Служба крови Латвии. Основные принципы иммуногематологического исследования доноров и реципиентов в Латвии

Размещено на http://www.allbest.ru/

Даугавпилсская региональная больница, Даугавпилс, Латвия

Служба крови Латвии. Основные принципы иммуногематологического исследования доноров и реципиентов в Латвии

И. Скринда



Резюме

медицинский обследование донор

В статье представлены основные принципы иммуногематологического исследования доноров крови и реципиентов в Латвии. Латвия - член Европейского союза, население страны - 1 млн. 920 тыс., количество доноров крови - 1,63 % населения. Служба крови объединяет Государственный центр доноров крови (Центр), 5 отделений заготовки крови в региональных лечебных учреждениях и 55 кабинетов крови. В структуру Центра входит иммуногематологическая лаборатория (ИЛ). ИЛ обеспечивает медицинское обследование доноров в соответствии с медицинской технологией: определение группы крови, резус-фактора, фенотипа крови и скрининга антител, определение группы крови двойной (перекрестной) реакцией и Rh (D) определение на микроплатах. ИЛ поддерживает базу данных фенотипированных доноров, регулярно тестирует доноров на наличие всех клинически значимых систем эритроцитов (16 антигенов), что необходимо для подбора эритроцитарной массы аллоиммунизированным пациентам. Категории лабораторных исследований: обязательные исследования - группа крови в системе АВО Rh (D) принадлежность, фенотип Rh-Kell, результат скрининга антиэритроцитарных антител (как минимум антигены D, C, c, E, e, K, k, Fya, Fyb, Ika, Ikb, S, s, M); дополнительные обследования - идентификация антиэритроцитарных антител, скрининг высокого титра анти-А и анти-В агглютининов, дополнительное фенотипирование. Автоматизированные исследования - автоматизировання система должна обеспечивать идентификацию образцов, прослеживаемость образца и результата, электронную передачу результатов. Для исследования используют утвержденные на национальном уровне, валидированные лабораторные процедуры исследования. Проводится титрование антиэритроцитарных антител у беременных женщин. Проводятся тесты на совместимость крови реципиента и донора в клинически значимых антигенных системах. Все исследования регулируются законодательством в сфере иммунологического тестирования крови доноров и реципиентов, что обеспечивает единообразность, безопасность и качество результатов во всех лечебных учреждениях Латвии.

Ключевые слова: служба крови Латвии; иммуногематологические исследования; валидированные лабораторные исследования; доноры крови; реципиенты.



Blood service of Latvia. Basic principles of immuno-hematological research of donors and recipients in Latvia

Skrinda І. Daugavpils Regional Hospital, Daugavpils, Latvia

Abstract

The article presents the basic principles of immunohematological research of blood donors and recipients in Latvia. Latvia is a member of the European Union, the country's population is 1 million 920 thousand, the number of blood donors is 1. 63% of the population. The blood service unites the State Center for Blood Donors (Center), 5 blood preparation departments in regional medical institutions and 55 blood offices. The Center structure includes an immunohematological laboratory (IL). IL provides a medical examination of donors in accordance with medical technology: determination of blood group, Rh factor, blood phenotype and antibody screening, determination of blood type by double (cross) reaction and Rh (D) determination on microplates. IL maintains a database of phenotyped donors, regularly tests donors for the presence of all clinically significant erythrocyte systems (16 antigens), which is necessary for the selection of red blood cells in alloimmunized patients. Categories of laboratory tests: mandatory studies - blood group in the ABO Rh (D) system, affiliation, Rh-Kell phenotype, result of screening of anti-erythrocyte antibodies (at least D, C, c, E, e, K, k, Fya, Fyb, Ika antigens, Ikb, S, s, M); additional examinations - identification of antierythrocyte antibodies, screening of a high titer of anti-A and anti-B agglutinins, additional phenotyping. Automated research - an automated system should provide identification of samples, traceability of the sample and result, electronic transfer of results. Nationally validated, validated laboratory research procedures are used for the study. Anti-erythrocyte antibodies are titrated in pregnant women. Tests are conducted on the compatibility of the blood of the recipient and the donor in clinically significant antigenic systems. All studies are regulated by legislation in the field of immunological testing of blood of donors and recipients, which ensures uniformity, safety and quality of results in all medical institutions in Latvia.

Keywords: blood service of Latvia; immunohematological studies; validated laboratory tests; blood donors; recipients.



Латвия - восточноевропейское государство, член Европейского Союза, расположенное на берегу Балтийского моря. Площадь - 64 589 km² , население в начале 2018 года - 1 млн. 920 тыс.

Доноры 1,63% населения, первичные доноры - 21,5% от общего количества доноров.

История службы крови началась 18 марта 1941 года. Профессор П. Страдиньш основал первую в Советском Союзе станцию переливания крови при больнице г. Риги. В 1945 г. она была названа «Республиканская станция переливания крови» (РСПК). В 1960 году было построено отдельное здание и с 25 августа 1993 года РСПК был переименован в Центр доноров крови Латвии.

Служба крови объединяет Государственный центр доноров крови - исполнитель государственного заказа на заготовку донорской крови, 5 отделений заготовки крови в региональных лечебных учреждениях и 55 кабинетов крови. За год заготавливается 52 000 доз ЭМ (эритроцитарная масса) и СЗП (свежозамороженная плазма), 8000 доз криопреципитата, 8000 доз ТМ (тромбоцитарная масса).

Государственный Центр доноров крови (далее - Центр) является учреждением прямого управления, находящимся в подчинении министра здравоохранения. Нормативные документы, регламентирующие работу Центра: закон о структуре государственного управления, закон о лечении, постановление Кабинета министров № 22 (22.02.2005). 138 «Устав Национального центра доноров крови», постановление Кабинета министров № 1037 (27.12.2005). «Положения о стандартах качества и безопасности для сбора, тестирования, обработки, хранения и распределения человеческой крови и компонентов крови и компенсации расходов на восстановление утраченного объема крови» и другие нормативные акты.

Взаимоотношения Центра крови в лабораторных исследованиях происходит с Лабораторией микробиологии Латвийского Центра Инфектологии - в качестве референтной лаборатории для подтверждения вирусных инфекций, с референтными лабораториями ЕС по иммуногематологии (Бристоль). В донорском движении Центр сотрудничает с муниципалитетами по защите доноров, с Латвийским Красным Крестом, с другими медицинскими учреждениями по использованию базы данных медицинских отводов, а также с лечебными учреждениями в вопросах трансфузиологии, с Латвийским Центром медицины катастроф.

Девиз Латвийской службы крови «Мы в едином кровообращении». Для специалистов трансфузиологов Центр ведет профессиональные заседания ассоциации (трансфузиологии), разрабатывает методические рекомендации для заготовителей и пользователей компонентами крови (кабинетов крови лечебных заведении), организует обучение, курсы специализации, резидентура для врачей по трансфузиологии.

В структуру Центра входит ИЛ (Иммуногематологическая Лаборатория). ИЛ обеспечивает медицинское обследование доноров в соответствии с медицинской технологией: определение группы крови, резус-фактора, фенотипа крови и скрининга антител, определение группы крови двойной (перекрестной) реакцией и Rh (D) определение на микроплатах, определение группы крови двойной реакцией, Rh (D) фенотипа и Келл-антигена на микроплатах. Также ИЛ поддерживает расширенную базу данных фенотипированных доноров, регулярно тестирует доноров на наличие всех клинически значимых систем антигенов эритроцитов (16 антигенов), что необходимо для индивидуального подбора ЭМ для аллоиммунизированных пациентов.

Исследование доноров крови в Латвии

Исследование доноров крови Латвии осуществляется централизованно в Государственном донорском Центре. Центр выполняет иммуногематологические исследования. обязательный скрининг на инфекции, применяя серологическое исследование и молекулярное исследование вирусов. Первичные положительные результаты подтверждаются в референтной лаборатории, также контроль качества готовой продукции. Центр проверяет донора на наличие поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg), антител против вируса гепатита С (анти-ВГС), антител против ВИЧ? (анти-ВИЧ?), антител к возбудителю сифилиса. Если получены отрицательные результаты - проводятся тесты на амплификацию нуклеиновых кислот (NAT- HCV, HBV, ВИЧ?).

Законодательство в сфере иммуногематологического тестирования крови доноров и реципиентов

Законодательство в сфере иммуногематологического тестирования крови доноров и реципиентов основано на базе данных МТ (медицинских технологий), которая содержит указания по заготовке крови и ее компонентов, контроля качества. Согласно их определено, что только центры донорства крови и отделы заготовки крови, (соответствие которых требованиям, утвержденным Кабинетом министров Латвийской Республики, было оценено в соответствии с процедурами, установленными Кабинетом министров), могут заниматься подготовкой крови и компонентов крови.

Тестирование образцов крови согласно МТ:

Иммуногематологическое исследование донорской крови - MT 16-012.

1. Иммуногематологическое исследование крови пациента и анализ совместимости крови реципиента-донора - MT 16-011.

Иммуногематологическое исследование донорской крови / MT 16-012

Категории лабораторных исследований:

1. Обязательные исследования - на этикетке компонента крови для распространения компонентов крови - группа крови в системе АВО, Rh (D) принадлежность, фенотип Rh-Kell, результат скрининга антиэритроцитарных антител.

Дополнительные обследования - для увеличения трансфузионной безопасности для отдельных категорий пациентов (не всем компонентам)

идентификация антиэритроцитарных антител, скрининг высокого титра анти-А и анти-В агглютининов, дополнительное фенотипирование.

Обязательные иммуногематологические исследования (автоматизированная система)

Определение группы крови в системе АВО:

первые 2 раза донору - прямая реакция с капиллярной кровью, двойная (перекрестная) реакция с венозной кровью;

для постоянного донора в последующих донация - только прямая реакция в образце венозной крови.

ИС (информационная система) сравнивает результаты автоматически.

Rh (D) - определение резус-принадлежности:

первичному донору Rh (D) - принадлежность определяется дважды

в капиллярной крови с анти-D (VI-) IgM и в венозной крови с двумя различными клонами реагентов анти-D IgM. Сомнительные результаты тестируют с реагентом анти-D IgG в непрямом антиглобулиновом тесте (IAT) с помощью гелевой технологии, где можно обнаружить все варианты Dw и парциального D, если Rh (D) положителен, делается в прямом антиглобулиновом тесте (DAT);

регулярным донорам при каждой донации венозной крови с использованием одного клона анти-D IgM реагента и контрольного реагента.

ИС автоматически сравнивает результаты.

Фенотипирование в системах Rh и Kell:

фенотипирование в системах Rh и Kell (обнаружение антигенов C, c, E, e, K) выполняется и документируется в двух последовательных дона- циях (включая гелевый метод).

ИС автоматически сравнивает результаты.

Скрининг антиэритроцитарных антител:

выполняют и документируют в первой донации, а затем каждые два года или, если в период после последней донации было переливание или беременность;

используют непрямой антиглобулиновый тест;

скрининг-эритроциты (пулированные) должны содержать как минимум следующие антигены: D, C, с, E, е, K, к, Fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s, M;

если скрининг антител положительный, идентифицируют антитела, дозу крови не используют для приготовления компонентов крови;

в качестве положительного контроля используют контрольный реагент с анти-D IgG, содержащий 0,5 МЕ/мл или ниже, и негативный контроль - реагент, не содежащий антитела.

Дополнительные иммуногематологические исследования.

Идентификация антиэритроцитарных антител:

проводится и документируется в обязательном порядке для всех образцов с положительным скринингом антител;

донору, у которого выявлены антиэритроцитарные антитела, выдается паспорт крови сенсибилизированной персоны.

Скрининг высоких титров анти-А и анти-Вагглютининов для доноров О группы:

проводится и документируется для отдельной категории (например, тромбоцитаферезных) О группы доноров при каждой донации;

титры агглютининов 256 и выше в непрямом антиглобулиновом тесте считаются повышенными;

компоненты крови с высоким титром агглютининов маркируют «Только для переливания реципиентам группы 0» и не используют для переливания.

Дополнительное фенотипирование.

фенотипирование в других клинически значимых антигенных системах (кроме систем АВО, Rh и Kell) выполняется и документируется в двух донациях.

Прямой тест антиглобулина. Прямой тест антиглобулина проводится, если:

обнаруживают положительный результат скрининга антител;

при определении АВО, Rh (D) или фенотипизации обнаружены отклонения от нормы;

при проведении совместимости конкретная доза крови несовместима с реципиентом, не имеющим антител против эритроцитов донора.

Доноры, у которых констатирован положительный прямой антиглобулиновый тест, отводятся от донации на 6 месяцев.

Автоматизированное исследование

А) Автоматизированная система должна обеспечивать, как минимум идентификацию образцов, прослеживаемость образца и результата, электронную передачу результатов.

Б) Как обязательное условие должно быть валидированные системы и процедуры, используемые для исследования, передачи, хранения или поиска данных и информации, процедуры нестандартных ситуаций в случае отказа автоматизированной системы, порядок работы с автоматизированными системами исследования, современные версии программного обеспечения и документов.

!!! Ручное исследование - для уточнения.

Иммуногематологическое исследование крови пациента и анализ совместимости крови реципиента-донора - MT 16-011

Для исследования используют утвержденные на национальном уровне, валидированные лабораторные процедуры исследования. Процедуры исследования перед началом их введения для использования в лаборатории валидируют, подтверждая соответствие параметров методики тестирования (наборов реагентов/тест-систем) требованиям для процедуры исследования.

Определение группы крови AB0

В присутствии пациента в капиллярном образце крови выполняют прямую реакцию AB0 определения.

Б) В лаборатории в венозном образце крови выполняют определение группы крови с двойной (перекрестной) реакцией, используя анти-A и анти-B моноклональные реагенты для прямой реакции и A1 и B стандартные эритроциты - для обратной реакции. Сравнивают результаты.

Новорожденным AB0 группу крови определяют с прямой реакцией.

Г) Сомнительных результатов используется IAT, тесты адсорбции, DAT/элюции.

Определение Rh (Б)-принадлежности, Rh-фенотипа и К-антигена

Каждый образец тестирует с двумя клонами анти-D IgM моноклональных реагентов (не для антигена DVI)

Б) Параллельно используют отрицательный контроль моноклональных реагентов.

Для исследования образцов крови пациентов не используют непрямой антиглобулиновый тест.

Г) Для уточнения парциального D-антигена должна использоваться панель парциального D-антигена.

Д) Если анти-D реагент показывает слабый результат (1+), определяют Rh-фенотип:

если C-антиген (CC, Cc) обнаружен в фенотипе Rh, результат трактуется как Rh (D) положительный;

в отсутствие C-антигена (cc) результат трактуют как Rh (D) отрицательный.

Е) Определение Rh-фенотипа и К-антигена рекомендуется для: девушек и женщин детородного возраста до переливания ЭМ и пациентов, нуждающихся в регулярном переливании ЭМ.

Ж) Rh-фенотип и K-антиген определяются у реципиентов, у которых определены антиэритроцитарные антитела любой специфичности и как часть процесса идентификации антител.

Скрининг антиэритроцитарных антител

Делается своевременно, чтобы в случае положительного скрининга, который свидетельствует о иммунизации пациента эритроцитарными антигенами, была возможность для получения совместимых компонентов крови.

Б) Скрининг антител проводят, как минимум, с тремя скрининг-эритроцитами с использованием непрямого антиглобулинового теста.

!!! Запрещено объединять все 3 образца скрининг-эритроцитов в один.

Г) Для положительного скрининга антител рекомендуется автоконтроль или DAT.

Д) Если автоконтроль или DAT положительный, у пациента могут быть обнаружены аутоантитела.

Е) В случае скрининга положительных антител новый образец крови отправляется в специализированную лабораторию для идентификации антиэритроцитарных антител.

Ж) Если у пациента, ранее получившего паспорт крови сенсибилизированной персоны, отрицательный скрининг на наличие антиэритроци- тарных антител, все равно для переливания выдают дозу ЭМ без антигена.

З) Действителен в течение 72 часов.

Идентификация антиэритроцитарных антител

Во всех случаях, когда пациенту констатируют положительный скрининг антиэритроцитарных антител, они должны быть идентифицированы для обеспечения выбора совместимой массы эритроцитов для переливания.

Б) Если пациент имеет историю аллоиммунизации, в каждом новом образеце надо идентифицировать антитела (чтобы идентифицировать или исключить антитела).

Идентификация алло-антител должна обеспечивать:

определение специфичности алло-антител;

определение антигена, соответствующего идентифицированным антителам;

выбор совместимой ЭМ при необходимости.

Если специфичность антител не обнаруживается или если есть подозрение, что в сыворотке есть антитела нескольких специфичностей:

выполнить фенотипирование эритроцитов пациента в системе Rh- Kell и расширенное фенотипирование путем определения: Cw, М, N, S, s, P1, Lea, Leb, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lua, Lub или, по меньшей мере, Rh-Kell системе и определяя антигены Fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s:

выбрать дополнительные методы, дополнительные панели и другую температуру инкубации;

для идентификации антител используют эритроциты, фенотип которых соответствует фенотипу пациента, чтобы дифференцировать смесь антител от антител против часто встречающегося антигена;

использует метод алоадсорбции, чтобы подтвердить смесь нескольких антител.

Тесты на совместимость крови реципиента и донора

Используется IAT, чтобы выявить несоответствие крови донора-реципиента АВ0 и т. д. в клинически значимых антигенных системах.

Процедура проверки на совместимость крови должна включать:

проверка групп крови реципиента и донора в системе АВ0 с реагентами анти-А и анти-В;

проверка Rh (D) реципиента и донора - определение с одним клоном анти-О-реагента;

сравнение полученных результатов с результатами предыдущих исследований;

Примечание:

следует отметить, что Rh (D) принадлежность доноров в учреждении крови уточняется с IAT, что открывает очень слабые варианты D и парциальные D варианты, поэтому результаты, полеченные в больничной лаборатории для обнаружения антигена D, могут отличаться:

результат Rh (D) принадлежности положительной ЭМ может быть отрицательным;

Тест на совместимость крови IAT методом гелевой карты.

маркируется мешок с кровью.

Титрование антиэритроцитарных антител

Если во время первого визита беременной женщины получен положительный скрининг антител, необходимо провести их идентификацию и титрование. Если обнаружены антитела против D, против C или против K, повторная идентификация антител проводится при каждом титровании.

Интервал титрования:

каждые 4 недели до 28-й недели, затем каждые 2 недели;

если до 28-й недели титр увеличивается на две ступени разведения, титруют каждые 2 недели до 28-й недели;

если у беременной женщины обнаруживаются антитела другой специфичности (кроме анти-D, анти-с или анти-К), повторную идентификацию и титрование антител следует проводить на 28-й неделе беременности или чаще, если это необходимо, по усмотрению врача;

если беременная женщина имеет антитела против Lea, против Leb или против P1, то на 28 неделе беременности проводится только идентификация антител, и повторное титрование не проводится, поскольку эти антитела не вызывают гемолитическую болезнь новорожденного;

титрование выполняется с использованием эритроцитов, на которых антиген, соответствующий антителу, содержится в однократной дозе;

титрование проводится методом гель-карты IAT;

если выполняется первое титрование, параллельно титруют анти-D референтный реагент;

о если титрование повторяется, параллельно титруют образец сыворотки, приготовленный в предыдущем исследовании. Сравнивают результаты обоих титров. Допускается различие с результатом предыдущего титрования на 1 ступень

остаток образца сыворотки замораживают при -20° C и ниже, для параллельного титрования в следующий раз.

Прямой антиглобулиновый тест (DAT)

DAT рекомендуется определять при:

положительном результате скрининга антиэритроцитарных антител;

гемолитической болезни новорожденных;

аутоиммунной гемолитической анемии;

исследовании трансфузионных реакций;

исследовании медикаментозной сенсибилизации эритроцитов.

Все вышеприведенные иммуногемотологические исследования, проводимые согласно МТ, обеспечивают единообразность, безопасность и качество результатов для доноров и реципиентов во всех лечебных учреждениях Латвии.

Размещено на Allbest.ru

...