Жовчносекреторна функція печінки самок щурів в умовах блокади естрогенових рецепторів тамоксифеном

Размещено на http://allbest.ru

10

Жовчносекреторна функція печінки самок щурів в умовах блокади естрогенових рецепторів тамоксифеном

Оксана Боровець, Володимир Бенедь, Євдокія Решетнік,

Станіслав Весельський, Микола Макарчук

Анотація

У гострих дослідах на щурах-самках із канюльованою жовчною протокою, які перебували під тіопенталовим наркозом (5 мг/100 г), досліджено вплив тамоксифену (57,2 мкг/100 г) при його одноразовому внутрішньопортальному введенні на жовчносекреторну функцію печінки.

За допомогою тонкошарової хроматографії визначено концентрацію жовчних кислот (вільних і кон'югованих із таурином і гліцином) в отриманих впродовж гострих дослідів п'яти півгодинних пробах жовчі.

Ключові слова: жовч, жовчні кислоти, печінка, естрогенові рецептори, тамоксифен.

Постановка наукової проблеми та її значення

Аналіз досліджень цієї проблеми. Епідеміологічні та клінічні дослідження переконливо свідчать, що жовчокам'яна хвороба значно частіше трапляється в жінок, ніж у чоловіків. Для європейців характерне формування жовчних каменів саме холестеролової природи [16]. Фізіологічне збільшення концентрації естрогенів (яке спостерігаємо, наприклад, під час вагітності), а також застосування гормональних контрацептивів і гормон-замісна терапія в постменопаузі призводять до посиленої екскреції холестеролу клітинами печінки, перенасичення ним жовчі й, отже, збільшують ризик виникнення холестеролових жовчних каменів у жінок [5, 7, 10, 14, 17]. Однак серед чоловіків зростає кількість патологій гепато-біліарної системи, таких як порушення жовчносекреторної функції печінки, жовчнокам'яна хвороба тощо. Це пов'язують з особливостями харчування та іншими екзогенними факторами. Також цікавий той факт, що споживання етанолу суттєво збільшує кількість естрогенових рецепторів у клітинах печінки, що розглядається як можливий механізм фемінізації й розвитку патології печінки при алкоголізмі. Водночас виявлено, що і естрогени (естрадіол), і андрогени (дигідротестостерон), позитивно впливаючи на тканину печінки й обмін у ній жирних кислот, запобігають розвитку неалкогольного жирового гепатозу при високожи- ровій дієті [19].

Методика. Досліди проведено на білих щурах-самках із масою 180-250 г, у гострих дослідах використано 80 щурів, які перед дослідом були позбавлені їжі на 18-20 год, але мали вільний доступ до води. Усі експерименти з використанням тварин виконано відповідно до Хельсинської декларації (Всесвітня медична асамблея, 1964), Декларації принципів толерантності (28 сесія ЮНЕСКО, 1995), Універсальної декларації по біоетиці та правах людини (ООН, 1997), норм Конвенції про захист прав людини у зв'язку з впровадженням нових біомедичних технологій, прийнятою в 1997 р. в м. Ов'єдо (Іспанія) та підписаною Верховною Радою України у 2002 р., Закону України № 3447 IV «Про захист тварин від жорстокого поводження». Проведені експериментальні дослідження не суперечать за - гальноприйнятим біоетичним нормам і здійснені з дотриманням відповідних міжнародних положень, які стосуються проведення експериментальних робіт та клінічних досліджень.

Під час гострого досліду тварини перебували під тіопенталовим наркозом (5мг/100г маси тіла тварини), уведеним внутрішньочеревно. Після лапаротомії у відпрепаровану жовчну протоку через надріз її стінки вводили тонку пластикову канюлю з приєднаною поліетиленовою трубкою, котра з'єднувалась із мікропіпеткою. Упродовж 30 хв після канюлювання жовчної протоки визначали вихідний рівень жовчовиділення шляхом збору трьох 10-хвилинних порцій жовчі. Після цього піддослідним тваринам внутрішньопортально вводили тамоксифен (57,2 мкг на 100 г маси тіла тварини, розчинений у 200 мкл фізіологічного розчину) та естрон (8 мкг на 100 г маси тіла тварини у 200 мкл фізіологічного розчину). Контрольній групі тварин аналогічно вводили відповідний об'єм фізіологічного розчину (200 мкл). Об'єм секретованої жовчі реєстрували кожні 10 хвилин упродовж трьох годин досліду. Інтенсивність секреторної функції печінки оцінювали за середньою об'ємною швидкістю секреції жовчі, котру розраховували за об'ємом жовчі (нл), що продукувалася впродовж однієї хвилини в перерахунку на один грам маси тіла (нл/г-хв).

Виклад основного матеріалу й обґрунтування отриманих результатів дослідження

Середня об'ємна швидкість секреції жовчі в самок щурів після внутрішньопортальної ін'єкції тамоксифену (57,2 мкг/100 г) не зазнає статистично значимих змін і складала впродовж 2,5 годин гострого досліду 44,0±3,4-35,6±2,0 (нл/г/хв).

Потрібно зазначити, що в самок, які отримали тамоксифен, нормальна фізіологічна дія ендогенних естрогенів через відповідні внутрішньоклітинні естрогенові рецептори стала неможливою. Це, зі свого боку, мало викликати суттєві зміни в регуляції метаболічних про - цесів у клітинах печінки.

Тамоксифен (57,2 мкг/100 г, внутрішньопортально) суттєво впливав на концентрацію холатів різних фракцій, визначених нами в пробах жовчі самок щурів (табл. 1).

Таблиця 1

Концентрація жовчних кислот у жовчі самок щурів (мг %) після внутрішньопортального введення тамоксифену (57,2 мкг/100 г), (М±ЈВ; п=11)

Такі швидкі ефекти блокатора не можуть бути обумовлені лише унеможливленням дії на відповідні рецептори ендогенних естрогенів. Найзначніший вплив тамоксифен виявляв щодо механізмів, які забезпечують утворення, трансцелюлярний і трансканалікулярний транспорт глікохолату, що спричиняє пригні - чення надходження в жовч самок щурів глікохолевої кислоти.

Джерела та література

1. Климюк О. В. Особливості жовчоутворення у щурів різної статі за дії естрону / О. В. Климюк, О. В. Бондзик, Є. М. Решетнік [та ін.] // Фізіол. журн. - 2011. - Т. 57, № 6. - С. 52-57.

2. Весельский С. П. Способ определения желчных кислот в биологических жидкостях / С. П. Весельский, П. С. Лященко, И. А. Лукьяненко // Авторское свидетельство. № 1624322. Опубл. 30.01.1991 г. Бюл. № 4.

3. Філімонова Н. Б. Статистичний аналіз даних відповідно до засад науково обґрунтованої медицини. Первинний аналіз кількісних даних, подання результатів експерименту / Н. Б. Філімонова, І. О. Філь, Т. С. Михайлова // Медицина залізничного транспорту України. - 2004. - № 4. - С. 30-38.

4. Філімонова Н. Б. Статистичний аналіз даних відповідно до засад науково обґрунтованої медицини. Порівняння груп за кількісними показниками / Н. Б. Філімонова, І. О. Філь // Медицина транспорту України. - 2005. - № 4. - С. 86-93.

5. Becker C. Another Selective Estrogen-Receptor Modulator for Osteoporosis / C. Becker // N. Engl J Med. - 2010. - V 362. - P. 752-754.

6. Chen J. Estrogen-induced cholestasis: pathogenesis and therapeutic implications / J. Chen, K. N. Zhao, G. B. Liu // Hepatogastroenterology. - 2013. - V. 60(126). - P.1289-1296.

7. Dhiman R. K. Is there a link between oestrogen therapy and gallbladder disease? / R. K. Dhiman, Y. K. Chawla // Expert Opin Drug Saf. - 2006. - V. 5(1). - P. 117-129.

8. Everson G. T. Mechanisms of gallstone formation in women. Effects of exogenous estrogen (Premarin) and dietary cholesterol on hepatic lipid metabolism / G. T. Everson, C. Mc Kinley, F. Kern // Journal of Clinical Investigation. - 1991. - V. 87(1). - P. 237-246.

9. Feng Y. Cloning of a novel member of the G protein-coupled receptor family related to peptide receptors / Y. Feng, P. Gregor // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 1997. - V. 231(3). - P. 651-654.

10. Fisher B. Tamoxifen for prevention of breast cancer: current status of the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project P-l study / B. Fisher, J. P. Costantino, D. L. Wickerham [et al.] // J Natl Cancer Inst. - 2005. - V. 97. - P. 1652-1662.

11. Gruber C. J. Production and actions of estrogens / C. J. Gruber, W. Tschugguel, C. Schneeberger, J. C. Huber // The New England Journal of Medicine. - 2002. - V. 346(5). - P. 340-352.

12. Hsieh Y.-C. G-Protein-Coupled Receptor 30-Dependent Protein Kinase A Pathway Is Critical in Nongenomic Effects of Estrogen in Attenuating Liver Injury after Trauma-Hemorrhage / Y.-C. Hsieh, H.-P. Yu, M. Frink, T. Suzuki, M.-G. Choudhry [et al.] // The American Journal ofPathology. - 2007. - V. 170. - Issue 4. - P. 1210-1218.

13. Iavarone M. The clinical and pathogenetic significance of estrogen receptor-P expression in chronic liver diseases and liver carcinoma / M. Iavarone, P. Lampertico, C. Seletti [et al.] // Cancer. - 2003. - V. 98(3). - P. 529-534.

14. Khan M. K.. Pregnancy causing gallstone disease / M. K. Khan, M. A. Jalil, S. U. Khan // Mymensingh Med. J. - 2008. - V. 17, Suppl 2. - P. S. 91. - S.96.

15. Marrone J. Adenoviral transfer of human aquaporin-1 gene to rat liver improves bile flow in estrogen-induced cholestasis / J. Marrone, G. L. Lehmann, L. R. Soria [et al.] // Gene Ther. - 2014. - V. 21(12). - P. 1058-1064.

16. Novacek G. Gender and gallstone disease / G. Novacek // Wien Med Wochenschr. - 2006. - V. 156 (19-20). - P. 527-533.

17. Portincasa P. Coordinate regulation of gallbladder motor function in the gut-liver axis / P. Portincasa, A. Di Ciaula, H. H. Wang [et al.] // Hepatology. - 2008. - V. 47(6). - P. 2112-2126.

18. Prossnitz E. R. GPR30: A G protein-coupled receptor for estrogen / E. R. Prossnitz, J. B. Arterburn, L. A. Sklar // Molecular and Cellular Endocrinology. - 2007. - V. 265-266. - P. 138-142.

19. Prossnitz E. R. Estrogen Signaling through the Transmembrane G Protein-Coupled Receptor GPR30 / E. R. Prossnitz, J. B. Arterburn, H. O. Smith, T. I. Oprea, L. A. Sklar [et al.] // Annual Review of Physiology. - 2008. - V. 70. - P. 165-190.

20. Zucchetti A. E. Hormonal modulation of hepatic cAMP prevents estradiol 17 p-D-glucuronide-induced cholestasis in perfused rat liver / A. E. Zucchetti, I. R. Barosso, A. C. Boaglio [et al.] // Dig Dis Sci. - 2013. - V. 58(6). - P. 1602-1614.

Аннотация

Жовчносекреторная функция печени самок крыс в условиях блокады эстрогенных рецепторов та- моксифеном

Боровець Оксана, Бенедь Владимир, Решетник Евдокия, Весельский Станислав, Макарчук Николай.

В острых опытах на крысах - самках с канюлированным желчным протоком, которые находились под тиопенталовым наркозом (5 мг / 100 г), исследовано влияние тамоксифена (57,2 мкг / 100 г) при его однократном внутрипортальном введении на желчесекреторную функцию печени. С помощью тонкослойной хроматографии определена концентрация желчных кислот (свободных и коньюгированных с таурином и глицином ) в полученных в течение острых опытов пяти получасовых пробах желчи.

Ключевые слова: желчь, желчные кислоты, печень, эстрогеновые рецепторы, тамоксифен.

Abstract

Bile Secretion Liver Function in the Female Rats at Estrogen Receptor Tamoxifen Blockade Conditions

Borovets Oksana, Bened' Volodymyr, Reshetnik Evdokiay, Veselsky Stanislav, Makarchuk Mykola

Influence of tamoxifen (57,2 mkg per 100 g of body weight) on secretion of bile and bile acids was studied in acute experiments in female rats. The concentration of bile acids (taurocholic acid, taurochenodeoxycholic and taurodeoxycholic acids, glycocholic acid, glycochenodeoxycholic and glycodeoxycholic acids, cholic acid, chenodeoxycholic and deoxycholic acids) were determine in six samples of bile using thin layer chromatography. Tamoxifen effects on nuclear estrogen receptors. Concentration decreasing of glycocholic acid (27,8-34,3 %, р < 0,01) and cholic acid were observed in female rats bile while such of taurocholic acid increased (16,8-30,7 % (р<0,05). Tamoxifen caused significant changes in the biotransformation and biosynthesis of bile acids in the liver of the experimental female animals, as reflected by changes in the ratio of trihydroxycholic and dihydroxycholic acids. Thus, tamoxifen influencing metabolism and transport of bile acids does not increase its lithogenic characteristics.

Key words: bile, bile acids, liver, estrogen receptors, tamoxifen.

Размещено на Allbest.ru