Использование гистохимического иммуноферментного метода для раннего обнаружения вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в культуре клеток
Сравнительный анализ результатов обнаружения вируса инфекционного ринотрахеита в культуре клеток крупного рогатого скота. Инфицирование носоглоточными смывами молодых телят традиционным вирусологическим и гистохимическим иммуноферментным методами.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 02.02.2020 |
| Размер файла | 1,6 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http: //www. allbest. ru/
ФГБОУ ВПО «ДагГАУ им. М.М. Джамбулатова», г. Махачкала
Использование гистохимического иммуноферментного метода для раннего обнаружения вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в культуре клеток
Т.Б. Ильясов - студент 253 гр., Х.З.
Махмудов - студент 233 гр., Б.М. Гаджиев,
к.в.н., доцент Д.А. Суллаева - ст. преподаватель
Аннотация
инфекционный ринотрахеит рогатый скот
Проведен сравнительный анализ результатов обнаружения вируса инфекционного ринотрахеита (вИРТ) в культуре клеток через 20 и 44 часа после инфицирования носоглоточными смывами экспериментально зараженных телят традиционным вирусологическим методом и гистохимическим иммуно-ферментным методом (гИФМ). Показано преимущество гИФМ перед традиционным методом вирусовыделения.
Вирус, культура клеток, титрование вируса, вирусо-выделение, гистохимический метод, цитопатогенное действие.
Annotatіon
The comparative analysis of the results of detection of virus infectious rhinotracheitis (vIRT) in cell culture through 20 and 44 hours after infection of calves experimentally infected smyvami nosoglotoиnymi traditional virological and gistohimiиeskim enzymetic method (gIFM). Shows the advantage gIFM to the traditional method of virusovydeleniв.
Virus, cell culture, virus Titrations, shedding, Histochemical method, citopatogennoe action.
Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота (ИРТ КРС) инфекция, вызываемая ДНК - содержащим герпес вирусом 1-го типа. Протекает она в респираторной и генитальной формах, имеет широкое распространение и поражает животных всех возрастов и пород, причиняя значительный экономический ущерб.
Важным звеном в борьбе с болезнью является своевременный и точный диагноз. Имеющиеся традиционные методы являются продолжительными по времени и технически трудоемким. Разработка ускоренных, высокочувствительных и специфических тестов остается актуальной проблемой ветеринарной вирусологии.
В работе применяли гистохимический иммуноферментный метод (ГИФМ) обнаружения вируса ИРТ КРС в культуре клеток при одно- и многоступенчатом циклах инфицирования, сравнивали с традиционным методом вирусо-выделения по цитопатогенному действию (ЦПД), принятым в диагностической практике.
В работе использовали перевиваемую культуру клеток почек теленка Маdin Darby bovini kidney (МDВК), которую выращивали на среде Дюльбекко-Игла с гидролизатом лактальбумина в соотношении 2:1. В среду добавляли 10% фатальной (Flow) или телячьей сыворотки. После заражения использовали среду с 2%-ной сывороткой. Вирус ИРТ КРС получен из лаборатории вирусологии Московской ветеринарной академии - штамм 4016. Титр вируса был равен 107.5 БОЕ/мл. Заражение культуры клеток проводили в стеклянных пробирках, а для титрования вируса в динамике использовали пластиковые чашки (35x10мм, Flow, по БОЕ). Бляшкообразующую способность оценивали модифицированным методом Dulbeccj еt. al. с двойным агаровым покрытием.
ГИФМ ставили непрямым методом в пробирках с монослосм клеток, зараженных вирусом ИРТ по методу, модифицированному D.Duglas. В первой фазе реакции использовали кроличий антивирус ИРТ сыворотку, а во второй меченную пероксидазой сыворотку против lgG кролика. Индикатором реакции служил субстрат диаминобензидинтетрахлорид (ДАБ). Учет реакции проводили под световым микроскопом. Определяли процент окрашенных клеток.
При одноступенчатом цикле инфицирования клеток вирусом ИРТ (10 ИД 50/кл) ЦПД развивалось к 16-20 часу, а к 28 монослой клеток полностью разрушался. Появление инфекционного вируса отмечали с 9-10 час, и к 24 часу он достигал предельного титра - 107,5 ПЦД50/мл.
ГИФМ позволил обнаружить вирус в ранние сроки (с 8-го по 12-й час), что выглядело в виде отдельных окрашенных скоплений клеток (бляшек), составляющие 5-30% монослоя, с 16 по 28-й часы в зараженных клетках нарастала интенсивность окрашивания, и эти клетки составляли 5-100%. В контрольных пробах (зараженные клетки с нормальной сывороткой и незараженные - с иммунной) специфического окрашивания не наблюдали.
В условиях многоступенчатого цикла инфицирования клеток вирусом ИРТ (1 ИД50/1000 кл.) ЦПД развивалось с 64-го часа и полное разрушение монослоя происходило к 96-му часу. Инфекционный вирус появлялся с 16-го часа и к 80-му достигал предельного титра. ГИФМ обнаруживал вирус ИРТ с 24-го часа, затем интенсивность реакции и % окрашенных клеток нарастал.
Следовательно, ГИФМ в условиях одноступенчатого цикла инфицирования позволил обнаружить вирус ИРТ в клетках на 12 часов, а при многоступенчатом на 40 часов раньше, чем традиционный метод вирусовыделения по ЦПД.
Сравнивая полученные данные, можно сделать вывод, что ГИФМ обнаруживал вирус ИРТ в более ранние сроки (через 24-48 ч), чем принятые в ветеринарной практике методы вирусовыделения (через 30 суток). Кроме того, ГИФМ является относительно простым тестом, перспективным для массовых диагностических исследований в ветеринарной практике.
Фото 1 Титрование вируса ИРТ крупного рогатого скота по БОЕ. С - лунка контрольная (бляшки отсутсвуют), А и В - опытные лунки (обнаруживаются светлые бляшки)
Фото 2 Обнаружение с помощью ГИФМ, заражённых вирусом ИРТ клеток в виде тёмной окрашенной бляшки
Фото 3 Наступление ЦПД в монослое клеток на месте появления окрашенной бляшек
Литература
1. Калюжная А.М. и др. Сопоставление методов обнаружения аденовируса крупного рогатого скота 3-го серотипа в зараженной культуре перевиваемых клеток почки теленка (MDBK) / / Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 1988. - № 10.
2. Мейхи В.Ф. Вирусология. Методы - М.: Мир, 1988.
3. Осидзе Д.Ф. Инфекционные болезни животных . - М.: Колос, 1987.
4. Сюрин В.Н. и др. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных. М.: Агропромиздат, 1986.
5. Фримель Г. Иммунологические методы. - М.: Медицина, 1987.
6. RichmanD.D. etal. Immunoenzymaticstainingofviaralandchlamidialantigensincellculture / / Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 1985. - V. 3.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
История выявления инфекционного ринотрахеита, возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, симптомы и патологоанатомические изменения, диагноз, профилактика и меры борьбы. Оценка эффективности ветеринарных мероприятий крупного рогатого скота.
дипломная работа [38,9 K], добавлен 01.01.2009Злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания как основная причина лейкоза крупного рогатого скота. Энзоотическая и спорадическая формы лейкоза крупного рогатого скота. Методы профилактики и борьбы с заболеванием.
презентация [1,3 M], добавлен 18.05.2016Вирусная диарея - болезнь слизистых крупного рогатого скота. Классификация штаммов вируса по патогенности, вирулентности и цитопатогенному действию, их идентичность в антигенном отношении. Инкубационный период, локализация вируса, лечение и профилактика.
реферат [27,2 K], добавлен 25.09.2009Борьба с лейкозом крупного рогатого скота в Республике Тыва как большая социальная задача. Рассмотрение особенностей проведения оздоровительных мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота в фермерском хозяйстве "Оюн", анализ эпизоотического состояния.
курсовая работа [194,6 K], добавлен 12.04.2019Диагностика, лечение и профилактика злокачественной катаральной горячки крупного рогатого скота. Методы диагностики, профилактики и меры борьбы при стрептококкозе телят. Основные патологоанатомические изменения при лейкозе птиц и болезни Марека.
контрольная работа [17,0 K], добавлен 21.04.2009В-лимфотропный РНК-содержащий вирус как основной возбудитель лейкоза крупного рогатого скота. Клиническое проявление заболевания. Патоморфологические изменения у скота при лейкозе. Диагностика заболевания, способы его лечения и проблемы профилактики.
презентация [12,8 M], добавлен 21.09.2016Краткая характеристика ОАО "Вологодский картофель" отделения "Русь": природно-климатические условия, акт эпизоотического обследования хозяйства. Основные симптомы хламидиоза крупного рогатого скота. Этапы лечения, выработка иммунитета и профилактика.
курсовая работа [33,3 K], добавлен 07.04.2010Общая морфология и биология пироплазмид. Особенности заболевания пироплазмозом крупного рогатого скота: возбудитель, цикл развития, эпизоотология, патогенез и клинические симптомы. Диагностика, лечение и профилактика. Ветеринарно-санитарная экспертиза.
курсовая работа [24,4 K], добавлен 26.12.2010Условия проведения исследований в СПК "Ново-Варненское". Организационная природно-экономическая характеристика хозяйства. Ветеринарно-санитарное состояние хозяйства. Эпизоотическое состояние хозяйства по туберкулезу крупного рогатого скота за 2000 год.
дипломная работа [47,0 K], добавлен 30.06.2009Понятие про диктиокаулез - заболевание легких, вызываемое гельминтами, паразитирующими в дыхательных путях. Лечебные и профилактические дегельминтизации при диктиокаулезе крупного рогатого скота. Краткая характеристика хозяйства ЗАО «Исетское».
курсовая работа [19,3 K], добавлен 21.04.2009Полимеразная цепная реакция, история ее изобретения и практическое использование. Преимущества ПЦР и возможные ошибки при реализации методики. Особенности ПЦР в "реальном времени". Роль и значение ПЦР при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.
курсовая работа [32,9 K], добавлен 20.02.2013Представления о строении слизистой оболочки желудка в периоды пре– и постнатального онтогенеза. Толщина рогового слоя многослойного эпителия ворсинок дна пищеводного желоба у новорожденных телят. Роль пищеводного желоба в секретирующей функции желудка.
статья [13,9 K], добавлен 01.09.2013Вирус иммунодефицита и его структура. ВИЧ-инфекция как причина заболевания. Действие вируса внутри белых клеток. Особенности строения мембраны вируса, его способность к мутациям. Распространение вируса через инфицированную кровь, попадающую в организм.
курсовая работа [58,9 K], добавлен 11.01.2010Патологические изменения клеток эпителиальных тканей шейки матки под влиянием вируса папилломы человека. Структура генома вируса, его роль в механизмах стимулирования пролиферации и индукции неопластической трансформации. Изменения клеток эпителия.
дипломная работа [4,9 M], добавлен 31.01.2018Причины и патогенез опухоли, поражение собак, лошадей, крупного рогатого скота и курей. Сущность вирусной и полиэтиологической теорий. Характеристика доброкачественных и злокачественных опухолей, понятие фиброматоза и карциномы, их клинические признаки.
реферат [21,9 K], добавлен 18.12.2011Дифференциация видов и биотипов бактерий рода Brucella. Своевременное выявление реагирующих животных как залог успеха при сохранении благополучия и оздоровлении неблагополучных хозяйств. Механизм агглютинации. Чувствительность бруцелл к антибиотикам.
дипломная работа [236,6 K], добавлен 22.04.2014Методы радиоиммуноанализа и иммунорадиометрического анализа. Сферы применения иммуноанализа в ветеринарии, потребители иммунодиагностических наборов. Диагностика фертильности и фекундильности крупного рогатого скота. Развитие иммуноанализа в ветеринарии.
реферат [1,7 M], добавлен 06.08.2009Описание эпидемиологии бруцеллеза, определение отличительных клинических черт бруцеллеза. Лечение, профилактика и меры контроля бруцеллеза. Стандартные определения случаев бруцеллеза. Динамика эпизоотии бруцеллеза у крупного рогатого скота в Казахстане.
презентация [11,0 M], добавлен 28.03.2023Предпосылки и распространенные причины переломов таза у лошадей, крупного рогатого скота, собак. Этиология и патогенез развития повреждения, его характерные клинические признаки и диагностирование, назначение лечения при открытом и закрытом переломе.
реферат [10,4 K], добавлен 14.09.2009Болезни обмена веществ. Профилактика и лечение остеомаляции у сельскохозяйственных животных. Туберкулез крупного рогатого скота. Методы диагностики и профилактики. Пироплазмидоз сельскохозяйственных животных. Ветеринарная дезинфекционная техника.
контрольная работа [108,0 K], добавлен 18.01.2014
