Визначення вмісту ретикулярних тромбоцитів у крові хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію з різною відповіддю на терапію інгібіторами тирозинкінази

Размещено на http://www.allbest.ru/

Визначення вмісту ретикулярних тромбоцитів у крові хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію з різною відповіддю на терапію інгібіторами тирозинкінази

Є.В. Шороп

ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України», Київ.

Резюме

Встановлено що, у пацієнтів з хронічною мієлоїдною лейкемією у периферичній крові знижена кількість ретикулярних тромбоцитів у порівнянні з показниками здорових осіб. Виявлено, що у хворих, резистентних до терапії, вказаний показник імовірно нижчий, ніж у групі хворих, які мають оптимальну відповідь на терапію.

Ключові слова: хронічна мієлоїдна лейкемія, інгібітори тирозинкінази, ретикулярні тромбоцити. хронічна мієлоїдна лейкемія інгібітор

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РЕТИКУЛЯРНЫХ ТРОМБОЦИТОВ В КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ МИЕЛОИДНОЙ ЛЕЙКЕМИЕЙ С РАЗЛИЧНЫМ ОТВЕТОМ НА ТЕРАПИЮ ИНГИБИТОРАМИ ТИРОЗИНКИНАЗЫ

Е.В. Шороп

Резюме. Установлено, что у больных хронической миелоидной лейкемией в периферической крови снижено количество ретикулярных тромбоцитов по сравнению с показателем здоровых лиц. Обнаружено, что у больных, резистентных к терапии, указанный показатель достоверно ниже, чем в группе больных с оптимальным ответом на терапию.

Ключевые слова: хроническая миелоидная лейкемия, ингибиторы тирозинкиназы, ретикулярные тромбоциты.

CONTENTS OF RETICULATED PLATELETS IN BLOOD OF PATIENTS WITH CHRONIC MYELOID LEUKAEMIA WITH VARIOUS ANSWERS TO TYROSINE KINASE INGIBITORS THERAPY

Y. Shorop

Summary. It is established, that in patients with chronic myeloid leukemia in peripheral blood the amount reticulated platelets in comparison with a parameter of healthy persons is lowered. It is revealed, that in resistant to therapy patients the specified parameter authentically below, than in group of patients with the optimum answer to therapy.

Key words: Chronic myeloid leukemia, tyrosine kinase inhibitors, reticulated platelets.

Вступ

Значні успіхи у лікуванні хронічної мієлоїдної лейкемії (ХМЛ) були досягнуті завдяки впровадженню в гематологічну практику препаратів інгібіторів тирозинкінази (ТКІ), які вибірково пригнічують активність продукту гену BCR/ABL, що є патогенетичною основою цього захворювання. Поряд з тим, частина пацієнтів виявляється нечутливою до такої терапії, або у них при лікуванні розвивається резистентність до препаратів ТКІ. Таким чином залишається актуальною проблема визначення механізмів розвитку резистентності до терапії ТКІ у хворих на ХМЛ та пошуку діагностичних і прогностичних критеріїв відповіді на терапію [1].

Одним із характерних проявів ХМЛ є підвищена проліферативна активність гемопоетичних клітин, зокрема мегакаріоцитарної ланки гемопоезу. Для дослідження тромбоцитопоезу наприкінці 90-х років 20-го сторіччя було запропоновано відносно нескладні методи, засновані на підрахунку в крові тромбоцитів, що протягом доби зберігають у своєму складі залишкову кількість РНК, яку можливо виявити за допомогою специфічних барвників, таких як аурамін або тіазоловий оранжевий (ТО). Ці клітини по аналогії з ретикулоцитами отримали назву ретикулярні тромбоцити (РТ) [2]. Хоча пізніше було доведено, що люмінесценція цих тромбоцитів істотною мірою викликана неспецифічним зв'язуванням барвників із вмістом щільних гранул, підвищена кількість яких також є ознакою більш молодих тромбоцитів, метод знайшов застосування для диференційної діагностики імунного характеру тромбоцитопенії. Поряд з морфометричними характеристиками тромбоцитів підвищення вмісту РТ може бути використане у якості прогностичного критерію розвитку тромботичних ускладнень [3]. Також існують відомості про використання цього методу при дослідженні тромбоцитопоезу й у хворих на хронічні мієлопроліферативні захворювання [4].

Мета роботи - дослідити вміст РТ у крові хворих на ХМЛ з різною відповіддю на терапію ТКІ.

Матеріали і методи

Були проведені цитофлюориметричні дослідження зразків периферичної крові 25 хворих на ХМЛ у хронічній фазі, які отримували лікування препаратами ТКІ І та ІІ покоління. За даними клініко-гематологічого та цитогенетичного дослідження у 16 з них відзначалася оптимальна відповідь на терапію ТКІ, а у 9 - резистентність до неї. Результати дослідження порівнювали з аналогічними показниками 16 хворих на ХМЛ до призначення їм ТКІ та групи контролю, що складалася з 23 відносно здорових осіб із числа донорів-добровольців.

Кількість РТ у крові оцінювали за флуоресценцією тромбоцитів після забарвлення їх РНК-специфічним люмінесцентним барвником - ТО (Aldrich-Sigma, США) з використанням методу лазерної цитофлуориметрії. Для аналізу використовували плазму, збагачену тромбоцитами, яку отримували шляхом центрифугування при 1000 об/хв периферичної крові, стабілізованої 5% розчином трилону-Б. Після 30-хвилинної інкубації плазми в розчині ТО проводили збір даних на лазерному цитофлуориметрі FACScan (Becton Dickinson, США) за допомогою програми LYSYS-II. Аналіз даних проточної цитометрії проводився за допомогою програми freeFCS-reader (Є. Шороп. Авт. свід. № 38745 від 23.06.11 р.). Для аналізу обирали події, які за параметрами прямого та бічного світорозсіювання відносились до тромбоцитів. Регіон цих подій верифікували та уточнювали за експресією специфічного для тромбоцитів антигену CD42b, який визначався за допомогою відповідних моноклональних антитіл (PharMingen, США). Результат вираховували за гістограмою розподілу подій і виражали в умовних одиницях (у.о.) у вигляді (M±m). Статистичну ймовірність розбіжностей між групами визначали за t-критерієм Стьюдента.

Результати та їх обговорення

У хворих, які приймали ТКІ, спостерігалося достовірне зменшення кількості тромбоцитів периферичної крові порівняно з середнім показником здорових осіб: хворі чутливі до ТКІ - (157,50±9,38)х10⁹/л, резистентні - (158,25±5,63)х10⁹/л, відносно здорові особи - (234,26±1,36)х10⁹/л.

Порівняння результатів дослідження між групами хворих, які мали оптимальну відповідь на терапію ТКІ - (252,36±11,11) у.о. та резистентних до лікування - (215,88±9,68) у.о. показало, що оптимальна відповідь на ТКІ супроводжувалася достовірним (p<0,05) збільшенням в крові кількості РТ, яка, проте, не досягала рівня здорових осіб - (288,78±13,80) у.о. Результати аналізу даних представлені на рисунку.

Рис. Флуоресценція тромбоцитів хворих на ХМЛ при забарвленні ТО

Примітки: * - достовірна різниця з показником здорових осіб (p<0,05);

** - достовірна різниця з показником хворих, які мають оптимальну відповідь на ТКІ (p<0,05).

У групі пацієнтів із ХМЛ, які не приймали ТКІ, також спостерігалося достовірне зменшення кількості РТ у периферичній крові - (225,99±17,58) у. о, у порівнянні з контрольною групою, незважаючи на істотну тромбоцитемію, властиву цьому захворюванню (середня кількість тромбоцитів становила (525,5О±9,О1)х10⁹/л). Такий результат можна пояснити зменшенням кількості щільних гранул у тромбоцитах внаслідок їхньої функціональної неповноцінності, що може спостерігатися при ХМЛ. У свою чергу, підвищення вмісту РТ у периферичній крові хворих на ХМЛ при оптимальній відповіді на терапію ТКІ порівняно з хворими, резистентними до терапії, можливо, пов'язане з відновленням нормального тромбоцитопоезу.

Висновки

1. У обстежених хворих на ХМЛ виявлено зменшення кількості РТ у периферичній крові порівняно з показниками здорових осіб.

2. У крові хворих на ХМЛ з оптимальною відповіддю на ТКІ визначалося підвищення кількості РТ у порівняні з пацієнтами резистентними до терапії.

Література

1. Експресія глікопротеїну Pgp-170 гемопоетичними клітинами периферичної крові та кісткового мозку у хворих на хронічну мієлоїдну лейкемію з різною відповіддю на терапію інгібіторами тирозинкінази / Т.П. Перехрестенко, А.І. Гордієнко, Н.М. Третяк [та ін.] // Клиническая онкология. - 2012. - № 5(1). - С. 95-98.

2. Разработка метода исследования молодых тромбоцитов с помощью проточной цитометрии / И.А. Замулаева, Ю.Е. Виноградова,

С.Н. Корякин [и др.] // Проблемы гематологии. - 2000. - № 3. - С. 10-15.

3. Reticulated platelets as a screening test to identify thrombocytopenia aetiology / M. Monteagudo, J. Amengual, L. Munoz [et al.] // QJM. - 2008. - Yd 101, № 7. - P. 549-555.

4. Increased Platelet Turnover and Platelet P-Selectin in Patients with Essential Thrombocythemia and Thrombosis / E. Arellano-Rodrigo, A. Alvarez-Larran, F. Cervantes [et al.] // Blood (ASH Annual Meeting Abstracts). - 2004. - № 104 - Abstract 4744.

Размещено на Allbest.ru