Иммуногистохимическая оценка рецепции к интерлеикину-2 при гастродуоденальных язвенных кровотечениях

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РЕЦЕПЦИИ К ИНТЕРЛЕИКИНУ-2 ПРИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНЫХ ЯЗВЕННЫХ КРОВОТЕЧЕНИЯХ

Мамедов А.М., Джамалов Ф.Х., Алиев Ш.Х., Эйвазова К.А., Рамазанов Дж.Н., Султанов А.П.

Кафедра хирургических болезней-III Медицинского Университета,

Баку, Азербайджан

Аннотация: Иммуногистохимически изучены «СБ25»-позитивные клетки в дне язвы, периульцерозных и отдаленных зонах стенки при гастродуоденальных язвах без кровотечения и с кровотечением. У пациентов с язвенным кровотечением во всех рассмотренных зонах гастральной и дуоденальной мукозы плотность распределения «СБ25»-позитивных перивазальных и «отростчатых» (антиген-представляющих) клеток, но не лимфоцитов, плазмацитов и макрофагов, в 2,0-2,2 раза превосходит аналогичный показатель у больных без кровотечения. Выполнен корреляционно статистический анализ между «СБ25»-позитивностью и язвенным кровотечением. Доказано, что количество «СБ25»-позитивных перивазальных клеток во всех зонах достоверно и прямо-пропорционально коррелирует с кровотечением, что следует рассматривать как проявление патогенетического значения интерлейкина-2 и его клеточно-тканевого рецептора «СБ25» при ульцерогенезе и гастро-дуоденальных язвенных кровотечениях.

Введение. Язвенная болезнь желудка и 12- перстной кишки (ЯБЖДК) не теряет своей актуальности. Несмотря на достижения в изучении этиологии и патогенеза болезни, внедрение более информативных методов диагностики и прогнозирования, успехи в консервативной терапии, частота осложнений ЯБЖДК остается высокой [2, 8, 1]. Среди осложнений гастро-дуоденальных язв особое место занимают кровотечения, частота которых не только не снижается, но и имеет тенденцию к росту [11, 2].

Степень клинической тяжести кровотечений при ЯБЖДК, наряду с комплексом других факторов, может быть обусловлена также морфо-функциональным состоянием локального гастро-дуоденального иммунного аппарата, в том числе - клеточно-тканевых комплексов, реагирующих на молекулы интерлейкина-2 (ИЛ-2) - важнейшего иммуномодулятора с широким спектром физиологического действия [3, 9].

Среди методов морфологической идентификации продуцентов и мишеней ИЛ-2 в различных органах надёжными результатами отличается иммуногистохимическое определение «СБ25» - гликопротеина; клеточно-тканевого рецептора а-цепиинтерлейкина-2 человека. Путем анализа сродства различных клеток и тканевых структур к «СБ25» можно оценить также степень их насыщенности отмеченным интерлейкином. Несмотря на всё возрастающее число сообщений о применении «Ронколейкина» - рекомбинантного интерлейкина-2, аналога эндогенного ИЛ-2, в профилактике и терапии ЯБЖДК [3, 6, 9, 4, 7], степень насыщенности ИЛ-2 различных клеточных типов в зоне язвы, периульцерозных и отдаленных участках гастро-дуоденальной стенки остаётся неизученной. Кроме того, практически нет сведений о возможной корреляции количества и функциональной активности «СБ25»-позитивных клеток со степенью клинической тяжести гастро-дуоденальных язвенных кровотечений.

Цель. Иммуногистохимический анализ «СБ25»-позитивной популяции клеток в дне, краях язвы, периульцерозной зоне и отдаленных участках слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки и корреляционно-статистический анализ связей «СБ25»-позитивности со степенью клинической тяжести гастро-дуоденальных язвенных кровотечений.

Материалы и методы исследования

Контингент исследования составлен 72 пациентами ЯБЖДК и разделен на 2 группы: I. «Группа сравнения» - 32 больных с ЯБ, не осложнившейся кровотечением; II. «Основная клиническая группа» - 40 больных с первичными и рецидивными язвенными кровотечениями. В группе сравнения - 23 мужчины и 9 женщин в возрасте 28,0-56,0 л.; с локализацией язвы в пилорической части желудка - 8, в луковице 12-перстной кишки - 18; с мультифокальными язвами в обоих регионах - 6. В данной группе изучены гастро-дуоденальные биоптаты с охватом слизистой оболочки и подслизистой основы, взятые при эндоскопическом исследовании. В основной клинической группе - 29 мужчин и 11 женщин в возрасте 29,0-59,0 л.; с локализацией язвы в пилорической части - 11, в луковице 12-перстной кишки - 22, с мультифокальными язвенными очагами в обоих регионах - 7 больных. В указанной группе оперативные вмешательства проведены по поводу острых гастро-дуоденальных язвенных кровотечений с 1 -й степенью клинической тяжести кровотечения - у 10 (по классификации В.И. Стручкова); со 2-й степенью - у 24-х и с 3-й степенью - у 6 пациентов. В основной клинической группе объектами исследования послужили как биоптаты, так и резецированные части желудка и луковицы 12-перстной кишки.

Состояние дна язвы, периульцерозных, отдаленных зон стенки желудка и 12-перстной кишки оценено гистологически, гистохимически и морфометрически. «СБ25»-позитивные клетки идентифицированы на криомикротомных срезах толщиной 7,0-9,0 мкм, изготовленных из тканевых блоков, фиксированных на твердой углекислоте («сухом льду»). Для иммуногистохимического выявления рецептора ИЛ-2 применена авидинбиотиновая технология с применением моноклональных мышиных антител к рецептору интерлейкина-2 человека (NCL-CD25) клона Tu69 («Novo Castra»). Контроль достоверности реакции - на параллельных срезах, нагретых до 70,0°С. При гистологических, гистохимических и иммуногистохимических окрашиваниях срезов за основу взяты соответствующие методические руководства и указания [14, 12, 13].

Микропрепараты исследованы в светооптическом микроскопе Leica DMB с видеосистемой Sony SSC-DC50P YS-W150. Для количественных оценок использовали видео-анализатор изображений, дигитайзер Watcom и специализированную векторную программу «Canvas» для Windows.

Показатели плотности распределения «CD25»- позитивных клеток (число позитивных клеток на 1мм² среза) обработаны вариационной статистикой с вычислением средней арифметической и ее средней ошибки (X±sx) при уровне доверительной вероятности Р=0,95 (p<0,05) [10].

Проведены корреляционно-статистические параллели между степенью клинической тяжести гастро-дуоденального кровотечения («наличие кровотечения» как отдельный критерий и дополнительно 3 показателя степени его клинической тяжести) и плотностью отдельных популяций «CD25»-позитивных клеток (15 показателей) посредством методов статистики для непараметрических критериев (двухфакторным и многофакторным анализами). Достоверность связей оценена коэффициентом корреляции (r) и критерием Пирсона (х²) при уровне доверительной вероятности Р=0,95 (p<0,05) [5, 10].

Результаты исследования. Установлено, что «CD25»-позитивные клетки в слизистой оболочке желудка и 12-перстной кишки представлены лимфоцитами, плазмацитами, макрофагами, различными «отростчатыми» (антиген-представляющими) клетками и перивазальными клетками в со- единительно-тканном каркасе гастро-дуоденальной стенки. Позитивность во всех случаях - мембранного, но не цитоплазматического и ядерного характера. Большая часть позитивных клеток находится в собственной пластинке слизистой оболочки (56,0 - 78,0% от общей популяции). Далее в убывающем порядке следуют каркас послизистой основы, межмышечные волокнисто-сосудистые прослойки, каркас серозы, а также эпизодически - выстилка слизистой оболочки, шеечная часть желез и крипт. Отмеченных клеток особенно много в диффузных инфильтратах и вокруг мелких сосудов в собственной пластинке слизистой оболочки.

Эпителиальные клетки различных гастро-дуоденальных желез, крипт и выстилки при соотвествующем окрашивании «СБ25»-негативны. При этом в толще выстилки и желез у больных обеих групп найдены отдельные мембран-позитивные сферические или отростчатые клетки, соответствующие лимфоцитам и антиген-представляющим клеткам. Последние расценены нами как «интраэпителиальные «СБ25»-иммуноциты».

В целом, «СБ25»-позитивных клеток статистически достоверно больше в гастральной мукозе, чем в дуоденальной (р J0,015).

Суммарная плотность распределения «СБ25»- позитивных клеток по всем сопоставленным зонам статистически достоверно выше у больных основной клинической группы (рЬ 0,041). Данное обстоятельство, возможно, связано с угнетением секреции интерлейкина-2 различными иммуноцитами, из-за чего большая часть рецепторов остается не связанной и поддается светооптическому определению.

Касательно отдельных субпопуляций позитивных клеток. У больных группы сравнения во всех зонах среди позитивных клеток количественно преобладают «малые» лимфоциты. Далее в убывающем порядке следуют плазмациты, «отростчатые» антиген-представляющие клетки, макрофаги и перивазальные клетки. При этом разница между показателями плотности их распределения во всех зонах, за исключением отдаленных участков в дуоденальной мукозе, достоверна (рГ 0,044).

У больных основной клинической группы общая тенденция в распределении субпопуляций позитивных клеток сохранена (лимфоциты - плазмациты - отростчатые клетки - макрофаги - перивазальные клетки). Вместе с тем, в отличие от группы сравнения, разница в количественном содержании отдельных субпопуляций «СБ25»-позитивных клеток недостоверна (р>0,056; 0,054; 0,53, 0,051).

Установлено, что у пациентов с язвенным кровотечением во всех рассмотренных зонах гастральной и дуоденальной мукозы плотность распределения «СБ25»-позитивных перивазальных и «отростчатых» (антиген-представляющих) клеток, но не лимфоцитов, плазмацитов и макрофагов, в 2,0-2,2 раза превосходит аналогичный показатель группы сравнения (р J 0,019 - при язвах желудка и р 0.011 - при язвах луковицы 12-перстной кишки).

Выявлена достоверная прямая корреляционная связь между количеством «СБ25»-позитивных перивазальных клеток и степенью клинической тяжести кровотечения у больных ЯБЖДК. Так, при I степени клинической тяжести язвенного кровотечения отмеченная связь слабая (р 10,049; г=0,22; ²=5.7). при II степени - умеренная (рГ0,042; I--0.44: П²=6,9), а при III степени - умеренная или умеренно-сильная (р 10,036; М),53; Г ²= 11,7).

Подобной упорядоченной достоверной корреляции численности «СБ25»-позитивных «отростчатых» (антиген-представляющих) клеток со степенью клинической тяжести гастро-дуоденальных язвенных кровотечений нет, хотя и прослежена достоверная прямо-пропорциональная слабой интенсивности зависимость между соответствующими показателями плотности в дне язвы, периульцероз- нах зонах и наличием кровотечения как непараметрического критерия (р 10,046; I--0,26; Г²=5,7).

Обсуждение полученных данных. Итак, часть лимфоидно-плазмацитарных клеток, макрофагов, «отростчатых» антиген-представляющих клеток, а также - популяция особо-специализированных пе- ривазальных клеток в гистоструктурах стенки желудка и луковицы 12-перстной кишки обладает комплексом мембранных рецепторов к а-цепи молекулы интерлейкина-2. Отмечена преимущественная локализация позитивных клеток в толще дна и периульцерозных зонах гастро-дуоденальной мукозы и субмукозы, особенно - вблизи мелких артерий, вен, капиллярных петель или в тесном контакте с микрососудами.

Судя по светооптическим признакам, большинство «СБ25»-позитивных перивазальных клеток может быть отнесено к так называемым адвентициальным клеткам артериол, прекапилляров, капилляров и посткапиллярных венул. Выявленная нами достоверная прямо-пропорциональная корреляционная связь между количеством «СБ25»- позитивных перивазальных клеток и клинической тяжестью кровотечения диктует необходимость более детального изучения возможного патогенетического значения ИЛ-2 и его клеточно-тканевого рецептора «СБ25» при гастро-дуоденальных язвенных кровотечениях. Успешное решение отмеченной задачи создало бы также соответствующие предпосылки более рационального и эффективного применения ронколейкина в клинической практике. Оптимизация применения ронколейкина же может способствовать, во-первых, коррекции синтеза интерлейкина-2 эндогенными продуцентами, а, во-вторых - повысить его эффективность в профилактике гастро-дуоденальных язвенных кровотечений.

Заключение. Количество иммуногистохимически «СБ25»-позитивных перивазальных клеток в дне, периульцерозных и отдаленных зонах гастро - дуоденальной стенки статистически достоверно и прямо-пропорционально коррелирует с язвенным кровотечением. Данное обстоятельство следует рассматривать как проявление патогенетического значения интерлейкина-2 и его клеточно-тканевого рецептора «СБ25» при ульцерогенезе и гастро-дуо- денальных язвенных кровотечениях.

Литература

1. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М., «Триада-Х», 1998. - 496 с.

2. Гостищев В.К., Евсеев М.А. Гастродуоденальные кровотечения язвенной этиологии (патогенез, диагностика, лечение): Руководство для врачей. М., ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с.

3. Егорова В.Н., Смирнов М.Н. Новые возможности иммунотерапии с использованием Ронколейкина® - рекомбинантного интерлейкина-2 человека. Терра Медика Нова. 1999. №2.

4. Завада Н.В., Седун В.В. Иммунотерапия Ронколейкином у больных с гастродуоденальными кровотечениями язвенной этиологии. Тезисы докл. «Объединённый иммунологический форум». Russian J. Immunol. 2004. Vol. 9. Suppl. 1. P. 276.

5. Кактурский Л.В. Корреляционный анализ таблиц сопряжённости. Архив патологии, 1980, т. 42, № 3, с. 78-80.

6. Карашуров Е.С., Островский А.Г., Зигинова Т.М., Ларина Н.А. Иммунокорригирующая терапия Ронколейкином осложнённых гастродуоденальных язв. Матер. междунар. конгр. хирургов «Новые хирургические технологии и избранные вопросы клинической хирургии». Петрозаводск, 2002. Т. II. С. 66-69.

7. Карашуров Е.С., Островский А.Г., Зигинова Т.М., Ларина Н.А. Значение иммунокоррекции Ронколейкином в профилактике и лечении послеоперационных осложнений прободных гастродуоденальных язв. Матер. Х ежегод. итог. науч.-практ. конф. по экстренной хирургии. Петрозаводск, 2005. С. 10-11.

8. Лобанков В.М. Хирургия язвенной болезни на рубеже XXI века. Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова, 2005. №1. С. 58-64.

9. Попов Е.А., Назаров В.Е. Влияние применения Ронколейкина на показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у больных с различными вариантами течения язвенной болезни 12-перстной кишки. Цитокины и воспаление. 2002. Т.1. №2. С 37.

10. Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований. СПб, ВмедА, 2002. - 266 с.

11. Church N., Palmer K. Ulcers and nonvariceal bleeding. Endoscopy. 2003. Vol. 35. P. 22-26.

12. www. ihcworld. com/_protocols/antibody_prot ocols/cd25_novocastra.htm

13. www.immunohistochemistryprotocols.com.

14. Mikel U.V. (Editor). Advanced Laboratory Methods in Histology and Pathology. AFIP, Washington, DC, 1994. - 254 p.

Размещено на Allbest.ru