбиновую кислоту, необходимую для его жизнедеятельности [2].

Штаммы микроорганизмов, составляющие тело «гриба», могут меняться в зависимости от места происхождения. Гриб представляет собой толстую слоистую слизистую плёнку, плавающую на поверхности жидкой питательной среды (сладкого чая, сока); состоит из культуры находящихся в симбиотических отношениях микроорганизмов: дрожжеподобных грибов (Saccharomycesludwigii, Saccharomycescerevisiae, Brettanomycesbruxellensis, Candidastellata, Schizosaccharomycespombe, Torulasporadelbrueckii, Zygosaccharomycesbailii и других) и бактерий (Acetobacterxylinum или другие виды рода Acetobacter). Л. Курсанов, предложивший название Medusomycesgisevi, обнаружил в них дрожжи Torula (Candidautilis) и уксуснокислые бактерии (Вacteriumxulinumxulinoides) [2].

Дрожжи медузомицета сбраживают сахар с образованием спирта и углекислоты, а бактерии переводят этиловый спирт в уксусную кислоту. Напиток получается кисло-сладкий слегка газированный. Согласно профессору Херману Сигварту, настой чайного гриба на меду содержит следы алкоголя, уксусной кислоты, большие количества глюконовой кислоты, холин и другие вещества[2].

Чайный гриб заполняет всю поверхность питательной среды. Он может достигать массы 100 кг в промышленных масштабах. Гриб после замены среды может некоторое время не подниматься на поверхность, это говорит о нарушении его жизнедеятельности заменом раствора и мойки оборудования. Полная замена среды полностью противопоказана.

Основными компонентами настоя медузомицета на сладком чёрном чае являются глюконовая и койевая кислоты, но он также содержит молочную, уксусную и угольную кислоты, (возможно, также лимонную и яблочную), сахара, кофеин, этанол до 2,5%, витамины (группы В, C, D, PP), различные ароматические вещества и ферменты[2].

Характеристика дрожжей

Не имея таксономического значения, термин «дрожжи» используется для обозначения микроорганизмов, относящихся к царству грибов и имеющих преимущественно одноклеточное строение. Принято считать, что дрожжи в процессе эволюции утратили способность к образованию мицелия и длинных нитей - гифов, характерных для других грибов (в том числе плесеней), что связано с их переходом к обитанию в богатых органическими веществами жидких и полужидких субстратах. Науке известны дрожжи, способные к формированию ложного мицелия. Современные молекулярно-генетические исследования пока не позволяют внести ясность в вопрос степени взаимосвязи дрожжей с другими грибами [3].

Классификация и идентификация дрожжей

Описано около 1500 видов дрожжей, относящихся к базидиомицетам и аскомицетам. К признакам классификации дрожжей относят фенотипические и биохимические свойства: способы бесполого и полового размножения, морфологию клеток, способность к утилизации различных азот и углеродсодержащих соединений, способность к образованию псевдо гифов. Трудоемкость, длительность, неточность результата являются недостатками традиционных методов исследований дрожжей.

Молекулярно-генетические методы используются для точной идентификации микроорганизмов. На начальном этапе определяют соотношение гуанина и цитозина в ядерной ДНК, существенно отличающееся у аскомицетных (28 - 50 моль%) и базидиомицетных грибов (50 - 70 моль%). Значительно более надежный современный метод идентификации дрожжей - это определение структуры ядерных и митохондриальных генов (например, 18S и 26S р-ДНК), но, к сожалению, провести такие исследования в каждой лаборатории невозможно[3].

Разрабатываются более доступные, ускоренные методы, в их числе и основанные на чипах системы и диагностические зонды. Методы, основанные на ПЦР (полимеразной цепной реакции: RFLP - определение полиморфизма длины фрагментов рестрикции, снятие «отпечатков пальцев» RAPD - ПЦР полиморфной ДНК, амплифицированной случайным образом, ПЦР микросателлитов, AFPL - определение полиморфизма длины амплифицированных фрагментов), дают возможность дифференцировать отдельные штаммы дрожжей и установить источник их попадания.

Микологи отмечают, что таксономия дрожжей постоянно меняется и находится в неопределенном состоянии. Идентификацию видов дрожжей и анализ информации затрудняет большое количество синонимов, обозначающих один и тот же вид[4].

Так, значительно хорошо изученные Candidakefyr - это то же самое, что и Candidapseudotropicalis, Saccharomyceskefyr, Saccharomycesfragrans, Candidapseudotropicalisvar. lactosa и другие, а молочные дрожжи Kluyveromycesmarxianus (геном впервые секвенирован в 2006 году) в разных научных литературных источниках называются Kluyveromyceslactis, Saccharomyceslactis, Zygosaccharomyceslactis и другими (всего около 20 терминов) [3].

В лаборатории молекулярной генетики, таксономии и экологии дрожжей ФГУП НИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов была выполнена работа, посвященная геносистематике дрожжей рода Kluyveromyces, в которой было показано, что вид К. marxianus включает три дивергентные популяции: молочные космополитные, эндемичные и природные дрожжи и не является гомогенным.

Строение и размножение дрожжей

Дрожжи, как и все грибы, имеют эукариотическое строение клетки с митохондриями, четко выделенным ядром, комплексом Гольджи, эндоплазматической сетью и 80S рибосомами, которые хорошо различимы при наблюдении под электронным микроскопом. Использование светового микроскопа (увеличение 90x15) позволяет хорошо рассмотреть крупные (диаметром 5 - 10 мкм, но размеры могут варьировать от 2 до 30 мкм) овальные или круглые неподвижные клетки, имеющие толстую клеточную стенку и неоднородный состав.

Наблюдать в клетках включения жировых капель, волютина и гранулы гликогена позволяет применение специальных методов окраски препаратов. Принято считать, что дрожжи по Граму окрашиваются положительно, капсул не образуют [3].

Почкование (полярное на широком или узком основании, биполярное, мульти латеральное) - основной тип вегетативного размножения дрожжей, однако у некоторых видов наблюдается равномерное деление. Аскоспоры разнообразной формы образуют аскомицетные дрожжи при половом размножении (сферической с ровной и неровной поверхностью, сатурновидные, шляповидные, игольчатые, удлиненные с отростками и др.

Для практического применения важны продукты вторичного метаболизма дрожжей, выделяемые в малых количествах в среду: сивушные масла, ацетоин (ацетилметилкарбинол), диацетил, масляный альдегид, изоамиловый спирт, диметилсульфид и др. Именно от них зависят органолептические свойства полученных с помощью дрожжей продуктов [4].

Saccharomyces cerevisiae - вид одноклеточных микроскопических (5-10 мкм в диаметре) грибков (дрожжей) из класса сахаромицетов, широко используемый в производстве алкогольной и хлебопекарнойпродукции, а также в научных исследованиях.

Вызывают помутнение жидкости. По окончании брожения среда становится более прозрачным, дрожжи оседают на дно, образуя плотный осадок желтовато-белого цвета, отделяется при сильном взбалтывании комками. Пленка на поверхности среды не развивается [5].

Уксуснокислые бактерии

Acetobacteraceae - семейство бактерий из типа протеобактерий, которые получают энергию, окисляя этанол до уксусной кислоты. Поэтому они часто развиваются вслед за дрожжами, используя продукт спиртового брожения как субстрат для роста. Это грамотрицательные аэробные палочковидные бактерии, слабо подвижные за счёт полярно расположенных жгутиков или неподвижные. Довольно требовательны к субстратам для роста. Почти все виды нуждаются в отдельных витаминах, в первую очередь в пантотеновой кислоте, однако есть формы, способные к синтезу всех факторов роста. Для производства уксуса применяются в основном представители двух родов - Gluconobacter и Acetobacter.

Acetobacter - род бактерий из семейства Acetobacteraceae класса альфа-протобактерий, характеризующийся умением окислять этанол до уксусной кислоты, ацетат и лактат - до CO₂ и H₂O [6].

Acetobacter имеет определённое значение для коммерции поскольку:

* Используется для производства уксуса;

* Может портить вина, производя уксусную кислоту или этилацетат;

* Используется для интенсивного подкисления пива в ходе долгого периода созревания при производстве традиционных фламандских кислых элей.

Род Gluconobacter

Некоторые уксуснокислые бактерии не способны к последующим превращениям образовавшихся соединений, и их окислительные способности, следовательно, весьма ограничены. Эти бактерии, объединённые в род Gluconobacter, глюкозу окисляют до глюконовой кислоты, этанол - только до ацетата, который дальше не может ими окисляться из-за отсутствия некоторых ферментов ЦТК [6].

Витаминный состав ферментированного раствора чайного гриба

Витаминный состав ферментированного раствора чайного гриба приведён в таблице 1.2.5

Таблица 1.2.5. Витаминный состав ферментированного раствора чайного гриба

Витамины	Содержание в 100г продукта
ВитаминА	0,04 - 0,12 мг
ВитаминВ1	0,1 мг
ВитаминВ2	0,15-0,3 мг
ВитаминВ6	0,1 мг
ВитаминВ12	0,005 мг
ВитаминРР	1,0 мг
Витамин D	0,05 мг
Витамин С	0,36 мг

Витамин PP участвует в окислительно-восстановительных процессах, обладает сосудорасширяющими свойствами, принимает участие в тканевом дыхании, углеводном и белковом обмене, улучшает выделение желудочного сока. Стоит отметить и еще одно из самых важных полезных свойств ниацина - воздействие на неравную систему, при нехватке этого вещества в организме, нервная система остается незащищенной и становится уязвленной.

Ниацин предупреждает возникновение такого заболевания, как пеллагра (шершавая кожа). Так же необходим для метаболизма белка, синтеза генетического материала, полезного холестерина и жирных кислот, а также для нормальной работы мозга и центральной нервной системы [16].

Витамин PP - это одно из самых эффективных средств для нормализации холестерина в крови. Он поддерживает работоспособность сердца и усиливает кровообращение. Ниацин участвует в большом количестве реакций, связанных с трансформацией сахара и жиров в энергию. Он благотворно влияет на сердечно-сосудистую систему, а именно - расширяет периферические кровеносные сосуды, улучшает кровообращение, а также очищает сосуды от плотных липопротеидов, понижает давление и снижает риск возникновения сердечно-сосудистых заболеваний.

Витамин С - мощный антиоксидант. Он играет важную роль в регуляции окислительно-восстановительных процессов, участвует в синтезе коллагена и проколлагена, обмене фолиевой кислоты и железа, а также синтезе стероидных гормонов и катехоламинов. Аскорбиновая кислота также регулирует свертываемость крови, нормализует проницаемость капилляров, необходима для кроветворения, оказывает противовоспалительное и противоаллергическое действие [16].

Витамин С является фактором защиты организма oт последствий стресса. Усиливает репаративные процессы, увеличивает устойчивость к инфекциям. Уменьшает эффекты воздействия различных аллергенов. Имеется много теоретических и экспериментальных предпосылок для применения витамина С с целью профилактики раковых заболеваний. Известно, что у онкологических больных из-за истощения его запасов в тканях нередко развиваются симптомы витаминной недостаточности, что требует дополнительного их введения.

Многочисленные исследования химических и биологических свойств чайного гриба позволили выявить его антимикробное действие. Оказывается, в нем образуется природный антибиотик медузин, который великолепно справляется с инфекцией и, в отличие от синтетических антибиотиков, не ослабляет иммунитет и не оказывает никаких побочных эффектов на организм [2].

Еще одна особенность медузина в том, что он воздействует сразу на несколько разных видов бактерий, которые не способны выработать к нему устойчивость. Поэтому имеет смысл использовать чайный гриб в борьбе с такими микроорганизмами, как стафилококки, стрептококки, пневмококки и др. [8].

Лекарственные препараты на основе Medusomyces gisevii.

Как уже упоминалось выше, чайный гриб обладает антибиотическим действием, что применяется в приготовлении различных препаратов. Сегодня можно найти следующие лекарственные препараты на его основе:

* «Комбука»

* «Медузин» («Медузим»)

* «ММ» («Медузомицетин»)

* «Бактерицидин КА» / КБ» / КН» В Великобритании производством напитков на основе Medusomyces gisevii занимается компания «Lewtress Natural Health Ltd». К ее продукции относятся:

* «Kom-Chungmee» («Lewtress Natural Health Ltd») - кисло-сладкий напиток. Основа - китайский зеленый чай. Помогает при диабете, болезнях простаты и почечных проблемах.

* «Kom-Sencha» («Lewtress Natural Health Ltd»). Основа напитка - зеленый чай. Обладает детоксирующими свойствами. Используется при сердечно-сосудистых заболеваниях, гипертонии, высоком уровне холе - стерина в крови. Обладает тонизирующим и успокаивающим свойствами.

* «Kom-Bancha» («Lewtress Natural Health Ltd») имеет сладкий вкус. Основа напитка - японский зеленый чай. Предназначен для восстановления здоровья алкоголиков и наркоманов. Также его рекомендуют больным раком для восстановления сил и повышения аппетита [10].

Полезные свойства чайного гриба

Польза чайного гриба обуславливается присутствием в нем большого количества биологически активных веществ. Настои на его основа содержат множество кислот, спиртов, витаминов и ароматических масел. Так же обнаружены бактерии, позволяющие убить или существенно замедлить развитие многих болезнетворных микробов [9].

Полезные свойства:

* Лечение ногтей чайным грибом;

* Для волос;

* При гастрите;

* При диабете;

* При язве;

* Для детей;

* При беременности;

Вред чайного гриба

Для организма настой чайного гриба неопасен. Его использование в качестве протирания и для других внешних целей является абсолютно безвредным для здоровья. Употреблять «чайный квас» могут взрослые и дети, при всем при этом его применение безопасно лишь при соблюдении гигиены и правильного приготовления чайного настоя из натурального чая с использованием свежей воды.

Несмотря на все полезные качества чайного гриба, его следует использовать с осторожностью.

Его нельзя употреблять людям, у которых имеется:

*Повышенная кислотность желудочного сока;

*Язва желудка;

*Подагра;

*Сахарный диабет;

*Грибковые заболевания;

*Индивидуальная непереносимость компонентов, входящих в этот продукт.

Т.к. в настое содержится небольшое количество спирта, его стоит с осторожностью принимать при езде за рулём, принимая во внимание то, что в чайном грибе содержится много полезных веществ, мы все же рекомендуем вам пить его как расслабляющий напиток, поднимающий настроение и придающий сил, а не как лечебное средство [9].

1.3 Мелисса

Мелисса лекарственная (Melissaofficinalis L.), английское наименование растения LemonBalm - это одно из наиболее популярных лекарственных и ароматических растений семейства Яснотковые (Lamiaceae) в традиционной медицине Европы. Родина мелиссы - Средиземноморье, для промышленных целей растение культивируют в странах Южной Европы и Ближнего Востока[11].

Химический состав

В надземных органах растения содержание эфирного масла колеблется от 0,02 до 0,2% и в редких случая достигает 0,8%, важными факторами являются географическое положение и климатические факторы. Содержание эфирного масла, по данным ученых, в верхней части травы 0,13%, в средней и нижней при совместном определении 0,08%, во все массе травы 0,06.

Наиболее характерные компаненты эфирного масла монотерпены - нерол, цитронеллол, цитронеллаль, цитраль (гениаль + нераль). Так же в меньших количествах содержится линалоол, мирцен, парацимол, в-кариофиллен и дртерпеноиды, было выделенно больше 200 соединений входящих в состав эфирного масла, запах лимона их них напоминаются нераль и гераниаль. По мнению немецкого профессора), их соотношение (3:4), а также наличие 6-метил-5-гептен-2-она являются критериями идентификации мелиссового масла. Другие авторы выделяют ещё один специфический компонент - в-кариофиллен [11].

Второй группой биологически активных соединений являются фенилпропаноиды, их них наиболее характерной выступает розмариновая кислота. При использовании метода высокоэффективной жидкостной хроматографии, было определено содержание розмариновой кислоты в листьях составляет от 0,54 до 1,79%.

Из фенольных веществ стоит отметить, что вклад в антиоксидантную активность вносят флавоноиды - космосиин, лютеин, цинарозид, а так же изокверцитрин.

Витамины представлены следующими соединениями В1, В2, С, в-каротин. В растении содержатся макроэлементы (калий, кальций, магний, железо) и микроэлементы марганец, медь, цинк, молибден, хром, селен, никель, ванадий).

Содержание витаминов и минералов в составе мелиссы

Витамины	Содержание в 100г	Минеральные вещества	Содержание в 100г
Витамин PP	1,78 мг	Цинк	1.09 мг
Витамин В9	0,1 мг	Кальций	199 мг
Витамин B6	0.16 мг	Марганец	1,12 мг
Витамин B1	0,08 мг	Железо	11.87 мг
Витамин B2	0.18 мг	Фосфор	60 мг
Витамин C	13,3 мг	Натрий	30 мг
Витамин A	0,02 мг	Калий	63 мг

Сырьё, предназначенное для получения эфирного масла, перерабатывают в свежем состоянии вместе со стеблями.

Виды и сорта

По всему земному шару насчитывается пять видов этого растения. В России культивируется мелисса лекарственная, а в качестве ее разновидности - мелисса пестролистная. Некое разнообразие вносят и восемь сортов, включенных в Гос реестр Российской Федерации, над которыми в свое время поработали ученые-селекционеры. У этих растений - красивая форма листьев, нарядная окраска, богатый аромат с тонкими оттенками. Все они адаптированы к местным условиям, хорошо переносят зимние холода.

Среди этих сортов:

* «Лимонный аромат» (многолетнее растение, уже в первый год жизни дающее около 120 граммов целебного лекарственного сырья);

* «Дозя» (с довольно мягким ароматом лимона по сравнению с другими сортами);

* «Чистое золото» (листья у этого сорта золотистые, а цветок сначала белый, а к моменту самого активного цветения - фиолетовый).

Применение в медицине

Имея такие заболевания как: острые и хронические воспалительные заболевания органов дыхания, экзема, дерматиты, острые и хронические желудочно-кишечные заболевания, дискинезии, нарушения менструального цикла, климактерические расстройства, токсикозы беременности; иммунодефицитные состояния, часто назначаются препараты на основе мелиссы лекарственной.

В набор растений разрешённых для детей входит мелисса, которая рекомендуется для фитотерапии. Так же она применяется для лечения детских неврозов, хронических гастритов, холециститов, пиелонефритов, сахарного диабета и ожирения. Наиболее в Российской Федерации препараты «Ново-пассит», «Персен», «Нервофлукс» изготавливаемые на основе мелиссы [11].

Она так же часто применяется как спазмолитическое средство, регулирующее работы пищеварительного тракта и как болеутоляющее. Одним из важных свойств мелиссы является её воздействие на центральную нервную систему, поэтому она рекомендуется при бессонице и мигрени.

Противопоказания и возможный вред

В очень редких случаях она вызывает индивидуальную аллергическую реакцию. Кроме того, ее не рекомендуют употреблять тем, у кого понижено артериальное давление.

Случается так, что, выпив чашку-другую чая с мелиссой, человек вместо бодрости ощутит слабость, головокружение, а все потому, что из-за мелиссы его давление упадет ниже допустимого значения [11].

2. Объекты и методы исследований

2.1 Объекты исследования

* Экстракт мелиссы (Производитель: ООО «ЦСИ»);

* Экстракт мелиссы с добавлением 2% чайного экстракта по объёму;

* Чайный экстракт(ЧЭ) (Greenfield Golden Ceylon Производитель: «Орими Трэйд»);

2.2 Методы проведения анализов ферментируемых экстрактов

Оценка качества ферментированного экстракта мелиссы с добавлением чая, без чая и контрольного образца чайного экстрактапроводилась на основании методовсогласноГОСТам, указанным в таблице 2.2.

Методы контроля показателей качества ферментированных экстрактов, их сущность и соответствие государственным стандартам

Контролируемый показатель	Сущность метода	Соответствие требованиям стандартов
Кислотность, см3/100cм3	Метод основан на титровании раствором щелочи всех веществ кислого характера после полного освобождения напитка от двуокиси углерода.	ГОСТ 6687.4-86 Напитки безалкогольные, квасы и сиропы. Метод определения кислотности (с Поправкой)
Содержание сахаров, %	Метод основан на восстановлении инвертным сахаром окисной формы меди в растворе Фелинга в закисную. Закисную форму меди переводят в окисную с помощью сернокислой окиси железа. Образовавшуюся закись железа определяют перманганатометрически	ГОСТ 13192-73. Вина, виноматериалы и коньяки. Метод определения сахаров (с Изменениями №1, 2, 3)
Содержание витамина С, мг/%	Метод основан на экстрагировании витамина С раствором кислоты с последующим титрованием визуально или потенциометрически раствором 2,6 - дихлорфенолиндофенолята натрия до установления светло-розовой окраски	ГОСТ 24556-89. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина С

Приготовление ферментированого напитка

Готовили 5% раствор мелисы, путём экстрагивания в дистилированой воде температурой 100°C в течении 5 минут потом фильтровали. Чайный компонент готовили следующим образом: 1% сухих чайных листьев (чай черный) смешивали с 10% сахара и заваривали дистилированой водой температурой 100°C в течении 5 минут. Экстракт чая добавляли в количестве 2% к одному раствору, второй без добавления и третий контрольный образец служащий контролем, остужали до температуры 30°C. Затем брали культуру чайного гриба, выращенную на таком же экстракте чая, в количестве 1,3-1,5% и добавляли в сладкий чайно-мелиссовый и мелиссовый раствор. Ферментацию проводили в течение 5 суток при температуре 37°C.

Определение активной кислотности

Активная кислотность определялась потенциометрическим методом на стационарном рН-метре. Отбирали пробу 50 мл в чистый химический стакан, промывали электроды дистиллированной водой, протирали фильтровальной бумагой после этого опускали их в раствор. После установления значения на экране прибора записывали данные.

Определение увеличения массы гриба в процессе ферментации

Определение проводили методом взвешивания на лабораторных весах. Для начала ферментации был выбран вес 2 г. Брали культуру чайного гриба, отрезали стерильным пинцетом 2 г, удаляли влагу с поверхности с помощью марли, проводили взвешивание. После процесса ферментации, брали образовавшуюся на поверхности пленку, удаляли влагу и взвешивали.

Методы количественного учета микроорганизмов.

Приготовление полной дрожжевой среды

Для приготовления полной дрожжевой среды компоненты смешивают: сахароза - 20 г., пептона - 10 г., дрожжевого экстракта - 5 г, воды - до 1000 мл. Смесь помещают на водяную баню до полного растворения компонентов смеси. Разливают в посуду через стеклянную воронку с марлевым фильтром и закрывают пробкой. Автоклавируют[15].

Количественный подсчет дрожжей

Общее количество дрожжей определяют в 1 мл ферментированной жидкости. С учетом наиболее вероятного микробного обсеменения готовят необходимое количество разведений. Для подсчета общего количества клеток выбираются лишь те разведения, при посевах которых на чашках насчитывается от 50 до 300 колоний. На 2 - 3 чашки разведения делают посев из каждого образца в количестве 1 мл в одну чашку Петри с заранее промаркированным дном, которое заливают 12 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара (полной дрожжевой среды). После застывания агара чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в термостат с оптимальной для данных дрожжей температурой на 2 - 3 суток.

Пользуясь лупой с увеличением в 8 - 10 раз в каждой чашке подсчитывают количество выросших колоний, поместив ее вверх дном (без крышки) на темном фоне. Каждую подсчитанную колонию помечают на дне чашки маркером. При большом количестве и равномерном распределении колоний дно чашки Петри делят на 6 и более равных секторов, считают число колоний в секторе и умножают на общее количество секторов всей чашки, находя таким образом общее количество колоний, выросших на одной чашке.

Умножая число колоний, выросших на каждой чашке, на соответствующее разведение получают общее количество дрожжей в 1 мл. Результаты, полученные по отдельным чашкам, складывают, а затем делят на количество подсчитанных чашек и выводят среднее арифметическое, которое принимают за окончательный результат. Полученные числа округляют [15].

3. Экспериментальная часть и обсуждение результатов

3.1 Маркетинговое исследование рынка безалкогольных напитков г. Бийска

Целью данного маркетингового исследования является анализ потребительских предпочтений безалкогольной продукции в г Бийск. Для проведения данного исследования была подготовлена анкета (Приложение Б). Анкетирование проводилось на улицах города. Полученные данные были собраны и обработаны для наглядности информации. В опросе приняли участие 190 человек, результаты проведённого анкетирования выглядят данным образом.

1) Ваш возраст?

Основная часть покупателей вина является лицами в трудоспособном возрасте от 18 до 55 лет, самой обширной группой стали респонденты от 18 до 35 лет, что составило 42%.Данные представлены на рисунке.

Возраст участвующих в опросе

2) Ваш пол?

Пол респондентов не имеет большого влияния на покупку жаждоутоляющих напитков, данный вопрос был выбран для составления более полной статистики. Результаты опроса представлены на рисунке.

.

Пол участвующих в опросе

3) Какие напитки употребляете для утоления жажды?

Предпочтения напитков для утоления жажды

4) Важны ли вам, что бы компоненты входящие в состав напитка были натуральными?

Важность натуральности напитка

5) Как вы отноститесь к напиткам с добавлением растительных экстрактов?

Отношение респондентов к напиткам в составе которых присутствуют растительные экстракты

6) Вы слышали о напитке чайный квас, производимом с помощью чайного гриба?

Информированность респондентов о напитке чайный квас

7) Знаете ли вы о пользе чайного гриба?

Информированность участников опроса о полезных свойствах чайного гриба

8) Попробовали бы вы новый напиток, экстракт мелиссы ферментированный с помощью чайного гриба?

Вероятность употребления нового ферментированного напитка на основе мелиссы и чайного гриба

9) Какая форма упаковки наиболее удобна для вас?

Предпочтения в выборе упаковки

10) Какую сумму вы могли бы потратить на покупку газированного безалкогольного напитка объемом 0,5 л

Приемлемая стоимость напитка

Исходя из данных результатов, для утоления жажды, самым популярным ответом являлись сладкие газированные напитки (49%), отвечающие люди довольно часто сомневаются в составе напитка и натуральности ароматизаторов. О чайном грибе люди имеют довольно слабое представление и о его полезных свойствах. Отвечающие в 45% ответов изъявляли желание попробовать напиток, поэтому он ферментированные напитки с помощью чайного гриба являются полезным аналогом сладких газировок и перспективным направлением для исследований

3.2 Определение динамики кислотности ферментированного экстракта

Опыт проводился согласно методу, указанному в таблице 2.2.1. Данные представлены в таблице и на рисунке.

Динамика кислотности ферментированных экстрактов

Образец	Продолжительность ферментирования, сутки
	1	2	3	4	5
	Кислотность, К. ед
Контроль (1%-ный чайный экстракт)	0,05	0,07	0,09	0,1	0,12
Экстракт мелиссы с добавлением ЧЭ (2% по объёму)	0,05	0,07	0,10	0,12	0,15
Экстракт мелиссы	0,04	0,07	0,09	0,10	0,14

Динамика кислотности ферментированных экстрактов

Из графика видно, что начальная кислотность составляла 0,05 для контрольного образца и экстракта с ЧЭ, для экстракта мелисы начальная кислотность составила 0,04. В результате опытов кислотность для экстракта мелиссы и экстракта мелиссы с добавлением чайного экстракта составила 0,14 и 0,15 к.ед соответственно. Для контроля 0,12

По результатам опытов кислотность быстрее возрастает и имеет большие значения в ферментированном экстракте с добавлением чайного экстракта. Данный результат можно объяснить тем, что симбиоз Мedusomycesgisevii очень чувствителен к содержанию экстрактивных веществ чая в питательной среде. К экстрактивным веществам черного чая можно отнести, кофеин, теофилин, теобромин, и т.д., которые являются активаторами роста чайного гриба. Следует отметить, отсутствие этих компонентов очень критично.

Значения рН экстрактов, полученные в ходе опыта, свели в таблицу, а также на основе этих данных построили графики, представленные на рисунке.

Динамика значений рН

Образец	Продолжительность ферментирования, сутки
	1	2	3	4	5
	Значение активной кислотности, pH
Контроль (1%-ный чайный экстракт)	5,50	5,10	4,89	4,38	4,10
Экстракт мелиссы с добавлением ЧЭ (2% по объёму)	5,50	5,10	4,89	4,38	4,10
Экстракт мелиссы	5,65	5,35	5,17	4,38	4,24



ЗависимостьpH экстрактов от продолжительности ферментации

Из данных, представленных на графиках можно наблюдать, что разница в значения проявляется только во время ферментации, на конечный результат добавление экстракта чая или ферментация на экстракте чая, никак не повлияло.

3.3 Изучение содержания витамина С в процессе ферментирования экстрактов

При проведении опытов, данные после первых суток составили 0,43 и 0,41 мг% экстракта мелиссы и экстракта мелиссы с добавлением чайного экстракта соответственно, для контроля 0,3 мг%. По окончании опытов в анализируемых образцах произошло двукратное увеличение содержания витамина С. Данные представлены в таблице 3.4 и на рисунке 3.13

Содержания витамина С в процессе ферментирования

Образец	Продолжительность ферментирования, сутки
	0	1	2	3	4	5
	Содержание витамина С, мг%
Контроль (1%-ный чайный экстракт)	0.27	0,30	0,38	0,47	0,59	0,63
Экстракт мелиссы с добавлением ЧЭ (2% по объёму)	0.41	0,43	0,51	0,68	0,7	0,82
Экстракт мелиссы	0.38	0,41	0,5	0,64	0,7	0,8

График зависимости содержания витамина с в процессе ферментирования

Исходя из данных на графике видно, что при добавлении чая имеются незначительные отличия, которые минимально сказываются на конечном содержание витамина С. Данные контроля заметно отличаются от экстрактов мелисы с ЧЭ и без, причиной этого является, высокое содержание витамина С в мелиссе.

3.4 Увеличения массы гриба в процессе ферментации

Производили взвешивание, удаляя влагу с поверхности стерильной марлевой салфеткой. При проведении данного опыта использовался лабораторный бокс, для исключения контаминации экстракта. Полученные данные были представлены в таблице 3.5 и на рисунке 3.14

Изменение массыMedusomycesgisevii

Сутки	Экстракт мелиссы с 2% чайного экстракта, г	Экстракт мелиссы, г	Контроль, г
1	2	2	2
5	4,8	4,42	5,3



График увеличения массы чайного гриба

На данном графике видно, чайныйгрибпоказывает лучшие результаты роста при ферментации с добавлением экстракта чая и контрольном образце. Экстрактивные веществасодержащиеся в чае, кофеин, теофилин, теобромин, являются активаторами роста Medusomycesgisevii.

3.5 Определение количества сахаров, потребляемых чайным грибом в процессе ферментации

Начальная концентрация сахаров составляла 10%. Для проведения опытов отбирали пробу и фильтровали через складчатый фильтр. Опыт проводился по методу Бертрана. Полученные данные представлены в таблице и на рисунке.

Изменение массовой доли сахаров в экстрактактах в процессе ферментации.

Образец	Продолжительность ферментирования, сутки
	0	1	2	3	4	5
	Содержание сахаров, %
Контроль (1%-ный чайный экстракт)	10	9,3	8,9	7,6	6,6	5
Экстракт мелиссы с добавлением ЧЭ (2% по объёму)	10	9,6	8,9	7,3	6,1	5,4
Экстракт мелиссы	10	9,5	9,3	8,4	7,3	5,9

Динамика количества сахаров в процессе ферментации

На графике отчётливо заметно, что первые двое суток, количество сахара изменяется незначительно. На вторые сутки оно составляетсоставляет 8,9% в контрольном образце и экстракте мелиссы с чайным грибом, 9,3% в экстракте мелиссы. В последующие сутки потребление сахаров чайным грибом заметно увеличивается и к концу опытов составляет 5 5,4 5,9 для контрольного образца, экстракта мелиссы с чайным экстрактом и экстрактом мелиссы соответственно. По данным можно сделать вывод, что чайному грибу нужно время для адаптации к новой среде и активаторы роста в виде чайного экстракта. Так же следует заметить, что образец с чайным экстрактом потребляет больше сахара, а значит быстрее проходит процесс ферментации.

3.6 Изучение количествамикроорганизмов в экстрактах

Опыт проводился в стерильном лабораторном боксе. Данные контрольного образца и экстракта мелиссы с добавлением чайного экстракта схожи и составляют 0,2 ·10⁷ КОЕ/мл и 0,15 ·10⁷ КОЕ/мл соответственно. Экстракт мелиссы имеет значительно меньшее значение 0,04 ·10⁷ КОЕ/мл. В процессе проведения опытов, резки рост был замете на третьи, четвёртые и пятые сутки. Данные представлены в таблице 3.6 и на рисунке 3.16

Динамика количества микроорганизмов

Образец	Продолжительность ферментации, сутки
	0	1	2	3	4	5
	Количество клеток в 1 мл культуральной жидкости, (КОЕ/мл)·107
Контроль (1%-ный чайный экстракт)	0,20	0,69	1,10	2,90	6,80	11,00
Экстракт мелиссы с добавлением ЧЭ (2% по объёму)	0,15	0,56	1,10	2,30	5,60	9,40
Экстракт мелиссы	0,17	0,40	0,89	1,70	4,90	5,80

График численности микроорганизмов из экстракта мелиссы с чаем и без

Из данного графика видно, что, как и в большинстве предыдущих опытов, образец с экстрактом чая показывает наибольшую численность микроорганизмов. На вторые сутки она составила 1,1·10⁷КОЕ/мл для контрольного образца и экстракта мелисы с чайным экстрактом, экстракт мелисы имел меньшие значения 0,89·10⁷КОЕ/мл. В последующие сутки в контрольном образце и экстракте мелиссы с чайным экстрактом, количество клеток увеличивалось примерно в 2 раза. Экстракт мелиссы так же показывал двукратный рост микроорганизмов до 4 суток, на пятые сутки рост замедлился и составил 5,8·10⁷КОЕ/мл. Сопоставив эти данные с данными из пункта 3.6 можно увидеть зависимость потребления сахара в растворе и численности микроорганизмов.

3.7 Изменение органолептических показателей напитка в процессе ферментации

Опыт проводился в течении 6 суток, на каждые сутки по одной ёмкости с ферментируемым экстрактом. Напиток стоял в термостате при температуре 37°С, перед употреблением напиток охлаждали до комнатной температуры. Данные представлены в таблице.

Органолептические показатели

Показатели	Продолжительность культивирования, сутки
	1	2	3	4	5	6
Состояние продуцента	Контроль	Гриб находится на дне сосуда	Образуется плёнка гриба вместе с помещённой ранее культурой поверхности сосуда	Плёнка продолжает расти на поверхности сосуда	Плёнка продолжает расти на поверхности сосуда
	Опытные образцы		Гриб находится на дне сосуда, появилась тонкая плёнка нового гриба по поверхности сосуда	Плёнка (Новый гриб) продолжает расти на поверхности
Запах	Контроль	Слабый запах чёрного чая	Слабый запах чёрного чая с легким запахом дрожжей	Преобладает дрожжевой запах	Дрожжевой запах с резким запахом уксуса
	Опытные образцы	имеет запах соломы	легкий запах мелисы	Легкий запах мелиссы с запахом уксуса
Вкус	Контроль	Сладкий чёрный чай	Сладкий чёрный чай с легким вкусом дрожжей	Вкус напоминающий квас, но с очень слабым запахом уксуса	Вкус напоминающий квас, но с легким запахом уксуса	Вкус напоминающий квас, но с запахом уксуса
	Опытные образцы	Сладкий экстракт мелиссы	Легкая кислинка, небольшая аэрация	Появилась легкаяг азированность с кислинкой	Выраженная газированность и кислинка, с приятным лимонно-мятным вкусом	Выраженная газированность и кислый вкус, с м лимонно-мятным вкусом
Консистенция	Контроль	Имеется небольшая муть	Муть осела на дне	Мутный осадок на дне, жидкость достаточно прозрачная
	Опытные образцы

По результатам проведения органолептических опытов, был выбран образец на 5 день ферментации. Он имел тонкий запах мелиссы и вкус похожий на лимонад с мятой, достаточно чистый при рассмотрении при дневном свете, так как мутный осадок осел на дно. На следующие сутки у напитка начал появляться запах уксуса, и кислый вкус, продуцируемый уксуснокислыми бактериями, поэтому опыты было решено остановить.

3.8 Блок-схема производства

Данная блок-схема производства описывает основные этапы производства напитка. Схема представлена на рисунке.

Блок-схема производства ферментированного экстракта мелиссы

В данной схема производства отсутствует стадия подготовки воды для производства, это объясняется тем, что для чайного гриба необходима и достаточна условная стерильность. Культура чайного гриба после ферментации используется повторно, в ней контролируется внешний вид, на наличие плесени. Так как чайный гриб имеет достаточно высокую скорость прироста биомассы, со временем происходит её переизбыток, который приводит к сложности мойки самого чайного гриба из-за его большого веса, решением данной проблемы может выступить продажа или безвозмездная передача в научные институты, занимающиеся бактериальной целлюлозой.

3.9 Аппаратурно-технологическая схема

Для масштабирования процесса производства была разработана аппаратурно-технологическая схема. Схема представлена на рисунке.

Аппаратурно-технологическая схема производства ферментированного экстракта мелиссы

Описание технологической схемы.

В экстрактор 1 поступает мелисса и чай, экстрагируется дистиллированной водой при t=100°C в течении 5 минут. Далее с помощью насоса 2 (4,6,8,10,12,15,18) подаётся в теплообменник 3 для охлаждения до t=37°C, после чего насосом 4 перекачивается в фильтр 5, потом экстракт поступает в фильтр пресс 7. В купажную ёмкость 9 поступает сахарный сироп и экстракт после фильтрации, подогревается до t=37°C, перемешивается и насосом 10 перемещается в ферментатор 11. В ферментатор 11 подаётся культура чайного гриба, ферментирование проходит при t=37°C в течении 5 суток. Ферментированная жидкость с помощью насоса перекачивается в фильтр 13, после чего поступает в фильтр пресс 14. С помощью насоса 15, жидкость поступает на пастеризатор 16, пастеризация проводится при t=68-72°C в течении 10-15 минут, после чего для охлаждения поступает в теплообменник 17. Напиток готов для розлива и хранения.

3.10 Расчёт себестоимости

Расчёт себестоимости напитка производили по сырью, необходимому для производства 1 л напитка. Расчёт производился по оптовым ценам на сырьё доступным в интернете. Данные представлены в таблице.

Расчёт себестоимости продукта

Наименование сырья	Количество на 1 л, кг	Стоимость ед./кг, руб.	Стоимость на 1 литр продукта, руб.
Сухие листья чая	0,01	150	1,5
Сухая мелисса	0,05	130	6,5
Сахар песок	0,15	26	2,6
Вода	1	0,03	0,03
Упаковочный материал	1	6,35	6,35
Итого			16,98

По результатам расчёта, стоимость напитка составила 16,98 руб. Себестоимость сырья, составляет около половины общей себестоимости напитка. Стоимость напитка в розничной продаже составит 35-45 р за литр, что по данным маркетингового исследования является приемлемой ценой для напитка.

Заключение

чайный гриб ферментированный лекарственный

По результатам выполненной курсовой работы можно сделать следующие выводы:

1. Маркетинговое исследование показало, что чайный квас имеет слабую известность, из всего количества опрошенных о нём известно 27% людей. Так же было выяснена приемлемый объем тары за 0,5 л и 1,5 л проголосовали по 36% опрошенных. 45% Респондентов проявили желание попробовать ферментированный напиток на основе экстракта мелиссы.

2. Кислотность в образце на основе экстракте мелисы увеличивалась наиболее интенсивно - с 0,04 К. ед до 0,14 К. ед., то есть в 3,5 раза за 5 суток ферментации.

Активная кислотность в процессе ферментации растительных экстрактов менялась не столь интенсивно: за пять суток ферментации снизилась в среднем с 5,4 до 4,1 ед. рН.

3. Содержание витамина С в образцах изначально имело различные значения - в опытных образцах оно в два раза превышало значение для контрольного образца. В процессе ферментации содержание витамина С так же увеличилось вдвое во всех образцах.

4. Концентрация сахара в контрольном образце снизилась на 50%, в опытных на 46% и 41% (для экстракта мелиссы).

5. Количество микроорганизмов в контрольном и опытных образцах по окончании ферментации составило порядка 5-11 ·10⁷ КОЕ/мл. Для варианта на экстракте мелиссы характерно некоторое снижение темпа роста микроорганизмов на пятые сутки. Чайныйгрибпоказывает лучшие результаты роста при ферментации с добавлением экстракта чая и контрольном образце

6. Наилучшими органолептическими показателями напитки обладали на пятые сутки ферментации. Значимого влияния на данные показатели добавление чайного экстракта выявлено не было. Напиток получился с тонким мятно-мелиссовым запахом, приятным лимонно-мятным вкусом и достаточной степенью насыщения CO₂.

7. Была разработана аппаратурно-технологическая схема производства напитка

8. Рассчитанная себестоимость составила 16.98 рза 1 л.

Список использованных источников

1. Даниелян Л.Т. Чайный гриб (Kombucha) и его биологические особенности. / Л.Т. Даниэлян. - М.: Медицина, 2005. - 83 с.

2. Jayabalan, R. KombuchaTeaMicrobiology, Composition, Fermentation, Beneficial Effects, Toxicity, and Tea Fungus // Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety. -2014. - Vol. 13. - P. 538-550

3. Глик, Б.К. Молекулярная биотехнология / Б.К. Глик - 2-е издание. - М.: Мир, 2002. - 560 с.

4. Шлегель, Г.П. Общая микробиология. /Г.П. Шлегель - М.: Мир, 1987. - 567 с.

5. Промышленная микробиология / Под общей редакцией проф. Н.С. Егорова. - М.: Высшая школа, 1989. - 438 с.

6. Гусев, М.В. Микробиология / М.В. Гусев, МинееваЛ.А. - М.: Мир, 2003, 464

7. Fallon, S. Nourishing Traditions: The Cookbook that Challenges Politically Correct Nutrition and Diet Dictocrats / S. Fallon - Publisher: Newtrends Publishing 2001. - P. 674.

8. Неумывакин, И.П. Чайный гриб - природный целитель / И.П. Неумывакин - М.: Диля, 2007. -160 с.

9. Щеглова А.В. Чайный гриб. Чудо-доктор в трехлитровой банке. - М.: РИПОЛ классик, 2014. - 64 с.

10. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: Офорт, 2007. - 1239 с Мелисса

11. Путырский, И.Н., Прохоров В.Н. Лекарственные растения. / Прохоров В.Н. Путырский И.Н - Мн.: Книжный Дом, 2005

12.ГОСТ 13192-73. Вина, виноматериалы и коньяки. Метод определения сахаров - Введ. 1975-01-01 - М.: ИПК Издательство стандартов, 2005. - 11 с.

13.ГОСТ 24556-89. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина С. - Введ. 1990-01-01 - М.: Изд-во стандартов, 2003. - 17 с.

14.ГОСТ 6687.4-86 Напитки безалкогольные, квасы и сиропы. Метод определения кислотности-Введ. 1987-07-01. - М.: Изд-во стандартов, 2003. - 23 с.

15. Ламберова, М.Э. Оценка эффективности культивирования и применениемолочнокислых бактерий / М.Э. Ламберова, Н.А. Шавыркина, А.А. Ламберова. - Бийск: Изд-во Алт. гос. тех. ун-та, 2009. - 90 с.

16. Хабибуллин, Р.Э. Вестник Казанского технологического университета /. Р.Э. Хабибуллин, Х.Р. Хусаинова, Э.И. Минивалеева, О.А. Решетник // - 2011. - №16, - С. 187-194, 203 - 209

17. Ламберова, М.Э. Оценка эффективности культивирования дрожжей Saccharomyceccerevisiae: учебное пособие / М.Э. Ламберова, Ю.А. Кошелев, Т.И. Войнаровская. - Бийск: Изд-во Алт. Гос. Техн. Ун-та, 2007. - 69 с.

18. Пат. 2580046 Российская федерация МПК C12N1/20 бактерии; питательные среды для них [Текст] / Низамов Р.Н., ГайзатуллинР.Р.; патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») - №200658716А, заявл. 16.04.15; опубл10.04.2016, Бюл. №33. - 5 с.

19. Плошкин, В.В. Безопасность жизнедеятельности: учеб. пособие для вузов / В. В Плошкин. - Москва; Берлин: Директ-Медиа, 2015. - Ч. 1 - 380 с.

20. ГОСТ Р 12.1.019-2009 ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты. - М.: Стандартинформ, 2010. - 32 с.

21. Екимова, И.А.&nbs...