Эпизоотология бруцеллёза крупного рогатого скота в СПК "Племзавод имени 60-летия СССР" Приаргунского района Забайкальского края

При отсутствии стандартных оттитрованных красок рабочие их дозы можно оттитровать с использованием эталонных штаммов бруцелл. Для этого испытуемые краски добавляют к среде в различных концентрациях. Концентрация красок в среде, с которой получается четкая дифференциация эталонных штаммов бруцелл (В.melitensis 16M, В.abortus 544, В.suis 1330), и являются рабочей дозой данной краски. Основные растворы фуксина и тионина готовят в концентрации 1:1000 (0,1 г краски, 20 мл 96Ь спирта и 80 мл дистиллированной воды). Флаконы с краской хранят в темном месте в течение 6 - 10 месяцев. Готовят питательную среду с краской следующим образом: к 100 мл охлажденного до 45 - 50 °C агара стерильно добавляют 2 мл основного раствора краски для получения концентрации 1:50000.

Питательную среду с краской разливают пипеткой по 20 - 25 мл в каждую чашку Петри. Затем среду подсушивают, не открывая чашки. Среды с красками должны храниться в холодильнике (+4 °C) и пригодны для работы в течение 10 - 15 дней. Обесцвеченные среды применять нельзя.

Взвесь бруцелл готовят из двухсуточной агаровой культуры. Посевы контрольных (эталонных штаммов всех трех видов бруцелл) и испытуемых штаммов производят петлей диаметром 2 мм из взвеси, содержащей в 1 мл 2 млрд. микробных клеток (по стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича). Одну петлю такой взвеси засевают штрихом на поверхность агара. На чашку можно одновременно засевать 4 - 6 культур, предварительно разделив чашку Петри на 4 - 6 секторов. Посевы помещают в термостат при 37 °C. Учет результатов проводят через трое суток инкубации.

Схема учета:

- интенсивный рост по всему штриху 4+;

- интенсивный рост вначале и более слабый в конце штриха 3+;

- менее интенсивный в начале или слабый рост по всему штриху 2+;

- очень слабый рост по ходу штриха или отдельные колонии +.

Дифференциация по образованию сероводорода.

В качестве реактива применяют водный раствор уксусно-кислого свинца, в котором смачивают полоски фильтровальной бумаги размером 1 x 8 см. Полоски затем просушивают. Заготовленные впрок сухие полоски фильтровальной бумаги хранят в банке из темного стекла с притертой пробкой не более 1 - 2 месяцев. Взвесь испытуемой культуры в физиологическом растворе (2 x 10 мкл в 1 мл) засевают стандартной петлей (2 мм) на скошенную поверхность печеночного агара (pH - 6,8 - 7,2). Затем берут полоску фильтровальной бумаги и зажимают между пробиркой и ватной пробкой так, чтобы нижний ее конец свободно свисал над верхним краем посева и не касался агаровой среды. Ватная пробка должна быть рыхлой, не задерживать выхода из пробирки углекислоты. Пробирки с посевами ставят в термостат при 37 °C.

Показателем интенсивности образования сероводорода является почернение нижнего, свисающего над посевом конца бумажки. Почернение бумажки измеряется в мм.

Результаты учитываются через 2 дня в течение 6 дней. При каждом учете темневшую бумажку заменяют новой. Для окончательной оценки способности культуры к образованию сероводорода все три показателя складывают. бруцеллез зоонозный ветеринарный

Для В.suis (биовар 1) суммарный показатель образования сероводорода равен примерно 12 - 20 мм, для В.abortus (биовар 1) - около 5 - 7, В.melitensis (биовар 1), как правило, совсем не образует сероводорода или вызывает только легкое побурение свинцовой бумажки. У штаммов В.neotomae показатель образования сероводорода в среднем равен 5 - 8 мм. Культуры В.ovis и В.canis сероводорода не образуют.

Реакция агглютинации с монорецепторными и R-сыворотками.

Реакцию ставят с двумя контролями:а) контроль с эталонным штаммом вида В.melitensis; б) контроль с эталонным штаммом В.abortus.

Монорецепторную сыворотку последовательно разводят до ее предельного титра (1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и т.д. в объеме 0,5 мл). В качестве антигена применяют смыв в физиологическом растворе 2-суточной агаровой культуры бруцелл изучаемого штамма, разведенного до 2 млрд. микробных клеток в 1 мл (по стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича). Для разведения сыворотки и антигена применяют физиологический раствор, pH 7,0. Антиген добавляют по 0,5 мл во все пробирки. Разведение сыворотки удваивается (1:10, 1:20 и т.д.).

Пробирки со смесью сыворотки и антигена выдерживают в термостате при температуре 37 °C 18 - 20 часов, а затем в течение 2 часов при комнатной температуре. После этого проводят учет реакции. Реакция считается положительной, начиная с разведения сыворотки 1:20 , но не менее чем на 2+.

Для культур бруцелл вида ovis и canis, а также для культур других видов и биоваров бруцелл, находящихся в R-форме, для реакции агглютинации используют анти-R-сыворотку. Техника постановки реакции аналогична. Используется физиологический раствор на фосфатном буфере, pH 8,2 - 8,4.

Определение чувствительности культур бруцелл к фагу.

Бруцеллезный фаг "Тб" избирательно лизирует бруцеллы вида abortus, находящиеся в S-фазе. При определении чувствительности бруцелл к фагу используют следующий метод:

Питательная среда - 1,5% мартеновский агар (можно 1,5% агар Альбими) разливают в чашки Петри по 25 - 30 мл. Среду подсушивают при комнатной температуре в течение 18 - 20 часов. Чашки можно открыть и прикрыть их стерильными кружками фильтровальной бумаги, но в этом случае желательно чашки держать под лучами бактерицидной лампы.

Для посева используют 48-часовую агаровую культуру бруцелл, из

которой готовят взвесь в физиологическом растворе из расчета 1 x 10 мкл в 1 мл, 0,4 - 0,5 мл из этой взвеси наливают на поверхность агара. Затем чашки тщательно раскачивают для получения равномерного газона, лишнюю посевную жидкость удаляют пастеровской пипеткой.

Засеянные чашки подсушивают в течение 1 часа при температуре 37° C. На газон наносят пастеровской пипеткой по одной капле фага в концентрации по 10 x 10 корпускул фага в 1 мл. Чашки быстро наклоняют и капли фага стекают по дорожке. Места нанесения капель и путь стекания капли можно заранее расчертить карандашом на внешней стороне дна чашки.

Учет результатов.

Полный лизис культуры на месте нанесения фага (или по дорожке) "4+", лизис с небольшим количеством отдельных колоний бруцелл или слившиеся бляшки в виде сот "3+". Резко ослабленный рост и небольшое количество бляшек "2+", очень слабый лизис "+" и отсутствие лизиса "-" - результат отрицательный.

Оценка результатов.

При исследовании за положительный результат следует принимать лизис культуры минимум на два креста на месте нанесения капли фага. В качестве контроля рекомендуется включать референтные штаммы В.melitensis 16M, В.abortus 544 и В.suis 1330.

Иммунологические и молекулярно-биологические тесты выявления бруцелл и их растворимые антигены

Были разработаны тесты, основанные на иммунологическом взаимодействии специфического антигена и антител (реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - прямой метод, реакция нейтрализации антител (РНАт), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция (ПЦР)) в связи с тем, что бруцеллы относятся к медленно растущим микроорганизмам и окончательный ответ бактериологического и биологического методов исследования можно ожидать только через 3 - 5 недель, а также молекулярно-биологический метод - полимеразная цепная.

Методы выявления специфических антител

При диагностике бруцеллеза рекомендуется несколько методов, которые используются в зависимости от целей исследования.

Реакция агглютинации - пластинчатая (Хеддлсона), РПГА, ИФА, кожно-аллергическая проба Бюрне рекомендуется при проведении эпидобследования населения в очагах.

Пластинчатая реакция агглютинации (Хеддлсона) или ИФА и кожно-аллергическая проба Бюрне или реакция лизиса эритроцитов - при обследовании населения перед профилактической вакцинацией.

Реакцию агглютинации и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса ставят для диагностики острого и подострого бруцеллеза проводят бактериологические исследования. Может быть использована ИФА.

Реакция Кумбса, ИФА и аллергические тесты рекомендуется для диагностики хронического бруцеллеза и при проведении диспансерного наблюдения за переболевшими бруцеллезом.

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему

диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменять друг друга. Это обуславливает необходимость применения комплексного серо-аллергического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (в первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического; серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 98% случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций (реакция агглютинации, РПГА) начинает падать. В поздние периоды заболевания большую диагностическую ценность имеет реакция Кумбса, ИФА и внутрикожная аллергическая проба.

Следует иметь в виду, что положительную реакцию агглютинации с бруцеллезным антигеном могут давать также сыворотки, содержащие антитела к микроорганизмам, имеющим общие антигенные детерминанты с бруцеллами (Е.coli, V.cholerae, Fr.tularensis, Y.enterocolitica 0 - 9, S.typhimurium).

При проведении обследования нужно учитывать, что если высокие титры антител почти всегда указывают на наличие инфекции, то антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключают возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется проводить повторные исследования с интервалом 1 - 2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.[10]( . Девришов Д.А. Результаты эпизоотологического анализа по бруцеллёзу животных, / Янышев А.А. // Ветеринария. - 2006. - N2 6С.ЗО)

Реакция агглютинации в пробирках

(реакция Райта)

Одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей является реакция агглютинации. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации имеет при острой и подострой форме бруцеллеза.

Реакция проводится по следующей схеме.

В пробирки разливают физиологический раствор: в первую - 2,4 мл, в остальные по 0,5 мл. В первую пробирку добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0,5 мл в третью пробирку и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0,5 мл следующих разведений 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. Из первой пробирки 0,5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0,5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1:50), а 1,0 мл выливают.

Диагностикум разводят физиологически раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0,5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т.е. получается 1:50, 1:100 и т.д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C) на 18 - 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 - 2 часа при комнатной температуре и проводят учет реакции.

Затем проводят учет реакции по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.

Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза.

Стандарт мутности готовят каждый раз при постановке РА и ставят в термостат одновременно с основной реакцией.

Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, - просветление, оцениваемое на 2+.

При применении стандартизированного диагностикума титры исследуемых сывороток соответствуют количеству международных единиц антител (ме/мл).

Так, титры 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. соответственно равны 50, 100, 200 и т.д. ме/мл.

Оценка РА проводится по следующей схеме:

- титр сыворотки 1:100 (100 ме/мл) - результат положительный;

- титр сыворотки 1:200 (200 ме/мл) - результат положительный;

- титр сыворотки 1:400 (400 ме/мл) - результат резко

положительный.

Диагностическим титром принято считать реакцию агглютинации не менее 2+ при разведении сыворотки 1:100 и выше.

Пластинчатая реакция агглютинации (реакция Хеддлсона)

Вид этого исследования имеет преимущество в простоте постановки реакции, быстром получении результатов и чувствительности реакции. В качестве антигена для постановки реакции Хеддлсона и Райта применяют единый бруцеллезный диагностикум. Реакцию ставят на обычном оконном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле, расчерченном на квадраты величиной 4 x 4 см каждый, по горизонтали должно быть 5 квадратов. На первом квадрате с левой стороны записывается номер испытуемой сыворотки, в последующие квадраты слева направо разливают (микропипеткой или 1 мл градуированной пипеткой) испытуемую сыворотку в следующих дозах: 0,04, 0,02, 0,01 и 0,03 (контроль сыворотки). К первым трем дозам сыворотки добавляют по 0,03 мл антигена. К последней дозе сыворотки (0,03) добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Сыворотку осторожно смешивают с антигеном палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Контроль антигена ставят, добавляя 0,03 мл физиологического раствора к 0,03 мл антигена. Затем стекло слегка подогревают над пламенем спиртовки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла.

В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья (агглютинат). Максимальный срок наблюдения 8 минут:

а) контроль сыворотки ставят с каждой испытуемой сывороткой для исключения спонтанной агглютинации;

б) контроль антигена ставят один (при любом числе испытуемых сывороток) для исключения спонтанной агглютинации применяемого антигена.

Учет реакции проводят невооруженным глазом по следующей схеме:

а) полное просветление жидкости с крупными и мелкими хлопьями, т.е. 100% агглютинации (4+);

б) почти полное просветление жидкости с ясно заметными хлопьями, т.е. 75% агглютинации (3+);

в) незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями, т.е. 50% агглютинации (2+);

г) мутная жидкость с едва заметной зернистостью (+);

д) равномерная мутная жидкость (-).

Для оценки результатов рекомендуется следующая схема:

а) агглютинация на 4+ во всех дозах сыворотки - результат "резко положительный";

б) агглютинация не менее 2+ во всех дозах сыворотки - результат "положительный";

в) агглютинация только в первой или в первой и второй дозах сыворотки - результат "сомнительный";

г) отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция "отрицательная".

Необходимо помнить,что для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный

результат реакции. При сомнительном или отрицательном результатах реакции и наличии эпидемических и эпизоотических показаний, а также в стационаре и при обследовании доноров, где необходимо определение титра агглютининов и их динамики, следует применять реакции Райта и Кумбса, РПГА и ИФА.

Микроскопия

Мазки, приготовленные из первичных посевов, из центрифугата или фильтрата (при исследовании воды, молока), и препараты-отпечатки из патологического материала после фиксации окрашивают по Граму или Козловскому и просматривают в световом микроскопе.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Данный метод достаточно широко используется в силу своей эффективности.

Метод используется для выявления бруцеллезного антигена в объектах внешней среды, пищевых продуктах и биологических объектах, а также для идентификации выделенных культур бруцелл. Метод характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью, возможностью количественной и автоматизированной оценки результатов, воспроизводимостью и стандартностью основных ингредиентов анализа с помощью ИФА можно выявить бруцеллы в концентрации 1 x 10 - 1 x 10 мкл/мл или 1 - 5 нг/мл бруцеллезного растворимого антигена.

Используемая иммуноферментная тест-система для определения бруцеллезного антигена для постановки ИФА имеет следующий состав: иммуноглобулины бруцеллезные, бруцеллезный конъюгат, бруцеллезный антиген (ЛПС), набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов, субстрат - ортофенилиндиамин (ОФД). Твин-20, бычий сывороточный альбумин (БСА, полистироловые планшеты для иммунологических реакций).

Выявление бруцеллезного антигена в ИФА происходит за счет специфического взаимодействия бруцеллезных иммуноглобулинов, сорбированных на планшете, с бруцеллезным антигеном, содержащимся в исследуемом материале. Образовавшийся комплекс "антиген + антитело" выявляют с помощью конъюгата (бруцеллезные антитела, меченные пероксидазой хрена).

ИФА проводится по следующей технике постановки.

А. Сенсибилизация твердой фазы. Для этого в лунки планшета вносят с помощью дозатора по 200 мкл раствора бруцеллезных иммуноглобулинов в рабочем разведении (20 мкг/мл) в 0,02М растворе ФСБ, pH 7,2. Планшеты помещают в термостат на 2 часа при 37 °C или в холодильник на 18 часов при 4 °C. После окончания адсорбции иммуноглобулины удаляют из лунок планшета встряхиванием и трехкратно отмывают раствором ФСБ, содержащим 0,1% твина-20.

Б. Внесение исследуемого материала. Исследуемый материал в разведениях (двух- или десятикратных) на ФСБ + твин, содержащий 1% БСА, вносят по 100 мкл в каждую лунку. Параллельно с исследуемыми образцами готовят серию последовательных разведений контрольного образца бруцеллезного антигена в концентрациях от 1 до 1000 нг/мл и каждое разведение антигена вносят в количестве 100 мкл в лунки планшета. После этого планшеты выдерживают в термостате при 37 °C в течение часа, после чего жидкость из планшета удаляют встряхиванием и планшеты отмывают.

В. Внесение конъюгата. В каждую лунку вносят по 100 мкл раствора

коньюгата в рабочем разведении (коньюгат разводят на ФСБ + твин, содержащий 1% БСА). Планшеты помещают в термостат на 40 мин., а затем

отмывают.

Г. Проявление реакции. В каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного раствора, содержащего 0,04% ОФД и 0,04% H2O2 в 0,1М цитратно-фосфатном буфере, pH 5,5. Планшеты помещают в темное место при комнатной температуре на 15 - 20 мин. Реакцию останавливают внесением в лунки 50 мкл серной кислоты в концентрации 0,5 моль/л. После этого проводится оценка результатов. Оценку результатов проводят по изменению окраски субстрата (от светло-коричнево до оранжево-коричневой) визуально или с помощью фотометра при длине волны 492 нм, сравнивая интенсивность окраски контрольных и опытных проб. Появление желто-оранжевого окрашивания в опытных лунках и положительном контроле при его отсутствии в лунках с отрицательными контролями свидетельствует о наличии в пробе бруцеллезного антигена. При фотометрическом учете результатов анализа проба считается положительной, если ее оптическая плотность (ОП) в 2 и более раз превосходит наивысшее значение ОП отрицательных контролей, которое не должно превышать 0,2.

2. Собственные исследования

На основании изложенных выше данных, в настоящее время бруцеллёз является актуальным заболеванием как среди животных, так и среди людей.

Дипломная работа выполнена в период с 2011 по 2016 г. в ветеринарной лаборатории, ветеринарной станции и ветеринарном участке Приаргунского района.

2.1 Общая характеристика неблагополучного пункта

Сельскохозяйственный производственный кооператив «Племзавод имени 60- летия СССР» (далее неблагополучный пункт) расположен на территории сельского поселения «Староцурухайтуйское» муниципального района «Приаргунский район» забайкальского края. Данное хозяйство находится в 30 км от районного центра, граничит с п. Молодёжный, с. Кути, с. Дурой.

Стадо КРС состоит из 2гуртов, которые располагаются на стоянках «Шанижная» и «Весовая».

Имеющееся поголовье животных :

КРС- 571 гол;

Лошади- 70 гол;

Овцы- 5000 гол;

Свиньи- 120 гол.

Направление скотоводства мясное. Телята на подсосе. Обслуживающий персонал: скотники- 4 человека.

Стоянки представлены однорядным помещением в шлакоблочном исполнении с привязанными постройками и загонами. В летнее время гурт находится на пастбищном содержании. Водопоение автономное. На территории хозяйства на двух стоянках для обслуживающего персонала имеются обустроенные дома.

Ветеринарно-санитарная характеристика хозяйства.

Поголовье животных обслуживается ветеринарными специалистами хозяйства, ветеринарной службой района. Ветеринарными специалистами проводятся плановые противоэпизоотические, лечебно- профилактические мероприятия, диагностические исследования. Яма скотомогильника находится в 3-х км от фермы. Типовой убойный пункт отсутствует. Имеется изолятор для положительно реагирующих животных в 20-ти м от животноводческого помещения, где содержится скот.

2.2 Специальная часть

В СПК диагностический фон неблагополучен по результатам выделения серопозитивных на бруцеллёз животных.

В 2013 году при плановом исследовании КРС на бруцеллёз в количестве 515 голов, принадлежащие СПК «ПЗ 60 лет СССР», выявлено 29 голов, положительно реагирующих на бруцеллёз. Согласно экспертиз ГУ «Забайкальской краевой ветеринарной лаборатории»

- № 36618-36620/ 13488-13490 от 20. 06. 2013 г- 3 головы положительных;

- № 36591-36616/ 123491-13516 от 20.06.2013г- 26 голов положительно реагирующих на бруцеллёз.

Установлено следующее количество животных в угрожаемой зоне:

КРС- 1300 гол;

Лошадей- 150 гол;

Овец- 5500 гол;

Свиней- 2000 гол.

Предполагаемый источник возбудителя инфекции не установлен.

Ветеринарной службой района первоначально были даны следующие рекомендации руководителю и ветеринарным врачам хозяйства для предупреждения заболевания скота в СПК, на основании которых они обязаны:

А. вести зоотехнический учёт, мечение скота путём чипирования в полном объёме. Без разрешения ветеринарной службы района, не производить никаких перегруппировок;

Б. вести учёт всех случаев абортов;

В. не допускать скармливания собакам абортированных плодов, последов, в сыром виде молока, полученного от бруцеллёзных животных, и сырого мяса от павших животных;

Г. содержать в надлежащем санитарном состоянии животноводческие помещения и территорию вокруг них;

Д. произвести буртование навоза для биотермического обеззараживания;

Е. составить карту выпаса животных и согласовать её с ветеринарной службой района и администрацией сельского поселения;

Ж. произвести отбор проб крови КРС, принадлежащего СПК, в порядке плана проведения оздоровительных мероприятий против бруцеллёза КРС;

З. оборудовать место утилизации биоматериалов;

И. оборудовать приспособленную убойную площадку.

Решение комиссии

Комиссия в составе Начальника КГУ «Приаргунская СББЖ» Гладких Д.А., Старшего ветеринарного инспектора Приаргунского района Рубченкова М.Ю., ветеринарного врача- эпизоотолога КГУ «Приаргунская СББЖ» Геласимова А.Г., рассмотрев все документы и произведя эпизоотическое обследование, решила- для недопущения распространения инфекции, направить ходатайство о наложении ограничительных мероприятий на 2 стоянки, где содержится КРС, принадлежащий СПК «ПЗ 60 лет СССР».

Ходатайство о наложении ограничительных мероприятий 24.06.2013 г было направлено на Государственную ветеринарную службу Забайкальского края.

Приказом Государственной ветеринарной службы Забайкальского края № 57 от 25.06.2013 года установлены ограничительные мероприятия (карантин) на территории сельскохозяйственного производственного кооператива «Племзавод имени 60 лет СССР» (далее НП) до принятия решения об отмене указанных мероприятий (после оздоровления неблагополучного пункта в соответствии с ветеринарными правилами ВП 13.3.1302- 96 «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Бруцеллёз»).

Также данным приказом был утверждён комплексный план мероприятий по оздоровлению НП от бруцеллёза животных, по которому необходимо:

1. Изолировать животных, положительно реагирующих по результатам лабораторных серологических исследований на бруцеллёз (далее- серопозитивных животных) от здоровых;

2. Оздоровление НП провести методом систематического исследования животных на бруцеллёз с убоем выявленных серопозитивных животных на мясо, согласно ветеринарного законодательства;

3. Обеспечить систематическую пастеризацию молока при t 70 С в течении 30 мин, или кипячением в течении 20 сек;

4. Систематически проводить очистку помещений и выгульных дворов, где содержались серопозитивные животные, от навоза, с последующей его утилизацией;

5. Обеспечить НП необходимым количеством дезинфицирующих средств;

6. Обеспечить контроль за перегруппировкой (переводом) животных внутри НП;

7. Предоставлять информацию в государственную ветеринарную службу Забайкальского края об осуществлении предусмотренных Ветеринарным Законодательством РФ по ликвидации очагов бруцеллёза в НП.

Исполнители:

- СПК «ПЗ 60 лет СССР»;

- КГУ «Приаргунская СББЖ»,

Далее до сентября 2013 г. проводились систематические исследования КРС на бруцеллёз. Всего исследовано 1043 пробы, из них- 141 положительная.

2.2.1 Материал и методика исследований

Методы исследований эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота проводили в соответствии с данными, изложенными в руководстве по общей эпизоотологий.

Серологические реакции (РА, РСК, РБП), бактериологические и биологические исследования проводили в соответствие «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» №11-1/54, утвержденным Комитетом ветеринарии МСХ РК от 3 февраля 1999 года

Идентификацию и дифференциацию видов и биотипов бруцелл проводили по методике и схеме ФАО /ВОЗ, утвержденной Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета экспортов (1986)

Приготовление питательных средств осуществляли по ГОСТ 20730-75.

Аллергическую пробу проводили путем введения аллергенов внутрикожно в дозе 0,2 см³ в среднюю треть шеи. Учет реакции проводили через 48 часов после введения препарат.

Отбор проб для бактериологического исследования, проверку активности, стерильности комплемента, гемолитической сыворотки, методы постановки РА, РСК, РБП, аллергической пробы проводили согласно ГОСТ 25385-82 (СТСЭВ 2703-80), утвержденным Постановлением Государственного Комитета по стандартам.

Концентрацию микробных клеток бруцелл определяли по стандарту мутности ГНИИСиК им. Л.Ф. Тарасевича.

Чувствительность бруцелл к антибиотикам определяли методом серийных разведений.

Определение минимальной инфицирующей дозы бруцелл для морских свинок проводили согласно описанию.

Проверку препаратов на стерильность проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 (ст СЭВ 6280-88) [№ГОСТ].

2.2.2 Результаты исследований

Территория Приаргунского района по природно-климатическим условиям относится к сухостойной зоне, для которой характерен резко континентальный температурный режим и малое количество атмосферных осадков. За год выпадает в среднем 240 мм. осадков, из которых около 80% приходится на вегетационный период растений.

Зима умеренно суровая, холодная, продолжительная, средняя температура января измеряется от - 28° до - 32,3°С. Снежный покров распределяется от 12 до 30 см. и удерживается в течение 4 - 5 месяцев. Замерзание почвы, то есть переход температуры почвы ниже 0 °С происходит в середине октября. Первые осенние заморозки наступают в начале сентября, последние весенние заморозки продолжаются до конца мая.

Весна и первая половина лета засушлива, основная масса осадков выпадает в июле-августе, средняя температура в июле составляет в среднем +19,4°С.

Лесной массив занимает 1/7 часть площади всех земельных угодий.

Из естественной растительности лугов и пастбищ, 70% - составляют разнотравья, 15%- злаковые, 10% - бобовые. Рельеф земельнопользовательного массива гористо-увалистый.

Почва данного региона влияет на урожайность сельскохозяйственных культур. Наблюдается катастрофическое падение плодородия почвы. Также хозяйства подвергается стихийным бедствиям - засуха, нашествие саранчи, которые наносят большой урон производству.

Для реализации в другие хозяйства возможности чаще всего нет. Растениеводство хозяйства служит в основном, для обеспечения отраслей животноводства необходимыми кормами.

В настоящее время хозяйства района занимаются производством и реализацией продукции овощеводства и молочного скотоводства.

Для более полного обзора экономических условий хозяйств необходимо подробнее рассмотреть производственный потенциал хозяйств. Это совокупность имеющихся в хозяйстве производственных ресурсов земли, трудовых ресурсов, материальных и технических, с помощью которых можно произвести сельскохозяйственную продукцию.

Рассмотрим состав и структуру земельных угодий

Таблица 1 Земельные угодья хозяйств Приаргунского района имеют следующий состав и структуру.

Наименование	2011	2012	2013	2014	2015
	га	%	га	%	га	%	га	%	га	%
Общая земельная площадь всего	2236	100	2236	100	2236	100	2236	100	2236	100
В т.ч. всего с\х угодий	236	100	236	100	236	100	236	100	236	100
Из них пашня	1011	47,0	1011	47,0	1011	47,0	1011	47,0	1011	47,0
Сенокосы	455	19,5	455	19,5	455	19,5	455	19,5	455	19,5
Пастбища	770	33,5	770	33,5	770	33,5	770	33,5	770	33,5

С 2011 года по 2015 год структура земельных угодий Приаргунского района существенно не изменилась. Все также общую земельную площадь занимают сельскохозяйственные угодья, равные 2236 га. В свою очередь наибольший удельный вес в сельскохозяйственных угодьях составляет пашни - 47%, далее пастбища - 33,5% и самое меньшее приходится на сенокосы - 19,5%. Чтобы определить отраслевые структуры и производственные направления необходимо рассмотреть специализацию хозяйств, которые показывают, производство каких видов продукции или какие отрасли преобладают в хозяйствах района. Наиболее точно определить характер и уровень специализации сельскохозяйственного производства можно по удельному весу отраслей в структуре товарной продукции.Таблица 2 Товарная продукция Приаргунского района имеет следующий состав и структуру.

Показатели	2011	2012	2013	2014	2015	В среднем за 5 лет
	тыс	%	тыс	%	тыс	%	тыс	%	тыс	%	тыс	%
Растениеводство: зерновые и зернобобовые	261	6,94	342	8,6	298	7,46	312	7,87	285	7,26	299,6	7,65
Овощи открытого грунта	784	20,87	605	15,22	867	21,69	732	18,47	654	16,67	728,4	18,56
Овощи закрытого грунта	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Прочая продукция	52	1,38	64	1,61	98	2,45	73	1,84	61	1,55	69,6	1,78
Итого по растениеводству	1097	29,2	1011	25,43	1263	31,6	1117	28,9	1000	25,49	1097,6	27,99
Животноводство скот в живой массе: КРС	240	6,39	270	6,79	265	6,63	272	6,86	280	7,14	265,4	6,76
Лошади	34	0,9	42	1,06	38	0,95	51	1,29	41	1,05	41,2	1,05
Молоко, ц.	1561	41,5	1634	41,11	1586	41,5	1730	43,65	1628	41,5	1627,8	41,5
Прочая продукция	3	0,08	5	0,12	-	-	4	0,1	3	0,08	3	0,08
Продукция собственного производства, реализованная в переработанном виде	361	9,6	285	7,17	324	39,68	168	4,24	315	8,03	290,6	7,42
Итого по животноводству	2199	58,5	2236	56,25	2213	55,37	2225	56,14	2267	57,79	2228	56,8
Товары	125	3,33	164	4,12	280	7,01	153	3,86	172	4,38	178,8	4,56
Работы и услуги	336	8,94	564	14,19	241	60,3	468	11,81	484	12,34	418,6	10,68
Всего	3757	100	3975	100	3997	100	3963	100	3923	100	3923	100

Удельный вес в структуре товарной продукции ежегодно занимает производство и реализация молока, так как ежедневно за его реализацию можно получить хоть и не большие, но «живые» деньги.

Большую долю дохода хозяйства дают такие виды продукции, дающими большую долю дохода хозяйства являются в растениеводстве овощи открытого грунта и зерновые, в животноводстве - молоко. Прочие виды продукции являются менее доходными и имеют меньшую долю в структуре товарной продукции .

На протяжении рассматриваемого периода уменьшение доли товарной продукции растениеводства и увеличение доли товарной продукции животноводства на данный факт влияют неблагоприятные погодные условия (заморозки, засухи).

Результаты хозяйственной деятельности, в частности качество, полнота и своевременность выполнения сельскохозяйственных работ, следовательно, и объем производства продукции, ее себестоимость, финансовое состояние предприятия напрямую зависят от обеспеченности сельскохозяйственных предприятий основными средствами производства и эффективности использования их.

За период с 2011 г по 2015 г наблюдается увеличение основных средств хозяйств. Данное явление может произойти в результате получения основных средств из основного и вспомогательного производства, приобретения основных средств и по другим причинам. Основную долю основных средств в хозяйствах в 2011 - 2015 годах составляли здания, как производственного, так и непроизводственного назначения. Наблюдается увеличение стоимости продуктивного скота. Обоснованием этого является следствием увеличения стоимости самих животных, так как поголовье животных за аналогичный период сокращается. Также заметно выросла стоимость транспортных средств.

Другие основные средства хозяйств за 2011-2015 год существенно не изменились. Состав и структура основных средств характеризует уровень оснащенности хозяйств основными фондами по следующим показателям:

Таблица 3 Основные средства Приаргунского района имеет следующий состав и структуру

Показатели	2011	2012	2013	2014	2015	2015 в % к 2011
	Тыс, руб	%	Тыс, руб	%	Тыс, руб	%	Тыс, руб	%	Тыс, руб	%
Здания	2153	37,3	2120	34,9	1861	30,1	1934	28,8	2115	27,9	98,2
Сооружения	1564	27,1	1682	27,6	1596	25,8	1435	21,4	1561	20,6	99,8
Машины и оборудование	564	9,8	672	11,0	938	15,2	1069	15,9	1248	16,4	221,3
Транспортные средства	485	8,4	564	9,3	729	11,8	1068	15,9	1395	18,4	287,6
Рабочий скот	58	1,0	69	1,1	74	1,2	82	1,2	75	0,9	129,3
Продуктивный скот	938	16,2	965	15,9	973	15,7	1093	16,3	1167	15,4	124,4
Другие виды основных средств	11	0,2	11	0,2	14	0,2	25	0,4	26	0,3	236,4
ИТОГО	5773	100	6083	100	6185	100	6706	100	7587	100	131,4

Большое значение для увеличения объема производства продукции и повышения эффективности производства имеет также достаточная обеспеченность сельскохозяйственных предприятий необходимыми трудовыми ресурсами, их рациональное использование, высокий уровень производительности труда. От обеспеченности хозяйства трудовыми ресурсами и эффективность их использования зависит объем и своевременность выполнения сельскохозяйственных работ, эффективность использования техники , а в конечном результате - объем производства продукции, ее себестоимость, прибыль и ряд других экономических показателей. Без качественных трудовых ресурсов (грамотных специалистов и добросовестных работников) невозможно развитие и благосостояние хозяйств.

Таблица 4 Показатели эффективности использования основных производственных средств Приаргунского района имеют следующий состав и структуру.

Показатели	2011	2012	2013	2014	2015	2015 в % к 2011
Основные производственные фонды сельскохозяйственного назначения	4864	4896	4972	5163	5587	114,9
Площадь с\х угодий, га	2236	2236	2236	2236	2236	100
Среднегодовая численность работников занятых в сельском хозяйстве, чел.	51	50	48	50	51	100
Стоимость валовой продукции сельского хозяйства, тыс. руб.	3564	3672	3648	3596	3621	101,6
Фондообеспеченность, тыс. руб.,/ га	2,2	2,2	2,2	2,3	2,5	113,6
Фондовооруженность, тыс. руб., /чел.	95,4	97,9	103,6	103,3	109,5	114,8
Фондоемкость, тыс. руб., / тыс. руб.	1,05	1,17	1,08	1,2	1,04	99,0
Фондоотдача, тыс. руб., / тыс. руб.	0,8	0,85	0,83	0,9	0,82	102,5

Общая численность рабочих за период практически осталась на прежнем уровне. Основную долю составляют рабочие постоянные и служащие. В целом за период наблюдались небольшие сокращения и увеличения численности работников.

Увеличение численности персонала хозяйств может быть связано с привлечением временных работников и с расширением штата работников сельского хозяйства. Сокращение численности рабочих может быть следствием сокращения работников целях снижения себестоимости продукции, а так же их увольнения по собственному желанию.

Таблица 5 Трудовые ресурсы Приаргунского района имеют следующую состав и структуру.

Категория работников	2011	2012	2013	2014	2015
	Чел.	%	Чел.	%	Чел.	%	Чел.	%	Чел.	%
Всего по организации	43	100	44	100	46	100	44	100	45	100
В т.ч. работников сельского хозяйства	43	100	44	100	46	100	44	100	45	100
Из них рабочие постоянные	28	65,1	26	59,1	30	65,2	27	61,4	28	62,2
Временные	5	11,6	7	15,9	6	13,0	7	15,9	7	15,6
Служащие	10	23,3	111	25,0	10	21,8	10	22,7	10	22,2

Для того, чтобы дать полную характеристику хозяйства как экономического субъекта необходимо изучить данные о финансовых результатах хозяйства за отчетные периоды. Финансовое состояние - это способность предприятия финансировать свою деятельность. Оно характеризуется финансовыми взаимоотношениями с другими юридическими и физическими лицами, обеспеченностью финансовыми ресурсами, необходимыми для нормального функционирования предприятия, целесообразностью их размещения и эффективностью использования, платежеспособностью и финансовой устойчивостью.

Таблица 6 Данные по финансовым результатам Приаргунского района имеют следующую состав и структуру

Наименование показателей	2011	2012	2013	2014	2015	В среднем за 5 лет
Доходы и расходы по обычным видам деятельности: выручка от реализации товаров, продукции, работ, услуг.	4522	4636	4378	4579	4684	4559,8
Себестоимость товаров, продукции, работ, услуг.	4171	4332	4108	4127	4483	4244,2
Валовая прибыль	351	304	270	452	201	315,6
Уровень рентабельности	8,4	7,0	6,6	10,9	4,5	7,5

Из данных таблицы видно, что прибыль за период значительно не увеличивается. Это заметно влияет на финансовое состояние. Основной деятельностью хозяйства является производство и реализация продукции сельского хозяйства.

По производственным показателям животноводства и растениеводства занимает одно из первых мест в крае, молочно-товарные фермы на протяжении последних трех лет увеличивает продуктивность стада. Помощь оказывает то, что район участвует в краевой программе «Зерно», программе «Животноводство» через краевую инвестиционно--лизинговую компанию «Агролизинг».

Основными задачами в программе оздоровления финансового состояния являются восстановление высокопродуктивного элитного стада со среднегодовым удоем молока на одну фуражную корову до 5000 кг, увеличение рентабельности производства и снижение кредиторской задолженности, увеличение урожайности кормовых культур, что позволит увеличить рентабельность животноводства.

Для сохранения и дальнейшего развития производства и улучшения финансового состояния хозяйства необходимо пополнять оборотные средства, выделять средства на оснащение новой техникой, оборудованием, а также развивать зерновое хозяйство, что позволит создавать устойчивую кормовую базу для животноводства.

Также важна помощь государства в плане снижения процентов по кредитам, оказании помощи в закупке как посевных культур, так и племенного скота.

28.11.2013 года «Приаргунской СББЖ» провели эпизоотическое обследование неблагополучного пункта по выполнению противобруцеллёзных мероприятий. Установлено:

- вакцинация ШТ- 82 непроводилась;

- оздоровление проводилось методом до 2-х кратного отрицательного результата;

- за срок с 26.06.2013 г по 23.10.2013 г исследовано 1409 голов, из них по диагностическим исследованиям выявлено 166 голов, положительно реагирующих на бруцеллёз. Все животные сданы на Приаргунский мясокомбинат.

- эпизоотический порог составил 30,6 %.

- рассмотрев порядок выполнения комплекса мероприятий, в связи с эпизоотическим порогом в 30,6 % рекомендовано применить радикальный метод оздоровления полной сдачи. Полную сдачу КРС произвести до 31.12.2013 г.

- обозначить зоны: очаговые, угрожаемые, буферные. Приступить к заключительным этапам оздоровительных мероприятий в соответствии с требованиями ВП по бруцеллёзу КРС.

Дальнейшие мероприятия составили:

- поголовье КРС с двух стоянок неблагополучного пункта было полностью сдано на Приаргунский мясокомбинат;

- провели исследование других видов животных на бруцеллёз в Пиаргунской ветеринарной лаборатории- результат отрицательный;

- провели заключительную дезинфекцию 2 % раствором каустической соды при t 70 С. количество дезраствора 0,5 л на 1 кв.м. площади. После дезинфекции помещения оставлены закрытыми на 12 ч. После проветривания кормушки и перегородки промыты водой

Таблица 7 Данные по заключительной дезинфекции в НП

Стоянка	Продезинфицировано кв.м. всего
	Помещений	Выгульных дворов	Предметов ухода
Шанижная	4500	1700	8
Весовая	4550	1770	7

01.06.2015 года при проведении повторного эпизоотического обследования установлено, что за период оздоровительных мероприятий План ветеринарных мероприятий по оздоровлению против бруцеллёза КРС выполнены следующие мероприятия:

1.сдан положительно реагирующий на бруцеллёз КРС в количестве 166 голов на Приаргунский мясокомбинат;

2. остальное поголовье КРС тоже сдано на мясокомбинат;

3. законсервированно 2 стоянки, где ранее выявлялись серопозитивные КРС;

4. проведена механическая очистка, дезинфекция и лабораторный контроль качества дезинфекции;

5. получен 2-х кратный отрицательный результат с интервалом 30 дней от других видов животных.

По данным результатам обследования КГУ «Приаргунской СББЖ» было направлено ходатайство на снятие ограничительных мероприятий (карантина) по бруцеллёзу КРС в Государственную ветеринарную службу Забайкальского края за № 218 от 02.06.2015 г.

Приказом Государственной ветеринарной службы Забайкальского края № 92 от 03.06.2015 г ограничительные мероприятия (карантин) по бруцеллёзу КРС на территории животноводческих стоянок СПК «ПЗ 60 лет СССР» были отменены.

Таблица 8 Количество положительно среагировавших животных (крупного рогатого скота) в СПК «ПЗ 60 лет СССР» за период с июня по октябрь 2013 г

Месяц	Исследовано Голов	Выявлено положительных
Июнь	385	29
Июль	242	43
Август	50	5
Сентябрь	366	64
Октябрь	366	25
Итого	1409	166

Проанализировав данные таблицы можно сделать вывод, что на протяжении действия ограничительных мероприятий при исследовании животных на бруцеллёз, тенденция уменьшения выявления серопозитивных животных из имеющегося поголовья животных, не наблюдается. Таким образом нельзя сказать, что метод исследования до двукратного отрицательного результата, в данном случае может считаться эффективным.

Также был проведён анализ причин падежа КРС в неблагополучном пункте за период с апреля по ноябрь 2013 года.

Таблица 9 анализ причин падежа крупного рогатого скота

Месяц	Падёж всего голов	В т.ч. по причине заболевания
		Органы пищеварения	Травмы	Нарушения обмена веществ	Органы дыхания	Истощение
Апрель	2	2
Май	3		1	2
Июнь	3	3
Июль	9	6	1		2
Август	4	2			2
Сентябрь	3					3
Октябрь	7	4	1		2	1
Ноябрь	5	1				4
Всего	36	18	3	2	5	8

Из данных таблицы следует, что заболевание органов пищеварения (50 %) , истощения (22,2 %) и органов дыхания (5 %) являются основными причинами падежа КРС в неблагополучном пункте. Не исключена связь этого фактора с возможными нарушениями в кормлении и содержании животных, а также с несоблюдением зооветеринарных требований.

Имеющиеся случаи выявления травм ( 3 %) и нарушения обмена веществ (2 %), могут являться следствием недоработки со стороны работников, т.к. в хозяйстве наблюдается нехватка кадров как специалистов, так и простых рабочих.

3. Экономическое обоснование проведенных мероприятий

Темой настоящей дипломной работы является исследование методов диагностики и оздоровления неблагополучных пунктов по бруцеллёзу крупного рогатого скота в Приаргунском районе Забайкальского края. Данное заболевание наносит ощутимый экономический вред не только сельскому хозяйству, но и в целом оказывает воздействие на экономику РФ.

Исследования проводились на примере СПК «ПЗ 60 лет СССР», находящегося на территории сельского поселения «Староцурухайтуйское» муниципального района «Приаргунский район» Забайкальского края.

Исследование животных на бруцеллёз в данном хозяйстве проводилось несколькими методами:

РИД- стоимость данного исследования составляет 390 рублей;

РДСК- стоимость данного исследования составляет 180 рублей;

РА- стоимость данного исследования составляет 160 рублей.

Исследование одной пробы крови по данным реакциям составляет 730 рублей.

Таким образом за период с июня по...