Визначення вмісту фактора зсідання крові VIII (ІХ) у концентратах препаратів для лікування хворих на гемофілію А та В
Діагностика порушень гомеостазу. Розрахунок дійсної активності препаратів фактору VIII та IX на предмет зсідання крові. Оцінка можливості застосування одностадійного методу без використання спеціальних плазм для лікування хворих на гемофілію А та В.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | украинский |
| Дата добавления | 18.12.2023 |
| Размер файла | 19,4 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://allbest.ru
1ДУ «Інститут патології крові та трансфузійної медицини
НАМН України»
2ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України»
Визначення вмісту фактора зсідання крові VIII (ІХ) у концентратах препаратів для лікування хворих на гемофілію А та В
В.В. Красівська1, В.І. Семеняка2, О.В. Стасишин1
Львів, Київ
Резюме
Мета - встановити особливості застосування одностадійного методу при проведенні визначення активності факторів зсідання крові у лікарських препаратах.
Матеріали і методи. Визначення активності факторів VIII та IX одностадійним методом. Проведено дослідження зразків препаратів фактору VIII та IX.
Результати. Показано можливість застосування одностадійного методу без використання спеціальних стандартних плазм та достатня точність дослідження.
Висновки. Методика визначення специфічної активності (вмісту) фактора зсідання VIII (IX) у концентраті препарату одностадійним методом є простою, не трудомісткою, інформативною та достатньо стандартизованою. Однією з переваг якої є можливість мануального визначення.
Ключові слова: фактор VIII (ІХ), гемофілія А та В, препарати.
Резюме
Определение содержания фактора свертывания крови VIII (ІХ) в концентратах препаратов для лечения больных гемофилией А и В
В.В. Красивская1, В.И Семеняка2, А.В. Стасишин1
1ГУ «Институт патологии крови и трансфузионной медицины НАМН Украины», Львов,
2ГУ «Институт гематологии и трансфузиологии НАМН Украины», Киев
Цель - установить особенности применения одностадийного метода при проведении определения активности факторов свертывания крови в лекарственных препаратах факторов свертывания крови.
Материалы и методы. Определение активности факторов VIII и IX одностадийным методом. Проведено исследование образцов препаратов фактора VIII и IX.
Результаты. Показана возможность применения одностадийного метода без использование специальных стандартных плазм и достаточная точность исследования.
Выводы. Методика определения специфической активности (содержания) фактора свертывания VIII (IX) в концентрате препарата одностадийным методом является простым, не трудоемким, информативной и достаточно стандартизированной. Одним из преимуществ которой является возможность мануального определения.
Ключевые слова: фактор VIII (IX), гемофилия А и В, препараты.
Summary
Determination of coagulation factors VIII (IX) activity in the concentrates of preparations for treatment of patients with hemophilia A and B
V.V. Krasivska1, V.I, Semeniaka2, O.V. Stasyshyn1
'SI «Institute of Blood Pathology and Transfusion Medicine of NAMS of Ukraine», Lviv,
2 SI «Institute of Haematology and Transfusiology of NAMS of Ukraine», Kyiv
Aim. Install the particular application of the one-step method when making the determination of the activity of coagulation factors in drugs of coagulation factors.
Materials and methods. The determination of the activity offactors VIII and IX of the one-step method. The study sample preparations of factor VIII and IX.
Results. A possibility of using of the one-step method without the use of a special standard plasmas and accurate research.
The conclusions. The method of determination of specific activity (content) of coagulation factor VIII (IX) in concentrate preparation of the one-step method is simple, not time consuming, informative and fairly standardized. One of the advantages is the possibility of manual definition.
Key words: factor VIII (IX), hemophilia a and b drugs.
Вступ
Завдяки прогресу в області терапії гемофілії розробляються та виробляються все нові препарати, в яких концентрацію фактора зсідання VIII (IX) (ф. VIII (ІХ)) можна визначати за допомогою біоаналізу (кількісного визначення активності) та імунологічного методу (найчастіше - імуноферментний аналіз). Серед методів біоаналізу виділяють одностадійне та двостадійне коагулологічне визначення, а також амідолітичний метод із використанням хромогенних субстратів [2, 4, 5].
Метою дослідження було встановити особливості застосування одностадійного методу при проведенні визначення активності факторів зсідання крові у лікарських препаратах факторів зсідання крові.
Матеріали і методи досліджень
Методологія визначення специфічної активності (вмісту) фактора зсідання VIII (ІХ) одностадійним методом у концентраті препарату для лікування хворих на гемофілію [1, 3, 6, 7]. Принцип кількісного визначення рівня активності ф. VIII (ІХ) ґрунтується на вимірюванні активованого часткового тромбопластинового часу (АЧТЧ) при достатній активності інших факторів коагуляції, коли час зсідання залежить тільки від активності ф. VIII (ІХ) у досліджуваній плазмі. Активність ф. VIII (ІХ) визначається за калібрувальним графіком у відсотках від його вмісту в калібрувальній плазмі за стандартною кривою розведення. Що стосується ф. VIII, таким методом визначають його прокоагулянтну активність - VIII:C. Необхідні реактиви: дефіцитна за ф. VIII плазма (для визначення активності ф. ІХ використовують дефіцитну за ф. ІХ плазму), калібрувальна (стандартна) плазма (виробником вказується активність ф. VIII (ІХ)), АЧТЧ-реагент, розчин імідазольного буферу, розчин 0,025 моль/л кальцію хлориду. Для кожного реактиву вказується назва, виробництво, країна, серія (лот), термін придатності. Всі реактиви готуються відповідно до інструкції виробника. Побудова калібрувальної кривої. Приготування розведень референтної плазми для побудови калібрувальної кривої подано у табл. 1.
Таблиця 1
Приготування розведень для калібрувальної кривої
|
Пробірка № |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
|
Буфер, мл |
0,9 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
|
Калібрувальна плазма, мл |
0,1 |
- |
- |
- |
- |
|
|
Перемішати і перенести 0,5 мл у наступну пробірку |
||||||
|
Розведення |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
|
|
Активність ф. VIII, % |
100,0 |
50,0 |
25,0 |
12,5 |
6,25 |
Початкове розведення може бути 1:9 або 1:5, що умовно приймається за 100% активності ф. VIII (ІХ). Кількість точок може бути більшою, ніж 5, що залежить від класу коагулометру. Визначення проводять на коагулометрі або мануальним методом. У кювету вносять 50 мкл калібрувальної плазми, 50 мкл дефіцитної по ф. VIII (або ф. ІХ) плазми, 50 мкл АЧТЧ-реагенту. Суміш інкубують протягом 3 хв. і додають 50 мкл розчину кальцію хлориду. Реєструють час утворення згустку. При роботі на коагулометрі послідовність внесення реактивів та час інкубації вказується виробником у методиці визначення. При мануальному визначенні всі об'єми проби та реагентів збільшують у 2 рази. Кожну пробу для кожного розведення повторюють двічі і враховують середнє значення, яке вносять у прилад для побудови калібрувальної кривої або наносять на логарифмічному папері і з'єднують точки. Крива в діапазоні від 1 до 100% має бути лінійною. На вісі ординат (Y) відкладають секунди, на вісі абсцис (X) - відповідна концентрація ф. VIII (IX). Для кожної іншої серії кожного з реактивів необхідно будувати нову калібрувальну криву.
Перед визначенням вмісту ф. VIII (IX) у препараті необхідно провести контроль якості за допомогою контрольних плазм - нормальної та патологічної, які тестуються виробником. Отримані значення повинні співпадати (або потрапляти у діапазон) із вказаними у паспортах.
Результати та їх обговорення
Приклад. Підготовка досліджуваного зразка на прикладі концентрату препарату ф. VIII «N», у якому виробник декларує активність 250 од у 1 флаконі (розчинником є 5 мл води).
1. Перше розведення зразка препарату здійснюють згідно з інструкцією виробника. Вміст флакону з препаратом розчиняють у 5 мл води кімнатної температури, обережно перемішують і отримують концентрацію ф. VIII 50,0 МО/мл.
2. Наступне (друге) розведення проводиться виходячи з того, що 1 МО дорівнює вмісту ф. VIII в 1 мл нормальної донорської пульованої плазми і становить 100% активності. Після отриманого першого розведення 50,0 МО/мл зразок розводять дефіцитною по ф. VIII плазмою або імідазольним буфером у 50 разів і готують пробу з кінцевою активністю ф. VIII 1 МО/мл (100%). У даному прикладі до 0,1 мл суміші додають 4,9 мл імідазольного буферу. Припускають, що у досліджуваному препараті міститься 1 МО ф. VIII у 1 мл (або активність становить 100%).
3. У подальшому наданий зразок розводять третій раз імідазольним буфером у співвідношенні 1:9 і визначають дійсну активність ф. VIII. Для цього до 0,1 мл розведеного препарату додають 0,9 мл буферу (або розводять у 5 разів, якщо при побудові калібрувальної кривої перше розведення становило 1:5). гомеостаз кров плазма гемофілія
Визначення проводять як при побудові калібрувальної кривої, тільки замість калібрувальної плазми вносять досліджуваний зразок. Пробу повторюють двічі. Якщо у калібрувальній плазмі вміст ф. VIII (IX) становить більше або менше 100%, то отримане значення активності необхідно помножити на відповідний коефіцієнт.
Наприклад: активність ф. VIII у калібрувальній стандартній плазмі становить 96,0%. У такому випадку, отримане за калібрувальною кривою значення 112,0% множать на 0,96 і після заокруглення отримують активність ф. VIII - 108,0%. Враховують середнє значення двох проб. Повторюють процедуру, описану вище, для досліджуваних зразків. Усі розведення для аналізу слід використати впродовж 15 хв. з моменту приготування. Розрахунок дійсної активності ф. VIII у препараті концентрату фактора «N». Розрахована активність у відповідності до опису препарату (надається виробником) має бути не нижче 80% і не вище 125% номінального значення (від 200 до 312,5 МО). Результати наведені у табл. 2.
Таблиця 2
|
Декларована активність у флаконах препарату «N», МО |
Від 200 МО до 312,5 МО |
|
|
Середній час зсідання у пробі № 1, с |
61,7 |
|
|
Активність ф.УШ у пробі, % |
108,0 |
|
|
Активність ф.УШ у пробі, МО |
1,08 |
|
|
Дійсна активність ф.УШ препарату «N», МО/фл |
270,0 |
Активність фактора VIII у відібраній пробі флакона 1 препарату «N»
Формула розрахунку дійсної активності ф. VIII у препараті «N», МО/фл.:
Активність ф. VIII у пробі, МО 1,08 х 50 (друге розведення) х 5 (перше розведення - кількість води 5 мл) = 270,0 МО/фл.
Отже, дійсна активність у відібраній пробі флакона 1 ф. VIII препарату «N» дорівнює 270 МО/фл, що відповідає активності, заявленій виробником.
Методика визначення специфічної активності (вмісту) фактора зсідання VIII (IX) у концентраті препарату одностадійним методом є простою, не трудомісткою, інформативною та достатньо стандартизованою. Однією з переваг її є можливість мануального визначення.
Література
1. Баркаган З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот- М. : Ньюамед - АО, 1999. - 213 с.
2. Diagnosis of factor VIII deficiency/ B. Verbruggen, P. Meijer, I. Nova [et al.] // Haemophilia. - 2008. - Vol. № 14, Suppl. 3. - Р. 76-82.
3. Difficulties and pitfalls in laborator y diagnosis of bleeding disorders / P.H.B. Bolton Maggs, E.J. Favaloro, A. Hillarp [et al.] // Haemophilia. - 2012. - Vol. 18, № 4. - P. 66-72.
4. Franchini M. The modern treatment of haemophilia: a narrative review / M. Franchini // Blood Transfus. - 2013. - № 1. - Р. 178-182.
5. Keeling D. Guideline on the selection and use of therapeutic products to treat haemophilia and other hereditary bleeding disorders. A united kingdom hаemophilia center doctors' organization (UKHCDO) guideline approved by the British committee for standards in haematology standards in haematology / D. Keeling, C. Tait, M. Makris // Haemophilia. - 2008. - № 14. - Р. 671-684.
6. Kitchen S. Diagnosis of haemophilia and other bleeding disorders. A laboratory manual / S. Kitchen, A. McCraw- Canada, Montreal: World Federation of Hemophilia (WFH), 2000. - 108 p.
7. Kitchen S. Diagnosis of haemophilia and other bleeding disorders. A laboratory manual / S. Kitchen, A. McCraw, M. Echenagucia- [Second Edition]. - Canada, Montreal: World Federation of Hemophilia (WFH), 2010. - 144 p.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Хронічний гломерулонефрит як найактуальніша проблема сучасної нефрології. Виснаження системи антиоксидантного захисту та активація перекисного окислення ліпідів. Концентрація мікроелементів у крові. Лікування хворих на хронічний гломерулонефрит.
автореферат [43,4 K], добавлен 21.03.2009Стан загального та місцевого імунітету у хворих на рецидивний простий герпес слизової оболонки порожнини рота і губ під час рецидиву та ремісії. Використання препаратів Ербісолу та Ербісол-Ультрафарму. Цитокіновий профіль периферійної крові хворих.
автореферат [45,6 K], добавлен 07.04.2009Класифікація, будова, життєвий цикл, епідеміологія, діагностика та лікування вірусу гепатиту С. Дослідження ефективності застосування імуномоделюючих препаратів у хворих на хронічний гепатит С. Визначення показників клітинного і гуморального імунітету.
курсовая работа [58,9 K], добавлен 11.11.2009Клінічні особливості перебігу хронічного бронхіту у хворих з наявністю фонової тонзилярної патології. Перспективність використання вітчизняного імуноактивного препарату рослинного походження протефлазіду при проведенні медичної реабілітації хворих.
автореферат [41,3 K], добавлен 08.02.2009Лікування когнітивних порушень з урахуванням змін функціонування піруватдегідрогеназної системи і циклу Корі при розладах психіки і поведінки внаслідок вживання алкоголю. Вплив препаратів нейрометаболічної дії та гепатопротекторів на когнітивну сферу.
автореферат [49,9 K], добавлен 12.03.2009Клініко-лабораторне обґрунтування і розробка медикаментозного лікування хворих на генералізований пародонтит при ротовій протоінвазії. Порівняльна оцінка методів прогозоологічної діагностики і діагностика інвазії протистів у пародонтологічних хворих.
автореферат [135,2 K], добавлен 15.08.2009Частота гострих порушень мозкового кровотоку у хворих на хронічну ішемію нижніх кінцівок, зокрема кількість великих ішемічних інсультів. Хірургічне лікування хворих з атеросклеротичним ураженням артерій нижніх кінцівок і брахіоцефальних артерій.
автореферат [42,0 K], добавлен 12.03.2009Підвищення ефективності діагностики та лікування залізодефіцитної анемії у дітей на основі ретроспективного експертного аналізу карт стаціонарних хворих за десятирічний період. Показання до призначення препаратів людського рекомбінантного еритропоетину.
автореферат [51,2 K], добавлен 29.03.2009Особливості прояву окисного стресу в онкологічних хворих на доопераційному етапі й під час лікування. Функціональна активність симпатоадреналової та гіпоталамо-гіпофазно-надниркової систем. Оцінка стану імунної системи та розробка стратегії лікування.
автореферат [72,5 K], добавлен 09.04.2009Важливість проблеми псоріазу. Поглиблене клініко-лабораторне обстеження в динаміці хворих на псоріаз. Порівняльний аналіз найближчих (після лікування) та віддалених результатів клінічної ефективності лікування хворих на псоріаз за алгоритмом клініки.
автореферат [49,0 K], добавлен 04.04.2009Інфекції сечової системи. Результати досліджень імунопатогенезу урогенітальних інфекцій за останнє десятиріччя. Помилки діагностики та лікування. Рівень резистентності виявлених збудників до антибактеріальних препаратів. Нозологічна характеристика хворих.
автореферат [142,7 K], добавлен 12.03.2009Ретроспективний аналіз результатів лікування хворих на розповсюджений гнійний перитоніт. Впровадження в практику дренування і санації черевної порожнини. Обґрунтування необхідності використання методу керованої інтестинальної пролонгованої декомпресії.
автореферат [35,4 K], добавлен 03.04.2009Метод гетерогенного твердофазного імуноферментного аналізу для визначення вмісту антитіл до екзогенного та ендогенного інсулінів у сироватках крові людей. Діагностичні характеристики імуноферментного методу (чутливість, специфічність, відтворюваність).
автореферат [47,5 K], добавлен 07.03.2009Фізична реабілітація в системі комплексного відновного лікування хворих на гіпертонічну хворобу. Клінічна характеристика хворих контрольної і експериментальної груп. Динаміка показників в період відновної терапії. Використання засобів фізіотерапії.
дипломная работа [1,1 M], добавлен 05.03.2013Обґрунтування профілактики й лікування карієсу зубів у дітей 3-6 років, ускладненого дисбіозом порожнини рота, шляхом сполученого використання фторвмісних препаратів і препаратів-синбіотиків. Ефективність окремих складових комплексу і їх сполученої дії.
автореферат [50,3 K], добавлен 12.03.2009Роль генетичної схильності до розвитку захворювань тканин пародонта на основі комплексного клініко-генетичного обстеження хворих. Вміст основних остеотропних біометалів у крові і ротовій рідині хворих. Етіологічний та патогенетичний способи лікування.
автореферат [87,2 K], добавлен 09.03.2009Аналіз результатів лікування хворих з пошкодженнями гомілковостопного суглоба та визначення причини розвитку післятравматичного остеоартрозу. Розробка та впровадження профілактично орієнтованої системи лікування хворих, оцінка її практичної ефективності.
автореферат [33,9 K], добавлен 11.04.2009Лікування фізичними вправами, виконуваними за допомогою спеціальних апаратів. Лікування працею з метою відновлення порушених функцій і працездатності хворих. Організація комплексного застосування засобів фізичної реабілітації у відновному лікуванні.
контрольная работа [197,8 K], добавлен 05.11.2009Ранній післяопераційний період з використанням традиційного лікування хворих після стандартних хірургічних втручань у щелепно-лицевій ділянці. Часткова паротидектомія при аденомі привушної залози. Комплексне лікування хворих стоматологічного профілю.
автореферат [94,7 K], добавлен 21.03.2009Патологічні процеси, порушення різних ланок гомеостазу та зниження слуху при отитах. Ефективність діагностики та лікування гнійних середніх отитів. Застосування інструментальних методів діагностики захворювання та вдосконалення патогенетичної терапії.
автореферат [115,2 K], добавлен 12.03.2009
