Влияние препарата Эсберитокс на функциональную активность 2D-позитивных натуральных киллерных клеток (NKG2D) и интерфероновый статус у больных с рецидивом инфекции вируса простого герпеса

Размещено на http://www.allbest.ru/

Влияние препарата Эсберитокс на функциональную активность 2D-позитивных натуральных киллерных клеток (NKG2D) и интерфероновый статус у больных с рецидивом инфекции вируса простого герпеса

Курченко А.И., Пшеничная И.В.

Национальный медицинский университет им. А.А. Богомольца, г. Киев 2Клиника иммунологии и аллергологии «Форпост», г. Киев

РЕЗЮМЕ

Влияние препарата Эсберитокс на функциональную активность 20-позитивных натуральных киллерных клеток (NKG2D) и интерфероновый статус у больных с рецидивом инфекции вируса простого герпеса

Курченко А.И., 2Пшеничная И.В.

1Национальный медицинский университет им. А.А. Богомольца, г. Киев 2Клиника иммунологии и аллергологии «Форпост», г. Киев

Целью исследования было оценить изменения функциональной активности 2D-позитивных натуральных киллерных клеток (NKG2D) и интерферонового статуса у больных с рецидивом герпесвирусной инфекции под влиянием препарата Эсберитокс.

Материалы и методы. Исследовано 30 пациентов в возрасте 22-45 лет с часто рецидивирующим лабиальным герпесом, верифицированным ранее методом ПЦР. Частота обострений на момент исследования составляла 6 (5,3±1,4) и более раз в год. Пациенты первично обследовались в пределах 24 часов от момента появления высыпаний. Экспрессию CD314 на поверхности CD3-CD56 лимфоцитов определяли методом проточной цитофлюориметрии (EPICS XL, Beckman Coulter). Содержание цитокинов (a-и Y-IFN) в супернатантах определяли иммуноферментным методом (IBL, Германия). Пациенты принимали таблетки Эсберитокс по 2 таб. х 3 раза в день и таблетированный Валацикловир в суточной дозировке 1 грамм на протяжении 7 дней. Контрольную группу составили 10 пациентов, получающих только таблетированный Валацикловир.

Результаты исследования. В результате проведенного исследования установлено, что окончательное нивелирование симптомов при комбинированном лечении с использованием препарата Эсберитокс отмечалось к исходу 5-6-х суток, при базовом лечении - на 9-10 сутки. Отмечено уменьшение частоты рецедивов (3 пациенты) за период наблюдения в течение 2 месяцев после окончания курса лечения. У пациентов, получающих базовую терапию Валацикловиром рецидивы заболевания в период наблюдения были зарегистрированы у большей по-ловины обследованных лиц (6 пациентов). Установлена позитивная динамика увеличения уровня y-IFN и a-IFN у пациентов основной группы и практически её отсутствие в контрольной группе. Динамика поверхностной экспрессии рецептора NKG2D на NK-клетках периферической крови показала повышение показателей под влиянием препарата Эсберитокс в сравнении с монотерапией валацикловиром, при этом достоверных изменений других субпопуляций лимфоцитов не наблюдалось.

Выводы. Назначение препарата Эсберитокс при часто рецидивирующей герпесвирусной инфекции является перспективным методом комбинированной иммуноадаптивной терапии, который требует дальнейшего тщательного изучения.

Ключевые слова: герпес, интерфероны, NK- клетки, Эсберитокс.

РЕЗЮМЕ

Вплив препарату Есберітокс на функціональну активність 20-позитивних натуральних кілерних клітин (NKG2D) і інтерфероновий статус у хворих з рецидивом інфекції вірусу простого герпесу

Курченко А.І., 2Пшенична І.В.

1Національний медичний університет ім. О.О. Богомольця, м.Київ

2Клініка імунології та алергології «Форпост», м.Київ

Метою дослідження було оцінити зміни функціональної активності 2D-позитивних натуральних кілерних клітин (NKG2D) і інтерферонового статусу у хворих з рецидивом герпесвірусної інфекції під впливом препарату Есберітокс.

Матеріали та методи. Обстежено 30 пацієнтів у віці від 22 до 45 років з частим рецидивуючим лабіальним герпесом, верифікованим методом ПЛР. Частота загострень на момент дослідження становила 6 (5,3 ± 1,4) і більше разів на рік. Пацієнти обстежувалися протягом 24 годин з моменту появи висипу. Експресію CD314 на поверхні лімфоцитів CD3-CD56 визначали методом проточної цитометрії (EPICS XL, Beckman Coulter). Вміст цитокінів (a-IFN і y-IFN) у супернатантах визначали за допомогою імуноферментного аналізу (IBL, Німеччина). Пацієнти основної групи приймали таблетки Есберітокс по 2 таблетки 3 рази на день і таблетки Валацикловір в добовій дозі 1 грам протягом 7 днів. Контрольну групу склали 10 пацієнтів, які отримували тільки таблетований Валацикловір.

Результати дослідження. В результаті проведенного дослідження було встановлено, що остаточне нівелювання симптомів при комбінованому лікуванні з використанням таблеток Есберітокс зазначалося до кінця 5-6-ї доби, а при базовому лікуванні - на 9-10 добу. Відмічено зменшення частоти рецидивів (лише у 3 пацієнтів) за період спостереження протягом 2 місяців після закінчення курсу лікування. У пацієнтів, які отримували тільки базову терапію Валацикловіром, рецидиви протягом періоду спостереження були зареєстровані більш ніж у половини обстежених осіб (6 пацієнтів). Встановлена позитивна динаміка збільшення рівня y-IFN і a-IFN у пацієнтів основної групи і практично її відсутність в контрольній групі. Динаміка поверхневої експресії рецептора NKG2D на NK-клітинах периферичної крові показала підвищення показників під впливом препарату Есберітокс в порівнянні з монотерапією Валацикловіром, при цьому достовірних змін інших субпопуляцій лімфоцитів не спостерігалося.

Висновки. Застосування препарату Есберітокс при часто рецидивуючій герпесвірусній інфекції є перспективним методом комбінованої імуноадаптивної терапії, яка вимагає подальшого ретельного вивчення.

Ключові слова: герпес, інтерферони, NK- клітини, Esberitox.

SUMMARY

The effect of Esberitox on the functional activity of 2D-positive natural killer cells (NKG2D) and interferon status in patients with recurrence of herpes simplex virus infection

Kurchenko A.I.,2Pshenychna I.V.

1National Medical University named after A.A. Bogomolets, Kyiv 2Clinic of immunology and allergology “Forpost”, Kyiv

The aim of the study was to assess changes in the functional activity of 2D-positive natural killer cells (NK- G2D) and interferon status in patients with recurrence of herpes virus infection under the influence of Esberitox.

Materials and methods. We studied 30 patients aged 22-45 years old with frequent relapsing labial herpes, previously verified by PCR. The frequency of exacerbations at the time of the study was 6 (5.3 ± 1.4) and more than once a year. Patients were initially examined within 24 hours of the appearance of rashes. The expression of CD314 on the surface of CD3CD56 lymphocytes was determined by flow cytometry (EPICS XL, Beckman Coulter). The content of cytokines (a-and y-IFN) in supernatants was determined by enzyme immunoassay (IBL, Germany). Patients took Esberitox tablets, 2 tablets x 3 times a day, and daily 1-gram tablets of Valacyclovir for 7 days. The control group consisted of 10 patients receiving only tablet valacyclovir.

Results. As a result of the study, tt was found that the final leveling of symptoms with combined treatment with Esberitox was noted by the end of 5-6 daysi whh basic treatment - by 9-10 days. There was a decrease in the relapse rate (3 patients) during the observation period within 2 months after the end of the course of treatment. In patients receiving basic Valacyclovir therapy, relapses during the observation period were recorded in more than half of the examined individuals (6 patients). The positive dynamics of the increase in the leve. of Y-IFN and a-IFN in patients of the main group and its almost absence in the control group were established. The dynamics of surface expression of the NKG2D receptor on peripheral blood NK cells showed an increase parameters under the influence of the Esberitox drug compared with Valacyclovir monotherapy, with no significant changes in other lymphocyte subpopulations.

Conclusions. The administration of Esberitox in case of frequently recurring herpes virus infection is a promising method of combined immuno-adaptive therapy, which requires further careful study.

Key words: herpes, interferons, NK cells, Esberitox.

Рецидивирующие формы герпесвирусной инфекции I и II типа встречаются, по данным различных авторов, у 15-30% людей трудоспособного возраста. Их развитие напрямую связано с нарушением клеточных и гуморальных механизмов иммунологической резистентности, в частности с дефектами цитокинового профиля. Наиболее изучена система интерферонов, которая обеспечивает как прямой противовирусный эффект, так и активацию защитных механизмов непораженных клеток. Однако, помимо интерферонов, в механизмах противовирусной защиты участвуют и другие цитокины (IL-1p, IL- 2, TNFa, IL-12, IL-18), действие которых реализуется через активацию клеток-продуцентов интерферонов, прежде всего естественных киллеров и плазмоцитоидных дендритных клеток и общую регуляцию цитокинового каскада [2, 4].

У ряда цитокинов (TNFa, IL-1p, IL-6 и IL-12) описан прямой антивирусный эффект. Множественные и многоуровневые биологические эффекты цитокинов суммируются с формированием так называемой совокупной противовирусной защиты. Нарушение баланса цитокиновой системы, в частности доминирование цитокинов, продуцируемых ТИ2-лимфоцитами (IL-4, IL-10, IL-13), рассматривается как предрасполагающий фактор повышенной чувствительности к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса (ВПГ). В то же время, хотя роль цитокинов в формировании устойчивости к ВПГ несомненна, особенности функционирования системы цитокинов при часто рецидивирующей герпесвирусной инфекции исследованы мало и преимущественно при латентной форме заболевания. Несомненный интерес в этой связи представляет изучение патогенетически обоснованной возможности проведения коррекции не только интерферонзависимых (альфа, гамма) и цитокиновых изменений, но и состояния функциональной активности 20-позитивных натуральных киллерных клеток [1,2, 7]. эсберитокс рецидив вирус герпес

Известные методы этиотропной терапии ВПГ часто не позволяют достичь желаемых ре-зультатов. Элиминирование вируса из организма на данный момент развития науки не пред-ставляется возможным вследствие уникальной способности герпес вирусов формировать состояние латентности в нейронах регионарных ганглиев. Если элиминировать вирус невозможно, то необходимо добиться контроля над инфекцией, что затруднено функциональной иммунологической недостаточностью, возникающей вследствие длительной персистенции вируса. Широкое применение ациклических нуклеозидов полностью не решило данную проблему, частые рецидивы определяют необходимость патогенетического лечения, направленного на коррекцию дефектов иммунного ответа.

Ключевыми факторами естественной противовирусной резистентности являются интерфероны (IFN) I типа, которые обладают как прямым противовирусным, так и иммуномодулирующим действием. ВПГ-1 и -2 типа являются мощными индукторами выработки IFN I типа, в частности интерферон альфа (a-IFN), мононуклеарными клетками (МНК) крови. Основными продуцентами IFN I типа среди МНК являются плазмацитоидные дендритные клетки, которые распознают ВПГ с помощью рецептора TLR9 [3]. Известно, что при часто рецидивирующей инфекции ВПГ имеется дефицит выработки IFN I типа мононуклеарными клетками крови. Более того, врожденный дефект генов (UNC93B, TLR3), отвечающих за индукцию выработки IFN I типа проявляется именно тяжелым протеканием инфекции, вызванной ВПГ. Все эти данные послужили теоретической основой для ряда успешных клинических испытаний препаратов IFN I типа и индукторов IFN при часто рецидиви-рующей инфекции ВПГ. Однако эти препараты оказались эффективными не у всех пациентов. Иммунологическая недостаточность у пациентов с часто рецидивирующей инфекции ВПГ может быть вызвана не только недостаточностью интерфероногенеза, но и снижением ответа иммунокомпетентных клеток на цитокины. Так, известно, что некоторые белки ВПГ могут ингибировать ответ ряда клеточных линий на возможность продуцировать a-IFN. В клетках, инфицированных ВПГ, ингибируется передача активационного сигнала от рецептора к IFN a/p в ядро, что приводит к подавлению ответа клеток на a-IFN. Эффект связан, в частности, с нарушением активации Jak/STAT-сигнального пути. По данным ряда исследований, при часто рецидивирующей инфекции ВПГ имеет место снижение цитотоксической активности и функциональной активности NK-клеток. NK-клетки способны к цитолизу вирус-инфицированных клеток без предшествующей активации. Однако IFN I типа, продуцируемые в ответ на инфекцию, резко повышают цитотоксичность NK-клеток, являясь мощными активаторами NK-клеток. NKG2D является классическим активационным рецептором NK-клеток. Лигандами NKG2D служат структурные гомологи HLA-A и HLA-B -- молекулы MICA и MICB, а также UL-16 звязывающие белки (ULBP), которые являются рецептором для антигена UL-16 цитомегаловируса [2,5,6].

Цель исследования

Оценить изменения функциональной активности 2D-позитивных натуральных киллерных клеток (NKG2D) и интерферонового статуса у больных с рецидивом герпесвирусной инфекции под влиянием препарата Эсберитокс.

Материалы и методы

Исследовано 30 пациентов в возрасте 22-45 лет с часто рецидивирующим лабиальным гер-песом, верифицированным ранее методом ПЦР. Длительность заболевания составляла от 2 до 7 лет. Частота обострений на момент исследования составляла 6 (5,3±1,4 ) и более раз в год. Пациенты первично обследовались в пределах 24 часов от момента появления высыпаний.

Терапия: таблетки Эсберитокс по 2 таб. х 3 раза в день и таблетированный Валацикловир в суточной дозировке 1 грамм на протяжении 7 дней. На 5 и 10 день лечения лабораторные исследования повторяли. Контрольную группу составили 10 пациентов, получающие только таблетированный Валацикловир.

Исследуемый материал - кровь и сыворотка крови.

Кровь отбирали в вакуумные пробирки с К2ЕДТА, и методом проточной цитометрии анализировали экспрессию CD314 (РЕ, BD Biosciences) на поверхности CD3-CD56 (FITC, BD Biosciences) лимфоцитов (на проточном цитофлюориметре EPICS XL (Beckman Coulter). Содержание цитокинов (a- IFN и y-IFN) в супернатантах определяли иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест систем фирмы “IBL” (Германия). Мононуклеарные клетки в количестве 1,5х106 кл/мл выделяли на градиенте плотности фиколл-верографин (1,076 г/см3 ), инкубировали в течение 24 ч в СО2 инкубаторе при 37°С в питательной среде без митогенов (спонтанная продукция), с добавлением митогена - ФГА (30 мкл). После инкубации клетки осаждали центрифугированием, собирали супернатанты и сохраняли при -20°С до момента тестирования (не более 2 месяцев). Контрольными иммунологическими параметрами служили величины соответствующих показателей при тестировании 15 практически здоровых пациентов.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с учетом достоверности разницы по критерию Фишера-Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

Анализ результатов исследования показал, что под влиянием базовой терапии герпетической инфекции препаратом Валацикловир у больных контрольной группы и комбинированной схемы с использованием препарата Эсберитокс у больных основной группы происходило уменьшение клинических проявлений герпетической инфекции - эритемы, отека, везикулёзных высыпаний, кожного зуда, а также площади очага поражения.

Рис. 1 Цитокинпродуцирующая способность мононуклеарных клеток больных с часторецидивирующей герпесвирусной инфекцией

Умеренный клинический эффект у больных основной группы отмечался уже к исходу 4-5-х суток, у больных контрольной группы - к 10-11 дню. Окончательное нивелирование симптомов при комбинированном лечении с использованием препарата Эсберитокс отмечалось к исходу 5-6-х суток, при базовом лечении - на 9-10-е сутки. У 3-х пациентов были отмечены рецидивы за период наблюдения в течение 2 месяцев после окончания курса лечения. В контрольной группе больных, получающих базовую терапию Валацикловиром в суточной дозировке 1г, рецидивы заболевания в период наблюдения были зарегистрированы у большей половины обследованных лиц (6 пациентов). При анализе цитокинпродуцирующей способности мононуклеарных клеток крови как у больных основной, так и контрольной групп до лечения было установлено значительное снижение спонтанной и ФГА-индуцированной секреции мононуклеарными клетками y-IFN и a-IFN. Позитивная динамика наблюдалась у пациентов основной группы и практически отсутствовала в контрольной группе (рис.1).

Исследование поверхностной экспрессии рецептора NKG2D (CD314) на NK-клетках (CD56 ) периферической крови показало повышение показателей под влиянием препарата Эсберитокс в сравнении с монотерапией Валацикловиром уже на 5 сутки лечения, в то время как в контрольной группе повышение экспрессии ре-цептора NKG2D наблюдалось только на 10 сутки ( рис. 2-3).

Рис. 2. Динамика поверхностной экспрессии рецептора NKG2D (CD314 РЕ) на NK-клетках (CD56 FITC) периферической крови.

Динамика поверхностной экспрессии ре-цептора NKG2D (CD314 РЕ) на NK-клетках (CD56 ФИТЦ) периферической крови показало повышение показателей под влиянием препа-рата Эсберитокс в сравнении с монотерапи-ей валацикловиром, хотя достоверных изме-нений других субпопуляций не наблюдалось (табл.1).

Рис. 3. Типичный пример поверхностной экспрессии рецептора NKG2D (CD314 РЕ) на NK-клетках (CD56 FITC) периферической крови основной группы перед терапией Эсберитоксом и в динамике.

Таблица 1

Таким образом, назначение препарата Эсберитокс при часто рецидивирующей герпесвирусной инфекции является перспективным методом комбинированной иммуноадаптивной терапии, который требует дальнейшего тщательного изучения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Alex M. Abel, Chao Yang, Monica S. Thakar, Subramaniam Malarkannan Natural Killer Cells: Development, Maturation, and Clinical Utilization Front Immunol. 2018; 9: 1869.

2. Douglas W. White, R. Suzanne Beard, Erik S. Barton Immune Modulation During Latent Herpesvirus Infection // Immunol Rev.- 2012 Jan; 245(1): 189-208.

3. Min Kim, Naomi R. Truong, Virginia James et all.Relay of Herpes Simplex Virus between Langerhans Cells and Dermal Dendritic Cells in Human Skin // PLoS Pathog.- 2015 Apr; 11(4): e1004812.

4. Naomi R. Truong, Jacinta B. Smith, Kerrie J. Sandgren, and Anthony L. Cunningham. Mechanisms of Immune Control of Mucosal HSV Infection: A Guide to Rational Vaccine Design// Front. Immunol., 06 March - 2019 | https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.00373

5. Pedro M. M. Mesquita, Paula Preston- Hurlburt et all. Role of Interleukin 32 in Human Immunodeficiency Virus Reactivation and Its Link to Human Immunodeficiency VirusHerpes Simplex Virus Coinfection // J.Infect. Dis. -2017 Feb 15; 215(4): 614-622.

6. Wald A, Link K. Risk of human immunodeficiency virus infection in herpes simplex virus type 2-seropositive persons: a meta-analysis // J. Infect. Dis. -2002.- 185:45-52

7. Yenan T. Bryceson, Michael E. March, Hans- Gustaf Ljunggren, Eric O. Long. Activation, co-activation, and co-stimulation of resting human NK cells // Immunol. Rev.- 2006 .Dec; 214: 10.1111/j.1600-065X.2006.00457.

Размещено на Allbest.ru