FIP. Современные подходы к диагностике инфекционного перитонита кошек
Установление диагностической ценности детекции антикоронавирусных антител методом иммуноферментного анализа. Результаты определения титров антител к коронавирусу в сыворотках крови кошек. Использование метода иммуноблоттинга для диагностики перитонита.
Рубрика | Сельское, лесное хозяйство и землепользование |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 22.06.2016 |
Размер файла | 418,1 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
FIP. Современные подходы к диагностике инфекционного перитонита кошек
Терехова Ю.О.
Научный сотрудник лаборатории диагностики, терапии и профилактики вирусных болезней АНО "НИИ ДПБ"
Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis, FIP) Ї тяжелое заболевание животных семейства кошачьих, приводящее к летальному исходу. Возбудитель ИПК входит в состав группы таксономически близких коронавирусов, включающую вирус энтерита кошек (ЭК), трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) и коронавирус собак (CCV). Имеются данные, что вирус ИПК образуется в результате мутации авирулентного кишечного вируса ЭК. При этом вирус приобретает вирулентность, способность поражать моноциты и макрофаги и вызывать тяжелый перитонит. Сложность серологической диагностики ИПК связана с высоким антигенным сходством коронавирусов, в частности вирусов ЭК и ИПК и, соответственно, практически идентичным спектром генерируемых антител. Цель работы заключалась в определении диагностической ценности детекции антикоронавирусных антител методами иммуноферментного анализа (ИФА) и иммуноблоттинга.
Объектом исследования являлись сыворотки крови от здоровых кошек, от подозрительных по заболеванию и клинически больных животных. Сыворотки получали из ветеринарных клиник, а также частных питомников и приютов. Диагноз подтверждали клиническими или патолого-анатомическими исследованиями.
В первую очередь была сконструирована тест-система для определения антител к коронавирусу в формате непрямого ИФА. В качестве антигенов использовали очищенные в градиенте плотности сахарозы вирусы ИПК и ТГС. Показана 100% корреляция иммунохимической специфичности антител сероположительных сывороток кошек к вирусам ИПК и ТГС. В связи с этим, далее в качестве антигена использовали вирус ТГС, культивирование которого хорошо отлажено в нашей лаборатории. Опосредованную сорбцию вирусных антигенов на планшет осуществляли с помощью специфических моноклональных антител к вирусу ТГС. После инкубации с исследуемыми сыворотками, вирус-специфические сывороточные антитела детектировали с помощью специально полученных поликлональных антител к IgG кошки, конъюгированных с пероксидазой хрена.
На первом этапе исследования проводили скрининговое исследование сывороток крови в одном разведении (1/200) для выявления животных с антителами к коронавирусу с помощью разработанного иммуноферментного метода. Затем отобранные положительные сыворотки титровали с разведениями от 1/200 до 1/25600.
При исследовании в таком алгоритме (первичный скрининг с последующим титрованием) 131 сыворотки кошек индивидуального содержания (пациенты ветеринарных клиник) выявлены следующие закономерности (Таблица 1).
Таблица 1
Результаты определения титров антител к коронавирусу в сыворотках крови кошек
У здоровых животных титр антител в ИФА не превышал значения 1:400 (46% животных). Часть животных (23%) без клинических признаков заболевания имела титр антител от 1:800 до 1:1600, что может свидетельствовать об инфицированности как вирусом ИПК, так и вирусом ЭК. Высокие (? 1:3200) титры антител к коронавирусу, определяемые методом ИФА, выявлены только у животных с клиническими признаками ИПК (29% животных). Следует отметить, что у 2% животных, уровни определяемых в ИФА антител были достаточно низкими (? 1:400), однако наблюдалась проявление клинической картины ИПК. Такой эффект может быть связан с наличием в организме большого количества вируса, который блокирует антитела и препятствует связыванию антител с вирусным антигеном, сорбированным на планшете.
Нами были также исследованы 120 животных из приюта и 22 - из питомника. Характерно, что у 52% животных методом ИФА выявлен довольно высокий уровень антител к коронавирусу (1/800 - 1/1600). Хотя клинических признаков заболевания ни у одного животного не было, формально все они находятся в "группе риска".
Т.е., при скученном содержании животных, по-видимому, имеет место латентное вирусоносительство из-за которого общий уровень антител выше, чем у животных при индивидуальном содержании.
Из полученных данных следует, что более важным прогностическим и диагностическим показателем является не сам факт наличия антител к коронавирусу, а их высокие титры с тенденцией быстрого увеличения, что прямо коррелирует с тяжестью клинического проявления болезни.
Мы исследовали также возможность использования метода иммуноблоттинга в качестве подтверждающего метода для диагностики ИПК. Показано, что в сыворотках крови с низким титром вирус-специфических антител (?1:400) в ИФА, методом иммуноблоттинга выявлялся только один белок N вируса ТГС, однако по мере повышения титров антикоронавирусных антител увеличивался и спектр детектируемых вирусных антигенов.
Сыворотки крови с высокими титрами антител (?1:3200) детектировали все основные структурные белки коронавирусов (N, S, M) (Рис.1).
Таким образом, при сопоставлении результатов иммуноблоттинга и ИФА с анамнезом и патоморфологической картиной можно заключить, что изменение специфичности сыворотки крови по отношению к основным структурным белкам коронавируса имеет важное значение при постановке диагноза ИПК. Так, при выявлении антител к высокомолекулярным белкам (М.м. > 85 кД) коронавируса и прежде всего к S- белку в сыворотке крови кошек, диагноз на ИПК можно считать подтвержденным. Детекция одного N-белка (М.м. 45 кД) коронавируса в иммуноблоттинге не позволяет поставить диагноз на ИПК и его можно считать отрицательным.
Рис. 1. Иммуноблоттинг для выявления антител к коронавирусу.
А - окраска суммарных белков в геле Кумасси G-250: 1 - маркеры молекулярной массы 200, 150, 120, 100, 85, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10 кД, 2 - вирус ТГС, стрелками отмечено положение основных белков вируса ТГС;
Б - обработка вирусных антигенов после электропереноса на ПВДФ мембрану сыворотками крови кошек: 3 - сыворотка крови клинически здоровой кошки, 4…13 - сыворотки крови, положительные в ИФА, титр 1:200 (4, 5), титр 1:400 (6, 7), титр 1:800 (8), титр 1:1600 (9), титр 1:3200 (10, 11), титр 1:6400 (12, 13).
Однако наличие антител к N-белку совместно с антителами к другим низкомолекулярным белкам (М.м. < 45 кД) может свидетельствовать о возможном инфицировании животного и в этом случае, как и в случае ИФА, анализ следует повторить через 1-2 недели.
Показано также, что у животных с высокими титрами антител (? 1:3200), достоверно повышен уровень суммарного белка в крови и снижено соотношение альбумин/глобулин (Рис.2). Изменения уровней билирубина и альбумина не выявлено.
Рис.2. Изменение уровня общего белка в крови (А) и соотношения альбумин/глобулин (Б) у кошек с различными титрами антител к коронавирусу
антитело коронавирус перитонит иммуноблоттинг
Заключение
Разработанная иммуноферментная тест-система для определения антител к коронавирусу методом непрямого ИФА может быть использована в практической ветеринарии для диагностики ИПК. Диагностическое значение иммуноферментного метода определения антикоронавирусных антител было определено при исследовании сывороток крови кошек с подозрением на ИПК и животных с подтвержденным диагнозом ИПК. Для правильной интерпретации результатов ИФА обязательно определение титров антикоронавирусных антител. Высокие титры антител считаются типичными для генерализованной инфекции и в сочетании с клиническими симптомами ИПК могут быть важным прогностическим показателем. Титр антител в ИФА выше, чем 1/3200 является диагностическим титром.
Предложенный метод иммуноблоттинга может быть эффективно использован в качестве подтверждающего теста для диагностики ИПК. При наличии в сыворотке антител к S - белку коронавируса диагноз на ИПК можно считать подтвержденным.
Показана также корреляция между уровнем антикоронавирусных антител, уровнем общего белка в и соотношения альбумин/глобулин.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Общая характеристика болезней ушей у кошек, их классификация и разновидности, главные причины возникновения. Этиология и патогенез отита кошек, причины возникновения, принципы диагностики и меры профилактики. Основные правила ухода за ушами кошек.
курсовая работа [77,7 K], добавлен 31.03.2014Исследование особенностей развития вирусных инфекций домашних кошек. Изучение этиологии, патогенеза и клинических признаков инфекционного ринотрахеита. Характеристика эпизоотической ситуации по данным частной ветеринарной клиники "Теремок" г. Луганска.
курсовая работа [40,7 K], добавлен 17.03.2013Эпизоотическая характеристика инфекционных болезней кошек, понятие их специфической профилактики. Особенности эпизоотологического и клинического проявления кальцивирусной инфекции у кошек. Анализ результатов лечения кошек, больных кальцивирозом.
дипломная работа [130,1 K], добавлен 16.05.2017Таксономия, этапы репродукции вируса ринотрахеита кошек. Основной путь заражения. Особенности культивирования в различных живых системах. Клинические признаки заболевания. Принципы диагностики герпес-вирусной инфекции методом полимеразной цепной реакции.
реферат [1,6 M], добавлен 02.06.2015Особенности и сущность ринотрахеита кошек, его идентификация, основные возбудители, распространение, влияние на организм, осложнения, патологоанатомические признаки, диагностика, профилактика и лечение. Общая профилактика инфекционных болезней кошек.
реферат [17,1 K], добавлен 26.09.2009Первостепенные источники инвазии для человека. Возрастная динамика описторхоза и дипилидиоза. Различия в экстенсивности и в интенсивности заражения кошек в районах с различной степенью урбанизации. Воспалительная реакция в тонком кишечнике кошек.
статья [193,4 K], добавлен 18.07.2013Обмен и взаимодействие минеральных веществ в организме животных. История открытия ряда микроэлементов, их биологическая роль в состоянии здоровья кошек, дозы, показанные для добавления в рацион. Потребности кошек в питательных веществах и энергии.
курсовая работа [39,4 K], добавлен 16.02.2017Изучение этиологии, общая характеристика и определение клинических признаков панлейкопении кошек как острозаразной вирусной болезни, характеризующейся поражением кишечника. Дифференциальная диагностика, лечение и система профилактики панлейкопении кошек.
реферат [18,1 K], добавлен 20.01.2012Предрасполагающие факторы мочекаменной болезни у кошек. Анатомические особенности органов мочеотделения как пусковые механизмы мочекаменной болезни у кошек. Значимость рационального подбора рациона кормления для мелких домашних животных в условиях города.
реферат [28,8 K], добавлен 10.08.2017Особенности содержания кошек. Устройства для транспортировки. Кошачий туалет, заточка когтей. Кормление кошки, свежий и сухой корм. Потребность кошек в воде, минеральных веществах, микроэлементах и витаминах. Санитарно-гигиенические условия содержания.
курсовая работа [78,4 K], добавлен 22.01.2012Общие сведения о дерматофитозах, их экологическая классификация. Источники возбудителя инфекции. Клинические признаки заболевания кошек, инкубационный период микроспории. Эпизоотологические данные, результаты люминесцентного и лабораторного исследований.
курсовая работа [770,4 K], добавлен 08.03.2014Ринит как воспаление слизистой оболочки носа, характеристика основных симптомов: склеившиеся носовые отверстия, истечения из носа, сопение. Знакомство с распространенными причинами появления ринита у кошек, рассмотрение стратегии эффективного лечения.
презентация [1,4 M], добавлен 16.07.2016Понятие панлейкопении кошек как высококонтагиозной, вирусной, остропротекающей болезни. Поражение желудочно-кишечного тракта, респираторных органов, сердца. Общая интоксикация, обезвоживание и высокая летальность. Клинические симптомы заболевания.
презентация [2,4 M], добавлен 18.05.2014Исследование основных причин и симптомов гастроэнтерита. Изучение состояния слизистых оболочек, кожной, лимфатической, нервной и мочеполовой систем больного животного. Этиология, патогенез, клиническая картина, диагностика и лечение гастроэнтерита кошек.
курсовая работа [4,5 M], добавлен 21.01.2017Определение, актуальность проблематики стрессовых и агрессивных состояний для владельцев кошек и собак. Перечень и краткая характеристика поведенческих отклонений у домашних животных. Причины и предрасполагающие факторы стрессовых и агрессивных состояний.
реферат [46,8 K], добавлен 10.10.2014Сущность калицивироза как инфекционного заболевания кошек, проявляющегося в типичных случаях повышением температуры, конъюнктивитом, изъязвлением слизистых ротовой и носовой полости, хромотой. Исследования лимфатических узлов (подчелюстные, паховые).
курсовая работа [22,7 K], добавлен 25.03.2015Специфические факторы противовирусного иммунитета. Два варианта выдачи иммунного ответа в форме биосинтеза антител. Вирус инфекционного бронхита птиц: возбудитель, диагностика. Методы лечения вируса ящура. Культивирование вирусов в культуре клеток.
курсовая работа [49,2 K], добавлен 17.11.2010Группы крови крупного рогатого скота как основа селекционного процесса. Тестирование типов крови и их использование для определения линий и пород. Использование иммуногенетического мониторинга и биотехнологии трансплантации эмбрионов в воспроизводстве.
курсовая работа [47,8 K], добавлен 02.08.2010Иммуногистохимические показатели нейронов фронтальной и теменной коры больших полушарий головного мозга в различные сроки подпеченочного холестаза у крыс. Использование поликлональных антител кролика. Применение для анализа U-теста Манна-Уитни.
курсовая работа [2,6 M], добавлен 28.10.2017Методология и современные подходы к оценке генетической ценности сельскохозяйственных животных. Теория смешанных линейных моделей, селекционного индекса. Метод наилучшего линейного несмещенного прогноза. Подходы к оценке племенной ценности животных.
монография [1,6 M], добавлен 28.12.2011