Роль рецептора эпидермального фактора роста EGFR в эффективности неоадъювантной химиотерапии у больных тройным негативным раком молочной железы

Размещено на http://www.allbest.ru/

Научно-исследовательский институт (НИИ) онкологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр (НИМЦ) Российской академии наук

Национальный исследовательский Томский государственный университет (НИ ТГУ)

Сибирский государственный медицинский университет (СибГМУ)

Роль рецептора эпидермального фактора роста EGFR в эффективности неоадъювантной химиотерапии у больных тройным негативным раком молочной железы

Бабышкина Н.Н., Дронова Т.А., Замбалова Е.А.,

Завьялова М.В., Слонимская Е.М., Чердынцева Н.В.

г. Томск

РЕЗЮМЕ

рак молочный железа химиотерапия

Актуальность. Выявление предсказательных молекулярных маркеров тройного негативного рака молочной железы позволит оценить эффективность неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) и определить оптимальные подходы к прогнозированию течения заболевания.

Цель исследования. Изучить взаимосвязь экспрессии рецептора эпидермального фактора роста EGFR и полиморфных вариантов его гена с эффективностью неоадъювантной химиотерапии у больных тройным негативным раком молочной железы.

Материалы и методы. В исследование включены 70 пациенток с тройным негативным раком молочной железы, получавших 2-4 курса НАХТ по схеме FAC или CAX. Оценка эффективности НАХТ проводилась по шкале RECIST. Уровень экспрессии EGFR в опухоли до и после НАХТ оценивался иммуногистохимическим методом. Анализ полиморфных вариантов гена EGFR в локусах rs2227983 и rs1468727 проведен с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Результаты. Выявлено, что в процессе НАХТ уровень экспрессии EGFR в опухоли значимо снижается (p = 0,000). Показано, что достижение объективного клинического и полного патоморфологического ответа опухоли ассоциировано с низким уровнем экспрессии EGFR (p = 0,007 и p = 0,000 соответственно). Отсутствие эффективного ответа на НАХТ у больных тройным негативным раком молочной железы связано с носительством мутантных генотипов EGFRCC в локусе rs1468727 (p = 0,042). Кроме того, среди пациентов, несущих мутантный вариант гена EGFRCC, чаще встречаются опухоли с высокой экспрессией EGFR по сравнению с больными, имеющими дикий вариант EGFRTT (p = 0,047).

Заключение. Уровень экспрессии EGFR в опухоли и полиморфные варианты его гена в локусе rs1468727 могут рассматриваться в качестве потенциальных молекулярных маркеров с предсказательной значимостью в отношении эффективности НАХТ у больных тройным негативным раком молочной железы.

Ключевые слова: тройной негативный рак молочной железы, неоадъювантная химиотерапия, рецептор эпидермального фактора роста EGFR, полиморфизм генов.

ABSTRACT

The role of epidermal growth factor receptor (EGFR) in the efficacy of neoadjuvant chemotherapy in triple-negative breast cancer patients

Babyshkina N.N., Dronova T.A., Zambalova E.A., Zavyalova M.V., Slonimskaya E.M., Cherdyntseva N.V.

Cancer Research Institute, Tomsk National Research Medical Center (NRMC) of Russian Academy of Sciences

National Research Tomsk State University (NR TSU)

Siberian State Medical University (SSMU)

Background. Identification of predictive molecular markers of triple-negative breast cancer (TNBC) will enable the evaluation of the efficacy of neoadjuvant chemotherapy (NACT) and define optimum approaches for the prognosis of the disease course in TNBC patients.

The aim of the study was to examine the correlation between the expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR), its gene's polymorphic variants and the neoadj'uvant chemotherapy (NACT) efficacy in triple-negative breast cancer (TNBC) patients.

Materials and methods. The study included 70 patients with triple-negative breast cancer, who had received 2-4 cycles of FAC and CAX regimens. The efficacy of the neoadj'uvant chemotherapy was assessed according to the RECIST scale. The EGFR expression level in tumors before and after the NACT was evaluated with the help of immunohistochemistry. Genotypes for EGFR (rs2227983 and rs1468727) were detected by a real-time PCR.

Results. It was found that NCT significantly decreases the EGFR expression level in the tumor (p = 0.000).

The research associates the objective clinical response as well as the pathological complete response with the low EGFR expression level (p = 0.007 and p = 0.000 respectively). Patients carrying the EGFRCC mutant genotype of rs1468727 did not achieve a pathological complete response (p = 0.042). In addition, patients with EGFRCC mutant genotype are more likely to have tumors with a high EGFR expression compared to EGFRTT wild-type genotype patients (p = 0.047).

Conclusion. The EGFR expression level in tumor tissue and the polymorphic variants of its gene in the rs1468727 locus can be considered as potential molecular markers with predictive significance in relation to the NACT efficacy in triple-negative breast cancer patients.

Key words: triple-negative breast cancer, neoadjuvant chemotherapy, epidermal growth factor receptor (EGFR); gene polymorphisms.

ВВЕДЕНИЕ

В структуре заболеваемости раком молочной железы тройной негативный подтип занимает особое место, поскольку характеризуется агрессивным течением и имеет неблагоприятный прогноз в отношении выживаемости [1-3]. Наиболее существенной характеристикой тройного негативного рака молочной железы (ТНРМЖ) является отсутствие мишеней воздействия для проведения гормонотерапии и таргетной терапии герцепти- ном, что существенно затрудняет лечение данного заболевания. На сегодняшний день противоопухолевая системная терапия является одним из основных этапов комплексного лечения тройного негативного рака молочной железы. При использовании неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) цитостатические препараты способствуют уменьшению размера опухоли, что позволяет выполнять органосохраняющие операции и максимально сохранить здоровые ткани молочной железы. Однако полный патоморфологический ответ опухоли наблюдается лишь у 12-30% больных [4, 5]. Таким образом, поиск дополнительных прогностических маркеров чувствительности и резистентности к различным группам цитостатиков, позволяющих индивидуализировать терапевтические подходы у больных тройным негативным подтипом, остается актуальной задачей.

Одним из активно изучаемых в последние годы молекулярных маркеров является рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), трансмембранный гликопротеин, вовлеченный в регуляцию процессов клеточного роста и злокачественной трансформации. Считается общепризнанным тот факт, что амплификация и (или) гиперэкспрессия EGFR ведут к развитию резистентности к эндокринной терапии в эстроген-зависимых опухолях [6, 7]. В своих недавних исследованиях мы продемонстрировали высокий уровень экспрессии EGFR в опухоли у больных, резистентных к терапии тамоксифеном, и показали его прогностическую значимость [8]. В эстроген-независи- мых опухолях гиперэкспрессия EGFR в большей степени является результатом увеличения числа копий гена из-за полисомии, нежели за счет активирующих мутаций или амплификации EGFR и, как правило, ассоциирована с прогрессированием заболевания и низкими показателями выживаемости больных [9, 10]. Стоит отметить, что прогностическому значению экспрессии EGFR у больных ТНРМЖ посвящено большое число исследований [11-14], однако вклад функционально значимых полиморфных сайтов гена EGFR в сопоставлении с уровнем экспрессии его белкового продукта в механизмы резистентности к неоадъювантной химиотерапии остается в настоящее время недостаточно изученным.

Цель исследования -- изучить взаимосвязь экспрессии EGFR и функционально значимых полиморфных вариантов его гена с эффективностью неоадъювантной химиотерапии у больных тройным негативным раком молочной железы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В исследование включены 70 пациенток в возрасте 28--69 лет с верифицированным диагнозом ТНРМЖ, находившихся на лечении в отделении общей онкологии НИИ онкологии Томского НИМЦ с 2007 по 2013 г. Все больные получали в неоадъювантном режиме 2--4 курса полихимиотерапии по схеме FAC (5-фторурацил 500 мг/м² в 1-е сут, адриамицин 50 мг/м² в 1-е сут, ци- клофосфамид 500 мг/м² в 1-е сут, внутривенно;

интервал между курсами 21 сут), или САХ (ци- клофосфан 100 мг/м² внутримышечно в течение 14 сут, адриамицин 30 мг/м² внутривенно в 1-е и 8-е сут, кселода 1 000 мг/м² 2 раза/сут, per os, в течение 14 сут; интервал между курсами 21 сут) с последующим проведением хирургического лечения (в объеме радикальной резекции, секторальной резекции с аксиллярной лимфаденэктомии или радикальной мастэктомии). По показаниям в адъювантном режиме были проведены курсы полихимиотерапии (FAC) и лучевой терапии.

Оценка эффективности НАХТ осуществлялась по шкале RECIST. Объективный клинический ответ определялся по сумме полных и частичных регрессий опухоли молочной железы, наличие стабилизации и прогрессирования заболевания рассматривалось как отсутствие эффективности лечения. Выраженность лекарственного патомор- фоза в ткани молочной железы и регионарных лимфатических узлах оценивалась по классификации, предложенной Е.Ф. Лушниковым (1977) [15]. Диагноз «полная морфологическая регрессия» устанавливался при отсутствии опухолевых элементов как в ткани молочной железы, так и в исследуемых лимфатических узлах. Срок наблюдения за больными составил 12-80 мес.

С целью изучения полиморфных вариантов гена EGFR проводилось выделение ДНК из образцов периферической крови с помощью наборов QlAamp DNA Mini Kit (50) (Qiagen). Качественная и количественная оценка ДНК проведена на спектрофотометре NanoDrop-1000 (NanoDrop, США). Полиморфные варианты гена EGFR в локусах rs2227983 и rs1468727 изучены с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени по технологии TaqMan.

Последовательность праймеров и проб подбирали при помощи программы OligoAnalysisVector NTI с использованием генетического банка данных (www.ncbi.nlm.nih.gov). Реакционная смесь для полимеразной цепной реакции объемом 15 мкл ключала 100 нг геномной ДНК; 0,5--1,5 мкл специфической пары праймеров и проб с концентрацией 1 о.е./мл; 200 мкМ каждого дезоксинуклеотид- трифосфата; 1,2--2,0 мкл буфера (60 мМТт-НС1 (pH 8,5 при 25 °С), 1,5 мМ MgCl₂; 25 мМКС1; 10 мМ 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон X-100) и 0,5--1,0 ед. Taq ДНК-полимеразы (компания «Ме- диген», г. Новосибирск). Программа амплификации включала предварительную денатурацию при 95 °С в течение 2 мин, с последующими 40 циклами при 95 °С (10 с), отжига при специфической температуре для каждой пары праймеров (30 с) на амплификаторе CFX96 (Bio--Rad, США).

Уровень экспрессии EGFR в опухоли до и после проведения НАХТ изучен на парафиновых срезах с помощью иммуногистохимическо- го метода. Применялись антитела к EGFR (клон SP9, рабочее разведение 1: 100) фирмы Novus Biologicals (США). Результаты иммуногистохи- мических реакций оценивали полуколичественно, в зависимости от доли (%) положительно окрашенных клеток и интенсивности их окрашивания, по меньшей мере, в 10 областях каждого среза при увеличении 400. Интенсивность окрашивания была оценена по шкале от 0 до 3, при этом значение 0 определялось как отрицательное окрашивание, 14-- как слабое окрашивание, 24-- как умеренное окрашивание и 34-- сильное окрашивание. Срезы с умеренной (2+) или сильной (3+) цитоплазматической и (или) мембранной окраской в более чем 10% клеток считали EGFR-позитивными, срезы с отрицательным окрашиванием (0) или слабой (1+) экспрессией в менее чем 10% клеток -- EGFR-негативными.

Для анализа полученных данных использована программа SPSS 21.0 (IBM SPSS Statistics, США). Распределение генотипов исследуемых генов было проверено на соответствие равновесию Харди--Вайнберга. Для сравнения частот встречаемости аллелей и генотипов гена EGFR, оценки их взаимосвязи с уровнем экспрессии EGFR, а также анализа взаимосвязи уровня экспрессии EGFR с эффективностью НАХТ был использован двусторонний критерий Фишера. Если количество наблюдений в таблице сопряженности было больше 5, то в расчет принимали %² с поправкой Йетса. Различия считались достоверными при уровне значимости р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Для анализа изменений уровня экспрессии EGFR в опухоли мы оценили содержание клеток с негативной и позитивной экспрессией в биопсийных образцах до неоадъювантной химиотерапии и в послеоперационных образцах после лечения. Выявлено, что показатели экспрессии EGFR в процессе проведения НАХТ значимо изменялись. Так, число клеток с позитивной экспрессией EGFR снижалось с 85,7 до 44,8%; количество EGFR-негативных клеток, напротив, увеличивалось с 14,3 до 55,2% (р = 0,000; рис. 1). Поскольку установлено, что применение НАХТ приводит к снижению уровня экспрессии EGFR, мы проанализировали, насколько такие экспрессионные особенности связаны с ответом опухоли на терапию. Выявлено, что высокая частота как объективного клинического, так и полного патоморфологического ответа опухоли наблюдаласьу больных с низким уровнем экспрессии EGFR (p = 0,007 и p = 0,000 соответственно, рис. 2).

Рис. 1 Уровень экспрессии EGFR в опухоли до и после проведения неоадъювантной химиотерапии

Рис. 2 Связь уровня экспрессии EGFR в опухоли с эффективностью неоадъювантной химиотерапией

Далее в образцах периферической крови пациентов с тройным негативным раком молочной железы изучены полиморфные варианты гена EGFR в двух локусах rs1468727 и rs2227983 для оценки их возможной вовлеченности в реализацию механизмов чувствительности и резистентности опухоли к неоадъювантной химиотерапии. При анализе объективного клинического ответа выявлено, что частота встречаемости мутантного генотипа EGFRCC в локусе rs1468727 у пациенток со стабилизацией и (или) прогрессированием заболевания более чем в два раза превосходила таковую у больных с полной и (или) частичной регрессией, однако без статистических различий (р = 0,114, таблица). Изучение полных морфологических регрессий позволило получить значимую ассоциацию данного мутантного варианта с неэффективным ответом опухоли (p = 0,042, табл. 1).

Таблица

Связь полиморфизмов гена EGFR с эффективностью НАХТ

EGFR (rs1468727)

EGFR (rs2227983)

Примечание. ОШ -- отношение шансов; ДИ -- доверительный интервал. ¹ различия показателей между группами «полныи ответ» и «отсутствие ответа». 120 100 80 60 40 20

Мы проанализировали связь исследуемых полиморфных вариантов EGFR с уровнем экспрессии кодируемого им белка. Установлено, что носители мутантных генотипов EGFRCC локуса rs1468727 чаще имели позитивную экспрессию EGFR в опухоли до проведения НАХТ по сравнению с носителями диких вариантов гена EGFR (р = 0,047, рис. 3). После проведения НАХТ позитивная экспрессия EGFR в опухоли регистрировалась у всех пациентов (100%), имеющих мутации в данном полиморфном локусе (р = 0,038, рис. 3).

Рис. 3 Связь уровня экспрессии EGFR в опухоли до (а) и после (b) неоадъювантной химиотерапии с полиморфизмами гена EGFR

ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенного исследования мы показали значимое снижение уровня экспрессии EGFR в опухоли в процессе НАХТ, которое ассоциировано с объективным клиническим и полным патоморфологическим ответом опухоли. Полученные нами данные находят подтверждение в литературных источниках. Известно, что использование стандартных комбинаций алкилирующих агентов и таксанов при местнораспространенном или метастатическом раке молочной железы приводит к снижению изначально высокого уровня экспрессии EGFR, что имеет прогностическую значимость [16]. Кроме того, уровень экспрессии EGFR рассматривается в настоящее время в качестве потенциального предиктивного маркера ответа на НАХТ у больных ТНРМЖ [17].

Отсутствие эффективного ответа на предоперационную химиотерапию у больных ТНРМЖ в нашем исследовании связано с носительством мутантных генотипов EGFR локуса rs1468727. Известно, что полиморфный вариант rs1468727 затрагивает интронную область гена EGFR и напрямую не изменяет аминокислотную последовательность белка. Однако мутации внутри интронов могут оказывать существенное влияние на уровень процессов транскрипции и стабильность РНК. Предполагается, что мутантный вариант EGFRCC локуса rs1468727 связан с увеличением активности рецептора, его экспрессии или стабильности, что ведет к активации EGFR- опосредованных сигналов и значительному увеличению пролиферативного потенциала опухоли [18]. Эта гипотеза находит подтверждение в наших исследованиях, поскольку мутантный генотип EGFRCC связан с отсутствием ответа опухоли на НАХТ. Важно, что у 60% пациентов с данной мутацией опухоли характеризуются положительной экспрессией EGFR. Высокий уровень экспрессии EGFR может способствовать активации большого числа внутриклеточных мессенджеров, в том числе PI3K/Akt, Ras/MAPK, STAT, что приводит к стимуляции пролиферативных процессов и увеличению инвазивного потенциала опухоли, способствующих неэффективному лечению. Следует отметить, что исследованный нами полиморфизм гена EGFR практически не описан в литературе, продемонстрирована лишь связь мутации rs1468727 с прогнозом глиом [19].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Эффективность НАХТ у больных ТНРМЖ сопряжена с генотипическими и фенотипическими особенностями EGFR. Механизмы неэффективности неоадъювантной химиотерапии могут быть обусловлены мутацией EGFR в локусе rs1468727, приводящей к высокой экспрессионной активности рецептора, что обусловливает реализацию EGFR-опосредованных сигнальных каскадов, обеспечивающих пролиферативный потенциал опухоли. Снижение уровня экспрессии EGFR в опухолевой ткани после проведения НАХТ и полиморфные варианты гена EGFR rs1468727 могут рассматриваться в качестве потенциальных молекулярных критериев, ассоциированных с эффективностью неоадъювантной химиотерапии у больных ТНРМЖ.

ЛИТЕРАТУРА

1. De Ruijter T.C., Veeck J., de Hoon J.P., van Engeland M., Tjan-Heijnen V.C. Characteristics of triple-negative breast cancer. Clin. Oncol. 2011; 137 (2): 183-192. DOI: 10.1007/s00432-010-0957-x.

2. Wahba H.A., El-Hadaad H.A. Current approaches in treatment of triple-negative breast cancer. Cancer Biol. Med. 2015; 12 (2): 106-116. DOI: 10.7497/j.issn.2095- 3941.2015.0030.

3. Oualla K., El-Zawahry H.M., Arun B., Reuben J.M., Woodward W.A., Gamal El-Din H., Lim B., Mellas N., Ueno N.T., Fouad T.M. Novel therapeutic strategies in the treatment of triple-negative breast cancer. Ther. Adv. Med. Oncol. 2017; 9 (7): 493-511. DOI: 10.1177/1758834017711380.

4. Voduc K.D., Cheang M.C., Tyldesley S., Gelmon K., Nielsen T.O., Kennecke H. Breast cancer subtypes and the risk of local and regional relapse. Journal of Clinical Oncology. 2010; 28 (10): 1684-1691. DOI: 10.1200/ JCO.2009.24.9284.

5. Cortazar P., Zhang L., Untch M., Mehta K., Costanti- no J.P., Wolmark N., Bonnefoi H., Cameron D., Gianni L., Valagussa P., Swain S.M., Prowell T., Loibl S., Wick- erham D.L., Bogaerts J., Baselga J., Pйrou C., Blumenthal G., Blohmer J., Mamounas E.P., Bergh J., Semigla- zov V., Justice R., Eidtmann H., Paik S., Piccart M., Sri- dhara R., Fasching P.A., Slaets L., Tang S., Gerber B., Geyer C.E. Jr., Pazdur R., Ditsch N., Rastogi P., Eiermann W., von Minckwitz G. Pathological complete response and long-term clinical benefit in breast cancer: the CTNeoBC pooled analysis. Lancet. 2014; 384 (9938): 164-172. DOI: 10.1016/S0140-6736(13)62422-8.

6. Osborne C.K., Schiff R. Mechanisms of endocrine resistance in breast cancer. Ann. Rev. Med. 2011; 62: 233247. DOI: 10.1146/annurev-med-070909-182917.

7. Chong K., Subramanian A., Sharma A., Mokbel K. Measuring IGF-1, ER-a and EGFR expression can predict tamoxifen-resistance in ER-positive breast cancer. Anticancer Res. 2011; 31 (1):23--32.

8. Дронова Т.А., Бабышкина Н.Н., Завьялова М.В., Пата- ляк С.В., Слонимская Е.М., Чердынцева Н.В., Кжыш- ковска Ю.Г. Взаимосвязь компонентов EGFR/PI3K/ AKT-сигнального пути с эффективностью терапии та- моксифеном у больных эстрогензависимым раком молочной железы. Успехи молекулярной онкологии. 2018; 5 (3): 40-50. DOI: 10.17650/2313-805X-2018-5-3-40-50.

9. Tischkowitz M., Brunet J.S., Begin L.R., Huntsman D.G., Cheang M.C., Akslen L.A., Nielsen T.O., Foulkes W.D. Use of immunohistochemical markers can refine prognosis in triple negative breast cancer. BMC Cancer. 2007; 7: 134. DOI: 10.1186/1471-2407-7-134.

10. Park H.S., Jang M.H., Kim E.J., Kim H.J., Lee H.J., Kim Y.J., Kim J.H., Kang E., Kim S.W., Kim I.A., Park S.Y. High EGFR gene copy number predicts poor outcome in triple-negative breast cancer. Mod. Pathol. 2014; 27 (9): 1212-1222. DOI: 10.1038/mod- pathol.2013.251.

11. Zhang M., Zhang X., Zhao S., Wang Y., Di W., Zhao G., Yang M., Zhang Q. Prognostic value of survivin and EGFR protein expression in triple-negative breast cancer (TNBC) patients. Target Oncol. 2014; 9 (4): 349-357. DOI: 10.1007/s11523-013-0300-y.

12. Yue Y., Astvatsaturyan K., Cui X., Zhang X., Fraass B., Bose S. Stratification of prognosis of triple-negative breast cancer patients using combinatorial biomarkers. PLoS One. 2016; 11 (3): e0149661. DOI: 10.1371/journal. pone.0149661.

13. Abdelrahman A.E., Rashed H.E., Abdelgawad M., Abdelhamid M. Prognostic impact of EGFR and cytokeratin 5/6 immunohistochemical expression in triple-negative breast cancer. Ann. Diagn. Pathol. 2017; 28: 43-53. DOI: 10.1016/j.anndiagpath.2017.01.009.

14. Foidart P., Yip C., Radermacher J., Blacher S., Lie- nard M., Montero-Ruiz L., Maquoi E., Montaudon E., Chвteau-Joubert S., Collignon J., Coibion M., Jossa V., Marangoni E., Noлl A., Sounni N.E., Jerusalem G. Expression of MT4-MMP, EGFR, and RB in triple-negative breast cancer strongly sensitizes tumors to erlotinib and palbociclib combination therapy. Clin. Cancer Res. 2019; 25 (6): 1838-1850. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR- 18-1880.

15. Лушников Е.Ф. Лучевой патоморфоз опухолей человека. M.: Медицина, 1977: 327.

16. Van Reesema L.L.S., Zheleva V., Winston J.S., Jansen R.J., O'Connor C.F., Isbell A.J., Bian M., Qin R., Bassett P.T., Hinson V.J., Dorsch K.A., Kirby B.W., van Sciver R.E., Tang-Tan A.M., Harden E.A., Chang D.Z., Allen C.A., Perry R.R., Hoefer R.A., Tang A.H. SIAH and EGFR, two RAS pathway biomarkers, are highly prognostic in locally advanced and metastatic breast cancer. EBioMedicine. 2016; 11: 183-198. DOI: 10.1016/j.ebi- om.2016.08.014.

17. Tang Y., Zhu L., Li Y., Ji J., Li J., Yuan F., Wang D., Chen W., Huang O., Chen X., Wu J., Shen K., Loo W.T., Chow L.W. Overexpression of epithelial growth factor receptor (EGFR) predicts better response to neo-adjuvant chemotherapy in patients with triple-negative breast cancer. J. Transl. Med. 2012; 10 (1): S4. DOI: 10.1186/1479-5876-10-S1-S4.

18. Li B., Zhao W., Li J., Yan M., Xie Z., Zhu Y., Chen C., Jin T. Effect of epidermal growth factor receptor gene polymorphisms on prognosis inglioma patients. Oncotar- get. 2016; 7(39): 63054-63064. DOI: 10.18632/oncotar- get.10666.

19. Wang X., Zhang H., Wang D., Li X. Association of genetic polymorphisms of EGFR with glioma in a Chinese population. Genet. Test Mol. Biomarkers. 2015; 19 (1): 59-62. DOI:10.1089/gtmb.2014.0228.

Размещено на Allbest.ru