Активность сухого (лиофилизированного) туберкулина для млекопитающих

Размещено на http://www.allbest.ru/

АКТИВНОСТЬ СУХОГО (ЛИОФИЛИЗИРОВАННОГО) ТУБЕРКУЛИНА ДЛЯ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

В.В. Белушко

ННЦ «ИЭКВМ», г. Харьков, Украина

Определение биологической активности туберкулина является важным этапом осуществления контроля качества производства этого препарата. Международные или национальные стандарты биологических препаратов применяются в тех случаях, когда невозможно получить исчерпывающей информации о качестве этих веществ с помощью химических и физических методов или эти методы являются труднодоступными из-за их дороговизны. В таком случае пригодность препаратов проверяется с помощью биологических тест-систем, в которых осуществляется оценка опытного препарата по сравнению со стандартом установленной активности [1, 2].

Относительно диагностических микобактериальних биопрепаратов, которые применяются для выявления больных туберкулезом животных, то как основной контроль, по требованиям МЭБ предусматривается тест на развитие у животных реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ) при внутрикожном введении туберкулина. Одной из главных характеристик качества туберкулина есть биологическая активность, которая условно определяется в международных единицах действия (МЕ). Активность определяется сравнением опытных образцов туберкулина с международным стандартом или национальным стандартом, откалиброванным относительно международного стандарта [3].

Впервые в мире международный стандарт, сначала для АТК (альттуберкулин Коха) был изготовлен в Лондоне и утвержден в 1928 году Организацией здравоохранения при Лиге Наций. Биологическая активность этого препарата составляла 100 000 IU (International Unit) в 1,0 см3 аллергена. В последующем, второй и третий международные стандарты для АТК были изготовлены в Копенгагене (Дания) в 1935 и 1965 гг.

Применение ППД-туберкулина, как диагностического препарата, требовало создания международного стандарта этого аллергена. За основу была взята серия туберкулина, которая изготовлена Seibert в 1940 г. из микобактерий возбудителя туберкулеза вида M. tuberculosis путем химического осаждения белка с помощью сульфата аммонию. Стандарт PPD-S был утвержден в 1951 году. За единицу активности (туберкулинову единицу - ТЕ, в последующем - международную единицу (IU)) стандарта принято 0,000028 мг активного вещества. Этот стандарт туберкулина изготовляют в ампулах, которые вмещают по 500 000 IU (10,0 мг PPD и 4,0 мг% буферных солей) [4].

Основным требованием для стандартизации туберкулина является биологическая реакция, интенсивность которой зависит от количества активной субстанции [3, 5].

Национальный институт биологических стандартов и контроля (NIBSC) в г. Вейбридж (Великобритания) обеспечивает для калибровки национальных образцов диагностических препаратов международными стандартами другие страны, в том числе и туберкулином очищенным (ППД) для млекопитающих [6, 7].

В частности на Украине, для проведения стандартизации туберкулина для млекопитающих, используют специально отобранную серию жидкого «Туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих в стандартном растворе», которую производят по технологи, разработанной в ННЦ «ИЭКВМ» на Государственной Сумской биологической фабрике [8]. В связи с этим, с целью получения собственного национального стандарта туберкулина для млекопитающих с более стабильными свойствами в ННЦ «ИЭКВМ» разработана технология изготовления сухого (лиофилизированного) ППД-туберкулина для млекопитающих, который сохраняет биологическую активность и специфичность на протяжении значительно большего срока (4 - 5 лет), чем туберкулин, который изготовляется в стандартном растворе (2 года). Поэтому целью данной работы было исследование диагностической эффективности изготовленных серий туберкулина сухого очищенного (ППД) для млекопитающих.

Материалы и методы: Исследование диагностической эффективности 3-х опытно-производственных серий (С-1, С-2, С-3) «Туберкулина сухого очищенного (ППД) для млекопитающих», изготовленного, по технологии разработанной ННЦ «ИЭКВМ», в условиях Государственной Сумской биологической фабрики проведенные на клинически здоровом крупном рогатом скоте (бычки возрастом 8-12 мес., массой 180-250 кг (Всего 35 гол.)) в благополучном по туберкулезу животных хозяйстве.

Изучения биологической активности проводили на 20-ти клинически здоровых, не реагирующих на туберкулин для млекопитающих, бычках, которые раньше не использовались ни в каких опытах и предварительно (за 30 суток) сенсибилизированных взвесью живой культуры вакцинного штамма BCG (гомологическая система) в дозе 5,0 мг бактериальной массы в 1,0 см3 стерильного изотонического раствора. Реактогенность изучали на 15-ти клинически здоровых бычках, которым не вводили культуру вакцинного штамма BCG. Биологическую активность и реактогенность изготовленных серий аллергена сравнивали с контрольной серией Национального стандарта Украины «Туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих в стандартном растворе» - серия № 5.

Аллергены вводили внутрикожно в предварительно депилированные и обработанные 70° этиловым спиртом участки кожи в области средней трети шеи с помощью инъъектора «БИ-7» в дозе 5000 МЕ в объеме 0,1 см3: с левой стороны - на расстоянии 10-15 см между местами введения - три опытных серии туберкулина, а с правой стороны - контрольную серию № 5 (национальный стандарт). Учет аллергических реакций у животных проводили через 72 часа после введения аллергенов путем определения величины утолщения кожи в месте инъекции препарата. Манипуляции с животными проводили руководствуясь принципами биоэтики.

Результаты исследований. Результаты определения биологической активности опытно-производственных серий туберкулина на крупном рогатом скоте приведены в таблице 1.

Таблица 1

Проявление интенсивности аллергических реакций на туберкулин у крупного рог. скота, сенсибилизированного культурой вакцинного шт. BCG

Примечание: достоверность результатов определения биологической активности опытно-производственных серий сухого очищенного туберкулина (ППД) для млекопитающих составляет 95-97,5 %.

Как видно из приведенной таблицы 1, аллергические реакции у бычков, сенсибилизированных живой культурой вакцинного штамма BCG, были неодинаковыми. При этом, максимальный размер утолщения складки кожи у животных через 72 ч. после введения первой опытной серии туберкулина (С-1) составляет 23 мм, а минимальный - 4 мм (таблица 1). Среднее значение, при этом, составляет (12,7 ± 0,95) мм. Соответствующие параметры относительно второй и третьей опытных серий (С-2, С-3) составляют 28 мм и 6 мм: в среднем - (14 ± 1,0) мм, а также 24 мм и 4 мм: средний показатель - (13,2 ± 1,0) мм.

В суммарном отношении величина утолщения складки кожи после введения аллергенов на серию № 1 составляла 254 мм, на серию № 2 - 280 мм, на серию № 3 - 264 мм, а на контрольную серию туберкулина в стандартном растворе (С5) - 233 мм (M ± m = 11,7 ± 0,65).

Следует отметить, что при статистической обработке полученных результатов по методу критерия знаков (таблица 1) достоверной разницы, которая свидетельствовала бы о преимуществе одной из серий туберкулина над другой не установлено, что свидетельствует о соответствии качества туберкулина сухого очищенного (ППД) для млекопитающих действующему национальному стандарту Украины для этого аллергена [5].

Реактогенность каждой серии определяли в опыте на 15-ти бычках, которым также с левой стороны вводили опытные серии туберкулина, а с правой стороны - контрольную серию. Через 72 часа на месте введения туберкулинив проявления аллергических и воспалительных реакций не было, что достоверно свидетельствует о нереактогенности опытных серий туберкулина сухого очищенного (ППД) для млекопитающих.

Вывод

На основании проведенных испытаний установлено, что туберкулин сухой (лиофилизат) очищеный (ППД) для млекопитающих является биологически активным и нереактогенным препаратом, который может использоваться, как национальный стандарт при проведении контроля качества коммерческих биофабричных серий туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих в стандартном растворе.

лиофилизированный туберкулин млекопитающий

Литература

1. Диагностические и лечебные аллергены. - М.: Медицина, 1990. -256 с..

2. Рокицкий, П. Ф. Биологическая статистика [ Текст ] / П. Ф. Рокицкий. - Минск : Издат. «Высшая школа», 1973. - 320 с.

3. Яблокова, Т. Б. Характеристика препаратов для диагностики туберкулёза и микобактериозов [ Текст ] / Т. Б. Яблокова // Пробл. туберкулеза, М. : «Медицина», 1972. - № 5. - С. 72-76.

4. Козлов, В. Е. Оценка активности национального стандарта туберкулина (ППД) для млекопитающих относительно 1-го международного стандарта туберкулина (PPD) bovine [ Текст ] / В. Е. Козлов, В. М. Безгин, К. В. Шумилов // Вет. патология «Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулёза животных», Научно-практич. журн. по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии. М. : 2004. - № 1-2 (9). - С. 85-89.

5. Устинович, А. Т. Применение математической статистики при обработке экспериментальных данных в ветеринарии [ Текст ] / А. Т. Устинович, П. Т. Лебедев // Зап.-Сибирское отд., 1970. - 42 с.

6. OIE Manual of standards for diagnostic test and vaccines / 2004.1.

7. Козлов, В. Е. Аллергены для диагностики туберкулёза. Совершенствование производства и стандартизация [ Текст ] : автореф. дис. … д - ра вет. наук / В.Е. Козлов ; [ ВИЭВ ] . - М., 2007 . - 32 с.

8. ППД-туберкулин для млекопитающих производства Сумской биофабрики [Текст] / А.И. Завгородний [и др.] // «Ветеринарная медицина Украины». - 2006. - № 1. - С. 34-35.

Размещено на Allbest.ru