Организация ветеринарной работы на ферме

в) серологических исследований;

г) исследований кожевенного сырья на сибирскую язву;

д) паразитологических исследований;

е) химических, химико-токсикологических исследований;

ж) радиологических исследований;

з) микологических исследований;

и) гематологических исследований;

к) биохимических исследований;

л) гистологических исследований;

м) приема патологического и других материалов в лаборатории;

н) вскрытия трупов животных и обработки материала, поступившего на исследование (вскрывочная, секционная);

о) содержания здоровых лабораторных животных;

п) заражения подопытных животных, их содержания, наблюдения за ними;

р) мойки, обеззараживания (автоклавирования) посуды, инвентаря и других предметов (моечно-дезинфекционная);

с) приготовления питательных сред, растворов и др.;

т) производства биологических препаратов, микроэлементов, лекарственных средств.

Во всех отделах (подразделениях), в которых проводится работа с культурами возбудителей инфекционных болезней (бактерии, вирусы, грибы), обязательно устройство и оборудование изолированных боксов.

Полы в помещениях вирусологического, бактериологического, серологического, химического, радиологического и производственного отделов и в коридорах должны быть из водонепроницаемого материала (линолеум или пластик).

Полы во вскрывочной, автоклавной, моечной, равно как и в помещениях вивария, должны быть водонепроницаемые (бетонные, цементные или плиточные), с отмазкой и иметь уклон к отверстиям или желобам канализации.

Стены помещений вирусологического и производственного отделов, вскрывочной, моечной, автоклавной и вивария от пола до потолка или на высоту не ниже 2 м должны быть покрыты глазурованной плиткой. Потолки в указанных помещениях, а также стены и потолки в остальных помещениях и коридорах окрашиваются глифталевой или масляной краской. Стыки отделки стен, пола и потолка в виварии, вскрывочной, моечной и автоклавной должны иметь закругления (галтели) для удобства уборки и санитарной обработки. Двери во всех производственных помещениях должны быть гладкими, без выступов, окрашенными масляной пли глифталевой краской.

Все помещения лаборатории должны иметь центральное отопление естественное и искусственное освещение. Светильники и арматура закрытого типа должны быть доступны для влажной очистки. Естественное и искусственное освещение производственных и бытовых помещений лаборатории должно соответствовать требованиям санитарных норм и правил. Умывальники в производственных помещениях необходимо оборудовать смесителями холодной и горячей воды. Непосредственно возле раковин устанавливают бутыли с тубусом, в которых должен постоянно быть дезинфицирующий раствор. Поверхность лабораторных столов покрывают пластикой.

корм обеззараживание препарат животное

Тема 2 «Способы взятия патматериала у животного. Методы консервирования, упаковки и транспортировки патматериала. Сопроводительная документация»

Брать материал нужно в стерильную посуду, стерильным инструментом. Место взятия материала на трупе прижигают горячей металлической пластинкой, а на больном животном это место после выстригания очищают ватным тампоном, смоченным спиртом.

При взятии от больных животных крови для исследования мазков на кровепаразитов дополнительно еще протирают указанное место ватой, смоченной эфиром. В зависимости от характера заболевания берут для исследования тот или иной патологический материал.

Жидкий патологический материал (кровь, синовиальную жидкость, желчь, эксудат, слизь, гной и пр.) насасывают в пастеровские пипетки, которые запаивают с обоих кондов. Тот же материал для целей микроскопического исследования наносят на чистые предметные стекла, которые затем подсушивают на воздухе и попарно связывают мазками внутрь, устранив их соприкосновение перекладинами из спичек.

Гной из глубоких полостей берут стерильным ватным тампоном на куске проволоки (или лучине), вмонтированном в пробирку с ватной пробкой.

Бронхиальную слизь (при исследовании на туберкулез КРС) берут после прокола трахеи трахеотубусом, введенными через канюлю последнего стерильным шелковым тампоном на проволоке до бифуркации трахеи (вызывает кашель). Рану животного по окончании операции смазывают настойкой йода.

Кал (из прямой кишки) кладут в стерильные пробирки или стеклянные банки, закрываемые стерильными пробками или бумагой. Аммоновы рога (бешенство), продолговатый мозг (болезнь Ауески), измененные части печени, селезенки, почек, мышц, лимфатические узлы кишечника (после его промывания водой), омертвевшие участки конечностей, губ, языка (после промывания, высушивания ватой и отделения острой ложкой до здоровых тканей) укладывают в банки и заливают 30- проц. водным раствором глицерина.

Материал для гистологических целей вырезают тонкими (не толще 1--2 см) пластинками и заливают десятикратным количеством 10-проц. водного раствора формалина.

Банки герметически закупоривают пробками, которые закрепляют проволокой, шпагатом, заливают сургучом, менделеевской замазкой или смесью юрка с парафином.

Трубчатые кости отделяют от трупа без повреждения их концов, освобождают от мышц и сухожилий и завертывают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, упаковывают в плотный ящик. Ухо (для исследования на сибирскую язву) берут с той стороны, на которой труп лежит. Предварительно его перевязывают у основания в двух местах шпагатом и отрезают между перевязками. Meсто отреза на трупе прижигают огнем. Ухо сначала завертывают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, а затем в пергаментную бумагу. Упаковывают в плотный ящик.

Трупы птиц, поросят, ягнят, а при возможности и жеребят, телят, плоды животных доставляют в лабораторию в целом виде; Трупы и плоды животных предварительно завертывают в мешковину, смоченную раствором фенола, или креолина, или лизола, а затем упаковывают в металлический или плотный деревянный ящик со стружками или опилками.

Пчелиный сот с погибшим расплодом укладывают в деревянный ящик на планки, не допускающие соприкосновения сота со дном и крышкой. Погибших пчел и маток пересылают в спичечных коробках и в банках, залитых медом. Патологический материал пересылают в ближайшую ветеринарную лабораторию спешно -- нарочным или почтой.

Упаковка должна гарантировать невозможность распространения инфекции. На посылке делают надпись: «Верх».

При подозрении на особо опасные инфекции (сибирская язва, сап, шумящий карбункул, туляремия, бруцеллез, перипневмония, чума КРС, свиней и птиц, ящур, инфекционная анемия; энцефаломиелит и бешенство) материал после взятия в стеклянную посуду заключают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а затем упаковывают в деревянный ящик.

При отправке нарочным допускается герметически упакованную посуду с патологическим материалом опечатывать, завертывать в вату и вкладывать в деревянный ящик.

В лабораторию направляют вместе с посылкой:

А) копию акта взятия материала с указанием, какой материал взят, сколько и в накую посуду, а также род упаковки;

Б) копию сопроводительного письма, в котором указывается:

1) адрес лаборатории;

2) название и адрес хозяйства;

3) количество животных по каждому виду;

4) сведения о кормлении и характеристика содержания и ухода за животными;

5) эпизоотическая обстановка хозяйства в прошлом и настоящем;

6) цифровые данные о ходе заболевания по дням (павших, больных и прирезанных);

7) лечение и результаты;

8) какие и когда производились предохранительные или лечебные прививки;

9) вид и возраст павшего животного, клиника;

10) что направляется для исследования (перечислить);

11) основные патологоанатомические изменения, обнаруженные при вскрытии трупов на месте в хозяйстве, и данные вскрытия трупа, от которого посылается на исследование материал;

12) предполагаемая причина падежа;

13) на какие заболевания требуется произвести исследование;

14) дополнительные сведения;

15) должность ветработника;

16) дата

Тема 3 «Подготовка лабораторной посуды к работе»

Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллированной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф.

Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с притертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.

Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно- марлевыми пробками, завертывают по 10-- 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязывают от попадания пыли.

В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полоской бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.

В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специальные пеналы Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.

Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясо-пептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.

Стерилизация -- Это полное уничтожение всех микроорганизмов (патогенных и сапрофитных) на стерилизуемом объекте.

Стерилизацию проводят различными методами: кипячением, паром под давлением (в автоклавах), текучим паром (в аппаратах Коха), сухим жаром (в печах Пастера), фильтрованием материала через бактериальные фильтры, прокаливанием на пламени горелки и др.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторах. Кипячением обычно стерилизуют инструменты в течение 30-40 мин. Однако при этом методе не всегда достигают полного уничтожения микробов. Споры некоторых микроорганизмов выдерживают кипячение более 3 ч.

Прокаливание на пламени применяют для стерилизации бактериологических петель, игл, скальпелей, ножниц, пинцетов и др.

Пастеризация - Это термическая обработка продуктов при температуре ниже 100 °С с последующим быстрым охлаждением до 6-9 °С При пастеризации погибают неспоровые микроорганизмы, уменьшается общее количество микробов. Пастеризацию проводят при различных режимах: длительная при 63-65 "С в течение 20-30 мин; кратковременная при 75 °С от нескольких секунд до 5 мин; моментальная при 90-93 °С без выдержки. Охлаждение стерилизуемого продукта необходимо для того, чтобы предотвратить прорастание в вегетативные клетки спор, сохранивших жизнеспособность после однократного прогревания

Тема 4 «Приготовление питательных сред и дополнительных растворов»

Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятят 30 минут 1-2 % растворе хлороводородной кислоты, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.

Сырьё

Исходным сырьём для приготовления большинства сред служат продукты животного и растительного происхождения, а также готовые полуфабрикаты.

Этапы приготовления

1. варка: среды варят на открытом огне, водяной бане, автоклаве или варочных котлах.

2. установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.

3. осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.

4. фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена -- они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

5. разливают среды не более чем на ѕ емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

6. стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.

7. контроль

· для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.

· химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.

· для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды

Тема 5 «Методы дезинфекции и стерилизации»

Стерилизация может производиться физическим (термическим) или химическим методом. Физический метод подразумевает кипячение в дистиллированной воде или же обработку в специальном приборе - паровом, инфракрасном или воздушном стерилизаторе.

Стерилизация химическим методом подразумевает обработку окисью этилена или ее смесью с другими компонентами, формальдегидом или озоном (газовый метод), парами перекиси водорода в сочетании с их низкотемпературной плазмой (плазменный), растворами химических средств (жидкостный).

Методы дезинфекции изделий медицинского назначения также подразделяются на физические (кипячение, обработка паром, обработка горячим воздухом) и химические.

Дезинфекция химическим методом заключается в применении специализированных химических препаратов-дезинфектантов. При проведении дезинфекции изделий медицинского назначения преимущество, как правило, отдается химическому методу. Объясняется это тем, что использование физических методов может привести к коррозии инструментов, потемнению зеркал и затуплению острых предметов.

Тема 6 «Освоение микроскопических методов исследований»

При любых микроисследованиях необходимо именно точные сведения о морфологических особенностях интересующего нас организма. Эти сведения не могут быть получены иначе, как путем изучения данного организма под микроскопом.

Целью различных видов микроскопии являются дальнейшее изучение морфологии вирусов и дифференциальная диагностика инфекционных болезней. По схеме строения электронный микроскоп аналогичен световому. В отличие от светового в электронных микроскопах изображение получается с помощью потока электронов. Препарат и его изображение проецируется на люминесцентный экран. Источником электронов является электронная пушка (вольфрамовая нить), нагреваемая электротоком. Электроны ускоряются и направляются вниз по колонке, проходя через несколько магнитных линз (конденсорная, объективная, проекционная). На экране возникает видимое изображение объекта, которое можно сфотографировать или просматривать на экране монитора.

Чтобы предотвратить поглощение электронов воздухом, из микроскопа откачивают воздух вакуум - насосом.

Основные части микроскопа: колонка, панель управления, пишущее устройство, вакуумная система, соединительные кабели. В нижней части электронного микроскопа расположены масляные и диффузные насосы.

Максимальная разрешающая способность электронного микроскопа 2А°. По характеру исследования объектов различают микроскопы просвечивающего типа, сканирующие, эмиссионные, теневые.

При работе с электронным микроскопом важное значение имеет подготовка препаратов. Для просвечивающего электронного микроскопа исследуемые объекты должны быть в виде тонких срезов или вирусных суспензий. Объекты помещают на медные сеточки с подложками.

Методы подготовки препаратов: метод негативного контрастирования, метод отпечатков, метод напыления, метод ультратонких срезов.

Материалом для электронно-микроскопических исследований вирусов могут быть смывы со слизистых оболочек, содержимое кишечника, кожные поражения, корочки, кусочки органов и тканей, аллантоисная жидкость куриного эмбриона, вируссодержащая культуральная жидкость культуры клеток. При подготовке препаратов большое значение имеет концентрация вируса в материале и степень его контаминации балластными веществами. В зависимости от этих факторов и выбирают методику подготовки исходного материала.

Тема 7 «Участие в бактериологических и (или) вирусологических исследованиях

В период прохождения учебной практики на базе хозяйства бактериологические и вирусологические исследования не проводились.

Тема 8 «Кормление и уход за лабораторными животными. Биопроба. Аллергическая проба»

Организация в научно-исследовательском институте (станции, лаборатории), учебном заведении или ином учреждении вивария для разведения и содержания опытных (лабораторных) животных, используемых в экспериментальных работах при различных научных исследованиях, а также в питомниках, поставляющих этих животных учреждениям, допускается лишь с ведома органов или учреждений ветеринарного надзора города (района).

Администрация учреждения обязана обеспечить обслуживающий персонал вивария спецодеждой и спецобувью, полотенцами, мылом, дезинфицирующим раствором, аптечкой и следить за выполнением работниками вивария правил личной гигиены. В вивариях, где проводятся опыты с особо опасными инфекциями, спецодежду стерилизуют в автоклаве.

В виварии необходимо вести пронумерованный, прошнурованный и заверенный печатью ветеринарного надзора журнал ветеринарного наблюдения за животными вивария, а также иметь ветеринарно-санитарную книгу для записи предложений по устранению недостатков, выявленных представителями органов ветеринарного надзора при проверке ветеринарного состояния вивария (питомника).

В питомнике опытных (лабораторных) животных, помимо основных помещений, а также вольеров для выращивания и содержания животных, необходимо иметь изолятор для заболевших и подозрительных по заболеванию животных, с изолированным помещением для вскрытия трупов.

Каждый виварий должен быть обеспечен следующими производственными помещениями, построенными по проектам, согласованным с органами ветеринарного надзора:

а) комнатой для обслуживающего персонала с индивидуальными шкафчиками для спецодежды;

б) помещением для карантинирования вновь поступающих в виварий (питомник) животных;

в) изолятором;

г) помещением для содержания здоровых животных, разделенным на секции по видам животных;

д) операционной при виварии или боксом для работы исследователей с незараженными животными, с помещением для вскрытия животных и холодильником для временного хранения трупов;

е) изолированными помещениями для содержания подопытных животных, зараженных культурами возбудителей особо опасных инфекций или радиоактивными веществами (раздельно), с операционной при каждом изолированном помещении, имеющей холодильник и необходимое оборудование для заражения и вскрытия животных;

ж) кухней для приготовления кормов (кухня должна быть оборудована плитой и холодильником);

з) помещением типа пропускника для мойки горячей водой, дезинфекции и сушки клеток и другого инвентаря;

и) печью для сжигания трупов животных.

В вивариях научно-исследовательских институтов, где работают с культурами возбудителей особо опасных инфекций и радиоактивными веществами, а также в других случаях, определяемых органами ветеринарного надзора и санэпидстанцией, и в питомниках опытных животных оборудуют душевые помещения пропускного типа с гардеробом для личной одежды и спецодежды обслуживающего персонала.

Территорию вокруг вивария (питомника) асфальтируют и ограждают глухим сплошным забором.

Помещения вивария должны отвечать следующим требованиям:

а) полы в помещениях должны быть водонепроницаемые (из метлахской плитки, бетонированные или асфальтированные), стены на высоту двух метров покрывают глазурованной плиткой или окрашивают масляной краской. В операционной покрывают масляной краской стены выше панели и потолок;

б) все помещения должны быть оборудованы канализацией, водопроводом и приточно-вытяжной вентиляцией. Производственные и сточные воды должны подвергаться обеззараживанию перед их поступлением в общую канализацию.

При входе на территорию вивария и в каждое из его помещений должны быть устроены в полу дезинфекционные барьеры на ширину входа, длиной 100 см, глубиной 10 см для обеззараживания обуви.

Вход посторонним лицам в помещение вивария, карантина и изолятора запрещается.

Все поступающие в виварий животные подлежат обязательному ветеринарному осмотру с применением метода люминесцентной диагностики на микроспорию, а также при необходимости - выборочному лабораторному исследованию на бактерионосительство.

Все вновь поступающие животные подлежат карантинированию: собаки - в течение 30 дней, белые мыши и крысы - 10 дней, все остальные животные - в течение 21 дня.

По окончании установленного срока карантина животных переводят по заключению ветеринарного врача в общие помещения вивария.

Животных содержат в клетках или боксах. Клетки устанавливают на стеллажах на расстоянии 30 - 50 см от стен. Между стеллажами оставляют проход шириной не менее одного метра.

В помещениях вивария, боксах и клетках следует поддерживать постоянную чистоту, истреблять мух и проводить регулярную дезинфекцию. Навоз в боксах и клетках убирают ежедневно.

Один раз в месяц проводят санитарный день, в течение которого наводят дополнительный к ежедневному санитарный порядок в виварии. Один раз в квартал проводят профилактическую очистку и дезинфекцию всей территории вивария.

Животных, зараженных культурами возбудителей заразных болезней, содержат обязательно в изолированных боксах (отдельных помещениях) с отдельным входом.

Навоз от павших животных, а также от животных, находящихся под опытом, обязательно сжигают в печи под наблюдением выделенного администрацией ответственного лица.

Навоз от здоровых животных, не находящихся под опытом, сжигают или вывозят по указанию органов ветеринарного надзора для использования в качестве удобрения.

Трупы животных, убитых или павших, собирают в специальный, закрывающийся наглухо водонепроницаемый ящик.

Биопроба- заражение культурой возбудителя или патологическим материалом подопытных животных в процессе лабораторных исследований с целью диагностики, экспериментального воспроизведения инфекционных болезней, выделения чистой культуры возбудителя, изучения его патогенности и вирулентности.

Аллергические пробы - биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.

При многих инфекционных заболеваниях за счет активации клеточного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагностики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, микозов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфичностью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.

Все аллергические пробы подразделяют на две группы -- пробы in vivo и in vitro.

К первой группе (in vivo)относятся кожные пробы, осуществляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 -- 48 ч) типов.

Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсибилизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.

Для проведения аллергических проб используют аллергены -- диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные аллергены, используемые в диагностике инфекционных заболеваний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.

Тема 9 «Проведение бактериологического анализа патологического материала»

Выбор материала для лабораторного исследования определяется локализацией патологического процесса, особенностями патогенеза болезни и биологическими свойствами возбудителя.

Успех бактериологического исследования зависит от правильности забора материала. Патологический материал для бактериологического исследования рекомендуется брать у животного до начала специфического лечения, так как под влиянием антибиотиков, иммунной сыворотки и других лечебных средств патогенные микробы изменяются и утрачивают способность к росту на искусственных питательных средах.

Тема 10 «Проведение вирусологического анализа патологического материала»

О размножении вирусов в культуре клеток определяют по следующим признакам::

- по характеру специфических поражений оболочек и тела эмбриона.

- по феномену гемагглютинации. Склеивание эритроцитов под действием гемагглютинина вирусов

- по цитопатическому действию вируса (ЦПД). Морфологические изменения клеток, вплоть до их гибели.

- по образованию в клетках включений.

- по образованию бляшек. Титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц в 1 мл.

- по феномену гемадсорбции. Клеточные культуры, зараженные вирусом, способны адсорбировать на своей поверхности эритроциты.

- по «цветной» реакции. При репродукции вирусов в культуре клеток нарушается их нормальный метаболизм и среда сохраняет свой первоначальный цвет.

Тема 11 «Проведение серологического анализа»

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков) в сыворотке крови, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови к определенному виду вирусов или бактерий, а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал: В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от животного: сыворотка крови, слюна, фекальные массы

Основные методы серологической диагностики:

1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген - антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе. Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов: + очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии ++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком +++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки.Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++. Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

2. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Принцип реакции основывается на способности эритроцитов концентрировать антиген на своей поверхности и склеиваться, образуя видимый осадок, при вступлении в контакт со специфическими антителами. Иногда РНГА используется для подтверждения результатов ИФА, что помогает повысить достоверность диагностики паразитарных заболеваний. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит: (Д+) эритроциты барана, чувствительные к специфическому антигену, (Д-) эритроциты без антигена, (Э) сухие эритроциты барана, (К+) диагностическую агглютинирующую сыворотку - положительный контрольный тест, (К-) нормальная сыворотка человека - отрицательный тест, реагент, применяемый для подготовки раствора, используемого при разведении сыворотки. Постановка реакции происходит в несколько этапов, строго следующих один за другим. Вначале подготавливают необходимые растворы, затем готовят сыворотки и их контрольные образцы, после чего данные образцы наносятся на планшеты. Далее следует нанесение на планшеты сенсибилизированных (Д+) и несенсибилизированных (Д-) эритроцитов барана. Данные препараты инкубируются, и через некоторое время производится учёт результатов. Результаты проведённой реакции учитываются по четырёх бальной системе. Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок: - отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки» + слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки ++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов +++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами ++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок. Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++, то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

3. Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип метода заключается в своеобразном взаимодействии антитела с антигеном. Одним из обязательных условий реакции является предварительная фиксация одного из её компонентов, то есть антигена или антитела, на твёрдых планшетах. Затем, при помощи ферментной метки обнаруживают возникнувшие комплексы антиген - антитело благодаря изменению оптической плотности первоначальной смеси (субстрата), что проявляется изменением интенсивности её окраски. ИФА свойственны некоторые преимущества перед остальными серологическими методами, например, данная реакция является наиболее чувствительной, в тестах используются универсальные реагенты, остающиеся стабильными не менее 6 месяцев, автоматизированный процесс учёта результатов реакции. Набор, необходимый для проведения реакции, содержит следующие компоненты: паразитарный антиген, специфические сывороточные антитела, конъюгат, планшета с зафиксированным на ней специфическим паразитарным антигеном, контрольные сыворотки. Постановка реакции ИФА происходит в несколько этапов: вначале производится приготовление необходимых растворов, затем готовятся исследуемые образцы сывороток, а также контрольные сыворотки, позже следует нанесение приготовленных образцов сыворотки и контрольных сывороток на твёрдофазные носители, планшеты инкубируются, промываются и, только после проведённых процедур в лунки планшет вносится конъюгат. Через некоторое время он удаляется путём промывания лунок. На завершающем этапе в лунки вносится субстратная смесь и выдерживается в тёмном месте при комнатной температуре. Оценка результатов проводится автоматически при помощи специальных измерительных приборов, в некоторых случаях допускается визуальный учёт результатов проведённой реакции.

Размещено на Allbest.ru

...