Цифровые лекарства на основе аптамеров для диагностики и терапии социально-значимых заболеваний
Инновационные лекарственные препараты с таргетным действием на основе аптамеров с уникальным цифровым кодом. Особенности и свойства цифровых лекарств. Поиск биомаркеров и разработка аптамеров к послеоперационным материалам рака легкого, сальмонеллеза.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 15.03.2021 |
| Размер файла | 3,3 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.Allbest.Ru/
Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого
Цифровые лекарства на основе аптамеров для диагностики и терапии социально-значимых заболеваний
О.С. Коловская, Т.Н. Замай
Г.С. Замай, Ю.Е. Глазырин
А.В. Крат, А.А. Народов
С.С. Замай, А.С. Кичкайло
Красноярск, Российская Федерация
Резюме
Цифровые лекарства - инновационные лекарственные препараты с таргетным действием на основе аптамеров, обладающих уникальным цифровым кодом. Цифровые лекарства легко синтезируются и химически модифицируются, стабильны, неиммунногенны и нетоксичны. Цель обзора - представление научных достижений КрасГМУ посвященных разработке цифровых лекарств на основе аптамеров и поиску биомаркеров в сопоставлении с мировыми уровнем. Показано, что впервые в мире в КрасГМУ получены аптамеры к послеоперационным материалам рака легкого, способные находить в крови онкологических больных циркулирующие опухолевые клетки; впервые в мире получены аптамеры, подавляющие рост возбудителей сальмонеллеза; разработаны аптаконструкции, способные in vivo осуществлять деструкцию злокачественных опухолей.
Ключевые слова: технология SELEX, цифровые лекарства, аптамеры, рак легкого, биомаркеры, онколитические вирусы, диагностика, терапия.
Abstract
Medicines on the basis of aptamers for diagnostics and therapy of socio-important diseases
Digital medicines are innovative drugs with targeted effects on the basis of aptamers that have a unique digital code. Digital drugs are easily synthesized and chemically modified, stable, non-immunogenic and non-toxic. The aim of the review is to present the scientific achievements of KrasSMU devoted to the development of digital medicines based on aptamers and to search for biomarkers in comparison with the world level. It was shown that for the first time in the world, aptamers to postoperative materials of lung cancer were obtained in KrasSMU, that are able to find circulating tumor cells in the blood of oncological patients; for the first time in the world, there were obtained aptamers suppressing the growth of pathogens of salmonellosis; there were developed aptaconstructions, capable in vivo to carry out the destruction of malignant tumors.
Key words: SELEX technology, digital medicines, aptamers, lung cancer, biomarkers, oncolytic viruses, diagnostics, therapy.
Введение
В настоящее время для разработки лекарственных препаратов с таргетным действием начинают использовать аптамеры - фрагменты однонитевой РНК или ДНК, интерес к которым связан, в первую очередь, с тем, что они могут образовывать уникальные трехмерные структуры, позволяющие им связываться только с определенными мишенями [1], что и создает основу для разработки эффективных диагностических и терапевтических препаратов.
Функционально аптамеры являются аналогами моноклональных антител, обладая при этом рядом преимуществ, в частности, они легко синтезируются с помощью стандартных технологий, химически модифицируются, что позволяет использовать их в различных целях. Кроме того, аптамеры стабильны, конформация их легко восстанавливается, в отличие от белков - моноклональных антител [2], аптамеры неиммунногенны и нетоксичны [3].
Получение аптамеров для терапии или диагностики осуществляется с помощью технологии 8ЕББХ, включающей в себя ряд стадий - селекцию к заданной мишени, выбор наиболее аффинного к своей мишени пула олигонуклеотидов, секвенирование наиболее аффинного пула, математический анализ полученных последовательностей, выбор из них наиболее аффинных и селективных к своей аптамеров, определение белков-мишеней и химический синтез (рис. 1). Полученные в результате селекции синтетические олигонуклеотиды представляют собой субстраты для создания средств диагностики и терапии. Благодаря химическим модификациям, аптамеры приобретают новые свойства, а именно, способность визуализировать свою мишень, изменять ее функциональное состояние, осуществлять адресную доставку лекарственных препаратов и др. Каждый аптамер обладает своим уникальным кодом, который может храниться в цифровом виде, благодаря чему аптамеры можно назвать «цифровыми лекарствами».
Рисунок 1. Схема получения аптамеров к заданным клеткам для диагностики и терапии
К настоящему времени аптамеры получены к белкам, вирусам, бактериям, живым клеткам [1,4-6]. Аптамеры применяют для визуализации, количественного определения мишеней [2], используют для терапевтических целей и адресной доставки лекарственных препаратов [3].
В статье представлены результаты работы «Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» по поиску биомаркеров онкологических заболеваний и разработке средств диагностики и терапии на основе апта- меров для диагностики онкологических заболеваний в сравнении с работами зарубежных исследователей.
Аптамеры для поиска биомаркеров
Аптамеры успешно используют для поиска биомаркеров заболеваний, что важно для диагностики и поиска новых молекулярных мишеней для терапии. Впервые метод поиска биомаркеров с помощью аптамеров был предложен Berezovski et al. [6] и модифицирован в Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого [7, 8]. Суть метода заключается в аффинном обогащении белков-биомаркеров с помощью аптамеров с последующим использованием масс-спектрометрии высокого разрешения для идентификации белков (рис. 2). Для валидации мишеней аптамеров используют специфичные к этому же белку моноклональные антитела [12]. Работами, проведенными в КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, показано, что метод поиска биомаркеров с помощью аптамеров является более эффективным по сравнению с методом полного протеомного профилирования, поскольку позволяет выявлять более специфические белки-биомаркеры, которые при анализе с помощью полного протеомного профилирования могут быть утеряны вследствие того, что белки-биомаркеры обычно являются низкокопийными, а с помощью аптамеров выявляются только специфические уникальные белки. В «Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий» методом аффинного обогащения белковых проб с помощью аптамеров был получен список белков-биомаркеров рака легкого человека, в который вошли как известные белки-биомаркеры, так и новые кандидаты.
К белкам-биомаркерам рака легкого, уже частично верифицированным с помощью моноклональных антител, были отнесены Zinc finger protein, Serine/ threonine-protein kinase, Keratin, type II cytoskeletal, Coiled-coil domain-containing protein [7], Catepsin D, Vimentin et al. [9]. Выяснено, что основные отличия опухолевых клеток легкого от нормальных клеток заключаются в нарушении в них регуляции процессов транскрипции, репликации, клеточного цикла и, кроме того, в активации перестройки цитоскелета, что необходимо опухолевым клеткам для успешной инвазии и метастазирования.
Рисунок 2. Схема поиска белковых мишеней аптамеров и биомаркеров различных заболеваний
Аптамеры для детекции и терапии сальмонеллеза
В связи с высокой способностью аптамеров связываться только со своими мишенями их начинают активно использовать в качестве биосенсоров для создания высокочувствительных тест-систем для диагностики. Особый интерес вызывают тест-системы для выявления возбудителей инфекционных заболеваний, поскольку такие экспресс тест-системы позволяют получить результат намного быстрее, чем при использовании классических методов диагностики. Причем на основе аптамеров можно получить разные диагностические системы - электрохимические, оптические, микрофлуидные, плазмонно-резонансные и другие, в зависимости от поставленной задачи.
К настоящему времени получены аптамеры и разработаны тест-системы для выявления возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis [10], кристаллообразующих бактерий Bacillus thuringiensis [11], стафилококка Staphylococcus aureus [12], молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus [13], кишечной палочки Escherichia coli [14], бактерий Campylobacter jejuni [15], Salmonella paratyphi [16]. Однако большинство описанных в литературе аптамеров к различным бактериям отбирались не к живым клеткам, а к мембранным белкам лизированных клеток, поэтому в биологических пробах невозможно дифференцировать живые и неживые бактерии, в результате чего определяется их суммарное количество. В «Лаборатории биомолекуляр- ных и медицинских технологий» впервые были получены аптамеры, позволяющие определять только живые возбудители сальмонеллеза - S.enteritidis и S.typhimurium. На основе полученных аптамеров впервые были созданы электрохимические аптасенсоры для выявления S.enteritidis и S.typhmurium в биологических жидкостях и определения их концентрации и жизнеспособности [17].
Одним из наиболее важных преимуществ аптамеров является их двойное назначение, т.е. их можно использовать как для создания средств диагностики, так и терапии [18, 19]. Очень перспективным направлением является использование аптамеров для разработки препаратов с антибактериальной активностью. Особенно важно эту особенность аптамеров использовать для разработки препаратов, подавляющих рост микроорганизмов с высоким уровнем антибиотикоустойчивости. В работе O. S. Kolovskaya et al. (рис. 3) [4] представлены результаты разработки аналога антибиотика на основе аптамеров против двух самых распространенных серотипов сальмонелл - S.enteritidis и S.typhmurium. В таблице 1 представлены биосенсоры на основе аптамеров, описанные в литературе.
Разработка такого аналога антибиотика крайне актуальна, поскольку в настоящее время все большее распространение получают бактерии - возбудители сальмонеллеза, проявляющие очень высокую устойчивость к антибиотикам третьего поколения - ципрофлоксацину и цефтриаксону, используемым для лечения больных сальмонеллезом. В работе О.S. Kolovskaya et al впервые показано, что синтетические аптамеры подавляют рост S.enteritidis и S.typhimurium на 80% [3]. Аптамеры, полученные другими исследователями, к другим бактериям, ведут себя сходным образом [34]. Можно предположить, что в будущем на основе аптамеров будет создан новый класс нетоксичных и неиммунногенных аптабиотиков - аналогов антибиотиков.
Рисунок 3. Бактериостатический эффект аптамеров к сальмонеллезу
Таблица 1
Аптамеры для выявления возбудителей сальмонеллеза
|
Серовар |
Метод детекции |
Ссылка |
|
|
S.enteritidis |
Электрохимическая детекция |
[17] |
|
|
Проточная цитометрия |
[20] |
||
|
Колориметрическая детекция |
[21] |
||
|
Плазмонно-резонансный биосенсор (SPR) на основе аптамеров |
[22] |
||
|
S.typhimurium |
Проточная цитометрии |
[23,24] |
|
|
ELISA |
[25] |
||
|
Магнитная сепарация |
[26] |
||
|
Колориметрическая детекция с использованием пероксидазы |
[27] |
||
|
Флуоресцентная детекция |
[28] |
||
|
Колориметрическая детекция с использованием анализа седиментации |
[29] |
||
|
Магнитоэлектрический датчик на основе аптамеров |
[30] |
||
|
Флуоресцентный метод детекции с использованием наночастиц диоксида кремния |
[31] |
||
|
Плазмонно-резонансный биосенсор (SPR) на основе аптамеров |
[32] |
||
|
Плазмонно-резонансный биосенсор (SPR) на основе аптамеров с использованием наночастиц золота |
[33] |
Аптамеры для диагностики и терапии рака легкого
Аптамеры начинают активно использовать для диагностики и терапии онкологических заболеваний. С помощью аптамеров оказалось возможным отличать опухолевые клетки от нормальных и дифференцировать различные типы опухолей. Однако следует отметить, что все описанные в литературе исследования были выполнены только на модельных экспериментах [35, 36], поскольку мишенями для селекции аптамеров выступали либо рекомбинантные белки, либо клеточные культуры. Это привело к тому, что на реальных образцах крови или ткани эти аптамеры не проявляли высокой чувствительности к опухолевым клеткам. В «Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» впервые получены аптамеры к самым распространенным гистологическим типам рака легкого - аденокарциноме и плоскоклеточному раку. Селекция аптамеров впервые была осуществлена с использованием послеоперационных материалов, в результате чего эти аптамеры оказались очень эффективными для диагностики онкологических заболеваний на реальных образцах крови и ткани онкологических больных [6, 7].
С помощью аптамеров, полученных к послеоперационным материалам, стало возможным выделять и определять уровень циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) в крови [6, 7], идентифицировать гистологические типы рака легкого (рис. 4) и разработать аптасенсор для электрохимической детекции уровня белков-онкомаркеров рака легкого [9]. Кроме того, было показано, что аптамер к катепсину Д обладает противоопухолевым эффектом. В таблице 2 приведены полученные к настоящему времени аптамеры для рака легкого и их применение для диагностики и терапии.
Микрофлюидные технологии с использованием аптамеров для определения ЦОК в крови онкологических больных
лекарственный цифровой таргетный аптамер
Выделение и определение онкобелков и циркулирующих в крови опухолевых клеток является очень трудной задачей и такие стандартные методы, как центрифугирование в градиенте фиколла, ПЦР, магнитная сепарация с применением магнитных частиц и проточная цитометрия не всегда приемлемы в силу разных причин. Поэтому в последнее время получили развитие микрофлюидные технологии выделения и идентификации онкобелков и циркулирующих опухолевых клеток, которые на настоящий момент являются наиболее перспективными и позволяют обходиться без дорогостоящих и нестабильных моноклональных антител [50, 51]. В случае применения микрофлюидных технологий разделение белков и клеток основывается на различии в их физико-химических свойствах.
Рисунок 4. Принципиальная схема выделения циркулирующих опухолевых клеток с использованием аптамеров (а) и окрашивание аптамерами тонких срезов тканей (б).
Таблица 2
Существующие аптамеры для рака легкого и их применение для диагностики и терапии
|
Аптамер |
Клетка-мишень |
Белок-Мишень |
Применение |
Ссылка |
|
|
Мелкоклеточный рак легкого |
|||||
|
HCA12 HCC03 HCH07 HCH01 |
Клеточные линии: NCI-H69 NCI-H146 NCI-H128 |
Не определено |
Гистологическое окрашивание тонких срезов тканей выделение и детекция клеток с помощью магнитных частиц, модифицированных аптамерами |
[37] |
|
|
16-1 |
Клеточная линия SBC3 |
Не определено |
Флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия |
[38] |
|
|
Аденокарцинома легкого |
|||||
|
EJ7 ADE2 |
Клеточная линии H23, A549 |
Не определено |
Проточная цитометрия |
[39] |
|
|
S13, S50 |
Клеточная линияA549 |
EGFR |
Антипролиферативная активность |
[40] |
|
|
R50 |
Клеточная линияA549 |
Нуклеолин |
Индукция апоптоза |
[41] |
|
|
LC-17 |
Послеоперационные ткани |
Тубулин альфа |
Аптагистохимическая окраска тканей, выделение циркулирующих опухолевых клеток |
[8] |
|
|
LC-18, |
Послеоперационные ткани |
Виментин, Ламин |
Аптагистохимическая окраска тканей, выделение циркулирующих опухолевых клеток, электрохимическое определение белков в плазме крови |
[8,9] |
|
|
LC-224 |
Послеоперационные ткани |
Актин, метилированный в позиции 73 |
Аптагистохимическая окраска тканей |
[8] |
|
|
LC-110 |
Послеоперационные ткани |
Клустерин Гистон H2B |
Выделение циркулирующих опухолевых клеток |
[8] |
|
|
LC-183 |
Послеоперационные ткани |
Катепсин Д |
Выделение циркулирующих опухолевых клеток, угнетение роста первичных культур раковых клеток |
[8] |
|
|
MA3 |
Клеточные линии: A549, MCF-7 |
Муцин-1 |
Адресная доставка доксорубицина |
[42] |
|
|
MUC-1 |
Клеточная линия A549 |
Муцин-1 |
Адресная доставка плазмидной ДНК |
[43] |
|
|
GL21.T |
Клеточная линия A549 (Дж!+) |
Рецептор тирозинкиназы онкоген, Axl |
Адресная доставка т^А ^-7д и т^-212 для подавления роста опухоли |
[44,45] |
|
|
Другие |
|||||
|
aptNCL |
Клеточная линия 0.1-5 |
Нуклеолин |
Адресная доставка химерной siRNA |
[46] |
|
|
AS1411 |
Множество раковых клеточных линий, с экспрессией нуклеолина |
Нуклеолин |
ПЭТ визуализация рака легкого с мопощью аптамера меченного Си-64 |
[47] |
|
|
S1, S6, S11e, S15 |
NSLC |
Не определено |
Флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия |
[48] |
В последнее время в микрофлюидных системах стали применять аптамеры [52]. Микрофлюидные устройства, используемые в медицине, очень разнообразны. В них используют различные принципы разделения, концентрирования и детекции. Однако, их можно в целом разделить на две группы - устройства, позволяющие разделять опухолевые и нормальные клетки на основании различия их физико-химических свойств [49-52], и системы, использующие узнающие молекулы - белковые антитела или аптамеры [53-55] для улавливания ЦОК. Наиболее популярными в последнее время становятся микрофлюидные устройства с использованием аптамеров.
Аптаконструкции для деструкции опухолей
Одним из наиболее новых и перспективных направлений использования аптамеров является их использование для тераностики в сочетании с наноконструкциями. Для деструкции опухолевых клеток стали разрабатываться нестандартные средства, основанные на нанотехнологиях, предполагающих физические способы деструкции опухоли с использованием наночастиц, обладающих уникальными физико-химическими свойствами. Недостатком таких методов стала невысокая специфичность воздействия на опухолевые клетки физических факторов, поскольку наночастицы накапливаются во всех тканях, а не только в опухолевых, в результате чего применение физических методов воздействия (греющего или негреющего магнитных полей или лазерного облучения) вызывает повреждение окружающих опухоль нормальных тканей.
Очевидно, что увеличение эффективности действия магнитных и золотых наночастиц можно достичь только путем адресного воздействия на опухолевые клетки. Сейчас в качестве биораспознающих молекул зачастую используют моноклональные антитела. Однако более целесообразным является применение аптамеров, поскольку они неиммуногенны, стабильны, легко синтезируются и модифицируются и, кроме того, обладают высоким сродством к опухолевой ткани.
Для деструкции опухолей использовали конструкции, состоящие из пермаллоевых плёночных нанодисков немагнитострикционного состава 80% Ni 20% Fe с двухсторонним золотым покрытием и моноклональных антител [55]. Такие замкнутые (вихревые) магнитные структуры нанодиска с очень малыми полями рассеяния не слипались в водной среде и образовывали водную суспензию с хорошими характеристиками [56]. Эксперименты с использованием магнитных нанодисков были проведены на клеточных культурах in vitro и показали высокую эффективность использования нанодисков для деструкции опухолевых клеток. Более поздние эксперименты были проведены с использованием никелевых нанодисков, функционализированных ДНК-аптамерами. Биомедицинская цель экспериментов состояла в определении перспектив использования нанодисков, модифицированных ДНК-аптамерами, для адресной клеточной хирургии онкологических заболеваний. Для связывания магнитных дисков с опухолевыми клетками использовали ДНК-аптамеры, структура и функция которых представлена в статье O.S. Kolovskaya et al. (рис. 5) [57].
Математические расчеты показали, что к повреждению клеточной мембраны в условиях действия переменного магнитного поля невысокой интенсивности приводит ее сильное растяжение. В проведенных исследованиях модифицированные ДНК-аптамерами магнитные нанодиски вызывали гибель опухолевых клеток [58]. Эксперименты были проведены не только in vitro, но и in vivo. Исследования, проведенные Belaynina et al., показали, что не только магнитные нанодиски, но и суперпарамагнитные наночастицы, покрытые золотом и функционализированные ДНК-аптамерами, в условиях низкочастотного магнитного негреющего поля обладают высокой способностью осуществлять деструкцию опухоли как in vitro, так и in vivo [59], связываясь с мембранными белками.
Рисунок 5. Схема магнитодинамической терапии с использованием нанодисков, модифицированных аптамерами
Схожие результаты по деструкции опухолевых клеток in vivo были получены в «Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий» с помощью конъюгатов золотых наночастиц с аптамерами. Применение наночастиц золота, обладающих уникальными оптическими свойствами, позволило увеличить термосенсибилизацию опухолевых клеток за счет возбуждения плазмонного резонанса [60], использование аптамеров, использующихся для адресного воздействия, увеличило эффективность воздействия. Облучение опухоли, меченной наночастицами, лазером на длине волны, попадающей в полосу плазмонного резонанса наночастиц, способствовало клеточной гибели.
Плазмонно-резонансная фототермическая терапия - это наименее инвазивный способ лечения злокачественных новообразований, в котором энергия фотонов преобразуется в тепловую энергию, достаточную для деструкции опухоли. Особенно перспективным является использование этого метода в тех случаях, когда оперативное удаление опухоли невозможно.
Показано, что использование опухоль-специфичных аптамеров обеспечивает адресное воздействие наночастиц золота и увеличивает специфичность фототермотерапии. Лазерное облучение, индуцируя плазмонный резонанс и нагрев наночастиц золота, вызывает повреждение опухолевых клеток-мишеней, при этом нормальные клетки остаются неповрежденными. В работе показана перспективность использования наночастиц золота, функционализированных аптамерами, для разработки методов и средств плазмонно-резонансной фототермической терапии.
Заключение
Таким образом, в Красноярском государственном медицинском университете имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого создана база для поиска биомаркеров социально-значимых заболеваний и создания инновационных средств диагностики и терапии на основе аптамеров (цифровых лекарств) для персонализированной медицины.
Литература / References
1. Patel DJ, Suri AK. Structure, recognition and discrimination in RNA aptamer complexes with cofactors, amino acids, drugs and aminoglycoside antibiotics. Journal of Biotechnology. 2000;(74):39-60.
2. Iliuk AB, Hu L, Tao WA. Aptamer in Bioanalytical Applications. Analytical chemistry. 2011;12(83):4440-52.
3. Ulrich H, Trujillo CA, Nery AA, Alves JM, Ma- jumder P, Resrnde RR, Martins AH. DNA and RNA aptamers: from tools for basic research towards therapeutic applications. Combinatorial Chemistry and High Throughput Screening Journal. 2006;9(8):619-32.
4. Kolovskaya OS, Savitskaya AG, Zamay TN, Reshetneva IT, Zamay GS, Erkaev EN, Wang XB, Wehbe MB, Salmina AB, Perianova OV, Zubkova OA, Spivak EA, Mezko VS, Titova NM, Berezovski MV, Zamay AS. Development of Bacteriostatic DNA Aptamers for Salmonella. Journal of Medicinal Chemistry. 2013;56(4):1564-72.
5. Jean SS, Wang JY, Hsueh PR. Bacteremia caused by Salmonella enterica serotype Choleraesuis in Taiwan. Journal of Microbiology Immunology and Infection. 2006;
6. Berezovski MV, Lechmann M, Musheev MU, Mak TW, Krylov SN. Aptamer-facilitated biomarker discovery (AptaBiD). Journal of the American Chemical Society. 2008;(130):9137-43.
7. Замай ГС, Коловская ОС, Глазырин ЮЕ, Оседко АВ, Замай АС, Малышева ЕА, Савицкая АГ, Крат АВ, Салмина АБ, Котловский ЮВ, Замай ТН. Разработка технологии идентификации биомаркеров с помощью аптамеров на примере плоскоклеточного рака легкого и аденокарциномы. Сибирское медицинское обозрение. 2012;(6):9-14. [Zamay GS, Kolovskaya OS, Glazyrin YuE, Osedko AV, Zamay AS, Malysheva EA, Savitskaya AG, Krat AV, Salmina AB, Kotlovski YuV, Zamay TN. Development of biomarker identification technology with aptamers using the example of squamous cell lung cancer and adenocarcinoma. Siberian Medical Review. 2012;(6):9-14. (In Russian)]
8. Zamay GS, Ivanchenko TI, Zamay TN, Grigorieva VL, Glazyrin YE, Kolovskaya OS, Garanzha I, Barinov A, Krat AV, Mironov G, Gargaun A, Veprintsev DV, Bekuza- rov SS, Kirichenko AK, Zukov RA, Petrova MM, Modestov AA, Berezovski MV, Zamay AS. DNA-Aptamers for Characterization of Histological Structure of Lung Adenocarcinoma. Molecular Therapy: Nucleic Acid. 2016;(6):150-162.
9. Zamay GS, Zamay TN, Kolovskii VA, Shabanov AV, Glazyrin YuE, Veprintsev DV, Krat AV, Zamay SS, Kolovskaya OS, Gargaun A, Sokolov AE, Modestov AA, Artyukhov IP, Chesnokov NV, Petrova MM, Berezovs- ki MV, Zamay AS. Electrochemical aptasensor for lung cancer-related protein detection in crude blood plasma samples. Scientific Reports. 2016
10. Torres-Chavolla E, Alocilja EC. Aptasensors for detection of microbial and viral pathogens. Biosensors and Bioelectronics. 2009;(24):3175-82.
11. Ikanovic M, Rudzinski W, Bruno J, Allman A, Carrillo M, Dwarakanath S, Bhahdigadi S, Rao P, Kiel J, Andrews CJ. In Vitro antibacterial effects of antilipopolysaccharide DNA aptamer-C1qrs complexes. Journal of Fluorescence. 2007;(17):193-99.
12. Cao X, Li S, Chen L, Ding H, Xu H, Huang Y, Li J, Liu N, Cao W, Zhu Y. Combining use of a panel of ssDNA aptamers in the detection of Staphylococcus aureus. Nucleic Acids Research. 2009;(37):4621-28.
13. Hamula CLA, Zhang H, Guan LL, Li X-F, Le XC. Selection of aptamers against live bacterial cells. Analytical chemistry. 2008;(80):7812-7819.
14. Bruno J, Carrillo M, Phillips T, Andrews CJ. A novel screening method for competitive FRET-aptamers applied to E. coli assay development. Journal of Fluorescence. 2010;(20):1211-23.
15. Dwivedi H, Smiley R, Jaykus L-A. Selection of DNA aptamers for capture and detection of Salmonella Typhimurium using a whole-cell SELEX approach in conjunction with cell sorting. Applied Microbiology and Biotechnology. 2010;(87):2323-34.
16. Yang M, Peng Z, Ning Y, Chen Y, Zhou Q, Deng L. Highly specific and cost-efficient detection of Salmonella Paratyphi A combining aptamers with single-walled carbon nanotubes. Sensors (Basel). 2013
17. Labib MB, Kolovskaya OS, Zamay AS, Reshetneva IT, Zamay GS, Kibbee RJ, Sattar SA, Zamay TN, Berezovs- ki MV. Aptamer-Based Impedimetric Sensor for Bacterial Typing. Analitycal Chemistry. 2012
18. Proske D, Blank M, Buhmann R, Resch A. Ap- tamers - basic research, drug development, and clinical applications. Applied Microbiology and Biotechnology. 2005;(69)
19. Ng EW, Adamis AP. Anti-VEGF aptamer (pegap- tanib) therapy for ocular vascular diseases. Gene Therapy. Annals of the New York Academy of Sciences. 2007;
20. Hyeon J-Y, Chon J-W, Choi I-S, Park C, KimD-E, Seo K-H. Development of RNA aptamers for detection of Salmonella. Journal of Microbiological Methods. 2012;(89):79-82.
21. Bayra9 C, Eyidogan F, Avni Oktem H. DNA ap- tamer-based colorimetric detection platform for Salmonella Enteritidis. Biosens Bioelectron. 2017;
22. Di WT, Du XW, Pan MF, Wang JP The SPR detection of Salmonella enteritidis in food using aptamers as recongnition elements. Materials Science and Engineering. 2017
23. Moon J, Kim G, Lee S, Park S. Identification of Salmonella Typhimurium-specific DNA aptamers developed using whole-cell SELEX and FACS analysis. Journal of Microbiological Methods. 2013
24. Park H-C, Baig I, Lee S-C, Moon J-Y, Yoon M-Y. Development of ssDNA Aptamers for the Sensitive Detection of Salmonella typhimurium and Salmonella enteritidis. Applied Biochemistry and Biotechnology. 2014
25. Han R, Ryul S, Lee S-W. In Vitro Selection of RNA Aptamer Specific to Salmonella Typhimurium. Journal of Microbiology and Biotechnology. 2013;23(6):878-84
26. Dwivedi HP, Smiley RD, Jaykus L-A. Selection of DNA aptamers for capture and detection of Salmonella Typhimurium using a whole-cell SELEX approach in conjunction with cell sorting. Applied Microbiology and Biotechnology. 2013
27. Park JY, Jeong HY, Kim MI, Park TJ. Colorimetric Detection System for Salmonella typhimurium Based on Peroxidase-Like Activity of Magnetic Nanoparticles with DNA Aptamers. Journal of Nanomaterials. 2015;(2015):1-9.
28. Wang R, XuY, Zhang T, Jiang Rapid and sensitive detection of Salmonella typhimurium using aptamer-con- jugated carbon dots as fluorescence probe. Analytical Methods. 2015
29. Lavu PSR, Mondal B, Ramlal S, MuraliHS, Batra Selection and Characterization of Aptamers Using a Modified Whole Cell Bacterium SELEX for the Detection of Salmonella enterica Serovar Typhimurium. ACS Combinatorial Science. 2016
30. Wang Q-Y,KangY-J. Bioprobes Based on Aptamer and Silica Fluorescent Nanoparticles for Bacteria Salmonella typhimurium Nanoscale Research Letters. 2016;(11 ): 150.
31. Wang B, Park B, Xu B,Kwon Y. Label-free biosensing of Salmonella enterica serovars at single-cell level. Journal of Nanobiotechnology. 2017;(15):40.
32. Oh SY, Heo NS, Shukla S, Cho H-J, Vilian E, Kim J, Lee SY, Han Y-K, Yoo SM, Huh Development of gold nanoparticle-aptamer-based LSPR sensing chips for the rapid detection of Salmonella typhimurium in pork meat. Scientific Reports. 2017
33. Chen I-H, Horikawa S, Du S, Liu Y, Wikle HC, Barbaree JM, Chin BA Thermal Stability of Phage Peptide Probes Vs. Aptamer for Salmonella Detection on Magnetoelastic Biosensors Platform. ECS Transactions. 2016
34. Ozalp VC, Bilecen K, Oktem HA. Antimicrobial aptamers for detection and inhibition of microbial pathogen growth. Future Microbiol. 2013
35. Liu G, Mao X, Phillips JA, Xu H, Tan W, Zeng L. Ap- tamer-nanoparticle strip biosensor for sensitive detection of cancer cells. Analytical Chemistry. 2009
36. Kang S, Mou L, Lanman J, Velu S, Brouilette WJ, Prebelige PE. Synthesis of biotin-tagged chemical crosslinkers and their applications for mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 2009
37. Chen H, Medley C, Sefah K, Shangguan D, Tang Z, Meng L, Smith J, Tan W. Molecular recognition of smallcell lung cancer cells using aptamers. ChemMedChem. 2008
38. Kunii T, Ogura S, Mie M, Kobatake E. Selection of DNA aptamers recognizing small cell lung cancer using living cell-selex. 2011
39. Jimenez E, Sefah K, Lopez-Colon D, Van Simaeys D, Chen H, Tockman M, Tan W. Generation of lung adenocarcinoma DNA aptamers for cancer studies. Plos One. 2012
40. Hu J, Zhao Z, Liu Q, Ye M, Hu B, Wang J, Tan W. Study of the function of g-rich aptamers selected for lung adenocarcinoma. Chemistry-an Asian Journal. 20150187
41. Xu L, Zhang Z, Zhao Z, Liu Q, Tan W, Fang X. Cellular internalization and cytotoxicity of aptamers selected from lung cancer cell. American Journal of Biomedical Sciences. 2013;(5):7-58. DOI:5099/aj130100047
42. Hu Y, Duan J, Zhan Q, Wang F, Lu X, Yang X. Novel muc1 aptamer selectively delivers cytotoxic agent to cancer cells in vitro. Plos One. 2012
43. Kurosaki T, Higuchi N, Kawakami S, Higuchi Y, Nakamura T, Kitahara T, Hashida M, Sasaki H. Self-assemble gene delivery system for molecular targeting using nucleic acid aptamer. Gene. 2012
44. Esposito C, Cerchia L, Catuogno S, De Vita G, Das- sie J, Santamaria G, Swiderski P, Condorelli G, Giangrande P, De Franciscis V. Multifunctional aptamer-mirna conjugates for targeted cancer therapy. Molecular Therapy. 2014
45. Iaboni M, Russo V, Fontanella R, Roscigno G, Fiore D, Donnarumma E. Esposito C, Quintavalle C, Gi- angrande P, De Franciscis V. Aptamer-mirna-212 conjugate sensitizes nsclc cells to trail. Molecular Therapy-Nucleic Acids. 2016
46. Lai W, Wang W, Chang Y, Chang C, Yang P, Peck K. Synergistic inhibition of lung cancer cell invasion, tumor growth and angiogenesis using aptamer-siRNA chimeras. Biomaterials. 2014; (35):2905-2914
47. Li J, Zheng H, Bates P, Malik T, Li X, Trent J, Ng C. Aptamer imaging with cu-64 labeled as1411: Preliminary assessment in lung cancer. Nuclear Medicine and Biology. 2014
48. Zhao Z, Xu L, Shi X, Tan W, Fang X, Shangguan D. Recognition of subtype non-small cell lung cancer by DNA aptamers selected from living cells. 2009
49. Huang C-T, Amstislavskaya TG, Chen G-H. Selectively Concentrating Cervical Carcinoma Cells from Red Blood Cells Utilizing Dielectrophoresis with Circular ITO Electrodes in Stepping Electric Fields. Journal of Medical and Biological Engineering. 2012
50. Nagrath S, Sequist LV, Maheswaran S. Isolation of rare circulating tumor cells in cancer patients by microchip technology. Nature. 2007
51. Chen GH, Huang CT, Wu HH, Zamay TN, Zamay AS, Jen CP. Isolating and concentrting rare cancerous cells in large sample volumes of blood by using dielectrophoresis and stepping electric fields. BioChip Journal. 2014
52. Sasakia T, Kurodab M, Katashimac K. In Vitro Assessment of Factors Affecting the Apparent Diffusion Coefficient of Ramos Cells Using Bio-phantoms. Acta medica Okayama. 2012
53. Stoff SL, Hsu C-H, Tsurkov DI. Isolation of circulating tumor cells using a microvortex-generating herringbone-chip. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2010.
54. Lee JA, Hwang S, Kwak J. An electrochemical impedance biosensor with aptamer-modified pyrolyzed Carson electrode for label-free protein detection. Sensor and Actuators B. 2008
55. Kim D-H, Rozhkova EA, Ulasov IV, Bader SD, Rajh T, Lesniak MS, Novosad V Biofunctionalized magnetic-vortex microdiscs for targeted cancer-cell destruction. Nature Materials. 2010
56. Novosad V, Guslienko KYu, Shima H, Otani Y, Kim SG, Fukamichi K, Kikuchi N, Kitakami O, Shimada Y. Effect of interdot magnetostatic interaction on magnetization reversal in circular dot arrays. Physical Review. 2002
57. Kolovskaya OS, Zamay TN, Zamay AS, Glazyrin YE, Spivak EA, Zubkova OA, Kadkina AV, Erkaev EN, Zamay GS, Savitskaya AG, Trufanova LV, Petrova LL, Berezovsky MV DNA-aptamer/protein interaction as a caurse of apoptosis and arrest of proliferation in Erlich ascites adenocarcinoma cells. Biochemistry (Moscow) Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. 2014;8(1):60-72.
58. Kim PD, Zamay SS, Zamay TN, Prokopenko VS, Kolovskaya OS, Zamay GS, Princ VY, Seleznev VA, Komov AI, Spivak EA, Rudenko RY, Dybinina AV, Komarov AV, Denisenko VV, Komarova MA, Sokolov AE, Narodov AA, Zjivaev VP, Zamay AS. The antitumor effect of magnetic nanodiscs and DNA aptamer conjugates. Doklady Biochemistry and Biophysics. 2015
59. Belyanina IV, Zamay TN, Zamay GS, Zamay SS, Kolovskaya OS, Ivanchenko TI, Denisenko VV., Kirichenko AK, Glazyrin YE, Garanzha IV, Grigorieva VV, Shabanov AV, Veprintsev DV, Sokolov AE, Sadovskii VM, Gargaun AB, Berezovski MV, Kichkailo AS. In vivo cancer cells elimination guided by aptamer-functionalized gold-coated magnetic nanoparticles and controlled with low frequency alternating magnetic field. Theranostics. 2017
60. Iancu C. Photothermal Therapy of Human Cancers (PTT) Using Gold Nanoparticles. Biotechnology, Molecular Biology and Nanomedicine. 2013
Размещено на allbest.ru
...Подобные документы
Химико-ферментативный синтез модифицированной комбинаторной РНК-библиотеки. Способы получения РНК-аптамеров, устойчивых в биологических средах, способных селективно и с высокой аффинностью связывать аутоантитела человека, больного рассеянным склерозом.
дипломная работа [2,6 M], добавлен 08.05.2012Характеристика этиологии, патоморфологии рака легкого. Отличительные черты недифференцированного и дифференцированного рака легкого. Клинические формы рака легкого. Основные клинические признаки заболевания. Особенности лучевой терапии и химиотерапии.
реферат [382,3 K], добавлен 02.09.2010Ранняя диагностика бронхолегочиого рака, как и злокачественных опухолей других локализаций, представляет собой актуальную и трудноразрешимую проблему. Лечение рака легкого. Хирургическое лечение рака легкого. Техника удаления легкого и его частей.
реферат [21,6 K], добавлен 25.03.2009Клинико-анатомическая классификация имеет чрезвычайно большое практическое значение с точки зрения распознавания рака легкого. Периферический рак легкого. Пути распространения и классификация рака легкого по распространенности. Распознавание рака легкого.
реферат [23,5 K], добавлен 25.03.2009Типы рака легких. Клинические проявления рака легкого. Место локализации, степень сдавления соседних органов и наличие метастаз в отдаленных органах. Основные причины заболевания. Этапы развития рака легкого. Морфопатологические аспекты рака легкого.
презентация [730,8 K], добавлен 05.02.2012Препараты для лечения и предупреждения заболеваний. Использование для лечения растений в разных видах, высушенных насекомых, органов животных. Сырье для получения неорганических препаратов. Противомикробные, антигистаминные и болеутоляющие лекарства.
презентация [9,4 M], добавлен 16.04.2014Лекарственные соединения, применяемые для лечения и предупреждения заболеваний. Неорганические и органические лекарственные вещества. Противомикробные, болеутоляющие, антигистаминные, противоопухолевые препараты, воздействующие на сердце и сосуды.
презентация [9,4 M], добавлен 12.02.2014Улучшение общественного здоровья населения путем совершенствования организационных технологий профилактики, диагностики, лечения заболеваний и реабилитации инвалидов. Основные факторы риска развития наиболее важных социально-значимых заболеваний.
дипломная работа [83,9 K], добавлен 03.11.2009Бензойная и фолиевая кислота и их производные. Пара-аминобензойная кислота, ее физико-химические свойства. Биологическое действие и минимальная суточная норма витамина В10. Лекарственные взаимодействия. Противосудорожные препараты. Действие салицилатов.
курсовая работа [270,8 K], добавлен 13.04.2014Анализ и история применения чаги в лечении и профилактике раковых заболеваний, рецепты приготовления различных лекарственных форм из нее. Особенности применения народной медицины в медикаментозном лечении рака. Характеристика комплексной терапии рака.
реферат [22,0 K], добавлен 03.05.2010Этиология, клинические проявления и патогенез рака легкого. Классификация критериев риска возникновения болезни. Ранняя диагностика рака легкого, хирургическое и лучевое лечение. Химиотерапия и профилактика болезни. Морфопатологические аспекты рака.
презентация [865,5 K], добавлен 19.03.2015Гистогенез и клеточный состав рака. Характер метастазирования рака. Биохимическое изучение рака. Исследования биосинтеза белков методом включения меченых аминокислот. Биохимические изменения при раке. Основные принципы диагностики и терапии рака.
реферат [14,7 K], добавлен 19.05.2010Нежелательные эфффекты лекарств и причины их вызывающие; основные виды осложнений, возникающие в результате побочного действия лекарств. Взаимодействие алкоголя с лекарствами приводит к разнообразным нежелательным последствиям.
реферат [7,1 K], добавлен 19.06.2003Рак легкого как социальная и научная проблема. Поздняя диагностика - причина запущенности заболевания. Классификация периферического рака легкого, его этиология, эпидемиология и патогенез. Сравнительная характеристика диагностических методов исследования.
курсовая работа [3,1 M], добавлен 19.08.2013Этиология и патогенез рака легкого, зависимость между курением и заболеваемостью. Классификация критериев риска возникновения болезни по Трахтенбергу. Ранняя диагностика рака легкого, хирургическое и лучевое лечение. Химиотерапия и профилактика болезни.
история болезни [47,5 K], добавлен 26.04.2009Рак легкого представляет собой злокачественную опухоль, уникальную с двух точек зрения. Резкое увеличение частоты бронхогенного рака по данным крупных прозектур. Фактор развития бронхогенного рака - хроническое вдыхание радиоактивной пыли и газов.
реферат [21,3 K], добавлен 25.03.2009Определение растительного сырья с фармакологическим действием (опиум из мака). Выделение и идентификация активного начала (морфин). Синтетические изучения. Разработка лекарства - синтез аналогов. Теории анальгетических рецепторов. Структура морфина.
презентация [726,5 K], добавлен 23.10.2013Проекция легких на ребра. Злокачественное новообразование лёгкого. Этиология рака легкого. Гистологическая классификация рака лёгкого. Боли в грудной клетке различного характера и интенсивности. Стадии рака легкого. Рентгеновская компьютерная томография.
презентация [3,8 M], добавлен 16.03.2016История развития лекарственных форм. Номенклатура и классификация лекарственных форм. Порошки и их производные. Капсулы, облатки, таблетки. Оригинальные формы лекарственных средств на основе порошков. Современные лекарственные формы на основе порошков.
курсовая работа [65,2 K], добавлен 13.03.2016Негативное влияние лекарств на плод и организм матери, меры предосторожности. Большинство лекарств, принимаемых беременными, способно проникать через плаценту и оказывать на развивающийся эмбрион и плод негативное действие.
реферат [4,9 K], добавлен 31.07.2003
