Процессы пролиферации и апоптоза в эутопическом и эктопическом эндометрии у женщин с наружным генитальным эндометриозом и вирусом папилломы человека высокого онкогенного риска

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Процессы пролиферации и апоптоза в эутопическом и эктопическом эндометрии у женщин с наружным генитальным эндометриозом и вирусом папилломы человека высокого онкогенного риска

Зайнетдинова Л.Ф., Коряушкина А.В., Телешева Л.Ф., Сычугов Г.В.

ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск Клиника ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России, г. Челябинск

Цель. Определить распространенность вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВНР) в эутопическом эндометрии и эндометриоидных гетеротопиях, а также особенности экспрессии белков пролиферации, апоптоза и воспаления в зависимости от наличия или отсутствия ВПЧ ВНР у женщин с разными стадиями перитонеального эндометриоза.

Материалы и методы. В исследование включено 159 пациенток с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ). Изучена распространенность ВПЧ ВНР у женщин с НГЭ и особенности экспрессии К'-67, Ьс1-2, р53, NF-kB (р65), сaspase-3 в зависимости от стадии заболевания и наличия ВПЧ ВНР. Результаты. ВПЧ ВНР идентифицирован у 29 (18,2%) женщин с перитонеальным эндометриозом в эутопическом и эктопическом эндометрии. Наиболее частой локализацией ВПЧ ВНР был эутопический эндометрий. Во всех случаях по данным гистологического исследования диагностирован хронический эндометрит. В эктопических очагах ВПЧ ВНР обнаружен в 2 (1,2%) случаях. У женщин с 1-2 стадиями эндометриоза при наличии ВПЧ ВНР в эутопическом эндометрии установлено повышение экспрессии NF-kB (р65), а в очагах эндометриоза - Ьс1-2. При 3-4 стадиях эндометриоза и ВПЧ ВНР установлен рост количества эпителиальных клеток эутопического эндометрия, экспрессирующих Ьс1-2. Экспрессия р53 в строме и эпителии эндометрия была повышена, а caspase-3 снижена.

Заключение. ВПЧ ВНР, вызывая воспалительные изменения в клетках, преимущественно, эутопического эндометрия и оказывая влияние на процессы пролиферации и апоптоза, может быть вовлечен в развитие перитонеального эндометриоза.

Ключевые слова: эутопический эндометрий, эндометриоз, пролиферация, апоптоз, вирус папилломы человека высокого онкогенного риска.

Zainetdinova L. F., Koryaushkina A. V., Telesheva L. F., Sychugov G. V.

PROCESSES OF PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN EUTOPIC AND ECTOPIC ENDOMETRY IN WOMEN WITH GENITAL ENDOMETRIOSIS AND HUMAN PAPILLOMA VIRUS OF HIGH CANCER RISK

Aim. To determine the prevalence of high-risk human papillomavirus (HPV HCR) in eutopic endometrium and endometrioid heterotopies, as well as the expression patterns of proliferation, apoptosis and inflammation proteins, depending on the presence or absence of HPV HCR in women with different stages of external genital endometriosis.

Materials and methods. The study included 159 patients with external genital endometriosis. The prevalence of HPV HCR in women with endometriosis and the expression features of Ki-67, bcl-2, p53, NF-kB (p65), caspase-3 were studied depending on the stage of external genital endometriosis and the presence of HPV HCR.

Results. HPV HCR was identified in 29 (18.2%) women with external genital endometriosis in eutopic and ectopic endometria. The most frequent localization of HPV HCR was eutopic endometrium. In all cases, according to histological examination, chronic endometritis was diagnosed. In ectopic foci of HPV HCR, was detected in 2 (1.2%) cases. In women with 1 to 2 stages of endometriosis, in the presence of HPV HCR, an increase in the expression of NF-kB (p65) was found in eutopic endometrium, and in the foci of endometriosis - bcl-2. At 3-4 stages of endometriosis and HPV HCR, an increase in the number of epithelial cells of eutopic endometrium expressing bcl-2 is established. The expression of p53 in the stroma and endometrial epithelium was increased, and caspase-3 was reduced.

Conclusion. HPV HCR, causing inflammatory changes in cells, predominantly of eutopic endometrium and influencing the processes of proliferation and apoptosis, may be involved in the development of external genital endometriosis.

Keywords: eutopic endometrium, endometriosis, proliferation, apoptosis, human papillomavirus of high oncogenic risk.

Актуальность

эндометриоз гинекологический генитальный папилломавирусный

Эндометриоз - одно из наиболее распространенных гинекологических заболеваний, встречается у 5-10% женщин репродуктивного возраста, наиболее часто проявляется бесплодием и хронической тазовой болью [7, 20]. Одна из ведущих теорий развития наружного генитального эндометриоза - имплантационная, согласно которой, эндометриоидные гетеротопии формируются при ретроградном забросе эутопического эндометрия в малый таз во время менструации [7]. Однако, не ясно, почему клетки эндометрия сохраняют жизнеспособность в перитонеуме, имплантируются на органах малого таза и приобретают способность инвазивного роста [15, 18]. В настоящее время эндометриоз рассматривается как многофакторное заболевание, в развитии которого играют роль генетические, иммунологические, гормональные нарушения, а также стресс, неблагоприятная экологическая обстановка [18, 11, 12]. Кроме этого, было высказано предположение, что внутриматочная инфекция может инициировать развитие эндометриоза путем активации провоспалительных путей и врожденного иммунитета [19]. В зарубежной литературе обсуждается возможное участие вируса папилломы человека при эндометриозе. Полученные данные не однозначны. В исследовании ОрреК Р. et а1. в очагах эндометриоза был найден ВПЧ высокого и среднего канцерогенного риска (ВПЧ ВКР) в 11,3% случаев [22]. Vestergaard А. L. et а1. обнаружили ВПЧ в эутопическом эндометрии у 3% женщин с эндометриозом. Однако, в эктопическом эндометрии вирус не был выявлен [26]. ВПЧ ВКР был обнаружен в 26% случаев в ткани яичников у женщин с эндометриозом [15]. Генитальная папилломавирусная инфекция является одной из самых частых инфекций, передаваемых половым путем. ВПЧ способен поражать практически любой эпителий, многослойный и однослойный [6]. По данным современной литературы ВПЧ определяется в эндометрии при хроническом эндометрите и гиперплазии эндометрия с частотой 9,1-46%, что позволяет предположить его участие в патогенезе данных заболеваний [6]. ВПЧ может усиливать пролиферацию клеток и влиять на апоптоз [3]. Известно, что эндометриоз является эстрогензависимым заболеванием ВПЧ-инфекция также имеет эстрогензависимый характер. Ранее было установлено, что тканевые изменения в цервикальном канале, вызванные ВПЧ, локализованы преимущественно в эстрогенчувствительных зонах.

Принимая во внимание высокую распространенность ВПЧ ВКР среди женщин репродуктивного возраста и развитие эндометриоза преимущественно в этой же возрастной категории, а также способность ВПЧ инфицировать различные типы эпителия, можно предположить участие данного вируса в изменении функционального состояния клеток эутопического эндометрия при эндометриозе.

Цель исследования

Определить распространенность ВПЧ ВКР в эутопическом эндометрии и эндометриоидных гетеротопиях, а также особенности экспрессии белков пролиферации, апоптоза и воспаления в зависимости от наличия или отсутствия ВПЧ ВКР у женщин с разными стадиями наружного генитального эндометриоза.

Материалы и методы

Исследование носило характер случай-контроль. В течение двух лет было обследовано 159 женщин с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ), которые поступали в гинекологическое отделение клиники ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России для проведения оперативного лечения. Диагноз во всех случаях был установлен во время проведения лечебно-диагностической лапароскопии и подтвержден результатами гистологического исследования удаленных тканей (капсулы эндометриоидных кист яичников, инфильтраты, «малые» формы эндометриоза). Лечебно-диагностическую лапароскопию выполняли с помощью эндовидеохирургического оборудования фирмы «Karl Storz» (Германия) под эндотрахеальным наркозом. Осматривали органы брюшной полости и малого таза. Для оценки тяжести эндометриоза использовали классификацию Американского общества по репродуктивной медицине (R-AFS, 1996) [7]. Оперативное лечение проводилось в фазу пролиферации менструального цикла. Забор эндометрия для гистологического исследования и ПЦР диагностики производили во время лапароскопии методом пайпель-биопсии. На наличие возбудителей генитальных инфекций (Chlamydia trachomatis, Mycoplasma spp., Ureaplasma spp., HSV 1,2, CMV, ВПЧ ВКР) методом ПЦР исследовали эндометрий и эндометриоидные гетеротопии. Из 159 обследованных женщин с НГЭ изучаемые возбудители генитальной инфекции не обнаружены у 86 (54%) женщин. ВПЧ ВКР был идентифицирован в эндометрии и очагах эндометриоза у 29 (18,2%) женщин, во всех случаях как моно-инфекция. В контрольной группе возбудители генитальной инфекции в эндометрии не обнаружены.

Иммуногистохимическое исследование эутопического и эктопического эндометрия было проведено у 37 женщин с НГЭ. Среди них с 1-2 стадиями эндометриоза было 17 (45,9%) женщин (первая группа); с 3-4 стадиями - 20 (54,1%) женщин - (вторая группа).

Маркеры пролиферации, апоптоза и воспаления определяли при ВПЧ ВКР и при отсутствии возбудителей генитальной инфекции. Для этого среди женщин первой и второй групп выделены подгруппы: 1а - женщины с 1-2 стадиями НГЭ, у которых возбудители генитальной инфекции не выделены (n = 9); 1б - женщины с 1-2 стадиями эндометриоза, у которых идентифицирован ВПЧ ВКР в указанных локализациях (n = 8); 2а - женщины с 3-4 стадиями эндометриоза, у которых возбудители генитальной инфекции не выделены (n = 11); 2б - женщины с 3-4 стадиями эндометриоза, у которых идентифицирован ВПЧ ВКР (n = 9).

Критерии включения в исследование: информированное согласие пациентки, оформленное в письменном виде, НГЭ, подтвержденный гистологическим исследованием операционного материала, репродуктивный возраст пациенток (18-46 лет). Критерии исключения: отказ от участия в исследовании, беременность, тяжелая соматическая патология в стадии суб- и декомпенсации, онкологические заболевания, туберкулез, ВИЧ инфекция, воспалительные заболевания в стадии обострения. Группу контроля составили 9 практически здоровых женщин репродуктивного возраста, поступивших для проведения хирургической стерилизации

Средний возраст женщин в первой группе - 31,16±0,6 год, во второй группе - 31,28±0,59 года. В группе контроля средний возраст женщин составил 30,79 ± 1,54 лет.

Экстракция ДНК из клинического материала осуществлялась с помощью наборов «ДНК-сорб-АМ» и «ДНК-сорб-В» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва) в соответствии с инструкцией производителя. Амплификационная часть исследования проводилась с помощью тест-систем «Ампли Сенс® Ch. trachomatis / Ureaplasma / M. Genitalium - МУЛЬТИПРАЙМ-FL», «Ампли Сенс® HSV/CMV - МУЛЬТИПРАЙМ-FL», «Ампли Сенс ® ВПЧ ВКР генотип-FL» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва) на детектирующих ам- плификаторах ДТ-96 (НПФ «ДНК-технология», Россия) и Rotor-Gene-6000 (Corbett Research, Австралия) в режиме реального времени. Исследования проводились в иммунологической лаборатории Клиники ЮУГМУ (зав. лабораторией С. В. Квятковская).

Удаленные при лапароскопии ткани исследовали гистологическим и иммуногистохимическим методами. После фиксации в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24 часов и стандартного протокола проводки, материал заливали в парафин. Далее серийные депарафинированные срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали гемотоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводили в световом микроскопе. При иммуногистохимическом исследовании биоптатов эндометрия фазы пролиферации (строма и железы эндометрия) и эндометриоидных гетеротопий определяли маркер пролиферативной активности клеток (Ki-67), антиапоптогенный белок (bcl-проапоптогенные белки (р53, caspase-3) и фактор транскрипции NF-kB (р65). Депарафинированные срезы толщиной 4-5 мкм монтировались на стекла со специальным, заряженным покрытием (Thermo Scientific™ Superfrost™ Ultra Plus Adhesion Slides.). Стекла со срезами сушили 12-16 часов в термостате при 40 °С. Далее проводился стандартный протокол постановки имму- ногистохимической реакции. Иммуногистохимическое исследование проводили при помощи сывороток: В2 (производитель - Cell marque, клон - 124, разведение - 1/500, контроль - миндалина); NF-kB (p65) (производитель - GeneTex, клон - поликлональный, разведение - 1/500, контроль - легочная карцинома); caspase-3 (производитель - GeneTex, клон - поликлональный, разведение - 1/500, контроль - миндалина); р53 (производитель - Cellmarque, клон - DO7, разведение - 1/500, контроль - карцинома молочной железы. Ki-67, производитель - Dako, клон - MIB1, разведение - 1/100, контроль - неходжкинская лимфома).Для количественной оценки результатов ИГХ-реакции получали микрофотографии образцов ткани с помощью системы фиксации микроскопических изображений, состоящей из микроскопа «CarlZeissAxioskop40», цифровой камеры «Jenoptik ProgRes CT3», персонального компьютера на базе Intel® Core™ i7, программного обеспечения «ProgRes Capture Pro 2.5». Из фотосъемки исключали поля зрения, содержащие дефекты ткани, дефекты окрашивания и артефакты. Фотосъемку проводили при увеличении 200 (окуляр 10, объектив 20) и 400 (окуляр 10, объектив 40) с полным закрытием апертурной диафрагмы, при поднятом конденсоре, время экспозиции 4,11 мс, размер изображения 1024x768 пикселей, графический формат изображения JPEG. Дальнейшее количественное исследование проводили с помощью программы компьютерного анализа изображений «Морфология 5.1» (ВидеоТест, Россия), по ранее примененной методике [5]. При оценке результатов окрашивания ядерных антигенов в произвольно выбранных полях зрения при увеличении 400 учитывали количество окрашенных ядер (для Ki-67, NF-kB, р53) по отношению к общему числу ядер клеток данной популяции. При оценке неядерных антигенов (bcl-2, caspase-3) рассчитывали относительную плотность изучаемых структур по отношению к общей площади исследуемого кадра при длине волны 450 нм по методике М. Ю. Смирновой и соавт. [4].

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием пакета программ прикладного статистического анализа IBMSPSS Statistics Version 22.2. Для оценки достоверности полученных значений применяли непараметрические методы статистического анализа cрасчетом медианы, минимальной и максимальной величины Различия показателей определяли с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни и признавали статистически значимыми при р< 0,05.

Результаты исследования

В исследование включено 37 женщин с НГЭ. По данным гистологического исследования у всех был хронический эндометрит неактивный или минимальной степени активности. У женщин контрольной группы во всех случаях был хронический неактивный эндометрит. Среди 17 женщин с 1-2 стадиями НГЭ ВПЧ ВКР был выделен из эндометрия в 8 случаях, из них в 1 (5,8%) случае одновременно из эндометрия и очага эндометриоза (1б группа). Среди 20 женщин с 3-4 стадиями НГЭ ВПЧ ВКР был выделен из эндометрия в 9 случаях (2б группа).

Результаты исследования факторов пролиферации, апоптоза и воспаления в эутопическом и эктопическом эндометрии у пациенток с 1-2 стадиями НГЭ представлены в таблице 1

Экспрессия маркера пролиферации Ю-67 у женщин 1а группы была снижена при сравнении с контрольной группой в строме эутопического эндометрия (р = 0,001) и эпителии железистых крипт (р = 0,001); в 1б группе экспрессия Ю-67 была снижена только в строме эндометрия (р = 0,001).

Экспрессия ингибитора апоптоза Ьс1-2 в строме эндометрия достоверно не отличалась у пациенток 1а и 1б групп от показателей в контрольной группе. В эпителии железистых крипт эндометрия экспрессия Ьс1-2 была больше в 1а группе, чем в группе контроля (р = 0,004) и в 1б группе (р = 0,001).

Экспрессия проапоптотических факторов р53, caspase-3 в строме и эпителии железистых крипт эутопического эндометрия пациенток 1а и 1б групп статистически значимо не отличалась от результатов в контрольной группе. Экспрессия NF-kВ (р65) в эутопическом эндометрии пациенток 1а и 1б групп также не отличалась от результатов в контрольной группе. Однако, при межгрупповом сравнительном анализе среди пациенток с эндометриозом экспрессия N F-kВ (р65) была выше в строме (р = 0,001) и эпителии железистых крипт (р = 0,001) эутопического эндометрия в 1б группе в сравнении с 1а группой женщин (рис. 1).

В эндометриоидных гетеротопиях экспрессия Ю-67, р53, caspase-3, N F-kB (р65) у женщин 1а и 1б групп была значительно ниже, чем в эутопическом эндометрии. Экспрессия Ьс1-2 в эндометриоидных гетеротопиях была достоверно повышена по сравнению с эутопическим эндометрием у женщин 1б группы (р = 0,001) (рис. 2)

Результаты исследования факторов пролиферации, апоптоза и воспаления в эутопическом и эктопическом эндометрии у пациенток с 3-4 стадиями НГЭ представлены в таблице 2.

У пациенток с 3-4 стадиями НГЭ при сравнении с контрольной группой экспрессия маркера пролиферации Ю-67 в клетках стромы эндометрия была снижена во 2а группе (р = 0,001). В клетках эпителия железистых крипт эндометрия уровень Ю-67 был наиболее низкий у женщин во 2б группе, но достоверность результатов на уровне тенденции (р = 0,05).

Экспрессия ингибитора апоптоза Ьс1-2 в строме эндометрия при сравнении с контрольной группой была повышена у пациенток 2а группы (р = 0,01) и на уровне тенденции во 2б группе (р = 0,05). В клетках эпителия железистых крипт эндометрия степень экспрессии Ьс1-2 была достоверно выше во 2б группе (р = 0,001). При межгрупповом анализе результатов среди женщин с 3-4 стадиями НГЭ экспрессия Ьс1-2 в эпителии железистых крипт эндометрия была статистически значимо выше во 2б группе, чем во 2а группе (р = 0,02).

Экспрессия маркера апоптоза р53 в строме эутопического эндометрия пациенток 2а группы была снижена, а 2б группы повышена на уровне тенденции в сравнении с контрольной группой (р = 0,06, р = 0,08). В эпителии железистых крипт эндометрия экспрессия р53 также на уровне тенденции была повышена во 2б группе (р = 0,05). Межгрупповое сравнение среди пациенток с 3-4 стадиями НГЭ выявило достоверно более высокую экспрессию р53 в строме (р = 0,03) и эпителии железистых крипт (р = 0,008) эндометрия во 2б группе.

Экспрессия caspase-3 в строме эндометрия была наиболее низкая у пациенток 2б группы. Различия статистически достоверны при сравнении с контрольной группой (р = 0,004) и женщинами 2а группы (р = 0,02). В клетках эпителия железистых крипт эндометрия экспрессия caspase-3 не отличалась от контрольной группы, но у пациенток 2б группы значения были достоверно ниже, чем во 2а группе (р = 0,001).

Установлена тенденция снижения экспрессии NF- кВ (р65) в строме эутопического эндометрия у женщин 2б группы (р = 0,05) в сравнении с контролем. В эпителии железистых крипт эндометрия экспрессия N F-kB (р65) не различались с контрольной группой (рис. 1).

В эндометриоидных гетеротопиях степень экспрессии caspase-3 (р = 0,001), NF-kB (р65) (р = 0,008) у женщин 2а группы была меньше, а Ьс1-2 - больше (р = 0,01), чем в эутопическом эндометрии. У пациенток 2б группы в гетеротопиях в сравнении с эутопи- ческим эндометрием была снижена экспрессия Ю-67 (р = 0,009), NF-kB (р65) (р = 0,009); caspase-3 (р = 0,001); р53 (р = 0,001) (рис. 2).

Мы сравнили экспрессию изучаемых маркеров пролиферации и апоптоза в аналогичных группах при 1-2 и 3-4 стадиях НГЭ. При отсутствии возбудителей генитальной инфекции установлено: увеличение количества клеток стромы и эпителия железистых крипт эутопического эндометрия фазы пролиферации, экспрессирующих воспалительный фактор N F-kB (р65) при 3-4 стадиях в сравнении с 1-2 стадиями НГЭ. При наличии ВПЧ ВКР установлено: рост количества клеток эпителия железистых крипт эндометрия фазы пролиферации, экспрессирующих Ьс1-2 при 3-4 стадиях в сравнении с 1-2 стадиями; рост количества клеток стромы и эпителия железистых крипт эндометрия фазы пролиферации, экспрессирующих р53 при 3-4 стадиях в сравнении с 1-2 стадиями НГЭ. В эндометриоидных гетеротопиях при отсутствии возбудителей генитальной инфекции выявлено увеличение экспрессии Ю-67, Ьс1-2 при 3-4 стадиях в сравнении с 1-2 стадиями; при ВПЧ ВКР - увеличение экспрессии caspase-3.

Результаты

Эндометриоз - заболевание, этиология которого остается загадкой. В последние годы обсуждается высокая частота хронического эндометрита у женщин, страдающих генитальным эндометриозом

Причиной хронического эндометрита является либо инфекционный фактор, либо нарушение местного иммунитета и развитие аутоиммунного процесса при длительном течении заболевания. Одной из наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем, является ВПЧ-инфекция. Имеются данные об инфицированности ткани эндометрия ВПЧ при хроническом эндометрите, гиперплазии эндометрия, аденокарциноме [16], при этом вирус может проникать в эпителиальные клетки эндометрия

Экспрессия факторов пролиферации, апоптоза и воспаления у женщин с 1-2 стадиями НГЭ

Таблица 1

Примечание: р* - различия между показателями у женщин 1а группы и 1б группы; р** - различия между контрольной группой и группами 1а и 1б; р*** - различия между стромой эндометрия и стромой очага эндометриоза в каждой группе. Тест Манна-Уитни.

Экспрессия факторов пролиферации, апоптоза и воспаления у женщин с 3-4 стадиями НГЭ

Таблица 2

Примечание: р* - различия между показателями у женщин 2а группы и 2б группы; р** - различия между контрольной группой и группами 2а и 2б; р*** - различия между стромой эндометрия и стромой очага эндометриоза в каждой группе. Тест Манна-Уитни.из цервикального канала, запускать синтез агентов, блокирующих естественный клеточный цикл инфицированных эпителиоцитов [24] и вызывать как доброкачественные, так и предраковые и раковые клеточные трансформации [6].

Рис. 1. Экспрессия факторов пролиферации, апоптоза и воспаления в эутопическом эндометрии у пациенток с разными стадиями НГЭ при отсутствии возбудителей генитальной инфекции и при ВПЧ ВКР

Рис. 2. Экспрессия факторов пролиферации, апоптоза и воспаления в эктопических очагах у пациенток с разными стадиями НГЭ при отсутствии возбудителей генитальной инфекции и при ВПЧ ВКР

Эндометриоз, как известно, развивается преимущественно у женщин репродуктивного возраста, когда наиболее высокий риск инфицирования генитальными инфекциями. В нашем исследовании ВПЧ ВКР был выделен в 14,5% случаях при 1-2 стадиях эндометриоза и в 21,1% - при 3-4 стадиях, преимущественно из эутопического эндометрия. В патогенезе эндометриоза важное значение имеет активация клеточной пролиферации и снижение апоптоза [1, 12]. Мы изучали экспрессию факторов пролиферации, апоптоза и воспаления в пролиферативную фазуменструального цикла. У женщин с 1-2 стадиями НГЭ при отсутствии возбудителей генитальной инфекции наблюдалось снижение К1-67 в строме и эпителии железистых крипт эутопического эндометрия Наличие ВПЧ ВКР также сопровождалось снижением экспрессии К1-67, но только в строме и не менялось в эпителии эндометрия. Другие изучаемые маркеры (Ьс!-2, р53, caspase-3, р65) достоверно не менялись в сравнении с результатами в контрольной группе. Тем не менее, между группами женщин с 1-2 стадиями НГЭ были установлены статистически значимые различия: при ВПЧ ВКР в эутопическом эндометрии фазы пролиферации в сравнении с показателями у женщин без возбудителей генитальной инфекции наблюдалось снижение экспрессии Ьс!-2 в эпителии железистых крипт и повышение экспрессии 1-кВ (р65) в строме и эпителии железистых крипт. KimS. H. etalранее показали усиление экспрессии NF-kB(р65) в эутопическом эндометрии и эндометриомах при эндометриозе. Известно, что при активации NF-kB (p65) повышается экспрессия провоспалительных цитокинов, хемокинов, молекул адгезии и других биологически активных веществ [17], следовательно, наличие ВПЧ ВКР вызывает или усиливает воспалительные изменения в эутопическом эндометрии уже на 1-2 стадиях НГЭ. Полученные результаты согласуются с литературными данными, согласно которым ВПЧ ВКР активирует синтез NF-kB[23, 25], однако, NF-kBможет подавлять репликацию ВПЧ ВКР [21] По результатам нашего исследования в клетках стромы эндометриоидных гетеротопий при наличии ВПЧ ВКР была повышена экспрессия ингибитора апоптоза bcl-2 в сравнениисо стромой эутопического эндометрия, таким образом, при ВПЧ ВКР усилены процессы антиапоптоза в очагах эндометриоза уже на 1-2 стадиях заболевания.

У женщин с инфильтративным эндометриозом (3-4 стадии НГЭ) экспрессия КІ-67 в эутопическом эндометрии была снижена, как и при 1-2 стадиях Полученные данные согласуются с результатами других авторов, которые также не установили статистически значимогоповышения КІ-67 в железистом и стромальном компонентах эутопического эндометрия при распространенном эндометриозе [1]. Экспрессия Ьс1-2 была повышена в обеих группах: при наличии ВПЧ ВКР - в эпителии железистых крипт и при отсутствии возбудителей генитальной инфекции - в строме. Это соответствует данным литературы, согласно которым в эутопическом эндометрии при эндометриозе повышается экспрессия ингибитора апоптоза Ьс1-2 [8, 10]. Изменение экспрессии проапоптотических факторов было установлено только у женщин с ВПЧ ВКР. В этой группе была снижена экспрессия caspase-3 в строме и эпителии железистых крипт эндометрия и повышена экспрессия р53 в строме эутопического эндометрия. В литературе также описано снижение экспрессии caspasе-3 в эутопическом и эктопическом эндометрии независимо от стадии эндометриоза [27]. Повышение р53 при ВПЧ ВКР может быть направлено на ликвидацию пораженных вирусом клеток, но апоптоз, вероятно, не эффективен из-за снижения caspase-3. Кроме этого, низкая экспрессия caspase-3 снижает местную противовирусную защиту, так как по данным литературы известно, что caspase-3 участвует в противовирусной защите путем активации Р-16 [9]. Экспрессия р53 не менялась у женщин с НГЭ при отсутствии возбудителей генитальной инфекции.

В эндометриоидных гетеротопиях при 3-4 стадиях НГЭ экспрессия ингибитора апоптоза Ьс1-2 была повышена в сравнении со стромой эутопического эндометрия не только при ВПЧ ВКР, но и в группе, где не были обнаружены возбудители генитальной инфекции. Эти результаты согласуются с данными других авторов, показавших повышение Ьс1-2 в эндометриоидных очагах [28].

Заключение

Таким образом, особенностью экспрессии белков пролиферации, апоптоза и воспаления при 1-2 стадиях НГЭ в группе, где отсутствовали возбудители генитальной инфекции было снижение экспрессии Ю-67 в клетках эпителия железистых крипт и стромы эутопического эндометрия фазы пролиферации и повышение экспрессии Ьс1-2 в клетках эпителия железистых крипт эндометрия. При 3-4 стадиях НГЭ в этой группе сохранялась низкая экспрессия фактора пролиферации Ю-67 в строме и эпителии железистых крипт эндометрия и повышалась экспрессия Ьс1-2 в строме эндометрия и эндометриоидных гетеротопиях.

В результате проведенного исследования установлено наличие ВПЧ ВКР в эутопическом и эктопическом эндометрии у 29 (18%) женщин с НГЭ. Наиболее частой локализацией ВПЧ ВКР был эутопический эндометрий. Особенностью экспрессии изучаемых маркеров у женщин с 1-2 стадиями НГЭ и ВПЧ ВКР было повышение экспрессии NF-kB (р65), что может отражать активность воспалительной реакции в эндометрии. В строме эндометриоидных гетеротопий установлено повышение антиапоптотического фактора в сравнении со стромой эутопического эндометрия. При 3-4 стадиях НГЭ и ВПЧ ВКР повышенная экспрессия антиапоптотического фактора Ьс1-2 наблюдалась в строме и в эпителии железистых крипт эутопического эндометрия. Кроме этого усиливалась экспрессия р53 и снижалась caspase-3. Эти результаты показывают, что ВПЧ ВКР способен подавлять процессы, направленные на уничтожение пораженных вирусом клеток. Таким образом, ВПЧ ВКР, вызывая воспалительные изменения в клетках, преимущественно, эутопического эндометрия и оказывая влияние на процессы пролиферации и апоптоза, может быть вовлечен в патогенез генитального эндометриоза.

Литература

1. Адамян Л. В., Зайратьянц О. В., Максимова Ю. В., Арсланян К. Н., Сонова М. М., Логинова О. Н., Мурдалова З. Х., Зарубина И. П. Пролиферативная активность эктопического и эутопического эндометрия при эндометриозе: что нового? // Материалы XXIII международного конгресса с курсом эндоскопии «Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний». Москва, 2010. С. 150-151.

2. Бахтияров К. Р., Щукина А. С Вирус папилломы человека - современный взгляд на проблему // Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2017. Т 19, №1.С. 37-42. http://dx. doi. org/10.26787/nydha-2226-7425-2017-19-12.

3. Маянский А. Н. Вирус папилломы человека - онкогенный вирус // Педиатрическая фармакология. 2010. Т 7, №4. С 48-55

4. Смирнова М. Ю., Джемлиханова Л. Х., Костючек И. Н., Кветной И. М., Ниаури Д. А., Пальцев М. А. Количественная иммуногистохимия: оптимизация анализа экспрессии сигнальных молекул в миометрии // Архив патологии. 2010. № 4. С. 51-55.

5. Сычугов Г В., Казачков Е. Л., Азизова Т В., Теплякова О. В., Ревина В. С. Иммуноморфологические особенности пневмофиброза у работников плутониевого производства // Уральский медицинский журнал. 2014. Т 8, № 122. С. 71-76.

6. Унанян А.Л., Сидорова И. С., Коссович Ю. М., Коган Е. А., Демура Т А. Хронический эндометрит и ВПЧ: тревожные новости. Роль сочетания ВПЧ-инфекции и хронического эндометрита в патогенезе злокачественных опухолей эндометрия // Журнал Status Praesens. 2012. Т 3, №9.С. 23-27.

7. Эндометриоз: диагностика, лечение и реабилитация. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных. Москва, 2016 66 с

8. Ярмолинская М. И., Айламазян Э. К. Генитальный эндометриоз. Различные грани проблемы. Санкт-Петербург: ЭКОВЕКТОР, 2017.615 с.

9. Яровая Г А., Нешкова Е. А., Мартынова Е. А., Роль протеолитических ферментов в контроле различных стадий апоптоза // Лабораторная медицина. 2011. № 11. С. 39-52.

10. Abdalla Ribeiro H. S., Galvao M.A., Aoki T, Aldrighi J. M., Ribeiro P. A. Anti-apoptotic activity in deep pelvic endometriosis // Histol Histopathol.2014.Vol. 29, № 9.Р. 1129-33.

11. Begum T, Chowdhury S. Aetiology and pathogenesis of endometriosis: аreview // Mymensingh Med. J.2013.Vol.22. № 1.Р. 218-221.

12. Burney R.O., Giudice L.C. Pathogenesis and pathophysiology of endometriosis// Fertil Steril. 2012.Vol. 98, № 3.Р. 511-519.

13. Cicinelli E., Trojano G., Mastromauro M., Vimercati A., Marinaccio M., Mitola P. C., Resta L., de Ziegler D. Higher prevalence of chronic endometritis in women with endometriosis: a possible etiopathogenetic link // Fertil. Steril. 2017. Vol. 108, № 2.Р. 289-295.

14. Goteri G., Altobelli E., Tossetta G., Zizzi A., Avellini C., Licini C. et al. High Temperature Requirement A1, Transforming Growth Factor Beta1, phosphorSmad2 and Ki67 in Eutopic and Ectopic Endometrium of Women With Endometriosis // Eur.J.Histochem.2015.Vol.59:2570.Р. 268-273.

15. Heidarpour M., Derakhshan M., Marzieh Horeh D., Kheirollahi M., Dashti S. Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in women with ovarian endometriosis // J. Obstet. Gynaecol. Res.2017.Vol. 43, № 1. P. 135-139.doi:10.im/jog. 13188.

16. Kinjo T, Kamiyama K., Chinen K. et al. Squamous metaplasia induced by transfection of human papillomavirus DNA into cultured adenocarcinoma cells // Mol. Pathol.2003. № 56. P 97108

17. Kim S.H., Ihm H.J., Oh Y S., Chae H.D., Kim C. H., Kang B. M. Increased nuclear expression of nuclear factor kappa-B p65 subunit in the eutopic endometrium and ovarian endometrioma of women with advanced stage endometriosis // Am.J. Reprod Immunol.2013.Vol. 70, № 6. P 497-508.

18. Kobayashi H., Imanaka S., Nakamura H., Tsuji A. Understanding the role of epigenomic, genomic and genetic alterations in the development of endometriosis (Review) // Mol. Med.Rep.2014.Vol. 9, № 5. P 1483-505.

19. Kobayashi H., Higashiura Y, Shigetomi H., Kajihara H. Pathogenesis of endometriosis: The role of initial infection and subsequent sterile inflammation (Review) // Mol. Med.Rep.2014. №9. P 9-15.

20. Macer M.L., Taylor H. S. Endometriosis and infertility: a review of the pathogenesis and treatment of endometriosis-associated infertility // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 2012.Vol. 39, № 4. P 535-549.

21. Nakahara T., Tanaka K., Ohno S., Egawa N., Yugawa T., Kiyono T Activation of NF-kB by human papillomavirus 16 E1 limits E1-dependent viral replication through degradation of E1 // J.Virol.2015.Vol. 89, № 9. P 5040-59.

22. Oppelt P., Renner S. P, Strick R., Valletta D., Mehlhorn G., FaschingPA.et al. Correlation of high-risk human papilloma viruses but not of herpes viruses or Chlamydia trachomatis with endometriosis lesions // Fertility and Sterility. 2010.Vol. 93, № 6. P 1778-86.

23. Prabhavathy D., Subramanian C.K., Karunagaran D. Re-expression of HPV16 E2 in SiHa (human cervical cancer) cells potentiates NF-kB activation induced by TNF-a concurrently increasing senescence and survival // Biosci Rep. 2015.Vol. 35, № 1.e00175.

24. Stoppler H., Stoppler M. C., Johnson E.et al. The E7 protein of human papillomavirus type 16 sensitizes primary human keratinocytes to apoptosis // Oncogene. 2000. № 17. P 12071214

25. Tang Y J., Khalaf A. T, Liu X. M., Xu C. X., Zhao W., Cheng S., Zhang R. Z. Zinc finger A20 and NF-kB correlate with high-risk human papillomavirus of squamous cell carcinoma patients // Tumour Biol.2014.Vol. 35, № 12.P 11855-60.

26. Vestergaard A.L., Knudsen U. B., Munk T., Rosbach H., Bialasiewicz S., Sloots T P et al. Low prevalence of DNA viruses in the human endometrium and endometriosis // Arch Virol. 2010.Vol.155, №5.P.695-703.

27. Wei W. D., Ruan F.,Tu F. X., Zhou C.Y, Lin J. Expression of suppressor of cytokine signaling-3 and caspase-3 in endometriosis and their correlation // Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi.2013.Vol.42, №8. P 515-8.

28. Wang C. Jin A., Huang W., Tsang L. L., Cai Z., Zhou X., Chen H., Chan H. C. Up-regulation of Bcl2 by CD 147 Through ERK Activation Results in Abnormal Cell Survival in Human Endometriosis // J. Clin Endocrinol Metab. 2015. Vol. 100, № 7. P 955-963.

Размещено на Allbest.ru