Властивості та методи одержання в лабораторних умовах фактора зсідання крові VII

Характеристика особливостей отриманого препарату фактора VII, який за чистотою та специфічною активністю аналогічний комерційним препаратам відомих виробників. Розробка методів виділення очищених вірусінактивованих факторів зсідання крові та фібринолізу.

Рубрика Медицина
Вид статья
Язык украинский
Дата добавления 19.12.2023
Размер файла 16,6 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

ДУ «Інститут патології крові та трансфузійної медицини НАМН України»

Властивості та методи одержання в лабораторних умовах фактора зсідання крові VII

С.Є. Мадич, Т.В. Даниш

Львів

Резюме

Фактор VII використовують при кровотечах і операціях у хворих на гемофілію А або В з інгібіторами до факторів VIII або ІХ, а також для лікування хворих з вродженим дефіцитом фактора VII. Ми показали, що ряд синтезованих нами сорбентів ефективно зв'язує фактор VII. За допомогою вдало підібраних умов елюції вдалось отримати високоочищений препарат цього білка. Отриманий препарат фактора VII за чистотою та специфічною активністю аналогічний комерційним препаратам відомих виробників. Технологія виділення фактора включає також стадії антивірусної обробки.

Ключові слова: плазма крові, фактор зсідання VII, хроматографічні методи, сорбенти, тріазинові барвники.

Resume

PROPERTIES AND METHODS OF OBTAINING BLOOD CLOTTING FACTOR VII IN LABORATORY CONDITIONS

S. Madych, Т. Danysh

SI «Institute of Blood Pathology and Transfusion Medicine of NAMS of Ukraine», Lviv

Factor VII is used in cases of bleeding and operations of patients with haemophilia A or B with inhibitors to VIII or ІХ and for treatment of patients with the acquire and inherit deficit of VII. We have shown that the row of newly synthesized sorbents effectively links factor VII. With the help of accurate conditions of elution highly-purified preparation of this protein was succsessfuly selected. The received preparation of VII according to its cleanness and specific activeness is analogical to commercial preparations of different producers. Technology of selection ofpreparation includes the stages of anti-virus treatment.

Key words: blood plasma, blood clotting FVII, chromatographic methods, sorbents, triazyne dyes.

Вступ

На сьогоднішній день є актуальною проблема переробки донорської плазми крові з метою створення ефективних лікарських препаратів та діагностичних засобів. Створено значну кількість методів фракціонування плазми крові, виділення та очищення її компонентів, зокрема, факторів зсідання крові та фібринолізу. Вивчення ролі такого фактора зсідання крові, як фактор VII, має теоретичне і практичне значення. Для проведення цих досліджень необхідним є наявність очищених препаратів цього білка. Важливими з точки зору ефективності є методи біоспецифічної хроматографії.

Активація фактора VII (FVII) носить локальний характер [5], тому не викликає системної активації зсідання крові, крім окремих випадків множинних пошкоджень. Препарати FVII використовують при кровотечах і операціях у хворих на гемофілію А або В з інгібіторами до факторів УШ або ІХ, а також для лікування хворих з вродженим його дефіцитом.

Застосування антикоагулянтів непрямої дії (синкумар, фенілін та ін.) призводить до порушення синтезу в печінці VII, IX, X факторів зсідання крові. Терапія фібринолітичними препаратами викликає порушення в системі зсідання крові.

Оскільки FVII присутній в плазмі в дуже низькій концентрації (близько 0,005 г/л), технології його виділення є складними [3]. Вихідною сировиною для його одержання може також бути концентрат факторів протромбінового комплексу (ППСБ), добутий шляхом попереднього фракціонування плазми [6]. Афінна хроматографія - це перспективний метод для виділення очищеного FVII [1, 2, 4].

Мета. Підбір вихідної сировини та отримання з неї очищеного FVII методом афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах з біоімітуючими барвниками-лігандами, придатного для діагностичних та лікувальних цілей.

Матеріали і методи. Фракції плазми І, ІІ + ІІІ чи ІІІ за Коном, сольове та поліетиленгліколеве (ПЕГ) фракціонування, афінна хроматографія, електрофорез, макропористий кремнеземний носій, активні тріазинові барвники. Визначення активності FVII проводили фотометричним методом за допомогою гідролізу хромогенного субстрату S-2765 фірми Chro- mogenix. У дослідженнях використовували референтні нормальні плазми, а також плазми, дефіцитні за факторами II, VII, ІХ та Х (фірма «Cormay"), препарат «NovoSeven" (Novo Nordisk A/S), набір білкових молекулярних маркерів PageRuler™ Unstained Protein Ladder (Fermentas, Литва).

Результати та їх обговорення

В нашій лабораторії розробляються методи виділення очищених вірусінактивованих факторів зсідання крові та фібринолізу з продуктів субфракціонування плазми крові за Коном з використанням методу афінної хроматографії на кремнеземних носіях. Використання такої технології дає можливість в один етап отримувати високоочищені терапевтичні кількості вірусінактивованих препаратів практично з утильної сировини станцій переливання крові. Зокрема, наші попередні дослідження показали можливість та достатню ефективність застосування кремнеземних носіїв з тріазиновим барвником - лігандом Активним яскраво-голубим для виділення та очищення тромбіну та фактора зсідання IX. Оскільки FVII, як і попередні виділені нами ферменти, є сериновою протеїназою трипсинового типу, логічною стала необхідність проведення досліджень можливості застосування кремнеземних носіїв з тріазиновими барвниками-лігандами для його виділення та очищення.

Експериментальним шляхом нами доведено, що перевагою кремнеземних сорбентів над органічними при створенні технологій одержання препаратів з плазми крові є висока стабільність, легкість регенерації, стійкість до дії мікроорганізмів, хімічних речовин та стерилізації, можливість застосування високих швидкостей проведення хроматографічного процесу.

В даному дослідженні нами проведено підбір умов визначення вмісту фактора VII у різних субфракціях плазми крові, а також в концентраті IIIІСБ. з метою виявлення найкращої сировини для його біоспецифічного виділення. Іншим важливим фрагментом даної роботи було створення технології його виділення та очищення з цієї сировини, включаючи етапи антивірусної обробки та афінну хроматографію на кремнеземних сорбентах з лігандами - активними барвниками. вірусінактивований кров фібриноліз

Висновки

1. Низка новосинтезованих макропористих кремнеземних сорбентів з лігандами - активними барвниками ефективно зв'язують фактор VII.

2. Підібрані умови елюювання фактора дозволяють отримувати його специфічно в м'яких фізіологічних умовах.

3. Створена лабораторна схема одержання очищеного фактора зсідання VII, яка включає етапи: сольового та ПЕГ-переосадження, одержання концентрату протромбінового комплексу, вірусну інактивацію, його активацію тромбопластин-кальцієвою сумішшю, та безпосереднє очищення фактора методом афінної хроматографії на макропористому кремнеземному сорбенті з лігандом - активним тріазиновим барвником.

Література

1. Мадич С.Є. Технологічні аспекти виділення фактора VII згортання крові / С.Є. Мадич // Гематологія і переливання крові: міжвідомчий збірник. - К., 2015. - Вип. 38. - С. 431-432.

2. Мадич С.Є. Фактор зсідання крові VII: властивості та методи одержання / С.Є. Мадич, Т.В. Даниш // Вісник Львівського університету. Серія біологічна. - 2016. - Вип. 73. - С. 310-313.

3. Broze G. J. Purification and properties of human coagulation factor VII / G.J. Broze, P.W. Majerus. // J. Biol. Chem. - 1980. - V. 255. - P. 1242-1247.

4. Madych S. Selection and purification of blood clotting factor VII suitable for therapeutic and treatment purposes / S. Madych, T. Danysh.// Thrombosis Research: Proceedings of the 5th International Conference on Thrombosis and Hemostasis Issues in Cancer, Stresa (Lake Majiore), Italy, April 23-25, 2010. - V. 125. - Suppl. 2. - P. S187.

5. Patthy L. Evolutionary assembly of blood - coagulation proteins / L. Patthy // Semin. Thromb. Hemost. - 1990. - V. 16. - P. 245-259.

6. New strategy for the design of ligands for the purification of pharmaceutical proteins by affinity chromatography./ K. Sproule, P. Morrill, J.C. Pearson [et al.] // J. Chromatogr. - 2000. - V. 740. - P. 17-33.

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

  • Дослідження клініко-неврологічних особливостей перебігу ішемічного інсульту,який клінічно розвинувся вперше, та їх прогностичної оцінки. Прогностичні аспекти клініко-лабораторних показників периферичної крові, біохімічних показників, рівня СРП у крові.

    автореферат [29,2 K], добавлен 10.04.2009

  • Склад і властивості плазми крові. Хвороби крові як результат порушень регуляції кровотворення і кроворуйнування. Кількісні зміни крові, особливості і класифікація анемії. Пухлини системи крові або гемобластози. Злоякісні та доброякісні утворення крові.

    реферат [26,1 K], добавлен 21.11.2009

  • Вивчення функціонального стану мікроциркуляції крові за допомогою методу лазерної допплерівської флоуметрії. Виявлення залежності особливостей мікроциркуляції крові від індивідуально-типологічних особливостей вищої нервової діяльності студентів.

    статья [337,9 K], добавлен 21.09.2017

  • Вплив поетапних диференційованих методів лікування невропатії лицьового нерва на клініко-неврологічний та нейрофізіологічний статус, стан гемодинаміки, реґіонарного кровообігу, метаболічних показників крові осіб похилого віку. Розробка методів корекції.

    автореферат [33,8 K], добавлен 21.03.2009

  • Характеристика основних симптомів глікемії та концентрації в крові глюкози, яка відображає обмін в організмі вуглеводів, білків і жирів. Особливості гіпоглікемічного стану, пов’язаного із різким зниженням вмісту глюкози в крові, особливо під час змагань.

    реферат [782,2 K], добавлен 27.05.2010

  • Метод гетерогенного твердофазного імуноферментного аналізу для визначення вмісту антитіл до екзогенного та ендогенного інсулінів у сироватках крові людей. Діагностичні характеристики імуноферментного методу (чутливість, специфічність, відтворюваність).

    автореферат [47,5 K], добавлен 07.03.2009

  • Ізосерологічна несумісність крові матері та плоду. Розподіл антигенів еритроцитів по імунологічному ризику. Продукування антитіл при першій та наступних вагітностях. Профілактика резуссенсибілізації, а також зв'язок групи крові та стану здоров’я.

    курсовая работа [503,3 K], добавлен 26.03.2014

  • Клінічний аналіз крові - кількісне та якісне дослідження елементів, формуючих кров; діагностика захворювань та подальший моніторинг на фоні медикаментозної терапії. Фактори впливу на показники аналізу крові. Показання та підготовка до дослідження.

    презентация [896,7 K], добавлен 10.10.2013

  • Поняття травми, принципи класифікації та види пошкоджень. Дістрофія та атрофія. Поняття та чинники некрозу тканин. Хвороби системи крові, порушення обміну циркулюючої крові. Характеристика хвороб системи виділення, порушення функції та хвороби нирок.

    реферат [19,3 K], добавлен 27.01.2009

  • Розробка новітніх методик корекції гіпоксії у хворих з синдромом гострого пошкодження легенів при критичних станах з позицій інтегративної медицини. Ефективність малопоточної мембранної оксигенації крові, протекторний вплив її на легеневу тканину.

    автореферат [52,1 K], добавлен 24.03.2009

  • Утворення в просвіті судин або порожнині серця згустку крові. Тромбоз судин основи мозку. Утворення первинної тромбоцитарної бляшки. Агглютинація і дегрануляція тромбоцитів. Зміни судинної стінки. Зміни системи гемостазу крові. Зміни густоти крові.

    презентация [6,3 M], добавлен 03.05.2015

  • Обґрунтування спектрального діапазону для виконання неінвазивного вимірювання глюкози в крові людини. Дослідження функціональних перетворень для ідентифікації абсорбційних спектрів глюкози. Розробка та структура вимірювального каналу для аналізатора.

    автореферат [24,3 K], добавлен 12.07.2015

  • Рух крові по судинах. Значення кров'яного тиску для життєдіяльності організму. Механізми регуляції, патологічні зміни кров'яного тиску. Методи і прилади вимірювання артеріального і капілярного тиску. Залежність венозного кров’яного тиску від віку.

    реферат [45,3 K], добавлен 06.06.2013

  • Особливості та характер перебігу хронічного гломерулонефриту на різних стадіях, дослідження рівню інтерлейкіну-6 у крові. На підставі оцінки клініко-лабораторних особливостей гломерулонефриту встановлення цитокінові чинники ризику його прогресування.

    автореферат [22,5 K], добавлен 11.04.2009

  • Роль крові як єднального елементу у забезпеченні життєдіяльності організму. Склад крові, поняття плазми та характеристика кровообігу. Будова серця, суть систоли і діастоли. Методика електрофізіологічного дослідження, коронарографії та ангіографії.

    презентация [936,5 K], добавлен 29.03.2010

  • Імунологічні механізми оплодотворення та вагітності. Серологічна несумісність, або конфліктне сполучення груп крові, її прояви, діагностика у вагітних. Порівняльний аналіз серологічного конфлікту по системі АВ0 з конфліктом по системі резус-фактора.

    реферат [21,6 K], добавлен 13.11.2009

  • Забарвлення еритроцитів та перенесення кисню гемоглобіном. Тривалість життя тромбоцитів. Групи крові в українців. Резус-конфлікт і групова несумісність. Характеристика ізогемаглютинуючих сироваток. Оцінка результатів реакції за наявністю аглютинації.

    курсовая работа [267,5 K], добавлен 16.05.2014

  • Використання методу пульсоксиметрії як вимірювання поглинання світла певної довжини хвилі гемоглобіном крові для визначення трьох основних діагностичних параметрів: ступеню насичення гемоглобіну крові киснем, частоти пульсу та його "об'ємної" амплітуди.

    реферат [81,2 K], добавлен 09.01.2012

  • Предмет клінічної біохімії. Основні об'єкти клініко-біохімічних досліджень. Особливості взяття крові для аналізу. Принципи, які необхідно враховувати для правильного трактування результатів біохімічних аналізів. Вплив положення тіла на показники крові.

    презентация [179,6 K], добавлен 10.04.2014

  • Динаміка вмісту фактора некрозу пухлин альфа (ФНП-б), інтерферону-гамма (ІФН-г) у сироватці крові. Показники функціонального стану геному букальних епітеліоцитів СОПР. Стан мікрофлори порожнини рота в хворих на ГП із застосуванням амізону та ліпофлавону.

    автореферат [29,4 K], добавлен 19.03.2009

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.