Размещено на http://www.allbest.ru/

Кафедра фармацевтической и токсикологической химии

Курсовая работа

ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНТИРЕТРОВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ В КОМБИНАЦИЯХ С ЛЕКАРСТВЕННЫМИ СРЕДСТВАМИ ИЗ ДРУГИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ГРУПП МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Исполнитель: Султанбекова Татьяна Юрьевна,

студентка 4 курса 403 группы фармацевтического факультета

Руководитель: Илларионова Е.А., профессор, д.х.н.,

зав. каф. фармацевтической и токсикологической химии



Содержание

Введение

1. Теоретическая часть

1.1 Общая характеристика

1.2 Побочное действие и отравления препаратами взятых на анализ

2. Практическая часть

2.1 Материалы и методы

2.2 Методика проведения тонкослойной хроматографии

2.3 Методика приготовления спиртовых растворов веществ

2.4 Результаты исследования

Заключение

Список литературы



Введение

На сегодняшний день проблема заболеваемости ВИЧ является одной из ведущих, что связано с высокой скоростью распространения инфекции. Помимо самой инфекционной болезни, больные ВИЧ могут страдать и другими заболеваниями, для лечения которых могут применятся психотропные вещества, анальгетики, снотворные и препараты, влияющие на мозговое кровообращение, применяемые одновременно с антиретровирусными лекарственными средствами.

В справочной литературе можно найти сведения о химико-токсикологическом исследовании биологических объектов на наличие пиразенамида, хлорпротиксена, протионамида, метронидазола, диклофенака, линезолида, кеторолака, но информации, связанной с идентификацией при химико-токсикологическом анализе саквинавира, ставудина, лопинавира, ритонавира в комбинации с данными лекарственными веществами отсутствует. В свою очередь, любое лекарственное вещество может оказаться ядом при неправильном приеме, при нарушении дозирования и других причинах. Поэтому разработка методики идентификации антиретровирусных препаратов с перечисленными лекарственными средствами методом ТСХ является актуальной задачей.

Цель исследования: Разработать методику идентификация ритонавира, лопинавира, ставудина и саквинавира при комбинированных отравлениях.

Задачи исследования:

1. Провести анализ антиретровирусных препаратов, принадлежащих к группе ингибиторов протеазы ВИЧ и ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ

2. Обосновать комбинированные сочетания средств, применяющихся в антиретровирусной терапии с препаратами из других фармакологических групп

3. Подобрать условия для проведения предварительной идентификации методом тонкослойной хроматографии

4. Разработать методику проведения анализа



1. Теоретическая часть

антиретровирусный терапия препарат ингибитор

1.1 Общая характеристика

Ставудин - это нуклеозидный аналог, полученный путем формального обезвоживания в позициях 2 и 3 тимидина, который ингибирует обратную транскриптазу и обладает активностью in vitro. Фосфорилируется клеточными ферментами до своей активной формы - ставудинтрифосфата, который подавляет активность обратной транскриптазы ВИЧ за счет конкуренции с природным субстратом дезокситимидинатрифосфатом и нарушает репликацию ВИЧ. Ставудинтрифосфат также усиливает терминацию цепей вирусной ДНК благодаря отсутствию в молекуле 3'-гидроксильных групп, необходимых для построения ДНК, ингибирует клеточные ДНК-полимеразы г, снижает синтез митохондриальной ДНК.

МНН: Ставудин

ИЮПАК: 1-[(2R,5S)-5-(гидроксиметил)-2,5-дигидрофуран-2-ил]-5-метил-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-2,4-дион

Брутто-формула: C10H12N2O4

Молярная масса: 224.213 г/моль

Рис. 1 Структурная формула ставудина

Ритонавир - это L-валиновое производное, которое представляет собой L-валинамид. Ингибитор CYP3A и антиретровирусный препарат из класса ингибиторов протеазы, используемый для лечения ВИЧ-инфекции и СПИДа, он часто используется в качестве комбинации с фиксированной дозой с другим ингибитором протеазы - лопинавиром.

МНН: Ритонавир

ИЮПАК: 1,3-тиазол-5-метил N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-5-[(2S)-3-метил-2-{[метил({[2-(пропан-2-ил)-1,3-тиазолl-4 ил] метил})карбомаил]амино}бутанамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]карбамат

Брутто-формула: C37H48N6O5S2

Молярная масса: 720.946 г/моль

Рис. 2 Структурная формула ритонавира

Лопинавир - это диамид дикарбоновой кислоты, который является амфетамином. Антиретровирусный препарат класса ингибитора протеазы, он используется против ВИЧ-инфекции в качестве комбинации с фиксированной дозой с другим ингибитором протеазы - ритонавиром. Он играет роль противовирусного препарата, ингибитора протеазы ВИЧ и антикоронавирального агента.

МНН: Лопинавир

ИЮПАК: (2S)-N-[(2S,4S,5S)-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-4-гидрокси-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид

Брутто-формула: C37H48N4O5

Молярная масса: 628,8008 г/моль

Рис. 3 Структурная формула лопинавира

Саквинавир - это производное аспарагиновой кислоты, полученное путем формальной конденсации первичной аминогруппы. Играет роль ингибитора протеазы ВИЧ-1 и противовирусного препарата. Является членом квинолинов и производным L-аспарагина.

МНН: Саквинавир

ИЮПАК:(2S)-N-[(2S,3R)-4-[(3S)-3-(терт -бутилкарбомаил)-декагидроизохинолин -2-ил]-3-гидрокси-1-фенилбутан-2-ил]-2-(хинолин-2-илформамид)бутандиамид

Брутто-формула: C38H50N6O5

Молярная масса: 766,96 г/моль



Рис. 4 Структурная формула саквинавира

Протионамид - является производным тиоамида с противотуберкулезной активностью. Протионамид образует ковалентный аддукт с бактериальным никотинотинамидом аденин динуклеотидом (NAD), PTH-NAD, который конкурирует 2-трансэноил-ACP-редуктазу (inhA), фермент, необходимый для синтеза миколевой кислоты. Это приводит к повышению проницаемости клеточной стенки и снижению устойчивости к повреждению клеток, что в конечном итоге приводит к лизису клеток. Миколевые кислоты, длинноцепочечные жирные кислоты, являются важными компонентами микобактериальной клеточной стенки и играют ключевую роль в устойчивости к повреждению клеток и микобактериальной вирулентности.

МНН: Протионамид

ИЮПАК:2-Пропил-4-пиридинкарботиоамид

Брутто-формула: C9H12N2S

Молярная масса: 180,27 г/моль

Рис. 5 Структурная формула протионамида

Пиразинамид - это амид монокарбоновой кислоты, образуя в результате формальной конденсации карбоксовой группы пиразиновой кислоты (пиразин-2-карбоновой кислоты) аммиаком. Используется в рамках многопрофильных лекарственных схем для лечения туберкулеза. Механизм действия точно неизвестен. Оказывает бактериостатическое или бактерицидное действие в зависимости от его концентрации и чувствительности микроорганизма. Хорошо проникает в очаги туберкулезного поражения.

МНН: Пиразинамид

ИЮПАК: Гидразид никотиновой кислоты

Брутто-формула: C5H5N3O

Молярная масса: 123,11 г/моль

Рис. 6 Структурная формула пиразинамида

Линезолид - противомикробное средство, относится к классу оксазолидинонов. Механизм действия обусловлен селективным ингибированием синтеза белка в бактериях. За счет связывания с бактериальными рибосомами линезолид предотвращает образование функционального инициирующего комплекса 70S, который является компонентом процесса трансляции при синтезе белка.

МНН: Линезолид

ИЮПАК: (S)-N-({3-[3-фторо-4-(морфонил-4-ил)фенил]-2-оксо-1,3-оксазолидин-5-ил}метил)ацетамид

Брутто-формула: C16H20FN3O4

Молярная масса: 337.346 г/моль

Рис. 7 Структурная формула линезолида

Метронидазол - относится к классу имидазолов, заменяемых в С-1, -2 и -5 2-гидроксиэтиловыми, нитро- и метиловыми группами соответственно. Он оказывает активность против анаэробных бактерий и простейших. Является пролекарством и селективен для анаэробных бактерий из-за их способности внутриклеточно уменьшать нитрогруппу метронидазола для получения нитрозосодержащих промежуточных продуктов. Они могут ковалентно связываться с ДНК, нарушая ее вертикальную структуру, вызывая разрывы нитей ДНК и ингибируя синтез бактериальных нуклеиновых кислот, что в конечном итоге приводит к гибели бактериальных клеток. Играет роль антитрихомонального препарата, пролекарства, антибактериального препарата, противомикробного агента, противопаразитарного средства, ксенобиотика.

МНН: Метронидазол

ИЮПАК: 2-(2-метил-5-нитро-1H-имидазол-1-ил)этанол

Брутто-формула: C6H9N3O3

Молярная масса: 171.15 г/моль



Рис. 8 Структурная формула метронидазола

Диклофенак - это форма натриевой соли диклофенака, производного бензоловой уксусной кислоты. Нестероидный противовоспалительный препарата (НПВП) с обезболивающим, жаропонижающим и противовоспалительным действием. Диклофенак натрий является неселективным обратимым и конкурентоспособным ингибитором циклооксигеназы (ЦОГ), впоследствии блокирующим преобразование арахидоновой кислоты в предшественники простагландина.

МНН: Диклофенак

ИЮПАК: 2-(2,6-дихлоранилино) фенилуксусная кислота

Брутто-формула: C14H11Cl2NO2

Молярная масса: 296,15 г/моль

Рис. 9 Структурная формула диклофенака

Хлорпротиксен - антипсихотическое средство (нейролептик), производное тиоксантена. Оказывает антипсихотическое, антидепрессивное, седативное, противорвотное действие, обладает альфа-адреноблокирующей активностью.

Полагают, что антипсихотическое действие связано с блокадой постсинаптических допаминовых рецепторов в головном мозге. Противорвотное действие связано с блокадой хеморецепторной триггерной зоны продолговатого мозга. Седативное действие обусловлено непрямым ослаблением активности ретикулярной системы ствола головного мозга. Подавляет высвобождение большинства гормонов гипоталамуса и гипофиза.

МНН: Хлорпротиксен

ИЮПАК: (Z)-3-(2-хлоротиоксантен-9-илиден)-N, N-диметил-пропан-1-амин

Брутто-формула: 18H18ClNS

Молярная масса: 315,861 г/моль

Рис. 10 Структурная формула хлорпротиксена

Кеторолак - это рацемат, состоящий из эквимолярных количеств (R)-(+)- и (S)-(-)-5-бензоила-2,3-дигидро-1H-пирролизина-1-карбоновой кислоты. В то время как только (S)-(-) энантиомер является ингибитором ЦОГ-1 и ЦОГ-2, энантиомер (R)-(+) проявляет мощную обезболивающая активность. Нестероидный противовоспалительный препарат. В основном используется (как правило, в качестве соли трометамина) для его мощных обезболивающих свойств при краткосрочном лечении послеоперационной боли и в глазных каплях для облегчения глазного зуда, связанного с сезонным аллергическим конъюнктивитом.

МНН: Кеторолак

ИЮПАК: 5-бензоил-2,3-дигидро-1H-пирролизин-1-карбоновая кислота

Брутто-формула: C15H13NO3

Молярная масса: 255,27 г/моль

Рис. 11 Структурная формула кеторолака

1.2 Побочное действие и отравления препаратами взятых на анализ

Ставудин

Ставудин является хорошо известной причиной повреждения печени и регулярно упоминается в случае серии, вызванных лекарственными повреждениями печени и острой печеночной недостаточностью. Клинически очевидная гепатотоксичность из-за ставудина хорошо описана и обычно характеризуется молочным ацидозом, выраженным печеночный стеатозом и прогрессирующей синтетической дисфункцией печени. Эта форма повреждения печени обычно возникает только после 2-6 месяцев терапии и предшествует неспецифическими продромальными симптомами анорексии, тошноты, рвоты, диареи и слабости, за которыми следуют одышка и желтуха. Лактический ацидоз часто сопровождает повреждение печени и может быть преобладающей клинической особенностью. Желтуха возникает поздно, и ферменты сыворотки необычно слегка или умеренно повышены. Также могут возникнуть панкреатит, миопатия и невропатия. Липодистрофия часто присутствует. Впоследствии возникает холестаз, и изменение жира может перерасти в макровезикулярную картину. Поздние изменения включают дегенерацию воздушных клеток, тела Мэллори.

Гепатотоксичность, связанная с приемом ставудина, может быть стремительно смертельной, но потенциально обратимой при интенсивной поддержке и раннем снятии терапии. Существующая травма печени, женский пол, пожилой возраст, ожирение, употребление алкоголя и параллельная терапию диданозином, рибавирином и тенофовиром, повышают риск этого синдрома у пациентов, принимающих ставудин.

Ритонавир

Человеческий опыт острой передозировки ритонавиром ограничен. Один пациент в клинических испытаниях принимал ритонавир 1500 мг/сутки в течение двух дней. Пациент сообщил о парестезиях, которые разрешились после снижения дозы. Сообщалось о случаях почечной недостаточности с эозинофилией при передозировке ритонавиром. Было установлено, что приблизительная смертоносная доза более чем в 20 раз превышает связанную дозу человека у крыс и в 10 раз превышает соответствующую дозу человека у мышей. Пероральное значение LD у крыс составляет > 2500 мг/кг. Побочные эффекты ритонавира могут возникнуть в результате лекарственно-наркотических взаимодействий.

Лопинавир

Поскольку лопинавир доступен только в сочетании с ритонавиром, опыт с острой передозировкой лопинавира в изоляции ограничен. Риск, связанный с передозировки, более выражен у детей. В одном из отчетов о случае подробно описывался смертельный кардиогенный шок у младенца весом 2,1 кг после примерно 10-кратной передозировки перорального раствора Калетра, в то время как другие зарегистрированные реакции на передозировку у младенцев включают кардиомиопатию, молочный ацидоз и острую почечную недостаточность.

Определенная степень повышения аминотрансферазы в сыворотке крови наблюдается у высокой доли пациентов, принимающих лопинавир. Умеренные и суровые повышения уровня аминотрансферазы в сыворотке крови (> в 5 раз превышает верхний предел нормы) наблюдаются у 3%-10% пациентов. Эти ситуации, как правило, бессимптомны и самоограничены и могут разрешиться даже при продолжении приема лекарства. Клинически очевидное заболевание печени из-за лопинавира/ритонавира встречается, но встречается редко.

Травма печени, как правило, является самоограниченной, однако сообщалось о смертельных случаях. Кроме того, начало высокоактивной антиретровирусной терапии на основе лопинавира/ритонавира может привести к обострению основного хронического гепатита B или C. Чаще всего обострение проявляется через 2-12 месяцев после начала терапии

Саквинавир

Данные о передозировке сакинавиром ограничены. Острые токсичности или последствия не были отмечены у пациента, который принял 8000 мг. саквинавира в виде одной дозы, а второй субъект, проглатывающий 2,4 грамма в качестве одной дозы, испытывал боль в горле, которая длилась 6 часов и впоследствии разрешилась. Лечение передозировки должно состоять из симптоматических и поддерживающих мер.

Определенная степень повышения аминотрансферазы в сыворотке крови наблюдается у высокой доли пациентов, принимающих саквинавир, входящий в антиретровирусные схемы. Умеренные и тяжелые повышения уровня аминотрансферазы в сыворотке крови (> в 5 раз превышает верхний предел нормы) наблюдаются у 3%-10% пациентов, хотя показатели могут быть выше у пациентов с коинфекцией ВИЧ-ВГС. Ситуация может разрешиться даже при продолжении приема лекарства.

Клинически видимая травма печени от саквинавира редка, и клиническая картина повреждения печени, задержки и восстановления не была четко определена.

Пиразинамид

Комбинированная терапия туберкулеза с использованием пиразинамида и обычно связана с переходными и бессимптомными повышениями уровня аминотрансферазы в сыворотке крови. Эти высоты обычно менее чем в пять раз превышают верхний предел нормального диапазона. Поскольку пиразинамид используется только в сочетании с другими противотуберкулезными препаратами, его вклад в повышение ферментов в сыворотке крови не совсем ясен, но он часто инкриминируется в переходных повышении ферментов в сыворотке крови.

Начало травмы из-за пиразинамида, как правило, происходит через 4-8 недель и иногда становится очевидным только после остановки пиразинамида. Клинический синдром напоминает острый вирусный гепатит. Особенности гиперчувствительности (сыпь, лихорадка и эозинофилия) необычны, как и образование аутоантител.

Протионамид

Применение противотуберкулезных препаратов, таких как протионамид, сопровождается разнообразными побочными эффектами, многие из которых связаны с угнетением пиридоксальфосфата, который является коэнзимом, необходимым для разнообразных превращений аминокислот. В связи с этим развиваются различные нейропатии.

Линезолид

Является обратимым, неселективным ИМАО; ингибирование МАО вызывает повышение уровня нейромедиатора серотонина. Таким образом, линезолид потенциально может вызывать серотониновый синдром (гиперсеротонинергическое состояние, характеризующееся изменениями психического состояния, неврологическими нарушениями и расстройством вегетативной нервной системы), когда его применяют у пациентов с одним из следующих состояний:

1) Эндокринологически активные карциноидные опухоли

2) Использование препаратов с серотонинергической активностью

Такие препараты включают селективные ингибиторы обратного захвата серотонина, ИМАО (например, фенелзин, изокарбоксазид), трициклические антидепрессанты, агонисты серотонининовых 1В, 1D рецепторов (триптаны), меперидин, бупропион и буспирон.

Метронидазол

Побочные эффекты, которые могут быть обусловлены передозировкой, включают периферическую невропатию, судороги, темную мочу, металлический вкус во рту, тошноту, эпигастрический дискомфорт и головокружение, в дополнение к нейтропении. Конкретного противоядия от передозировки метронидазола нет.

Несмотря на широкое использование метронидазола, сообщалось только о редких случаях гепатотоксичности, и метронидазол не входит в число причин вызванного лекарственным повреждением печени и острой печеночной недостаточности в больших сериях случаев. Высокие дозы метронидазола, вводимые парентерально или при передозировке, могут вызвать повышение уровня аминотрансферазы в сыворотке крови, но они обычно являются самоограниченными и минимально симптоматическими. Острая, клинически видимая травма печени метронидазолом встречается редко.

Диклофенак

Нет специфической клинической картины отравления диклофенаком. Могут наблюдаться такие симптомы, как эпигастральная боль, тошнота, рвота, диарея, желудочно-кишечные кровотечения, головокружение, головная боль, возбуждение, сонливость, шум в ушах, нарушение ориентации, кома, обморок или судороги. В случае значительного отравления возможны острая почечная недостаточность и повреждение печени.

Хлорпротиксен

Симптомы передозировки включают затрудненное дыхание, головокружение, сонливость, дрожание мышц, дрочения, скованность или неконтролируемые движения, мелкие зрачки, необычное волнение и необычную усталость или слабость.

Побочные эффекты включают в себя повреждение печени, артралгию, анорексию, тошноту и рвоту, лихорадку, сидеробластную анемию, неблагоприятные последствия на механизм свертывания крови или целостность сосудов, а также реакции гиперчувствительности, такие как крапивница и кожная сыпь.

Кеторолак

Частота побочных эффектов увеличивается с более высокими дозами кеторолака. Наиболее часто наблюдаемые побочные эффекты у пациентов с частотой более 10% включают в себя: боли в животе, диспепсию, тошноту и головные боли. Большинство побочных эффектов, связанных с краткосрочным использованием, являются мягкими по своей природе, связаны с желудочно-кишечными путями и нервной системой, и возникают примерно у 39% пациентов. Общие симптомы передозировки кеторолака включают тошноту, рвоту, эпигастральную боль, желудочно-кишечное кровотечение, вялость и сонливость. Более редкие симптомы передозировки включают острую почечную недостаточность, гипертонию, респираторную депрессию и кому.

Перспективные исследования показывают, что до 1% пациентов, принимающих кеторолак, испытывают, по крайней мере, переходные повышения аминотрансферазы в сыворотке крови. Они могут разрешиться даже при продолжении препарата.



2. Практическая часть

2.1 Материалы и методы

Объекты исследования:

МНН	Торговое наименование	Форма выпуска, дозировка	Серия	Страна производитель
Кеторолак	Кетанов	Таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 10 мг	410519	Индия, ООО «Сан фармадьютикал индастриз Лтд.»
Саквинавир	Интерфаст	Таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 500 мг	301217	Россия, АО «Фармасинтез»
Хлорпротиксен	Хлорпротиксен	Таблетки, покртытые пленочной оболочкой, 15 мг	61118	Россия, ООО «Озон»
Ставудин	Ставудин	Капсулы твердые желатиновые, 30 мг	2531117	Россия, АО «Фармасинтез»
Протионамид	Протионамид	Таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 250 мг	141219	Россия, АО «Фармасинтез»
Пиразинамид	Пиразинамид	Таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 500 мг	051118	Россия, АО «Фармасинтез»
Диклофенак	Ортофен	Таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, 25 мг	420520	Россия, АО «ТАТХИМФАРМПРЕПАРАТЫ»
Метронидазол	Трихопол	Таблетки, 250 мг	670921	Польша SA “POLPHARMA”

Также в исследовании использовались субстанции следующих ЛВ: лопинавир, ритонавир, линезолид.

Материалы:

1.Камеры для хроматографии диаметром 12 см, высотой 20 см;9

2.Пластины хроматографические «Силуфол» 150Ч150 мм;

3.Фильтровальная бумага.

Посуда:

1.Колба круглодонная с притертой пробкой на 100 мл;

2.Градуированные пипетки;

3.Мерные цилиндры, градуированные на 50 и 100 мл;

4.Флаконы пенициллиновые с резиновыми пробками.

Реактивы:

1.Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) (ХЧ);

2.Хлороформ (ЧДА);

3.Раствор аммиака концентрированный 25% (ОСЧ - 23-5);

4.Спирт этиловый 95%;

5.Толуол (ХЧ);

6.Ацетон (ХЧ);

7.Метанол (ХЧ);

8.Уксусная кислота ледяная (ХЧ)

2.2 Методика проведения тонкослойной хроматографии

На линию старта пластинки «Силуфол» микропипеткой наносят от 0,15 до 0, 50 мл (в зависимости от вещества) спиртовых растворов лекарственных веществ. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей (системы I, II, III, IV, V, VI) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет до линии финиша, её вынимают из камеры, сушат на воздухе и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. Отмечаем пятна определяемых веществ и рассчитываем величину Rf.



2.3 Методика приготовления спиртовых растворов веществ

1 таблетку лекарственного средства (если покрыты пленкой, необходимо предварительно очистить от пленки) измельчали в ступке и количественно переносили в сухой пенициллиновый флакон с помощью 5 мл спирта этилового 95%, растворяли. Лекарственные вещества, взятые для анализа в виде субстанций отвешивали на аналитических весах по 0,05 г.

2.4 Результаты исследования

Несмотря на внедрение в практику химико-токсикологического анализа современных физико-химических методов, обладающих высокой чувствительностью и избирательностью, хроматография в тонком слое сорбента не утратила своего значения благодаря доступности, не сложному аппаратурному оснащению и простоте выполнения.

Тонкослойная хроматография является наиболее распространенным методом анализа лекарственных, наркотических веществ и их метаболитов в биологических объектах и на этапе скрининга служит преобладающим источником информации. Данный метод применяется в общем и частном скрининге.

Предварительно нами была определена хроматографическая подвижность исследуемых веществ в общих системах растворителей, наиболее часто применяемых для веществ основного характера в химико-токсикологическом анализе.

В качестве общих систем использовали:

I. Этилацетат-хлороформ-25% раствор аммиака (17: 2:1);

II. Хлороформ-этанол-25% раствор аммиака (30: 30: 1);

III. Толуол-ацетон-25% раствор аммиака (50: 50: 1);

IV. Этилацетат-ацетон-этанол-25% раствор аммиака (50: 45:4:1);

V. Этанол-25% раствор аммиака (40: 1);

VI. Этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17: 2:1).

Была определена хроматографическая подвижность данных веществ в общих системах растворителей, данные полученные при испытании указаны в таблице 1 и на рис. 12.

Таблица 1

Хроматографическая подвижность ЛВ в общих системах растворителей

Наименование лекарственного средства	Величина Rf cистема № I	Величина Rf cистема № II	Величина Rf cистема № III	Величина Rf cистема № IV	Величина Rf cистема № V	Величина Rf cистема № VI
Кетанов	-	0,3±0,01	0,18±0,01	-	0,56±0,01	-
Интерфаст	-	0,92±0,01	0,69±0,01	0,66±0,01	-	0,56±0,01
Амизолид	0,16±0,01	0,85±0,01	0,58±0,01	0,53±0,01	0,64±0,01	0,53±0,01
Лопинавир	0,18±0,01	0,95±0,01	0,22±0,01	0,71±0,01	0,68±0,01	0,59±0,01
Хлорпротиксен	0,69±0,01	0,89±0,01	0,62±0,01 0,75	0,63±0,01	0,59±0,01	0,87±0,01
Ставудин	0,83±0,01	0,84±0,01	0,5±0,01	0,61±0,01	0,68±0,01	0,33±0,01
Протионамид	0,48±0,01	0,74±0,01	0,68±0,01	0,86±0,01	0,76±0,01	0,84±0,01
Ортофен	-	0,39±0,01	-	0,26±0,01	0,83±0,01	0,14±0,01
Пиразенамид	0,36±0,01	0,74±0,01	0,54±0,01	0,72±0,01	0,59±0,01	0,69±0,01
Трихопол	0,21±0,01	0,71±0,01	0,54±0,01	0,63±0,01	0,58±0,01	0,56±0,01



Рис. 12 Хроматографическая подвижность ЛВ в системе этилацетат: ацетон: этанол: 25% раствор аммиака (50:45:4:1)

По данным представленным на рисунке 1 для разделения исследуемых лекарственных веществ наиболее оптимальной является система № IV - этилацетат: ацетон: этанол: 25% раствор аммиака (50:45:4:1). Выбор данной системы обусловлен тем, что пятна, исследуемых веществ на пластине правильной кругло - овальной формы, без хвостов, небольшого размера и находятся на оптимальном расстоянии от линии старта. В ходе исследования было выяснено, что значения Rf близко расположены друг к другу, что может помешать их идентификации. Поэтому на 2 этапе для увеличения значения ДRf между зонами исследуемых веществ, провели варьирование объемами компонентов выбранной подвижной фазы.

В первую очередь варьировали объемом аммиака. В связи с тем, что на 1 этапе кеторолак не смог проявиться в системе № IV, в дальнейших исследованиях участия он не принимал. А также, учитывая условия, что лопинавир чаще всего назначают в общих схемах антиретровирусной терапии с ритонавиром, было принято решение включить его в дальнейшие этапы исследования.

Рис. 13 Хроматографическая подвижность ЛВ при варьировании объемом раствора аммиака 25%

При проведении испытания было выяснено, что при увеличении объема аммиака в системе подвижность ЛВ не увеличилась, а стало наблюдаться наложение зон адсорбции. При уменьшении объема аммиака до 0,5 мл подвижность также не улучшилась. В связи с этим, оптимальным количеством аммиака 25% является 1 мл, так как наблюдается наилучшее разделение веществ.

Далее в анализе в системе заменили аммиак на ледяную уксусную кислоту, что связано с проявлением веществами и основных, и кислотных свойств, а это в свою очередь может отразиться на разделительной способности веществ. Результаты, полученные при испытании отображены на рисунке 14.



Рис. 14 Хроматографическая подвижность ЛВ при варьировании объемом ледяной уксусной кислоты

Видно, что при варьировании объемом кислоты уксусной ледяной улучшилась разделительная способность веществ, в частности при добавлении 1 мл кислоты увеличилось расстояние между зонами адсорбции, что в свою очередь, позволяет нам сделать заключение о том, что для хроматографического анализа представленных веществ необходима кислая рН среды. Поэтому дальнейшие испытания проводили в присутствии кислоты в количестве 1 мл.

Далее варьировали количеством этилацетата. Результаты разделения ЛВ представлены на рисунке 15.



Рис. 15 Хроматографическая подвижность ЛВ при варьировании объемом этилацетатом

Исходя из представленных данных на рисунке 4 наилучшее разделение ЛВ наблюдается при введении в систему 45 мл этилацетата, наблюдается максимальное значение ДRf между зонами.

Следующим этапом испытания стало варьирование объемом ацетона, полученные данные представлены на рисунке 16.



Рис. 16 Хроматографическая подвижность ЛВ при варьировании ацетоном в системе этилацетат: ацетон: этанол: ледяная уксусная кислота (40:45:4:1)

По полученным данным было установлено, что наиболее рациональным количеством ацетона является 45 мл, так как при уменьшении или увеличении объема ацетона наблюдается наложение зон адсорбции и их сближение.

Также исходя из данных на рисунке 16 можно сделать вывод, что при хроматографировании диклофенака при данных условиях, обнаружить его при детектировании под УФ-лампой не представилось возможным.

На последнем этапе исследования варьировали количеством этанола в системе.



Рис. 17 Хроматографическая подвижность ЛВ при варьировании объемом этанола 95% в системе этилацетат: ацетон: этанол: ледяная уксусная кислота (40:40:4:1)

Исходя из полученных данных на рисунке 6 можно сделать вывод, что оптимальным объемом этанола для улучшения хроматографической подвижности ЛВ является 6 мл. При этом же значении на хроматограммах был обнаружен диклофенак.



Заключение

Таким образом была подобрана оптимальная система растворителей этилацетат: ацетон: этанол: ледяная уксусная кислота (40:45:6:1) для хроматографического разделения антиретровирусных препаратов в сочетании с препаратами из других фармакологических групп.

Стоит отметить, что возможны и другие сочетания препаратов как изученных нами, так и других фармакологических групп.



Список литературы

1.Арльт, А. В. и др. Клиническая фармакология лекарственных средств, для терапии ВИЧ-инфекции в образовательном процессе / А. В. Арльт // Международный журнал экспериментального образования. 2012. №. 8. С. 43 - 47.

2.Березкин В. Г., Ашрапова И. И. Воспроизведение первой работы по тонкослойной хроматографии Н.А. Измайлова и М.С. Шрайбер / В. Г. Березкин, И. И. Ашрапова // Научное наследие Н.А. Измайлова и актуальные проблемы физической химии. 2007. Т.5, № 9. С. 168-184.

3.Дегтерев, Е. В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе наркотических и сильнодействующих веществ / Е. В. Дегтерев, А. В. Гаевский, Е. А. Зенкова // Химико - фармацевтический журнал. 1998. Т.32, №8. С. 54-58.Государственный реестр лекарственных средств.

4.Илларионова Е. А. Совершенствование спектрофотометрического и хроматографического методов анализа азотсодержащих лекарственных средств: дис.... д. х. наук: защищена 21.01.2005: утв. 13.05.2005 / Е. А. Илларионова. М.: Изд-во Российского университета дружбы народов, 2004. 379 с.

5.Кирилюк А.А., Петрище Т.Л. Анализ рынка антиретровирусных лекарственных средств США, Европейского союза, Российской Федерации и республики Беларусь /Современные проблемы здравоохранения и медицинской статистики// 2015. №. 2. С. 1-10.

6. Лазицкая А. М. Тонкослойная хроматография в анализе психотропных лекарственных средств при комбинированных отравлениях / А. М. Лазицкая, Н.

7.Мазус А. И., Каминский Г.Д., Зимина В.Н. и др. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению ВИЧ-инфекции взрослых. М.; 2014.

8.Машковский М. Д. Лекарственные средства. - 16-е издание. М.: Новая волна, 2012. 1216 с.

9. Поспелова, А.А. Обращенно-фазная тонкослойная хроматография в скрининге ряда психоактивных лекарственных веществ / А.А. Поспелова // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа материалы Рос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. 2009. С. 50-53.

10. Фармацевтическая химия: учебник / под ред. Г. В Раменской. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2015. 258 с.

11. Хабриева Р. У. Токсикологическая химия \ Р. У. Хабриева, Н.И. Калетиной. М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2010. 167 с.

12. Харкевич Д.А. Фармакология. Учебник для ВУЗов. 10-е изд. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 908 с.

13. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. М.: Мир, 1980. Т.2. С. 504 - 509.

14. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. Планарная хроматография. М.: Научный совет РАН по хроматографии, 1999. Т.1. 405 с., Т.2. 348 с.

15. Прендергаст Э., Гибб Д., Кроули Д. Классификация механизмов действия антиретровирусных препаратов и схемы АРТ / Э. Прендергаст, Д. Гибб, Д. Кроули // Выездной обучающий семинар по лечению детей с ВИЧ-инфекцией для врачей специалистов Украины, Белоруссии и Молдовы. 2013. С. 6 - 9.

Размещено на Allbest.ru

...