Разработка методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского

Размещено на http://www.Allbest.Ru/

ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет»

ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет»

Разработка методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского

К.Н. Семенюта, В.А. Куркин

А.А. Шмыгарева, А.Н. Саньков

Аннотация

В настоящей работе обсуждаются актуальные аспекты разработки методики стандартизации корней ревеня тангутского (Rheum palmatum L.). Дубильные вещества являются второй доминирующей группой биологически-активных веществ корней ревеня тангутского (Rheum palmatum L.). Существующая методика определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского, представленная в ФС.2.5.0092.18 Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV издания, предусматривает использование методики прямого перманганатометрического титрования в пересчете на танин с визуальным детектированием точки эквивалентно сти в виде образования золотисто-желтого окрашивания вследствие реакции первой капли избытка перманганата калия с индигокармином, достаточно трудоемка и неточна. Предложены новые подходы количественного анализа содержания дубильных веществ в корнях ревеня тангутского, заключающиеся в использовании метода спектрофотометрии при аналитической длине волны 282±2 нм в пересчете на катехин. В целях максимальной экстракции дубильных веществ из сырья ревеня тангутского были подобраны оптимальные условия: экстрагент - вода, соотношение сырье - экстрагент 1 к 50, время экстракции на кипящей водяной бане - 15 минут. С помощью спектрофотометра Unico 2800 были изучены УФ-спектры растворов водных извлечений из сырья. Использование катехина, дающего максимум поглощения при длине волны примерно около 282±2 нм, как стандарта является наиболее оптимальным, поскольку он является одним из доминирующих веществ и распространен в различных других лекарственных растениях, содержащих дубильные вещества как основную группу биологически активных соединений, а, значит, позволяет полученные данные использовать для сравнения содержания дубильных веществ в различных лекарственных растениях. Содержание дубильных веществ в корнях ревеня тангутского при подобранных условиях экстракции равно 21.74%. Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского ±7.40%. Предложенная методика проста, доступна и не требует использования большого количества реактивов.

Ключевые слова: ревень тангутский, Rheum palmatum L., корни, дубильные вещества, катехин, стандартизация, спектрофотометрия.

Abstract

Development of methods for quantitative determination of tannins in the roots of rheum palmatum

K.N. Semeniuta, VA. Kurkin, А.А. Shmygareva, A.N. Sankov; Orenburg state medical academy, Samara state medical university

In the present work are discussed the actual aspects of the development of methods of standardization of Rheum palmatum roots. Tannins are the second dominant group of biologically active substances in the roots of Rheum palmatum. The existing method of determining tannins in the roots of Rheum palmatum, presented in the FS.2.5.0092.18 State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition, provides for the use of methods of direct permanganatometric titration calculated on tannin with visual detection of the equivalence point in the form of the formation of golden-yellow staining due to the reaction of the first drop of excess potassium permanganate with indigocarmine, quite time-consuming and inaccurate. New approaches of quantitative analysis of tannins content in the roots of Rheum palmatum, consisting in the use of spectrophotometry method at an analytical wavelength of 282±2 nm calculated on catechin, are proposed. In order to maximize the extraction of tannins from the raw materials of Rheum palmatum were selected optimal conditions - water, the ratio of raw materials - extractant 1 to 50, extraction time in a boiling water bath - 15 minutes. UV spectra of solutions of water extracts from raw materials were studied using Unico 2800 spectrophotometer. The use of catechin, which gives a maximum absorption at a wavelength of about 282±2 nm, as a standard is the most optimal, since it is one of the dominant substances and is common in various other medicinal plants containing tannins as the main group of biologically active compounds, and, therefore, allows the data obtained to be used to compare the content of tannins in various medicinal plants. The content of tannins in roots the of Rheum palmatum under selected conditions of maximum extraction is 21.74%. The results of statistical processing of the experiments indicate that the error of a single determination of tannins in the roots of Rheum palmatum ±7.40%.The proposed method is simple, accessible and does not require the use of a large number of reagents.

Keywords: Rheum palmatum L., roots, tannins, standardization, spectrophotometry.

перманганатометрический дубильный ревень тангутский

Роль лекарственных растений и получаемых из них эффективных препаратов и лекарственных форм значительно возросла в последние годы. Расширяется фронт научно-исследовательских работ как в области изыскания новых лекарственных растений, так и более углубленного изучения химического состава растений, давно применяемых в научной и народной медицине [1-3]. Ревень тангутский (Rheum palmatum L.) сем. Гречишные

(Polygonaceae) - лекарственное растение, используемое в традиционной медицине стран Европейского Союза, традиционной и нетрадиционной китайской медицине, гомеопатии. Интерес к данному лекарственному растению обусловлен его уникальным химическим составом [4-6]. Ведущими группами биологически активных соединений корней ревеня тангутского выступают вещества, обладающие абсолютно противоположными фармакологическими свойствами Т» дубильные вещества и антрацен-производные [7-10]. Характер действия извлечений из корней ревеня на желудочно-кишечный тракт зависит от дозировки: вяжущее, противовоспалительное действие оказывают малые количества экстрактов, слабительным же эффектом обладают, наоборот, большие количества [11-13]. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания в ФС.2.5.0092.18 содержит методику количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня в пересчете на танин прямым перманаганатометрическим титрованием методом Левенталя-Курсанова. В соответствии с этим методом дубильные вещества определяются путем окисления их перманганатом калия в слаборазбавленных растворах в присутствии индиго-сульфокислоты [14]. Данная методика достаточно трудоемка и неточна. Для определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского была предложена методика спектрофотометрического определения в пересчете на катехин. Экспериментальным путем были подобраны оптимальные условия для экстракции дубильных веществ из сырья.

Методика эксперимента

Объектами исследования служили корни ревеня тангутского ООО «Старослав», Россия, Новосибирская обл., г. Бердск, 2018 год. Электронные спектры измерялись на УФ-спектрофотометре UNICO 2800.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл воды. Колбу закрывают пробкой, взвешивают с точностью до ± 0.01, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 15 минут с момента закипания экстрагента. После этого содержимое колбы охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы водой. Полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят объем раствора до метки водой. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при аналитической длине волны 282 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Содержание суммы дубильных веществ в пересчете на катехин и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) рассчитывают по формуле:

где: E- оптическая плотность испытуемого раствора;

E_o - оптическая плотность раствора стандартного образца катехина;

m - масса сырья, г;

mЎЈ- масса стандартного образца катехина, г;

W - потеря в массе при высушивании, в процентах.

В случае отсутствия стандартного образца катехина для расчета целесообразно использовать теоретическое значение ее удельного показателя поглощения, равное 144, для ревеня тангутского формула (4) втлнднт следующим образом:

где: 144 - удельный показатель поглощения катехина.

Метрологические характеристики методики количественного определения содержания дубильных веществ в корнях ревеня тангутского представлены в таблице 1. Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского ±7.40%.

Обсуждение результатов

Корни ревеня тангутского содержат большое количество дубильных веществ, среди которых доминируют ратанин, катехин, глюкогаллин и галловая кислота [16-18]. С помощью спектрофотометра Unico 2800 были изучены УФ-спектры растворов водных извлечений из сырья. Использование катехина, дающего максимум поглощения при длине волны примерно около 282±2 нм (рис. 1), как стандарта является наиболее оптимальным, поскольку он является одним из доминирующих веществ и распространен в различных других лекарственных растениях, содержащих дубильные вещества как основную группу биологически активных соединений [19, 20], а, значит, позволяет полученные данные использовать для сравнения содержания дубильных веществ в различных лекарственных растениях. Экстракция проводилась различными экстрагентами, при различных соотношениях «сырье-экстрагент», а также варьировалось время экстракции на водяной бане. При разработке методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня тангутского выявлены оптимальные условия экстракции антрацен-производных: экстрагент - вода; соотношение «сырье -- экстрагент» -1:50; время экстракции - 15 мин на водяной бане при температуре 80-90°С (рис.2).

Таблица 1