Способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни

Размещено на http://www.allbest.ru/

Способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни

О.В. Бухарин, А.А. Третьяков,

О.Б. Дронова, В.А. Кириллов

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может найти применение в онкологии, гастроэнтерологии и медицинской микробиологии. Способ осуществляется путем проведения фиброэзофагогастроскопии с биопсией, при этом забор биоптатов осуществляют со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии, проводят бактериологическое исследование биоптатов на наличие Helicobacter pylori, у выделенной культуры определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака, равном или более 2 мкг/мл, диагностируют пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни. Способ позволяет выявить пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии его проявления, когда отсутствуют клинические симптомы и эндоскопические признаки, провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение, способ прост в осуществлении и не требует дорогостоящей аппаратуры.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может найти применение в онкологии, гастроэнтерологии и медицинской микробиологии.

Проблема ранней диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни является актуальной для практического здравоохранения в связи с возрастанием числа онкологических заболеваний в области пищеводно-желудочного перехода. Своевременное распознавание пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ) становится одной из важных задач диагностической службы и лежит в основе первичной профилактики онкопатологии этого отдела пищеварительной системы [1].

Известны способы диагностики пренеопластических изменений слизистой у больных ГЭРБ на основе хромоскопии с прицельной биопсией [2], флуоресцентной эндоскопии [3], эндосонографии слизистой пищевода [4]. гастроэзофагеальный рефлюксный пренеопластический биопсия

Однако известные способы обладают рядом недостатков, которые не позволяют их использовать для ранней диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Так способ диагностики на основе хромоскопии с использованием метиленового синего трудоемок и требует значительного времени и специальной подготовки слизистой. Необходимо также отметить, что метиленовый синий накапливается также в участках, имеющих эрозивно-язвенные изменения, которые могут влиять на результаты гистологического исследования.

Эндосонография с использованием ультразвуковых минидатчиков с частотой вращения кристалла 20 МГц выявляет достоверные признаки пренеопластических изменений слизистой пищевода в виде утолщения второго гипоэхогенного слоя лишь при наличии дисплазии высокой степени.

Флуоресцентная эндоскопия, основанная на феномене различной аутофлуоресценции здоровых и больных тканей, подвергшихся диспластической трансформации, может быть использована в качестве скринингового исследования для диагностики предраковых поражений, однако требует наличия дорогостоящей аппаратуры и не может широко использоваться в практическом здравоохранении.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни путем патоморфологического исследования биоптатов слизистой пищевода, заключающийся в том, что при наличии видимых изменений слизистой пищевода во время проведения фиброэзофагоскопии в 4-х точках по полюсам стенок пищевода осуществляют забор биопсийного материала и направляют на патоморфологическое исследование, выявляющее тип пренеопластических изменений [5].

Однако существенным недостатком известного способа является частое отсутствие визуальных признаков цилиндрической метаплазии слизистой пищевода, которая ничем не отличается от обычной слизистой [1]. Но и при наличии визуальных изменений слизистой пищевода патоморфологическую диагностику пренеопластических изменений слизистой затрудняют сопутствующие воспалительные изменения тканей, а также наличие артефициальных изменений [6]. Кроме того, диспластически измененный эпителий далеко не всегда удается отличить от эпителия регенерирующего [7]. Необходимо отметить, что при различной терапии пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни возникающая маскировка метапластических изменений под слоем плоского эпителия создает трудности для патоморфологического исследования и требует проведения “глубоких” биопсий [8].

Заявляемый способ решает задачу повышения эффективности диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, а именно на ранней стадии их проявления.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни при проведении фиброэзофагогастроскопии осуществляют забор биоптатов со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии, проводят бактериологическое исследование биоптатов на наличие Helicobacter pylori, у выделенной культуры определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака, равном или более 2 мкг/мл, диагностируют пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Новым в заявляемом способе является то, что при проведении фиброэзофагогастроскопии забор биоптатов осуществляют со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии, проводят бактериологическое исследование биоптатов на наличие Helicobacter pylori, у выделенной культуры определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака, равном или более 2 мкг/мл, диагностируют пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Достигаемый при осуществлении способа технический результат состоит в том, что новый способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни позволяет повысить эффективность выявления пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии проявления, когда отсутствуют клинические симптомы и эндоскопические признаки, провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания. Заявляемый способ прост в осуществлении и не требует дорогостоящей аппаратуры.

Известно определение Helicobacter pylori в пищеводе дистальнее зубчатой линии бактериологическим методом [9].

Известно определение антилизоцимной активности микроорганизмов (АЛА). Уровень антилизоцимной активности используется в качестве информативного маркера персистенции микроорганизмов, а также для диагностики и прогнозирования течения хронических и латентных форм бактериальных инфекций, в качестве критерия выбора схем эффективной антибактериальной терапии инфекционных заболеваний и бактерионосительства [10].

В источниках патентной и научно-технической информации сведений об использовании антилизоцимной активности микроорганизмов для диагностики пренеопластических осложнений не обнаружено.

Авторами экспериментально установлена связь антилизоцимной активности Helicobacter pylori, выделенного из пищевода больных гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью дистальнее зубчатой линии, с наличием пренеопластических изменений в слизистой пищевода, что позволяет использовать эту взаимосвязь для выявления пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

В результате проведенных авторами клинических бактериологических исследований биоптатов слизистой дистальнее зубчатой линии выявлено, что у больных гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью при наличии кишечной метаплазии и дисплазии эпителия уровень антилизоцимной активности Н. pylori равен или больше 2 мкг/мл.

Были проведены бактериологические исследования биоптатов, взятых у 28 больных гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью, осложненной пренеопластическими изменениями, и 44 больных с неосложненной гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью. Забор биоптатов осуществляли дистальнее зубчатой линии. Микроорганизм Helicobacter pylori был обнаружен в 56 биоптатах. У чистой культуры Н. pylori определяли антилизоцимную активность. Результаты исследования представлены в таблице.

Как видно из таблицы, у 24 из 28 пациентов с метаплазией и дисплазией уровень антилизоцимной активности выделенных штаммов Н. pylori составлял 2 мкг/мл или более. В группе пациентов с неосложненной гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью у выделенных 32 штаммов Н. pylori антилизоцимная активность либо вовсе не была обнаружена, либо ее уровень составил менее 2 мкг/мл.

Способ осуществляется следующим образом.

При проведении фиброэзофагогастроскопии осуществляют взятие биопсийного материала со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии. После механической дезинтеграции проводят посев на селективную питательную среду Columbia-II-агар (BBL, США) с 10% дефибринированной бараньей кровью и селективной добавкой из антибиотиков (амфотерицин-В 10 мг/мл, триметоприм 5 мг/мл, сульфометоксазол 25 мг/мл). Чашки помещают в анаэростат GasPak 100 (BBL, США) с газогенераторными пакетами СаmpyPak Plus (BBL, США) и инкубируют в микроаэрофильных условиях при 37С в течение 72-96 часов. Выросшие колонии микроорганизмов идентифицируют на основании культуральных, тинкториальных и биохимических свойств (коммерческая тест-система ApiCampy, Biomerieux, Франция). Выделяют чистую культуру Н. pylori, определяют у нее антилизоцимную активность известным методом [11], модифицированным авторами для микроорганизма Helicobacter pylori. Для этого чистую культуру Н. pylori наносят стандартной микробиологической петлей на поверхность питательной среды Columbia-II-агар (BBL, США) с лизоцимом в концентрации 1, 1,5, 2, 2,5 и 3 мкг/мл. Спустя 72 часа инкубации в микроаэрофильных условиях при температуре 37С выросшие колонии Н. pylori убивают хлороформом и заливают вторым слоем питательной среды, содержащей 0,1 мл взвеси (10-9 КОЕ/мл) тест-штамма Micrococcus luteus ГИСК № 211001 и 4,9 мл 0,7% мясопептонного агара. Чашки инкубируют в аэробных условиях 24 часа при температуре 37С. Уровень антилизоцимной активности определяют по максимальному разведению чашки с лизоцимом, в которой над колонией Н. pylori отмечается рост тест-штамма, и при уровне выраженности данного признака, равном или более 2 мкг/мл, диагностируют пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Пациент В., 28 лет. Диагноз: хронический гастрит. Беспокоят периодические боли в верхней половине живота, отрыжка, изжога (особенно по ночам), слюнотечение. Направлен гастроэнтерологом для проведения фиброэзофагогастроскопии с целью уточнения диагноза. При проведении фиброэзофагогастроскопии выявлены рефлюкс-эзофагит I степени, поверхностный гастрит. Из нижней трети пищевода дистальнее зубчатой линии взята биопсия на предмет выявления Н. pylori. При бактериологическом исследовании выявлен штамм Н. pylori. У выделенного штамма определяли антилизоцимную активность. АЛА составляла 2 мкг/мл, что позволило диагностировать пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

При повторной фиброэзофагогастроскопии с хромоскопией 2%-м водным раствором Люголя и прицельной множественной биопсией с последующим морфологическим исследованием была выявлена кишечная метаплазия I типа дистальнее зубчатой.

Пример 2. Пациент Б., 43 лет. Диагноз: хронический гастрит, обострение. При опросе беспокоят периодические боли в верхней половине живота и за грудиной, возникающие натощак и по ночам, изжога. Больной направлен на диагностическую фиброэзофагогастроскопию. При проведении фиброэзофагогастроскопии выявлены явления эрозивного рефлюкс-эзофагита II степени, явления хронического гастрита с атрофией и зернистой гиперплазией в антральном отделе. Биоптаты со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии направлены на бактериологическое исследование с целью обнаружения Н. pylori. Выявлен Н. pylori, определена его антилизоцимная активность. АЛА составила 2,5 мкг/м, что позволило диагностировать пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Была проведена повторная фиброэзофагогастроскопия с хромоскопией пищевода 2%-ным водным раствором Люголя с прицельной множественной биопсией с последующим морфологическим исследованием, которая выявила у больного дисплазию легкой степени слизистой желудка дистальнее зубчатой линии.

Пример 3. Пациент Г., 13 лет. Направлен для проведения диагностической фиброэзофагогастродуоденоскопии с диагнозом “Хронический гастродуоденит, обострение”. Проведенная фиброэзофагогастроскопия выявила у больного признаки эзофагита I степени, явления хронического гастрита. При бактериологическом исследовании биоптатов со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии выявлен Н. pylori, определена его антилизоцимная активность. АЛА составила 1 мкг/мл, что позволило диагностировать отсутствие пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.

Повторная фиброэзофагогастроскопия с множественной биопсией и морфологическим исследованием выявила у пациента признаки эзофагита и хронического активного гастрита средней степени.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни позволяет выявить пренеопластическое осложнение гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии его проявления, когда отсутствуют клинические симптомы и эндоскопические признаки, провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания. Заявляемый способ прост в осуществлении и не требует дорогостоящей аппаратуры.

Источники информации

1. Трухманов А.С. Пищевод Баррета: эпидемиология, патогенез, клиническое течение и профилактика // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2002. № 5. С. 59-62.

2. Годжелло Э.А. Пищевод Баррета: эндоскопическая диагностика, стратегия наблюдения и лечения // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2002. № 5. С. 67-71.

3. Haringsma J., Tytgat G.N.J. Fluorescence and autofluorescence// Baillierre's Clin. Gastroenterology. 1999. Vol. 13. № 1. P. 1-10.

4. Adrian A.L., Ter H.C., Cassidi M.J. et al. High resolution endoluminal sonography is a sensitive modality for the identification of Barrett's metaplasia// Gastrointest. Endoscopy, 1997. Vol. 46. P. 147-151.

5. Кубышкин В.А., Корняк Б.С. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь // М.: Спрос, 1999. С. 95.

6. Schlemper R.J., Riddel R.H., Kato Y. et al. The Vienna classification of gastrointestinal epithelial neoplasia//Gut. 2000. Vol. 47. P. 251-255.

7. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М.: Триада-Х, 1998, с. 289.

8. Пасечников В.Д., Ивашкин В.Т., Чуков С.З. Ингибиторы протонной помпы в терапии предраковых заболеваний пищевода. // В кн. Профилактика и лечение хронических заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта. Под ред. Ивашкина В.Т. М.: Медпресс-информ, 2002, с. 111.

9. Gisbert J.P., Pajares J.M. Prevalence of Helicobacter pylori infection in gastroesophageal reflux disease and Barretts esophagus // Med Clin (Barc). 2002. Vol. 119(6). P. 217-223.

10. Бухарин О.В. Персистенция микроорганизмов. M.: Медицина, 1999.

Размещено на Allbest.ru