Эффективность моновалентной вакцины "АРРИАХ-ВАК", разработанной на основе штамма О/KOR/JC02D1/14 (O/JINCHEON/2014) вируса Ящура
Ящур как высококонтагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных, которое относится к категории трансграничных инфекций и вызывает эпизоотии. Характеристика методики тестирования вакцины на авирулентность с помощью крупного рогатого скота.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 09.06.2021 |
| Размер файла | 220,1 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru
Размещено на http://www.allbest.ru
Эффективность моновалентной вакцины «АРРИАХ-ВАК», разработанной на основе штамма О/KOR/JC02D1/14 (O/JINCHEON/2014) вируса Ящура
Лозовой Д.А., Михалишин Д.В, Стариков В.А.
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Аннотация. В данное статье описано исследование, посвященное оценке эффективности противоящурной вакцины из штамма О/Jincheon/2014 генетической линии SEA/Mya-98 против гомологичного и гетерологичного вируса ящура О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016, применяющейся с целью профилактической иммунизации животных в Южной Корее. Разработанная вакцина авирулентна, безвредна и иммуногена. Проведено исследование иммуногенной и протективной активности против гомологичного вируса ящура О/Jincheon/2014 на свиньях. Протективная активность противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 против гомологичного вируса ящура составила 50 PD50 в прививной дозе. Протективная активность той же вакцины против гетерологичного штамма 0/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 имела высокое значение и составила у КРС 18 PD50, а у свиней 15 PD50. Полученные данные свидетельствуют о возможности использования разработанной вакцины для профилактической вакцинации животных и предупреждения возникновения чрезвычайных ситуаций на свободных от ящура территориях, где высоки риски занесения вируса ящура типа О генетической линии SEA/Mya-98, а также ME-SA/Ind-2001d.
EFFECTIVENESS OF MONOVALENT VACCINE «ARRIAH-VAC» FROM STRAIN О/KORУJC02D1/14 (O/JINCHEON/2014) AGAINST FOOT-AND-MOUTH DISEASE
Federal Centre for Animal Health, Federal Governmental Budgetary Institution
Summary. This article describes an analysis to the efficiency ofthefoot-and-mouth (FMD) disease vaccinefrom the strain O/ Jincheon/2014 genetic line SEA/Mya-98 against homologous and heterologous FMD virus O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016, usedfor preventive immunization of animals in South Korea. The developedvaccine is avirulent,harmless andimmunogen. The research of immunogenic and protective activity against homologous FMD virus O/Jincheon/2014 in pigs. The protective activity of monovalent emulsion vaccine "ARRIAH-VAC" from strain O/Jincheon/2014 against homologous FMD virus was 50 PD50 in the inoculated dose. The protective activity of the same vaccine against the heterologous strain O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 was high and amounted to 18 PD50 in cattle and 15 PD50 in pigs. The data obtained indicate the possibility of using this vaccine from the strain O/Jincheon/2014 for prophylactic vaccination of animals and preventing emergencies in FMD-free areas where the risks of introducing the genetic isolates ME-SA/Ind-2001d of the FMD virus are high.
Введение
Ящур высококонтагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных, которое относится к категории трансграничных инфекций, вызывает эпизоотии и причиняет большой экономический ущерб животноводству многих государств. Возбудителем является безоболочечный РНК-содержащий вирус, принадлежащий к порядку Picornavirales, роду Aphthovirus семейства Picornaviridae [7]. Характерной особенностью вируса ящура является наличие 7 типов: О, А, С, Азия-1, SAT-1, SAT-2, SAT-3 и множества подтипов с различными генетическими и антигенными вариантами. Геном вируса кодирует четыре структурных и восемь неструктурных белков, вызывающих у животных выработку антител [4].
В настоящее время в мире существует семь экосистем (пулов) вируса ящура: 1 Юго-Восточная Азия и Китай, 2 Южная Азия, 3 Ближний и Средний Восток, 4 Западная и Центральная Африка, 5 Восточная Африка, 6 Южная Африка, 7 Южная Америка. В каждом пуле циркулируют изоляты вируса ящура, отличающиеся друг от друга по своим генетическим и антигенным характеристикам. Сформировавшиеся, устойчивые генетические группы изолятов получили название топотипов (географических типов), в которых различают многочисленные генетические линии вируса [3].
Вспышки ящура в разных странах мира (Великобритания, Франция, Нидерланды, Болгария, Израиль, Тайвань, Северная и Южная Корея, Япония, Монголия и др.) свидетельствуют о постоянной угрозе занесения его возбудителя на территорию соседних государств. Обострение эпизоотической ситуации по ящуру обусловлено множеством факторов: высокой степенью мутационной изменчивости вируса и, как следствие, появлением новых изолятов, множеством путей передачи инфекции и высокой контагиозностью вируса, перемещением животных, в том числе диких, их случайными контактами на пастбищах и водопое, разными хозяйственно-экономическими и культурными связями, возросшим уровнем туризма и паломничества, военными конфликтами, движением автотранспорта, массовой миграцией людей [5].
Согласно отчетам Европейской комиссии по контролю ящура (EuFMD) и Всемирной справочной лаборатории МЭБ по ящуру (WRLFMD) года ящур типа О был выявлен в Южной Корее в феврале 2017 года у КРС в «Chungcheongbuk-Do» и «Jeollabuk-do» [2]. Полевой изолят Zabaikalskiy/2/RUS/2016 вируса ящура, выделенный в Забайкальском крае РФ от крупного рогатого скота, относится к генетической линии ME-SA/Ind-2001d. Другой полевой изолят, обнаруженный 06 февраля 2017 года в Jeonbuk (Южная Корея), принадлежит также к линии ME-SA/Ind-2001d и по последовательности нуклеотидов имеет высокую степень родства (99,7%) по отношению к изоляту Zabaikalskiy/2/RUS/2016 [2].
Цель исследования заключалась в определении антигенной и протективной эффективности противоящурной моновалентной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 (генетическая линия Mya98 топотипа SEA) против гетерологичного штамма 0/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 (генетическая линия ME-SA/Ind-2001d) вируса ящура.
Материалы и методы
Вирус ящура. В работе применяли культуральный вирус ящура штаммов O/Jincheon/2014 (генетическая линия Mya-98 топотипа SEA) и O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 (генетическая линия ME-SA/Ind-2001d). Для контрольного заражения применяли 10%-ную афтозную суспензию штамма O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 и O/Jincheon/2014 вируса ящура адаптированного к восприимчивым животным.
Животные. В исследовании использовали крупный рогатый скот (КРС) голштино-фризской породы, массой 250-300 кг, в возрасте 9-12 месяцев, в количестве 22 голов. В исследовании использовали свиней породы ландрас, массой 30-40 кг, в количестве 17 голов.
Вакцина. В работе исследовали экспериментальную противоящурную моновалентную инактивированную эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 с содержанием в прививном объеме не менее 6 PD50.
Оценка авирулентности инактивированного антигена вируса ящура. Авирулентность суспензии инактивированного вируса ящура контролировали инокуляцией монослойной перевиваемой клеточной линии почки свиньи (IB-RS-2).
Тестирование вакцины на авирулентность с помощью КРС
Отобранную пробу экспериментальной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 вируса ящура каждому из пяти животных вводили в 20 точек слизистой оболочки языка по 0,1 см3 (прививная доза 2,0 см3). Вакцина считается авирулентной, если все животные, которым был инокулирован препарат, в течение 6 суток оставались клинически здоровыми, без проявления клинических признаков, характерных для ящура.
Оценка безвредности вакцины для КРС
Для тестирования вакцины на безвредность 5 головам КРС внутримышечно в область верхней трети шеи в дозе 6,0 см3 (трехкратная доза) вводили препарат и наблюдали за клиническим состоянием животного в течение 6 суток. Вакцина признается безвредной в том случае, если все животные по итогам наблюдения остаются клинически здоровыми, и на месте введения препарата не происходит некроза тканей.
Определение антител к неструктурным белкам вируса ящура на КРС
Для определения серонегативности к неструктурным белкам вируса ящура от животных до иммунизации отбирали кровь и тестировали полученные сыворотки с помощью блокирующего варианта иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ). На 14 день после начала испытаний на авирулентность и безвредность 5 головам КРС вводили усредненную из 3 флаконов пробу моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура в количестве одной прививной дозы в область верхней средней трети шеи внутримышечно. Через 14 суток после последней вакцинации от животных производили отбор проб крови. Тестирование полученных сывороток проводили с использованием тестсистемы для ИФА «PrioCHECK® FMDV NS ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs» (Prionics Lelystad B.V., Нидерланды). Для контрольных и исследуемых образцов после проведения реакции на спектрофотометре-ридере измеряли значения оптических плотностей (ОП) и преобразовывали их в процент ингибиции, пользуясь формулой:
PI процент ингибиции (%),
OnS оптическая плотность исследуемой сыворотки крови;
ОПКО оптическая плотность отрицательного контроля.
Сыворотки крови КРС в отношении наличия антител к неструктурным белкам вируса ящура следует считать положительными, если значение PI>50%, отрицательными при PI<50%. При этом значение оптической плотности отрицательного контроля должно быть >1,000. Процент ингибиции слабоположительного контроля должен составлять >50,00%, положительного контроля >70,00% [6, 7].
Определение титра вируснейтрализующих антител (ВНА)
На 0 и 21 сутки после введения моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 от животных отбирали кровь и получали сыворотки, которые исследовали на наличие ВНА с применением реакции микронейтрализации (РМН) вируса. Постановку РМН для определения титра нейтрализующих антител против гомологичного штамма O/Jincheon/2014 и гетерологичного штамма O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 вируса ящура осуществляли с использованием клеточной линии IB-RS-2 по стандартной процедуре [7].
Оценка иммуногенности вакцины
Иммуногенность вакцины исследовали на 17 головах КРС и 34 головах свиней количественным методом с контрольным заражением против гомологичного штамма O/Jincheon/2014 (генетическая линия Mya-98 топотипа SEA) и гетерологичного штамма О/ZabaІkalskiy/2/RUS/2016 вируса ящура (генетическая линия О/ME-SA/Ind-2001d). Для вакцинации животных готовили 3 образца: 1) моновалентную эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура без разведения, вакцину, разбавленную «Плацебо» в соотношении 1:4 для КРС и 1:5 для свиней, вакцину, разбавленную «Плацебо» в соотношении 1:16 для КРС и 1:25 для свиней. Приготовленные образцы вводили внутримышечно в верхнюю треть шеи в дозе 2,0 см3. Для тестирования каждого образца брали по 5 голов КРС и свиней и 2 головы оставляли в качестве контроля без иммунизации. КРС с порядковыми номерами с 1 по 5 инокулировали вакциной без разведения, животным с номерами с 6 по 10 вводили вакцину, разведенную 1:4, животным с номерами с 11 по 15 вакцину, разведенную 1:16, животных с номерами 16 и 17 не иммунизировали (контроль). Свиней с порядковыми номерами с 1 по 5 инокулировали вакциной без разведения, животным с номерами с 6 по 10 вводили вакцину, разведенную 1:5, животным с номерами с 11 по 15 вакцину, разведенную 1:25, животных с номерами 16 и 17 не иммунизировали (контроль).
Спустя 21 суток после иммунизации от вакцинированных животных отбирали кровь и полученные сыворотки анализировали в РМН с целью определения уровня вируснейтрализующих антител (ВНА). Затем КРС и свиней заражали гетерологичным штаммом вируса ящура O/Zabaikalskiy/2/ RUS/2016 в слизистую оболочку языка в дозе 104,0 ИД50/0,20 см3 (в две точки по 0,10±0,05 см3). КРС и свиньи друг с другом не контактировали. В течение 7 суток после заражения за животными вели наблюдение и ежедневно измеряли температуру. Через 7 суток после заражения всех животных подвергли эвтаназии и проводили патологоанатомический осмотр. Защищенными от ящура считали животных, у которых на конечностях отсутствовали поражения, характерные для ящура. Первичные афты не учитывали. Иммуногенную дозу (ИмД50) вакцины определяли по общепринятой методике Рида и Менча, в модификации И.П. Ашмарина [1].
Количество протективных доз (PD50) вычисляли путем деления прививной дозы (2,0 см3) на ИмД50.
Статистическая обработка данных. Статистическая обработка заключалась в определении средних арифметических значений и достоверности статистической разницы между средними величинами, определенными по разностному методу СтьюдентаФишера [1]. Различия считали статистически достоверными при уровне значимости p<0,005.
Результаты исследований и обсуждение
На первом этапе работы экспериментальную моновалентную эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура тестировали на авирулентность и безвредность в процессе наблюдения за состоянием здоровья КРС после инокуляции. По результатам исследования изготовленный препарат признан авирулентным и безвредным, поскольку все животные, которые были иммунизированы, в течение всего срока наблюдения оставались клинически здоровыми и без формирования некроза тканей на месте введения вакцины.
На следующем этапе работы сыворотки крови животных до и после введения моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 исследовали на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура. До иммунизации в сыворотках крови КРС и свиней антитела, специфичные к 3АВС полипротеину, не были обнаружены. Результаты исследования в блокирующем варианте ИФА сывороток крови после вакцинации, отобранных в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ), представлены в таблицах 1, 2.
ящур вакцина вирусный авирулентность
Таблица 1. Определение в ИФА антител к неструктурным белкам вируса ящура в сыворотках крови КРС, иммунизированного моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014
|
Исследуемые сыворотки |
Значение оптической плотности |
Процент ингибиции (PI), % |
|
|
слабоположительный контроль |
0,555 |
61,46 |
|
|
положительный контроль |
0,290 |
79,86 |
|
|
отрицательный контроль |
1,780 |
0,00 |
|
|
1 |
1,019 |
29,24 |
|
|
2 |
1,027 |
28,68 |
|
|
3 |
1,015 |
29,51 |
|
|
4 |
0,999 |
30,63 |
|
|
5 |
0,923 |
35,90 |
Примечание: номер исследуемой сыворотки соответствует порядковому номеру животного
Таблица 2. Определение в ИФА антител к неструктурным белкам вируса ящура в сыворотках крови свиней, иммунизированного моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014
|
Исследуемые сыворотки |
Значение оптической плотности |
Процент ингибиции (PI), % |
|
|
слабоположительный контроль |
0,719 |
61,46 |
|
|
положительный контроль |
0,259 |
79,86 |
|
|
отрицательный контроль |
1,787 |
0,00 |
|
|
1 |
1,436 |
19,64 |
|
|
2 |
1,676 |
6,211 |
|
|
3 |
1,330 |
25,57 |
|
|
4 |
1,525 |
14,66 |
|
|
5 |
1,491 |
16,56 |
Примечание: номер исследуемой сыворотки соответствует порядковому номеру животного.
Из данных таблиц 1, 2 следует, что PI слабоположительного контроля был выше 50%, положительного контроля больше 70%, что соответствует требованиям теста. Сыворотки крови, полученные от 5 голов КРС и 5 голов свиней после введения 4 доз (тест на авирулентность, безвредность) и 1 дозы вакцины через 14 дней, имели процент ингибиции менее 50%. Иными словами, моновалентная эмульсионная вакцина «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 не индуцирует у КРС и свиней выработку антител к неструктурным белкам вируса ящура.
На следующем этапе работы провели исследования иммуногенной и протективной активности эмульсионной моновалентной вакцины «АРРИАХ-ВАК» на свиньях против гомологичного штамма. Результаты исследований сывороток крови свиней до вакцинации в РМН показали, что животные не содержали противоящурных антител.
Таблица 3. Гуморальный и протективный иммунитет у свиней на эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/ЛпєИєсп/2014 против гомологичного вируса ящура
|
Разведение вакцины |
№ п/п животных |
Развитие генерализации |
Титры вируснейтрализующих антител в сыворотках крови КРС, иммунизированных противоящурной моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 в РМН (lg) против штаммов |
ИмД50,см3 /PD50 |
||||
|
O/Jincheon/2014 |
O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 |
|||||||
|
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
|||||
|
без разведения |
1 |
- |
<0,45 |
2,10 |
<0,45 |
1,58 |
0,04/50 |
|
|
2 |
- |
<0,45 |
1,95 |
<0,45 |
1,35 |
|||
|
3 |
- |
<0,45 |
1,88 |
<0,45 |
1,58 |
|||
|
4 |
- |
<0,45 |
1,58 |
<0,45 |
1,50 |
|||
|
5 |
- |
<0,45 |
1,65 |
<0,45 |
1,20 |
|||
|
M±m |
1,83±0,10 |
1,44±0,10 |
||||||
|
1-5 |
6 |
- |
<0,45 |
1,43 |
<0,45 |
1,05 |
||
|
7 |
- |
<0,45 |
1,50 |
<0,45 |
1,13 |
|||
|
8 |
- |
<0,45 |
1,58 |
<0,45 |
1,13 |
|||
|
9 |
- |
<0,45 |
1,58 |
<0,45 |
0,60 |
|||
|
10 |
- |
<0,45 |
1,50 |
<0,45 |
1,05 |
|||
|
M±m |
1,52±0,03 |
0,99±0,10 |
||||||
|
1--25 |
11 |
- |
<0,45 |
1,28 |
<0,45 |
0,75 |
||
|
12 |
- |
<0,45 |
1,50 |
<0,45 |
0,45 |
|||
|
13 |
- |
<0,45 |
0,75 |
<0,45 |
0,53 |
|||
|
14 |
- |
<0,45 |
1,13 |
<0,45 |
0,53 |
|||
|
15 |
- |
<0,45 |
0,98 |
<0,45 |
0,45 |
|||
|
M±m |
1,13±0,13 |
0,54±0,10 |
||||||
|
16 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
||||
|
17 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
Примечание: «-» отсутствие генерализованной формы ящура, «+» наличие генерализованной формы ящура, «н/и» не исследовали.
По результатам исследования гуморального и протективного иммунитета, представленным в таблице 3, видно, что вакцина стимулировала выработку ВНА против гомологичного штамма животных, иммунизированных вакциной без разведения на уровне 1,83±0,10 lg, 1,52±0,03 lg в группе животных, привитых препаратом в разведении 1:5, 1,13±0,13 lg в группе животных, вакцинированных препаратом в разведении 1:25.
Сыворотки также анализировали в РМН против гетерологичного штамма О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016. Титры ВНА в группе животных, инокулированных вакциной без разведения, составили 1,44±0,10 lg, в группе с разведением 1:5, 0,99±0,10 lg, а в группе с разведением 1:25 0,54±0,10 lg.
В результате контрольного заражения вакцинированных свиней гомологичным штаммом O/Jincheon/2014 не наблюдали генерализованную форму ящура. Протективная активность против гомологичного вируса ящура составила 50 PD50 в прививном объёме.
Следующий этап работы посвящен изучению эффективности противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014. Результаты тестирования сывороток крови КРС до вакцинации в РМН показали, что животные не содержали противоящурных антител. Результаты исследований гуморального и протективного иммунитета, сформированного у КРС после введения противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014, против гетерологичного штамма О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 отражены в таблице 4.
Таблица 4. Гуморальный и протективный иммунитет у КРС на эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 против гетерологичного вируса О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016
|
Разведение вакцины |
№ п/п животных |
Развитие генерализации |
Титры вируснейтрализующих антител в сыворотках крови КРС, иммунизированных противоящурной моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 в РМН (lg) против штаммов |
ИмД50,см3 /PD50 |
||||
|
O/Jincheon/2014 |
O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 |
|||||||
|
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
|||||
|
без разведения |
1 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,95 |
0,11/18 |
|
|
2 |
- |
<0,45 |
2,40 |
<0,45 |
2,10 |
|||
|
3 |
- |
<0,45 |
2,55 |
<0,45 |
2,10 |
|||
|
4 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,95 |
|||
|
5 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,95 |
|||
|
M±m |
2,34±0,10 |
2,01±0,04 |
||||||
|
1-4 |
6 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,95 |
||
|
7 |
- |
<0,45 |
1,80 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
8 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
9 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,80 |
|||
|
10 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
M±m |
2,16±0,10 |
1,74±0,10 |
||||||
|
1-16 |
11 |
+ |
<0,45 |
1,65 |
<0,45 |
0,90 |
||
|
12 |
- |
<0,45 |
1,80 |
<0,45 |
1,50 |
|||
|
13 |
- |
<0,45 |
1,80 |
<0,45 |
1,50 |
|||
|
14 |
- |
<0,45 |
1,80 |
<0,45 |
1,40 |
|||
|
15 |
+ |
<0,45 |
1,65 |
<0,45 |
0,80 |
|||
|
M±m |
1,74±0,04 |
1,22±0,12 |
||||||
|
16 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
||||
|
17 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
Примечание: «-» отсутствие генерализованной формы ящура, «+» наличие генерализованной формы ящура, «н/и» не исследовали.
Из данных таблицы 4 следует, что разработанная вакцина стимулировала выработку высокого уровня антител у привитых животных. Спустя 21 сутки после иммунизации при исследовании сывороток крови в РМН титры ВНА против гомологичного штамма О/Jincheon/2014 составили 2,34±0,10 lg в группе животных, иммунизированных вакциной без разведения, 2,16±0,10 lg в группе животных, привитых препаратом в разведении 1:4, и 1,74±0,04 lg в группе особей, инокулированных вакциной в разведении 1:16. Полученные сыворотки также анализировали в РМН против гетерологичного штамма 0/Zabaikalskiy/2/RUS/2016.
Титры ВНА в группе животных, инокулированных вакциной без разведения, составили 2,01±0,04 lg, в группе особей, привитых вакциной с разведением 1:4, 1,74±0,10 lg, а в группе животных, иммунизированных вакцинным препаратом в разведении 1:16 1,22±0,12 lg. В сыворотках крови животных №11 и 15 титры ВНА составили 0,90 lg и 0,80 lg, соответственно.
В результате контрольного заражения гетерологичным штаммом O/Zabaikalskiy/2/ RUS/2016 у животных №16 и №17, не подвергнутых иммунизации, наблюдали развитие генерализованной формы ящура. У двух голов КРС (№ 11, №15) из группы, привитых вакциной в разведении 1:16, были выявлены клинические признаки, характерные для ящура. Животные остальных групп были защищены от генерализованной формы ящура.
Рис. 1. Температура тела КРС, привитого противоящурной моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 без разведения, с разведениями 1:4, 1:16 и не вакцинированного, после контрольного заражения гетерологичным штаммом O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016
По результатам РМН титры антител сывороток крови испытуемых животных против гомологичного штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура были выше, чем против гетерологичного штамма 0/Zabaikalskiy/2/RUS/2016. Так, значения титров антител у КРС, иммунизированного вакциной без разведения, против гомологичного штамма превышали данный показатель против гетерологичного штамма в 2,14 раза, в группе животных, подвергнутых введению данной вакцины с разведением 1:4 в 2,63 раза, а в группе КРС, которым вводили вакцинный препарат с разведением 1:16 в 3,31 раза.
После проведения контрольного заражения в течение 7 суток вели наблюдение за состоянием здоровья животных и регистрировали температуру их тела. Результаты исследования продемонстрированы на рисунке 1.
Как следует из сведений, отраженных на рисунке, у всех животных в ходе наблюдений после контрольного заражения наблюдалась пирексия. Только у 2 из 15 вакцинированных голов КРС отмечали развитие генерализованной формы поражения конечностей. Иными словами, полученные результаты свидетельствуют о том, что лихорадка не является предвестником генерализованных поражений у животных.
На следующем этапе провели исследования по изучению эффективности противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 на свиньях. Результаты контроля на присутствие антител к вирусу ящура сывороток крови свиней до вакцинации в РМН показали, что животные не содержали противоящурных антител. Антитела ни к гомологичному штамму O/Jincheon/2014, ни к гетерологичному штамму O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 вируса ящура не были выявлены. Результаты исследований гуморального и протективного иммунитета, сформированного у свиней после введения противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014, против гетерологичного штамма O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 продемонстрированы в таблице 5.
Таблица 5. Гуморальный и протективный иммунитет у свиней на эмульсионную вакцину «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 против гетерологичного вируса О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 Таблица 5
|
Разведение вакцины |
№ п/п животных |
Развитие генерализации |
Титры вируснейтрализующих антител в сыворотках крови свиней, иммунизированных противоящурной моновалентной эмульсионной вакциной «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 в РМН (lg) против штаммов |
ИмД50,см3 /PD50 |
||||
|
O/Jincheon/2014 |
O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 |
|||||||
|
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
до вакцинации |
21 сутки после вакцинации |
|||||
|
без разведения |
1 |
- |
<0,45 |
2,17 |
<0,45 |
1,65 |
0,11/18 |
|
|
2 |
- |
<0,45 |
2,62 |
<0,45 |
1,72 |
|||
|
3 |
- |
<0,45 |
2,17 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
4 |
- |
<0,45 |
2,32 |
<0,45 |
1,57 |
|||
|
5 |
- |
<0,45 |
2,25 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
M±m |
2,31±0,10 |
1,65±0,02 |
||||||
|
1-5 |
6 |
- |
<0,45 |
1,65 |
<0,45 |
1,20 |
||
|
7 |
- |
<0,45 |
2,10 |
<0,45 |
1,27 |
|||
|
8 |
- |
<0,45 |
1,65 |
<0,45 |
1,57 |
|||
|
9 |
- |
<0,45 |
1,95 |
<0,45 |
1,57 |
|||
|
10 |
- |
<0,45 |
1,80 |
<0,45 |
1,65 |
|||
|
M±m |
1,83±0,10 |
1,45±0,10 |
||||||
|
1-25 |
11 |
+ |
<0,45 |
1,42 |
<0,45 |
0,90 |
||
|
12 |
- |
<0,45 |
1,42 |
<0,45 |
1,20 |
|||
|
13 |
+ |
<0,45 |
1,27 |
<0,45 |
0,75 |
|||
|
14 |
+ |
<0,45 |
1,27 |
<0,45 |
0,67 |
|||
|
15 |
+ |
<0,45 |
1,35 |
<0,45 |
0,80 |
|||
|
M±m |
1,35±0,03 |
0,86±0,11 |
||||||
|
16 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
||||
|
17 |
+ |
<0,45 |
н/и |
н/и |
Примечание: «-» отсутствие генерализованной формы ящура, «+» наличие генерализованной формы ящура, «н/и» не исследовали.
Из данных таблицы 5 видно, что моновалентная эмульсионная вакцина «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура индуцировала выработку высокого уровня антител у привитых животных. Спустя 21 сутки после иммунизации при исследовании сывороток крови в РМН титры ВНА против гомологичного штамма O/Jincheon/2014 составили 2,31±0,10 lg в группе из 5 животных, привитых вакциной без разведения, 1,83±0,10 lg в группе животных, привитых препаратом в разведении 1:5, и 1,35±0,03 lg в группе, инокулированной вакциной в разведении 1:25. Сыворотки крови также тестировали в РМН против гетерологичного штамма O/Zabaikalskiy/2/ RUS/2016. Уровень ВНА на 21 сутки после вакцинации в группе животных, иммунизированных вакциной без разведения, составил 1,65±0,02 lg, в группе свиней, привитых вакциной с разведением 1:5, 1,45±0,10 lg, а в группе животных, иммунизированных вакцинным препаратом в разведении 1:25 0,86±0,11 lg.
В результате заражения гетерологичным штаммом O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 у контрольных животных (№16 и №17) наблюдали развитие генерализованной формы ящура. В группе свиней, получивших дозу вакцины в разведении 1:25, у 4 животных (№ 11, №13, №14, №15) наблюдали генерализованную форму ящура, титры вируснейтрализующих антител составили 0,90, 0,75, 0,67, 0,80 lg, соответственно. Животные остальных групп были защищены от генерализованной формы ящура.
По результатам РМН титры антител сывороток крови испытуемых животных против гомологичного штамма O/Jincheon/2014 вируса ящура были выше, чем против гетерологичного штамма O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016.
Так, значения титров антител у свиней, иммунизированных вакциной без разведения, против гомологичного штамма превышали данный показатель против гетерологичного штамма в 4,60 раза, в группе животных, подвергнутых введению данной вакцины с разведением 1:5 в 2,40 раза, а в группе свиней, которым вводили вакцинный препарат с разведением 1:25 в 3,10 раза.
Заключение
Осуществлена оценка антигенной и протективной эффективности противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 против гетерологичного штамма O/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 вируса ящура. Разработанная вакцина авирулентна, безвредна, иммуногенна, при этом не индуцирует формирование антител к неструктурным 3АВС белкам вируса ящура у привитых животных.
Проведено исследование иммуногенной и протективной активности против гомологичного вируса ящура O/Jincheon/2014 на свиньях. Выявлено, что протективная активность противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма O/Jincheon/2014 против гомологичного вируса ящура составила 50 PD50 в прививной дозе.
Проведено исследование гуморального и протективного иммунитета, сформированного у КРС и свиней после введения данной вакцины, против гетерологичного штамма О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 (линия ME-SA/ Ind-2001d). Выявлено, что протективная активность противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины «АРРИАХ-ВАК» из штамма О/Jincheon/2014 против гетерологичного штамма О/Zabaikalskiy/2/RUS/2016 имела высокое значение и составила у КРС 18 PD50, а у свиней 15 PD50.
Список литературы
1. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медицина, 1962. 179 с.
2. Официальный сайт The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease URL: http:// www.fao.org/fileadmin/user_upload/eufmd/Pirbright_reports/JM2017OIE-FAO_FMD_Ref_Lab_Report_January-March_2017.pdf (дата обращения 19.05.2017).
3. Щербаков А.В. Молекулярная эпизоотология ящура в России (Филогенетический анализ Российских изолятов вируса ящура) // Ветеринария сегодня. 2015. №3 (14). С. 30-36.
4. Щербаков А.В., Тимина А.М., Зиняков Н.Г. Филогенетический анализ изолятов вируса ящура, вызвавших вспышки болезни в России в 2013 году // Ветеринария. 2014. №7. С. 22-25.
5. Мищенко А.В. Эпизоотологические особенности ящура типа А, вызванного гетерологичными штаммами вируса / А. В. Мищенко, В.А. Мищенко, В.В. Дрыгин [и др.] // Ветеринария. 2014. №11. С. 20-24.
6. Sharma G.K. Comparative evaluation of nonstructural protein-antibody detecting ELIS As for foot-and-mouth disease sero-surveillance under intensive vaccination / G.K. Sharma, J.K. Mohapatra, S. Mahajan [et al] // J. Virol. Methods. 2014. V. 207. P. 22-28.
7. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th еd. Paris, 2017.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Вирусная болезнь парнокопытных животных ящур. Историческая справка, распространение и степень опасности. Возбудитель ящура, эпизоотология, патогенез, клиническое проявление, патологоанатомические признаки, диагностика, профилактика, лечение и меры борьбы.
реферат [22,4 K], добавлен 23.09.2009Живые вакцины. Убитые корпускулярные вакцины. Химические вакцины. Анатоксины. Ассоциированные вакцины. Для создания пассивного иммунитета используются: сыворотки, гамма-глобулины. Методы снижения вирулентности.
реферат [3,3 K], добавлен 25.02.2002Вирусная диарея - болезнь слизистых крупного рогатого скота. Классификация штаммов вируса по патогенности, вирулентности и цитопатогенному действию, их идентичность в антигенном отношении. Инкубационный период, локализация вируса, лечение и профилактика.
реферат [27,2 K], добавлен 25.09.2009Антигенные препараты, используемые как вакцины, эффективность вакцин. Вакцины, применяемые для массовой иммунизации, их различие по эффективности, адьюванты и их воздействие. Применение вакцин в противораковой терапии, противозачаточные вакцины.
реферат [23,2 K], добавлен 27.09.2009Борьба с лейкозом крупного рогатого скота в Республике Тыва как большая социальная задача. Рассмотрение особенностей проведения оздоровительных мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота в фермерском хозяйстве "Оюн", анализ эпизоотического состояния.
курсовая работа [194,6 K], добавлен 12.04.2019Злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания как основная причина лейкоза крупного рогатого скота. Энзоотическая и спорадическая формы лейкоза крупного рогатого скота. Методы профилактики и борьбы с заболеванием.
презентация [1,3 M], добавлен 18.05.2016Общая морфология и биология пироплазмид. Особенности заболевания пироплазмозом крупного рогатого скота: возбудитель, цикл развития, эпизоотология, патогенез и клинические симптомы. Диагностика, лечение и профилактика. Ветеринарно-санитарная экспертиза.
курсовая работа [24,4 K], добавлен 26.12.2010Понятие вакцины и их классификация. Рассмотрение принципа действия препаратов, предназначенных для создания иммунитета к инфекционным болезням. Метод получения генно-инженерных вакцин с помощью биотехнологии, которая сводится к генетической рекомбинации.
презентация [2,8 M], добавлен 09.10.2014Возбудитель острого вирусного заболевания группы антропозоонозов. Эпизоотологический мониторинг ящура. Источники инфекции и заражения людей, специфическая диагностика. Инкубационный период и опорные симптомы болезни. Проявления на слизистых и коже.
презентация [4,6 M], добавлен 03.04.2013Краткая характеристика ОАО "Вологодский картофель" отделения "Русь": природно-климатические условия, акт эпизоотического обследования хозяйства. Основные симптомы хламидиоза крупного рогатого скота. Этапы лечения, выработка иммунитета и профилактика.
курсовая работа [33,3 K], добавлен 07.04.2010В-лимфотропный РНК-содержащий вирус как основной возбудитель лейкоза крупного рогатого скота. Клиническое проявление заболевания. Патоморфологические изменения у скота при лейкозе. Диагностика заболевания, способы его лечения и проблемы профилактики.
презентация [12,8 M], добавлен 21.09.2016Классификация различных категорий стратегий противоопухолевой вакцины. Особенности и свойства клеточных вакцин. Характеристика антигенных и антигенсодержащих вакцин. Сущность неспецифичной и цитокиновой терапии. Первая вакцина для профилактики рака.
презентация [439,4 K], добавлен 29.03.2016Корь - острое инфекционное вирусное заболевание с высоким уровнем восприимчивости, его этиология, клинические симптомы. Механизм передачи и источник инфекции. Проникновение вируса в организм человека. Коревая сыпь (экзантема). Профилактика и иммунизация.
презентация [2,5 M], добавлен 06.05.2014Диагностика, лечение и профилактика злокачественной катаральной горячки крупного рогатого скота. Методы диагностики, профилактики и меры борьбы при стрептококкозе телят. Основные патологоанатомические изменения при лейкозе птиц и болезни Марека.
контрольная работа [17,0 K], добавлен 21.04.2009История появления вакцин. Определение, классификация, войства вакцин и их изготовление. Инструкция по применению адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины (АКДС-вакцины). Сыворотки в биотехнологии, их общая характеристика и получение.
реферат [11,7 M], добавлен 01.02.2011Высококонтагиозное острое вирусное заболевание человека с воздушно-капельным механизмом передачи. Лихорадка, общая интоксикация, преимущественное поражение верхних дыхательных путей. Основные симптомы заболевания. Основные средства профилактики гриппа.
презентация [3,5 M], добавлен 04.04.2015Описание эпидемиологии бруцеллеза, определение отличительных клинических черт бруцеллеза. Лечение, профилактика и меры контроля бруцеллеза. Стандартные определения случаев бруцеллеза. Динамика эпизоотии бруцеллеза у крупного рогатого скота в Казахстане.
презентация [11,0 M], добавлен 28.03.2023История выявления инфекционного ринотрахеита, возбудитель, эпизоотологические данные, патогенез, симптомы и патологоанатомические изменения, диагноз, профилактика и меры борьбы. Оценка эффективности ветеринарных мероприятий крупного рогатого скота.
дипломная работа [38,9 K], добавлен 01.01.2009Классификация вакцин в зависимости от природы иммуногена. Протективные антигены, являющиеся белками, гликопротеидами, липополисахаридобелковыми комплексами. Конструирование вакцин на базе знаний об антигенной структуре патогена, биосинтетические вакцины.
реферат [27,8 K], добавлен 31.05.2010Создание протективного иммунитета. Побочные реакции и осложнения, возникающие при вакцинации. Пути создания вакцин. Адъюванты как их составная часть. Живые ослабленные вакцины, антитоксические, синтетические, рекомбинантные, ДНК-вакцины, идиотипические.
презентация [469,0 K], добавлен 02.11.2016
