Продуктивность норок стандартной породы при использовании комплексного иммунного модулятора

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФГОУ ВПО «СТАВРОПОЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Продуктивность норок стандартной породы при использовании комплексного иммунного модулятора (КИМ)

Специальность 06.02.04 - частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства

МОРЕНКО ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА

Научный руководитель

доктор сельскохозяйственных наук,

профессор Погодаев В.А.

Ставрополь, 2006

Содержание

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Пути и методы иммуностимуляции организма животных

1.2 Виды и механизмы действия

1.3 Использование иммуномодулирующих и биологически активных препаратов в пушном звероводстве

1.4 Влияние биологически активных веществ на плодовитость норок

1.5 Иммуннодефицитные состояния

1.6 Инфекционная патология у пушных зверей

1.7 Иммунодефицитные состояния у молодняка пушных зверей

2. Материалы и методы исследования

3. Результаты исследования

3.1 Технология приготовления и состав комплексного иммунного модулятора КИМ

3.1.1 Технология приготовления комплексного иммунного модулятора КИМ

3.1.2 Состав комплексного иммунного модулятора КИМ

3.1.3 Испытание препарата КИМ на лабораторных животных

3.2 Влияние комплексного иммунного модулятора КИМ на рост, развитие и сохранность молодняка норок в подсосный период

3.3 Использование комплексного иммунного модулятора КИМ на отсаженном молодняке норок

3.3.1 Весовой и линейный рост молодняка норок

3.3.2 Морфологические и биохимические показатели крови подопытного молодняка норок

3.3.3 Показатели качества пушнины у подопытного молодняка норок

3.4 Использование комплексного иммунного модулятора КИМ на взрослых самцах в период подготовки и проведения гона

3.4.1 Воспроизводительная способность самцов

3.4.2 Интерьерные показатели самцов норок

3.4.2.1 Показатели естественной резистентности организма самцов

3.4.2.2 Морфологические показатели крови подопытных самцов

3.4.2.3 Показатели минерального обмена сыворотки крови подопытных самцов

3.4.2.4 Показатели ферментной активности крови подопытных самцов

3.4.3 Развитие внутренних органов подопытных самцов

3.5 Использование комплексного иммунного модулятора КИМ на самках норок

3.5.1 Использование комплексного иммунного модулятора КИМ на самках в период подготовки гона и проведения щенения

3.5.2 Использование комплексного иммунного модулятора КИМ на самках норок, страдающих лактационным истощением

3.5.3 Анализ качества пушнины самок норок опытных групп

3.6 Экономическая эффективность

Выводы

Предложения производству

Библиографический список

Введение

комплексный иммунный модулятор норка

Актуальность темы. Звероводство - отрасль народного хозяйства, занимающаяся разведением пушных зверей, она является одной из самых молодых отраслей сельского хозяйства, насчитывающая менее 100 лет своего существования.

Звероводческие хозяйства России в настоящее время находятся в условиях жесткой конкуренции с западными производителями пушнины. Потребности пушно-мехового российского рынка удовлетворяется за счет собственного производства не более чем на 25-30%, остальное завозится из-за рубежа в виде сырья и меховых изделий.

Нарушение хозяйственных связей звероферм и предприятий перерабатывающей промышленности обусловило перевод звероводства на корма с низкой биологической ценностью.

В структуре себестоимости шкурковой продукции на долю кормов приходится около 70%. При этом 65-70% рациона состоит из дорогостоящих кормов, поставляемых мясо- и рыбоперерабатывающей промышленностью. Одним из основных резервов снижения себестоимости продукции пушного звероводства наряду с совершенствованием существующих пород и методов отбора племенного молодняка, дальнейшей механизацией основных процессов обслуживания животных является внедрение в кормление зверей новых, нетрадиционных биологически активных веществ.

Перспективность и значение использования биологически активных веществ и стимуляторов в звероводстве определяется тем, что данные препараты улучшают усвояемость кормов, позволяет повысить воспроизводительные качества самок норок, сохранность молодняка, увеличить размеры шкурок, улучшить качество пушнины и повысить рентабельность отрасли.

В.А. Погодаевым, Е.А. Моренко, Е.А. Киц разработан новый комплексный иммунный модулятор КИМ (патент на изобретение № 2264221 от 24.02.2004г.), он регулирует иммунную систему организма и повышает выносливость организма к стрессам, связанным как с неблагоприятным воздействием окружающей среды, так и с особенностями содержания и ухода за хищными зверями.

Цель и основные задачи исследования. Основной целью работы явилась разработка комплексного, эффективного и дешевого препарата, обладающего иммуномодулирующими свойствами, а также изучение его эффективности при патологических состояниях у животных, установление оптимальных доз и кратности применения препарата КИМ с целью повышения продуктивности и улучшения качества шкурок норок.

Для достижения основной цели были поставлены следующие задачи.

Испытать как доступное, качественное и дешевое сырье для получения биологически активного препарата массу оплодотворенного куриного яйца.

Разработать комплекс биотехнологических приемов приготовления препарата-биостимулятора для животных, обеспечивающий максимальную активность за счет сохранения полезных свойств субстрата.

Экспериментальным путем подтвердить активность и безвредность препарата, определить минимальную лечебную дозу и схему его применения.

Изучить влияние препарата на хозяйственно биологические признаки и качество продукции норок: изучение роста, развития молодняка, воспроизводительных качеств зверей различных половозрастных групп в разные периоды жизни (подготовка к гону, гон, щенение, лактация и т.д.) и качества шкурок.

Научная новизна работы. Разработан и экспериментально апробирован новый комплексный биологически активный препарат, обладающий свойствами иммуномодулятора, изготовленный по запатентованной нами технологии из оплодотворенного куриного яйца (патент на изобретение №2264221).

Впервые у норок изучена специфическая активность биомодулятора, который не вызывает отклонений от физиологических пределов функционирования основных систем, не нарушает процессов иммуногенеза у норок после иммунизации, улучшает усвоение питательных веществ и увеличивает живую массу зверей.

В контексте диссертационной работы иммунокорреция является основной функцией биомодулятора. Благодаря стимулирующему действию на ткани препарат восстанавливает подавленные функциональное состояние всех органов и систем, предотвращают отход при иммунодефицитных состояниях, а также защищает от гибели самок при лактационном истощении.

Теоретическая и практическая значимость. Впервые проведены комплексные исследования по определению влияния препарата КИМ на хозяйственно-билогические признаки и качество продукции норок. Определены оптимальные дозы и кратность введения препарата КИМ норкам различных половозрастных групп.

На основании проведенных исследований при разработке технических условий по приготовлению и испытанию препарата была разработана и утверждена документация, получен патент. На основании данных, полученных при изучении влияния препарата КИМ на норок различных половозрастных групп, даны предложения и рекомендации по использованию препарата КИМ для повышения роста и развития молодняка, улучшению воспроизводительных способностей зверей и повышения качества шкурок норок.

Научные разработки внедрены в ЗАО зверохозяйстве «Лесные ключи» Шпаковского района, Ставропольского края.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены, обсуждены и одобрены:

- Научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехнической и ветеринарной науки и практики в АПК» СНИИЖК Ставрополь, 2005;

- I Всероссийской научно-практической конференции «Роль науки Южного Федерального округа в развитии животноводства по реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» Черкесск, 2006.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных статей, в которых изложены основные материалы выполненной работы.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, предложения и библиографический список. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 11 рисунками. Библиографический список включает 158 источников, в том числе 35 на иностранных авторов языках.

1. Обзор литературы

1.1 Пути и методы иммуностимуляции организма животных

Приобретенные свойства иммунодефицитных состояний животных могут нивелироваться и предотвращаться биомодуляторами. Именно модуляторы широкого спектра действия могут быть эффективными, поскольку при иммунодефицитных состояниях кроме угнетения клеточной и гуморальной систем иммунитета ингибированными могут оказаться клетки паренхимы функционально заторможенных иных систем. То есть восстанавливающий иммунодефицитное состояние препарат должен быть минимум бифункциональным: стимулировать иммунитет и активизировать заторможенные, подавленные клетки или функции паренхимной ткани. (П.А. Емельяненко, 1997)

Биомодуляторы не вызывают отклонений от физиологических пределов функционирования основных систем, не нарушают процессов иммуногенеза у норок после иммунизации, улучшают усвоение питательных веществ и повышают живую массу зверей.

В контексте диссертационной работы иммунокорреция является основной функцией биомодуляторов. Благодаря стимулирующему действию на ингибированные ткани они восстанавливают подавленные функции органов, предотвращают отход при плазмоцитозе и иммунодефицитных состояниях, а также защищают от гибели самок при лактационном истощении. В основе физиологической стимуляции лежит направленное изменение обменных функций организма с обязательным превалированием ассимилятивных процессов. При этом характер изменения метаболизма находится в тесной зависимости от стимулирующего фактора и его относительной специфичности. (Н.Г. Беленький, 1959). Есть несколько видов стимулирующей терапии различающихся по характеру стимулирующего фактора. Стимулирующая фармакотерапия используется в ветеринарии для стимуляции центральной нервной системы животных: кофеин, камфара, коразол, кордиамин, стрихнин, женьшень, лимонник и другие вещества. При введении в организм в малых дозах они способны быстро поднимать и поддерживать жизненный тонус организма, благотворно влияя на обменные процессы, улучшая функции кровообращения и дыхания, но все они в той или иной мере активизируют центральную нервную систему. Стимулирующая физиотерапия, по данным В.М. Юркова (1991) влияет на обмен газов и других веществ в организме, который тесно связан с интенсивностью и продолжительностью освещенности, а также со спектральным составом света. Полученные им данные свидетельствуют о том, что обмен веществ в организме животных наиболее эффективно протекает при освещении помещения источниками света, имеющими полный спектр. В настоящее время в арсенале ветеринарной службы имеется несколько аппаратов лазерного излучения, из которых наиболее распространены «СТП», «Милта», «Вега-МВ» и «Петролазер» (В.П. Иноземцев и др., 1997; А.А. Катаранов, В.С. Авдеенко, 1997; Н.К. Комарова, О.Л. Чернова, 1997; Г.В. Небогатиков, В.Д. Кочарян, Ю.В. Шевырев, 1997). Парентеральное введение в организм белковых веществ с лечебной целью называется протеинотерапией. Этот термин был введен Шмидтом в 1916 году. В качестве белковых препаратов используют кровь, сыворотку крови, молоко и другие вещества. В зависимости от применяемого белкового вещества различают гемотерапию, серотерапию и лактотерапию. Используют также гистолизаты, тканевые препараты, антиретикулярные цитотоксические сыворотки, которые имеют более сложный механизм действия на организм, но в них в какой-то мере также заложены принципы протеинотерапии (по Н.И Краузе, 1949; В.П. Филатову, 1955; Мозгову, 1961; И.А. Калашнику, 1990; Д.И. Барабаш, 1998). Понятие органотерапия объединяет в себе лечебные методы, связанные с применением препаратов из органов, тканей животных, содержащих комплекс специфических и общестимулирующих веществ. Различают специфические методы лечения: гормонотерапия - лечение гормонами, ферментотерапия - ферментами и витаминотерапия - витаминами. Органопрепараты содержат гормоны, ферменты, антитела, витамины, медиаторы, белки, аминокислоты и биологически активные соединения. Механизм действия органопрепаратов различен и зависит от содержания в них разных биологически активных соединений. Гистолизаты - это органотерапевтические препараты, приготовленные методом расщепления или растворения тканей, действующим началом которых служат продукты распада тканей отдельных органов. Учение о гистолизатах М.П. Тушнова (1936) основано на его идеи о натуральных клеточных ядрах.Белковые гидролизаты представляют собой смесь аминокислот и простейших пептидов. Их получают из крови, казеина и растительных белков (M. Sela, E. Mozes, 1979). Известно, что тканевые препараты обладают высокой терапевтической эффективностью и выраженной способностью повышать устойчивость организма к патогенным влияниям, восстанавливать нарушенные физиологические процессы (И.А. Калашник, 1990).

Не подлежит сомнению, что в различных тканях и органах содержится комплекс регуляторных пептидов, принимающих непосредственное участие в межклеточной сигнализации (И.П. Ашмарин, М.А. Каменская, 1988).

Впервые пептидные биорегуляторы многоклеточных систем, названные впоследствии цитомединами, были выделены в 1971 году из гипоталамической области мозга, эпифиза, тимуса и сосудистой стенки. Однако первые публикации по этой проблеме относятся лишь к 1973-1974 гг. (Л.В. Филев и др., 1984; В.Г. Морозов, Г.А. Рыжик, В.В. Малинин, 1999). Оказалось, что все цитомедины оказывают иммуномодулирующее, противосвертывающее и противоопухолевое воздействия (В.Н. Анисимов и др., 1973; P. Jolles, A. Paraf, 1973; Y. Weinstein, K.L. Melmon, 1976; B.N. Waksman, A.B. Wagshal, 1978; B.N. Waksman, 1979; M. Sela, E. Mozes, 1979)

1.2 Виды и механизмы действия

Биостимуляторами называются вещества, которые различными путями действуя на ткань, орган или систему органов, сначала в большей или меньшей степени повышают общую реактивность организма, а затем повышают реактивность одной или нескольких функциональных систем организма, соответственно относительной специфичности действия стимулятора. В основе всех видов физиологической стимуляции напрямую или опосредовано лежит действие биостимулятора.

В связи с широким распространением и разнообразием иммунодефицитов, особенно среди молодняка, а также огромным экономическим ущербом, вызываемым ими, важнейшей проблемой, занимающей на протяжении многих десятилетий видное место в исследованиях многих ученых - биологов, является получение биостимуляторов роста и защитных свойств организма.

Ряд авторов, таких как В.П. Филатов (1946), Н.И. Краузе (1949); Г.Е. Румянцев (1950); В.А. Герман (1951); Н.Е. Дорогов (1952); Г.Э. Маннов, Н.И. Серков (1959) и другие, использовали для этих целей тканевые препараты, антибиотики, витамины, гормоны, специфические сыворотки, бактериальные и фармацевтические препараты. На протяжении нескольких лет уделяется большое внимание тканевым препаратам, как наиболее доступным и высокоэффективным.

В своих работах В.П. Филатов (1955) исходил из предположения, что животные ткани, отделенные от организма, погибают не сразу, в них долго сохраняется обмен веществ, протекающий различно в зависимости от того, в каких условиях они находятся. При воздействии неблагоприятных факторов обмен веществ сопровождается выработкой весьма активных биологических веществ, названных им веществами сопротивления или биогенными стимуляторами. Биостимуляторы, изготовленные по методу В.П. Филатова (1946), получили название тканевых препаратов. Он же разработал теорию тканевой терапии и предложил использовать консервированные ткани животного и растительного происхождения. По данным таких ученых, как В.П. Филатов (1946), Г.Е. Румянцев (1950), биогенные стимуляторы являются веществами небелковой природы и представлены преимущественно яблочной, лимонной, молочной, янтарной, карбоновыми кислотами.

М.П. Тушнов (1936), Н.И. Краузе (1949) и другие авторы стимулирующее действие тканевых препаратов связывают с продуктами распада белков - нуклеопротеидов и гистаминов, а также с гиалуроновой кислотой, биокатализаторами и аминокислотами, в частности, аргениновой и глютаминовой, образующимися в процессе консервирования тканей.

Биогенные стимуляторы возникают и образуются не только в консервированных тканях, но и в организме животных при неблагоприятном воздействии внешней среды, усиленной мышечной работе, после подкожных инъекций антиретикулярной цитотоксической сыворотки (по Богомольцу), крови реконваленсцентов, облучения ультрафиолетовыми и рентгеновскими лучами и после воздействия красным лучом гелий-неонового лазера малой интенсивности, вызывающими в организме животных резонансный эффект (И.Е. Мозгов, 1961).

И.И. Чикало (1947) установлено, что экстракты из консервированных листьев растений, лишенных белков, усиливают действие протеолитических ферментов.

И.Е. Мозгов (1961) указывает, что в действии биогенных стимуляторов обращает на себя внимание тот факт, что они весьма умеренно активизируют физиологические процессы здорового организма и повышают устойчивость его к неблагоприятным факторам. При заболеваниях животных эти же биогенные стимуляторы ведут к восстановлению нормального состояния.

По данным Н.Г. Беленького (1959), многочисленные опыты показали, что в основе механизма стимуляции, какой бы природы она ни была, лежат соответствующие изменения обмена веществ.

Исследования Н.Д. Придыбайло (1991) показали, что разнообразие веществ со сходной иммуностимулирующей активностью, химическая структура которых часто не имеет ничего общего, затрудняет изучение механизма их действия. Трудно предположить, что у сотен известных стимуляторов иммунного ответа есть сотни различных механизмов действия.

М.С. Ломакин (1990) полагает, что в основе механизма стимулирующего действия иммунотропных средств заложен эффект неспецифической защиты. Самыми древними из них являются фагоцитоз, комплемент, опсонин, продукция лизоцима, образование интерферона. В комплексную систему защиты входит также спонтанная клеточная цитотоксичность, эффекторами которой являются макрофаги, полиморфноядерные лейкоциты, Т-клеточные предшественники, Т- и В-лимфоциты. Спонтанная клеточная цитотоксичность в значительной мере зависит от продуцируемых этими клетками медиаторов.

Механизм действия иммуностимуляторов можно рассматривать также с позиции гипотезы системы биологических регуляторов - цитомединов, которые осуществляют перенос специфической информации, необходимой для нормального функционирования, развития и взаимодействия клеточных популяций (В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон, 1983).

Предполагается, что в основе их функционирования лежат тканеспецифичность, геномный уровень регуляции и специфическая индукция процессов цитодифференцировки клеток-мишеней (Л.А. Кожемякин и др., 1987).

Н.Г. Беленький (1959) указывает, что в природе не существует абсолютно специфических стимуляторов, то есть стимуляторов, действующих на гомологичную ткань, орган, систему органов, строго ограниченно или адекватно. Влияние стимулятора любого диапазона действия на организм животного, по его мнению, протекает двухфазно. В первой фазе организм в большей или меньшей степени реагирует изменением своей общей реактивности, то есть свойством отвечать изменением обменных функций на разнообразные колебания условий жизни. Во второй фазе выявляется преимущественное повышение реактивности одной или нескольких функциональных систем организма соответственно относительной специфичности действия стимулятора. Он же отмечает, что любая по своему характеру стимуляция обязательно в какой-то мере затрагивает все звенья нейрогуморальной регуляции в смысле активации физиологических процессов. Это касается центральной и вегетативной нервных систем, гормональной функции, физиологической системы соединительной ткани и других, а, в общем - метаболизма в целом.

Первичной точкой приложения действия стимулятора является рецепция, заложенная как на всем протяжении сосудистого русла, так и во всей совокупности тканей организма, могущих служить местом для введения стимулирующего начала или контакта с ним (К.И. Шакалов, 1961).

Л.М. Заблудовский (1953) полагает, что биогенные стимуляторы действуют по типу новокаиновой блокады.

По Г.Е. Румянцеву (1950), тканевые препараты содержат специфические вещества - биокатализаторы и специфические вещества, включающиеся в восстановительные процессы.

Одними из наиболее эффективных препаратов относящихся к группе стимуляторов, являются иммуномодуляторы. Суть иммуномодуляции состоит в том, что один и тот же фармакологический агент может действовать в разных дозовых и временных режимах и таким образом давать иммуномодулирующий эффект (R.E. Cone, 1979.К.В. Flemming, 1985; S.H. Kowalczuk-Bronisz, 1986)

По данным Н.Д. Предыбайло (1991), номенклатура иммуномодуляторов разнообразна. Они представляют собой большую группу гетерогенных по природе, свойствам, конкретному получаемому эффекту и механизму действия веществ. Поэтому многочисленные попытки разработать универсальную классификацию иммуномодуляторов с учетом перечисленных характеристик пока не дали желаемого результата. Он приводит одну из последних классификаций иммуномодуляторов в ветеринарии (R.B. Parker, 1974; В.А. Vanselow, 1987; R. Fuller, 1989), которая выделяет 5 групп веществ:

1) биологические субстанции: микобактерии, коринебактерии, бордетеллы, нокардии, смешанные бактериальные токсины, вирусы, включающие птичью оспу и парамиксовирусы, сапонины, витамины А и Е, ланолин;

2) химические субстанции бактерий и грибов: липополисахариды, полисахариды, мурамилдипептид, связывающий фактор;

3) биологические продукты иммунной системы: химические гормоны, лимфокины и цитокины, включая интерферон;

4) синтетические биологические аналоги: двуспиральные РНК, такие как поли U: С: поли А: U, синтетические МДП и ТДМ, стеарин тирозина гидрохлорид;

5) химические препараты: соединения алюминия, декстран сульфат, масляная эмульсия левамизоля, липосомы полиакриловые адьюванты, сывороточный альбумин, синтетические полимеры.

Все перечисленные субстанции, как правило, применяются для стимуляции иммунного ответа, хотя в больших дозах они могут вызывать и его угнетение (R.E. Cone, 1979; А.М. Паланский, В.В. Герман, В.А. Бусол, 1989).

Научно обоснованные принципы применения иммуномодуляторов в ветеринарии еще не разработаны, однако наиболее общие из них для профилактики и лечения животных, уже определены:

· выбор иммуномодулирующих средств должен быть основан на их способности к специфическому усилению тех звеньев иммунной системы, которые снижают способность возбудителя вызывать инфекционное заболевание;

· выбор времени введения иммуномодулирующих веществ должен обеспечивать максимальную защиту в самые опасные для заражения периоды жизни;

· используемые иммуномодулирующие препараты необходимо применять в сочетаниях с другими стандартными методами лечения;

· применение иммуномодулирующих препаратов необходимо увязывать с технологическим процессом в животноводстве;

· иммуномодуляция не должна снижать качество продуктов животноводства;

· необходимы разработка и совершенствование тест-систем разного уровня для контроля состояния иммунной системы организма животного.

Известно множество веществ и соединений, влияющих на иммунные свойства организма. Они имеют различную химическую структуру и обладают действием на разные цепи иммунной системы.

Круг этих веществ чрезвычайно обширен: синтетические химические соединения, продукты жизнедеятельности микроорганизмов, биологические продукты иммунной системы (Б.И. Кузник, А.В. Степанов, Н.И. Цыбинов, 1987; M. Aita, 1993; Д.И. Барабаш, 1998; Д.А. Девришов, 2000; В.С. Бузлама, 2002; М.С. Жаков и др., 2000).

Механизм действия известных биостимуляторов разнообразен. Наибольший интерес, в связи с этим, представляют тканевые препараты, зарекомендовавшие себя, как наиболее эффективные и универсальные иммуностимулирующие средства (Н.И Краузе, 1949; В.П. Филатов, 1955; И.Е. Мозгов, 1961; И.А. Калашник, 1990; Д.И. Барабаш, 1998).

Тканевые препараты действуют благотворно в основном на те органы, из которых они изготовлены. Другие соединения действуют, опосредовано, через усиление или коррекцию обмена веществ в отдельных органах или в организме в целом. Причем действие каждого из биостимуляторов определяется, тем или иным специфическим биологическим соединением или их комплексом, являющимся действующим началом.

Несмотря на широкую известность, многие препараты, обладающие стимулирующим действием, недоступны для большинства сельскохозяйственных производителей или используются ими ограничено, что обусловлено многими причинами. В некоторых случаях это недостаточная эффективность препарата, ограниченная специфической направленностью действующего начала, в других - его большая стоимость или сложность технологии приготовления.

Несмотря на многообразие и сложность процессов, как осуществления иммунитета, так и нарушения его функционирования, все исследователи, изучающие эту область биологической науки, единодушны в том, что иммунодефицитные состояния или недостаточность иммунного ответа лежат в основе развития обширной группы заболеваний наследственной или приобретенной природы, общий признак которых - дефект гуморального или клеточного звена иммунитета (С. Collins-Williams, 1969; А.А Сохин, Е.Ф. Чернушенко, 1984; И.М. Карпуть, М.П. Бабина, 1998; А.В. Караулов, 1999; А.И. Гусев, Е.В. Щербаков, С.А. Власов, 2001)

Как считают большинство отечественных исследователей, основным этиологическим фактором, приводящим к нарушению иммунной функции в организме животных, является экологическая обстановка.

По данным Ю.Н. Бригадирова, А.И. Ануфриева, В.М. Асланова, 1997 комплексное воздействие различных факторов, таких как экологическая среда обитания, состояние кормления, содержания и внутреннего обмена веществ, имеют значительное влияние на неспецифическую резистентность свиней в Воронежской области. Смертность молодняка в группах 0-2 и 2-4 от желудочно-кишечных и респираторных болезней составил 40-50% от числа родившихся. После нормализации обмена веществ при помощи внесения в рацион свиноматок различных премиксов и выгона их на пастбища улучшились показатели неспецифической резистентности, а у молодняка, родившегося от таких животных, отсутствовали расстройства со стороны желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы. Такие же результаты получены и на телятах в той же Воронежской области (М.А. Костына, 2002).

При наличии иммунодефицитов серьезную угрозу представляют не только высокопатогенные возбудители, но и условно-патогенные микробы, так называемые микст-инфекции, обусловленные сочетанием нескольких слабопатогенных возбудителей. Это сопряжено со снижением естественной резистентности у животных (Л.В. Деменко, Н.Н. Ткаченко, В.М. Апатенко, 2000).

Проведенные гистологические исследования иммунокомпетентных органов взятых у поросят с неинфекционной патологией, показали, что иммунодефицитные состояния встречались в 100% случаев. Следовательно, иммунодефицитные состояния характерны не только для инфекционных заболеваний у сельскохозяйственных животных, но и для неинфекционной патологии, в особенности заболеваний органов дыхания и пищеварения (А.А. Буянов и др., 2000).

И.М. Донник (1997) указывает, что под влиянием экологических факторов у животных происходит угнетение иммунной системы, что в свою очередь оказывает влияние на формирование поствакцинального иммунитета и общую резистентность организма.

Наиболее убедительно и обоснованно об иммунодефицитных состояниях у молодняка животных сообщает И.М. Карпуть (1998). Он утверждает, что большинство болезней молодняка возникает на фоне возрастной и приобретенной иммунной недостаточности. Среди них чаще всего встречаются заболевания с диарейным, респираторным, септическим и кожным синдромами. Также он доказывает, что в жизни молодняка раннего возраста четко выделяется два возрастных иммунных дефицита - критические иммунологические периоды. Первый возрастной иммунный дефицит связан с недостатком или с несвоевременным поступлением с молозивом или трансовариально защитных факторов, а также с нарушением их адсорбции и незрелостью иммунной системы. Он проявляется выраженной гуморальной и слабее клеточной иммунной недостаточностью. Наиболее характерными симптомами для возрастного иммунного дефицита периода новорожденности являются невысокий уровень клеточных факторов защиты, отсутствие или незначительное содержание иммуноглобулинов, слабая лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови. Второй возрастной иммунный дефицит отмечается у молодняка на 7-14 день или в первый месяц жизни. Для него характерно первоначально снижение показателей гуморального иммунитета при одновременном усилении фагоцитарной активности микрофагов, а в последующем - в период выраженной иммунной недостаточности падение всех показателей естественной резистентности и иммунной реактивности клеточного и гуморального типов.

Активность и свойства любого иммуностимулятора прежде всего зависят от его технологии приготовления. В данное время существует огромное количество таких технологий.

В основе тканевой терапии лежит учение о биогенных стимуляторах, разработанное В.П. Филатовым (1946). Основные положения этого учения В.П. Филатовым (1946) сформулированы следующим образом: отделенные от организма животного или растения ткани, при воздействии на них таких факторов среды, которые затрудняют их жизнь, подвергаются биохимической перестройки. При этом в тканях вырабатываются вещества, стимулирующие биологические процессы в этих тканях. Вещества эти, помогающие тканям сохранить жизнь в неблагоприятных условиях, называются биогенными стимуляторами. Эти биологически активные соединения, будучи введены тем или иным путем, в какой-либо организм, активируют в нем жизненные процессы. Усиливая обмен веществ, они тем самым повышают физиологические функции организма. Биогенные стимуляторы возникают и в целых живых организмах, подвергнутых неблагоприятным, но не убивающим их условиям среды. Факторы среды, вызывающие появление этих биохимических соединений, могут быть разнообразными. Так, биогенные стимуляторы накапливаются в тканях и организмах при действии каких-то внешних и внутренних факторов, которые приводят к нарушению нормального обмена и в химическом отношении являются продуктами такого нарушенного обмена. Они действуют на весь организм в целом.

Методика приготовления препаратов по В.П. Филатову (1946) достаточно простая. Животные ткани, заготовленные в асептических условиях, разрезают на кусочки и помещают в холодильник при 2-4°С сроком на 6-7 суток. После этого из них получают экстракты или автоклавируют и имплантируют.

И.А. Калашник (1990) считает, что вторично автоклавированная ткань пригодна для подсадок в течение 2-3 месяцев при хранении ее в холодильнике при 2-4°С, при условии хорошо залитых горловин банок и пробок парафином.

По Н.И. Краузе (1949), в стеклянные банки с притертой пробкой, наполненные 2% раствором хлороцида, помещают кусочки тканей массой 2,5-3 г, но не более 20 г и ставят в темное место при комнатной температуре. Впервые 3-4 дня раствор хлороцида меняют ежедневно, потом - на шестой день. После ежесуточной консервации ткани пригодны для имплантации.

Приготовление тканевых взвесей по В.А. Герману (1954) и И.А. Калашнику (1960): консервированную в рефрижераторе ткань пропускают через стерильную мясорубку и растирают в стерильной ступке. Полученный фарш разбавляют в соотношении 1-3 изотоническим раствором поваренной соли, настаивают при комнатной температуре 2 часа подогревают на водяной бане при температуре 80°С в течение 60 минут, фильтруют через два слоя стерильной марли. Фильтрат заливают по 10-15 мл в ампулы, запаивают их и автоклавируют при 120°С в течение 60 минут. Хранят в прохладном, темном помещении.

Заслуживает внимания состав и технология приготовления тканевого препарата «ПСК» (препарат селезенки и крови), предложенный К.А. Рейдлом (1984). Препарат состоит из двух частей суспензии селезенки и одной части крови, консервированной 4,5% раствором натрия цитрата (кровь готовят по И.А. Калашнику, 1960) и подвергают автоклавированию.

Для приготовление тканевого препарата из кости от здорового животного после убоя берут эпифизы трубчатых костей и консервируют при температуре 2-4°С в течение 4 суток. Затем кости автоклавируют при 4 атмосферах в течение 3 часов, после чего высушивают в сушильном шкафу при температуре 70-100°С в течение двух суток, измельчают в шаровой мельнице до тонкого порошкообразного состояния и просеивают через густое сито. Полученную костную муку таким образом смешивают с 0,2% раствором агар-агара в соотношении 1:2, разливают во флаконы с притертыми пробками и автоклавируют в течение 1 часа при 120°С Л.И. Юрченко (1970).

В качестве субстратов используемых для приготовления тканевых препаратов большинство исследователей рекомендуют ткани с высокой активностью роста, а значит и обмена веществ. Это эмбриональные ткани, плацента, семенники, кровь и другие.

В ветеринарной практике широко применяют мазь, приготовленную по Д.И. Гольдбергу (1942). Для ее изготовления в асептических условиях берут 5-6-месячные плоды крупного рогатого скота и 2-3-месячные мелкого рогатого скота от заведомо здоровых животных в период убоя. Плод измельчают в стерильной мясорубке, полученный фарш тщательно растирают в стерильной фарфоровой ступке с последующим добавлением к 250-300 г тканевой массы 5 г ксероформа или 15 г белого стрептоцида и 700 г белого вазелина. Все ингредиенты тщательно растирают в ступке до однообразной консистенции. Готовую мазь сохраняют в стерильных закрытых банках емкостью 100-150 мл при низкой температуре. Применяют для лечения ран и язв.

Тканевая мазь по П.Ф. Симбирцеву (1955) состоит из 90-95 г тканевого фарша из семенников и 5-10 г дихлорамина Б. Семенники берут во время кастрации или убоя молодых животных, тщательно отмывают от крови и консервируют в 2% растворе хлороцида в течение 10 дней. Затем, сняв с семенников оболочку, паренхиму измельчают и тщательно растирают в фарфоровой ступке или гомогенизаторе. К полученной массе добавляют дихлорамин Б и снова тщательно растирают. Хранят мазь в темных широкогорлых банках с притертой пробкой в прохладном помещении.

Заслуживает внимания технология приготовление сухого тканевого биостимулятора по методу В.П. Багинкаса (1960). При убое здоровых животных берут селезенку (64%), печень (10%), надпочечники (1%), кровь (15%), эмбрионы (10%), которые помещают в холодильник на 4-6 суток при температуре 1-4°С для консервации. Потом измельчают в мясорубке, загружают в котел Лаабаса и сушат 1 час при температуре внутри котла 90-100 °С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы. Затем включают вакуум-устройство, давление пара в рубашке котла уменьшают до 0,5 атмосфер и сушку продолжают при температуре внутри котла 60-80 °С. Высушенную тканевую массу измельчают в шаровой мельнице.

Р.М. Полковников, Л.Т. Туренкова (2000) на основе принципов В.П. Филатова разработали и производят новый биостимулятор - «Плацента активное начало» (ПАН) из плацент женщин. Препарат изготавливается по новой технологии без термообработки, с использованием при стерилизации эффекта кавитации, вновь открытых химических реагентов и оборудования, ранее используемого в военно-промышленном комплексе. Новая технология позволила стабилизировать биологический состав препарата, увеличить его активность за счет сохранения комплекса биологических веществ, увеличить сроки хранения и диапазон применения.

При приготовление полипептидных биорегуляторов по И.Ю. Фролову (1993) брали тимус, фабрициевую сумку цыплят-бройлеров в возрасте от 2 до 45 дней, 10-суточные эмбрионы. Использовали органы, полученные не позднее 2 часов после убоя птицы или плодов животных. Затем их очищают от жира, помещали в холодильник (-4°С) и выдерживали не более 5 суток. Затем органы измельчали, заливая 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:2, нагревали до 37°С, фильтровали и расфасовывали в стеклянные флаконы. Также им готовился препарат для применения внутрь с кормом. Органы (фабрициева сумка, тимус, аппендикс) высушивались в автоклаве при температуре 100єС, давлении 0,5 атмосферы.

Этот же автор рекомендовал для улучшения выживаемости эмбрионов облучать их при помощи лазера на 4 сутки инкубации, однако в иммунных органах морфологических изменений не наблюдалось. Интересно, что при этом брали только органы эмбриона, а остатки яичной массы не использовались. Учитывая то, что соотношение эмбриональных и вне эмбриональных тканей на 10 сутки инкубации составляет 49%:51%, и к этому времени начинают активно секретировать железы внутренней секреции, начинается гематопоэз в костном мозге, целесообразно использовать весь комплекс тканей яйца в производстве иммуномодулирующих препаратов.

Яйцо в целом является удачным субстратом по составу компонентов и содержанию питательных веществ, по наличию таких показателей неспецифической резистентности, как бактерицидной и лизоцимной активности. По данным Ю.З. Буртова (1990), в состав яйца входят вода - 73-74%, сухие вещества - 26-27%. В состав сухих веществ входят 25-26% органических и 0,6-0,8% неорганических соединений, в том числе 12-13% протеинов, 11-12% жиров, 0,8-1,2 % углеводов. Протеин богат аминокислотами, в том числе незаменимыми (в % воздушно-сухого вещества): глицин - 1,16; аланин - 1,86; серин - 2,49; трионин - 1,89; валин - 2,07; лейцин - 3,04; цистин - 0,82; метионин - 0,87; изолейцин - 1,92; заменимыми: аспарагиновая кислота - 2,36; глутаминовая кислота - 3,45; пролин - 1,57; тирозин - 1,48; фенилаланин - 1,53. Яйцо также богато витаминами. В белке яйца есть витамины группы В, витамины Н, РР; в желтке, кроме этих витаминов, есть витамины А, Д, Е, а также каротиноиды. В состав липидов входят глицериды (жиры) - 3,7-3,9 г, фосфолипиды - 1,8-2,0 г, стеролы - 0,2-0,3 г, цереброзиды - 0,03-0,05 г. Состав неорганических соединений также разнообразен. В них входят следующие минеральные вещества: сера, калий, натрий, хлор, фосфор, кальций, магний, железо, медь, йод, марганец, цинк, кремний. Важнейшим показателем неспецифической резистентности яйца является лизоцим - 3,8-5,9 мг/мл. Все это и то, что яйцо является живой клеткой, любой его субстрат может явиться биологически активным компонентом препарата.

К сожалению, вопросы применения яйца с целью приготовления тканевых препаратов не нашли должного отражения в практике и заключаются в единичных попытках, дающих - и это хочется отметить - положительные результаты. Это исследования И.Ю. Фролова (1990-2002), который изготавливал биологически активный препарат из тканей тимуса и фабрициевой сумки кур и применял его при лечении ран и ожогов у цыплят. Также такие данные были получены 1991 году В.И. Андрющенко и С.В. Кутиковой. Путем скармливания яичной массы, консервированной по В.И. Филатову, были получены результаты, которые выражались в увеличении живой массы и яйценоскости кур породы русская белая.

Исходя из вышеизложенного, можно утверждать, что важнейшими общими биотехнологическими принципами при разработке и производственном изготовлении биологически активных биостимуляторов являются выбор исходного субстрата и подбор технологических приемов его обработки. Анализ литературы показал, что именно эти факторы обеспечивают высокое качество полученных препаратов и заслуживают особого внимания при разработке новых и совершенствовании известных биостимулирующих средств.

Подводя краткий итог полученных сведений, отраженных в обзоре литературы в целом по изучаемой проблеме, следует отметить, что иммунодефицитные состояния как первичные, вторичные, так и комбинированные широко распространены среди молодняка различных видов животных и наносят в связи с этим большой экономический ущерб сельскому хозяйству. Такой характер иммунодефицитов усложняет специфику подбора определенного препарата, поскольку большинство из них влияет преимущественно на одно или несколько звеньев иммунитета, что диктует необходимость разработки новых биологически активных препаратов.

Большинство авторов единодушны в том, что такими свойствами обладают иммуномодуляторы, которые по химическому составу являются чаще всего полипептидами, полисахаридами и др. Действующим началом иммуномодуляторов являются, по общепризнанному мнению, цитомедины, биогенные стимуляторы, витамины, аминокислоты и т.д. Максимальное количество этих элементов в подобных препаратах обусловлено подбором оптимального по своим исходным свойствам субстрата и рациональной технологии его обработки, обеспечивающих экономическую эффективность и доступность препарата.

Таким образом, судя по литературным сообщениям, остается актуальной проблема приготовления комплексных иммуномодулирующих препаратов, и изучение их влияния на иммунную систему и другие показатели организма животных, что и определило направление наших исследований.

1.3 Использование иммуномодулирующих и биологически активных препаратов в пушном звероводстве

Норководство, являясь основной отраслью пушного звероводства, но его развитие сдерживается медленными инфекциями и иммунодефицитным состоянием молодняка. Как показывают результаты эпизоотологического анализа, практически повсеместно норки поражены плазмоцитозом. Эта медленная инфекция вирусной этиологии из-за длительной персистенции возбудителя характеризуется постоянным генерированием IgG. Он тут же агрегируется с реплицирующимся возбудителем, образуя иммунные комплексы, которые оседают на клетках организма норки и разрушают их. Болезнь иммунных комплексов по существу является иммунопатологией. (Asconas B.A., Unanue E.R 1968, Larsen A.E., Porter H.G., 1969; Cho H.I., Ingram D.G., 1973; Porter D.D., 1972; 1973)

Приобретенные свойства иммунодефицитных состояний животных могут нивелироваться и предотвращаться биомодуляторами. Именно модуляторы широкого спектра действия могут быть эффективными, поскольку при иммунодефицитных состояниях кроме угнетения клеточной и гуморальной систем иммунитета ингибированными могут оказаться клетки паренхимы функционально заторможенных иных систем. То есть восстанавливающий иммунодефицитное состояние препарат должен быть минимум бифункциональным: стимулировать иммунитет и активизировать заторможенные, подавленные клетки или функции паренхимной ткани. (Емельяненко П.А., 1997).

Иммунопаталогией обусловлены широко распространенные в звероводческих хозяйствах нарушения функционирования у развивающихся животных пищеварительной и респираторной систем. Причинным фактором в данном случае чаще являются условно-патогенные бактерии, причем различных таксономических групп. Такие состояния в настоящее время принято считать иммунодефицитами. Иммунодефицитные состояния организма молодняка устраняются терапевтическими вмешательствами, т.е. являются вторичными. (Емельяненко П.А., 1982, 1999,2000).

Данные литературы показывают, что применение различных биологически активных веществ позволяет проводить более или менее успешно коррекцию обменных процессов в организме норок, дает возможность нормализовывать морфофункциональное состояние печени и повышать воспроизводительную функцию норок. Однако острота этих проблем в настоящее время значительна, и ветеринарная наука и практика вынуждены изыскивать новые, более эффективные средства для их разрешения. Это возможно достигнуть на основе более глубокого изучения физиолого-биохимических механизмов регуляции функции воспроизводства и патогенетических механизмов развития патологических процессов в половых органах и во всем организме в целом, изысканием новых эффективных средств для нормализации обмена веществ и повышения воспроизводительной способности зверей.

Пушные звери (норки, лисицы, хори, соболя и т.д.) имеют сезонную ритмику и биологические периоды у них тесно связаны с изменением условий внешней среды. В определенные сезоны года у зверей проходит смена структуры волосяного покрова, обеспечивая защиту организма животных от охлаждения или перегрева.

Имплантация мелакрила молодняку норок при содержании его на интенсивном рационе (9,5-10,0 г белка на 100 кал) ускоряет созревание зимнего волосяного покрова на 45-50 дней. При сортировке шкурок не отмечено разницы со шкурками от зверей, забитых в ноябре. Гистологическими исследованиями кожной ткани у норок, обработанных мелакрилом, установлен стимулирующий эффект этого препарата на рост и развитие волосяных фолликулов (Рапопорт О.Л., Бернацкий В.Г., Худякова А.А. и др., 1990). По сообщению О.В. Березиной (2000), которая применяла янтарную кислоту и препарат «Янтарос», отмечается положительное влияние этих препаратов на обмен веществ и воспроизводительную способность норок, а именно, повышается прирост живой массы мехового молодняка, содержание эритроцитов и гемоглобина; выход молодняка увеличивается на 1,2-1,5 щенка и повышается сохранность молодняка; профилактируется железодефицитная анемия, концентрация железа в крови, печени и селезенке увеличивается на 48%.

По данным Е.Г. Квартниковой (1997), введение в кормосмесь таких биологически активных препаратов, как рибав (экстракт продуктов синтеза эндофитных микромицетов), мидиум (средство пробиотического действия, получаемое при переработке мидий), амивит (получают из отходов виноделия - это комплекс натуральных, легко усвояемых витаминов группы В, основных аминокислот, ферментов и микроэлементов) позволяет повысить молочность самок, в 2 раза сохранность молодняка в раннем возрасте, содержание витаминов В₁ и В₂ в 2-3 раза в печени норок.

В.А. Берестов (1999) наблюдал выраженное положительное влияние на результаты щенения норок при включении в рацион зверей спирулина (гормогониевая нитевидная водоросль) в дозе 200 мг на норку в день.

Многие исследователи, в своих научных работах, придают большое значение применению различных биологически активных веществ в составе комплексных препаратов, когда они взаимно повышают активность друг друга, что оказывает усиленное их нормализующее влияние на витаминный, минеральный, углеводный, белковый и жировой обмены.

Исследования многих отечественных и зарубежных ученых (Н. Travis, Т. Pilbecet, 1978, Е.Г. Квартникова, 1986, 1997, Н.Ш. Перельдик, 1987; и другие) показывают, что одним из главенствующих факторов, профилактирующих нарушение обмена веществ и снижение воспроизводительной способности норок, является применение различных витаминов и препаратов на их основе. При этом исследователями отмечается особая роль в регуляции обмена веществ в организме норок и в воспроизводительной функции жирорастворимых витаминов A, D, Е. Например, при дефиците каротина в рационе и витамина А в организме, признаки перерождения эпителия в репродуктивных органах обнаруживаются раньше, чем в других органах (Т.Н. Мингазов, 1988). А пониженное содержание витамина Е в рационе норок приводит к увеличению числа прохолостных и пропустовавших самок, рождение слабых, нежизнеспособных щенков; при этом большое количество покрытых самок осталось без приплода вследствие абортов, гибели и рассасывании плодов во второй половине беременности (Н.Ш. Перельдик, Л.В. Милованов, А.Т. Ерин, 1981).

Макро- и микроэлементы играют важную роль в обменных процессах организма, участвуют в промежуточном обмене веществ, в синтезе биологически активных соединений. Многие микроэлементы входят в состав ферментов (медь, цинк, молибден, марганец, кобальт), витаминов (кобальт), гормонов (йод) (А.И. Войнар, 1953; А.А. Кабыш, 1998), микроэлементы проявляют свою биологическую активность неспецифическим участием в разнообразных биохимических и физиологических процессах. Органические комплексы микроэлементов, участвуя в промежуточных процессах метаболизма, оказывают существенное влияние на рост, развитие, кроветворение, тканевое дыхание и другие важные функции организма (В.В. Ковальский, 1968).С углублением знаний о роли биологически активных препаратов в жизнедеятельности животного организма, заострялось внимание ученых на комплексных препаратах, полученных путем синтеза макроэлементов с аминокислотами и другими веществами, входящих в группу биокоординационных соединений. Функциональная активность этих соединений обусловлена их способностью образовывать хелатные структуры и участвовать во всех метаболических реакциях и в клеточном химизме (В.И. Дороткин, 2000).

В последние годы, из-за важной роли перекисного окисления внутриклеточных мембранных липидов в функционировании практически всех структур клетки, возросло внимание ученых к антиоксидантам, в исследованиях которых была показана способность антиоксидантов сберегать жирорастворимые витамины и содействовать их депонированию, благоприятное влияние на плодовитость и сохранность молодняка следующих синтетических антиоксидантов: фенозан (50 мг/гол), лимонная кислота (20 мг/гол), агидол (25 мг на 100 ккал обменной энергии), микровит Е (5-25 мг на 100 ккал обменной энергии), дилудин (25-75 мг/гол), феноксан (1-2,5 мг/гк живой массы). Например, экспериментальными исследованиями было показано, что фенозан (50 мг/гол), лимонная кислота (20 мг/гол) и особенно их смесь, введенные в рацион основного стада норок в период размножения, положительно влияли на воспроизводительную функцию самок, снижали количество неблагополучных щенений, повышали плодовитость и выход щенков.

Опыты Н.Ш. Сухова и М.Ф. Бражниковой (2000), по использованию селенита натрия с кормом в дозе 0,1 мг на килограмм ежедневно в течение 10 дней с десятидневными перерывами маточному поголовью норок в период гона, беременности и лактации, а на молодняке зверей - после отсадки и до забоя их на шкурку, позволило снизить заболеваемость норок гепатодист-рофией на 25%, применение препарата благотворно сказалось на выходе щенков в дорегистрационный период и позволило получить дополнительно на 0,47 щенка на самку.

...