Синтетические аналоги природных олигопептидов и их использование в ветеринарной медицине

Размещено на http://www.allbest.ru/

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени

доктора биологических наук

Синтетические аналоги природных олигопептидов и их использование в ветеринарной медицине

Трутаев Игорь Викторович

Воронеж 2009

Работа выполнена в отделе клинической биохимии Государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии

Научные консультанты:

доктор ветеринарных наук, профессор Шабунин Сергей Викторович заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор Бузлама Виталий Соломонович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Беляев Василий Иванович

доктор биологических наук Матюшевский Леонид Артемович

доктор биологических наук, профессор Рыжкова Галина Федоровна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Белгородский государственный университет

Защита состоится на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИПФиТ) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Т.И. Ермакова

1. Общая характеристика диссертации

олигопептид метаболический ветеринарный организм

Актуальность проблемы. С интенсификацией животноводства усложняется и сфера его ветеринарного обслуживания. Увеличивается количество и разнообразие фармакологического обеспечения. Так, если 50-лет назад для ветеринарного благополучия на фоне удовлетворительной санитарии было достаточно классических вакцин (сибирская язва, ящур, чума, бешенство, рожа и др.), сывороток, антибиотиков, сульфаниламидов и нитрофуранов, то сегодня этот арсенал оказался очень узок (Смирнов П.Н.,1997; Анудориев А.М. и др., 1999; Бузлама В.С., 2003; Шахов А.Г., 2004), но и его расширение, особенно за последнюю четверть века не привело к желаемым результатам. Болезни, особенно продуктивных животных, стали разнообразнее и сложнее. Они трудно поддаются профилактике и терапии классическими путями (Донченко А.С., 1997; Воронин и др., 1999; Шахов А.Г. и др., 2001). Оказалось, что это обусловлено рядом объективных причин. Прежде всего, это противоречие между нарастающим уровнем продуктивности и генетически обусловленными защитно-приспособительными возможностями организма. Здесь традиционные лекарства и биологически активные препараты не могут восстановить постоянно нарушающийся баланс.

Коровы, свиноматки во время критического процесса воспроизводства (роды) с трудом переносят эту физиологическую нагрузку. В результате - задержание последа, метриты, маститы, агалактия. Кроме этого нарождающийся молодняк мало жизнеспособен, в течение первых двух месяцев плохо растёт, у него возникают массовые заболевания так называемыми факторными инфекциями и как следствие - или гибель, достигающая 30%, или достаточно большие затраты на лечение и реабилитацию (Слободяник В.И., 1994; Париков В.А., 2000; Шахов А.Г. и др., 2000; Мисайлов В.Д. и др., 2004; Нежданов А.Г. и др., 2007).

Одним из главных решений этой проблемы является ослабление или, по-возможности, ликвидация противоречия между эволюционно обусловленными защитно-приспособительными возможностями и искусственно созданной высокой продуктивностью. Новые перспективы в этом направлении открывает создание фармакологических препаратов для поддержания продуктивного здоровья крупного рогатого скота, свиней, птиц - адаптогенов или средства повышения резистентности, или стресс-корректоров. На сегодня известен ряд препаратов подобного действия, среди которых наиболее известны препараты природного происхождения типа элеутерококка и модифицированные природные производные гуминовых веществ (Брехман И.И., 1957; 1968; Дардымов И.В., 1976; Беркович А.М. и др., 2003; Бузлама В.С., 2000-2005; Попов А.И., 2004;).

За последние 20-25 лет экспериментальных и клинических фармакологов заинтересовали вначале природные, выделенные из тканей животных, а затем ресинтезированные и модифицированные олигопептиды, обладающие широким спектром биологической активности в плане повышения и восстановления защитно-приспособительных возможностей организма. Наиболее широко известным и первым вошедшим в ветеринарную практику стал тимоген. Активность синтетического дипептида, идентичного природному, не укладывается в рамки иммуномодулятора тимусного просхождения и проявляется при более широком спектре патологий (Андреева Н.Л, 1990; Хавинсон В.Х. и др., 1991; Золотарёв Д.В., 2001; Malkahanov V.B. et al., 1991; Shustval D., 1992; Lukash et al.,1998 1991; Золотарёв Д.ов И)

Возникла проблема фармакологического изучения ряда синтетических аналогов природных олигопептидов с новых позиций: анализ её состояния, необходимость разработки новых, практически не токсичных и экологически безопасных лекарств для поддержания здоровья продуктивных животных, комплексной профилактики, терапии болезней и реабилитации, что обусловило направление данного исследования, их методическое обеспечение и клинические испытания (Чазов Е.И. и др., 1984; Бахаров В.Д., 1989; Гомазов О.А., 1992; Дейгин В.И. и др., 2001; Флейшман М.Ю. и др., 2004; Alvares A.A. et al., 1994; Morozov V.G. et al., 1997; Paukovits W.R. et al., 1998; Kvetney J. еt al., 2002).

Цель и задачи работы. Цель исследований - изучить фармако-токсические свойства синтетических олигопептидов (тимогена, неогена и седатина), их влияние на метаболический статус и защитно-приспособительные возможности организма и разработать показания к их применению в ветеринарной медицине.

Для достижения этой цели и решения проблемы поставили следующие основные задачи:

1. Дать фармако-токсикологическую характеристику синтетических олигопептидов;

2. Изучить влияние тимогена, неогена и седатина на защитно-приспо-собительные возможности животных;

3. Изучить действие синтетических олигопептидов на метаболический статус животных:

- резорбтивное действие;

- система пероксидации липидов и состояние антиоксидантной защиты;

- гомеостаз глюкозы (интактное состояние, нагрузки).

4. Разработать показания к применению синтетических аналогов природных олигопептидов для повышения резистентности и улучшения продуктивного здоровья животных.

Научная новизна. Впервые в ветеринарной фармакологии поставлена и решена проблема комплексного многостороннего изучения синтетических олигопептидов для повышения резистентности и улучшения продуктивного здоровья животных. Показано, что тимоген, неоген, седатин на фоне низкой токсичности и относительно низкой органо-системной специфичности проявляют высокую защитную активность при изменяющихся условиях и неблагоприятных воздействиях внешней среды. Установлено, что препараты проявляют стресс-корректорное, актопротекторное, антигипоксическое и антитоксическое действие, стимулируют гемопоэз и клеточный иммунитет при их угнетении, что связано с нормализацией процессов пероксидации липидов, активизацией антиоксидантной защиты, сохраняют гомеостаза глюкозы в экстремальных условиях. Новизна исследований подтверждена патентом РФ и дипломом Президиума Россельхозакадемии «За лучшую завершенную научную разработку 2005 года».

Практическая значимость и реализация результатов. Показания к применению изученных синтетических олигопептидов для повышения резистентности и улучшения продуктивного здоровья крупного рогатого скота, свиней, пушных зверей, птиц использованы при разработке Наставления по применению седатина в ветеринарии (№ 13-5-2/1142 от 14.01.98). Полученные результаты вошли в методические рекомендации «Скрининг биостимулирующих и биоцидных веществ (адаптогены, бактерициды и другие препараты)» одобренных секцией патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (протокол №2 от 14.07.2006 г.) и «Синтетические аналоги природных олигопептидов и их использование в ветеринарии», одобренных секцией патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (протокол №2 от 15.05.2008 г.).

Апробация работы. Данные экспериментальных и клинических исследований, которые легли в основу диссертации, доложены и представлены на ежегодных отчётных сессиях института в 1995-2005 годах, заседаниях Ветфармбиосовета в 1995, 2001 годах, на международной научно-практичес-кой конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Авророва А.А. (Воронеж, 2006), международной научной конференции «Токсикозы животных и актуальные проблемы болезней молодняка» (Казань, 2006), юбилейной научно-практической конференции ветеринарных терапевтов и диагностов, посвященной 90-летию со дня рождения засл. деят. науки РСФСР, академика РАЕ, д. вет. н. Кабыша А.А. (Троицк, 2007), первом съезде ветеринарных фармакологов России (Воронеж, 2007), международной научно-практи-ческой конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008), международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области (Курск, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 31 научная работа, в том числе 12 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ, 2 Методические рекомендации, 1 монография и 1 патент.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

- о низкой токсичности и относительной органо-системной индифферентности синтетических олигопептидов;

- об адаптогенном, стресс-корректорном действии препаратов;

- о защитном действии тимогена, неогена и седатина при эмоционально-физических и химических нагрузках, гипоксиях и интоксикациях;

- о регулирующем влиянии препаратов на систему пероксидация липидов - антиоксидантная защита (ПОЛ-АОЗ) и гомеостаз глюкозы при изменяющихся условиях и неблагоприятных воздействиях внешней среды.

- об эффективности применения синтетических олигопептидов для повышения резистентности и улучшения продуктивного здоровья сельскохозяйственных животных.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 338 страницах и включает введение, обзор литературы, материал, объем и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 120 таблицами и 37 рисунками. Список литературы включает 626 источников, в том числе 235 на иностранных языках.

2. Материал, объём и методы исследований

Исследования проведены в 1994-2008 годах в отделе клинической биохимии по планам НИР ГНУ Всероссийского научно-исследователь-ского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии в рамках государственной Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ по заданиям: «Разработать и внедрить промышленную систему мероприятий по повышению естественной резистентности у крупного рогатого скота, свиней, овец и птиц» (№ гос. рег. 01860113278); «Изучить роль нарушений обменных процессов и снижения резистентности в возникновении патологии высокопродуктивных животных. Разработать методы и средства их прогнозирования и профилактики, диагностики и терапии» (№ гос. рег. 01940007587); «Разработать общую теорию патологии животных и на её основе создать экологически чистую систему ветеринарной защиты»(№ гос. рег. 01.9.90.0001257), «Разработать новые высокоэффективные средства и методы повышения общей резистентности и иммунного статуса крупного рогатого скота, свиней и птиц» (№ гос. рег. 150070.3666026906, 06.8.003.04).

В проведении ряда исследований принимали участие сотрудники ГНУ ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Долгополов В.Н., Ермакова Т.И., Федорова Н.М., Аргунов М.Н., Сулейманов С.М., Шушлебин В.И., Мещеряков Н.П., Бузлама С.В., Бузлама А.В., Максимова Л.И., которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствие с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учёта результатов.

Клинические испытания препаратов, их производственная апробация и внедрение осуществлены на животноводческих предприятиях Воронежской, Белгородской, Липецкой и других областей Российской Федерации, а также Харьковской области Украины.

Скрининговые исследования выполнены в соответствии с Методическими рекомендациями «Скрининг биостимулирующих и биоцидных веществ (адаптогены, бактерициды и другие препараты)», 2006, авторским свидетельством на изобретение (1982) и патентом RU (2125261).

Токсикологическую оценку и органо-системное действие изучали в соответствии с «Руководством по доклиническому изучению новых лекарственных средств» (Москва, 2000).

Оценка адаптогенного спектра препаратов выполнена с использованием трёх групп экстремальных воздействий (физическая перегрузка, кислородная недостаточность и химическая интоксикация) на 14 моделях. Состояние «оксидативного стресса» моделировали путем введения 5,6-диоксиура-цил моногидрата (ДОУМГ, аллоксана), который восстанавливается в диалуровую кислоту, при аутоокислении которой образуется H2O2 и активные формы кислорода, которые запускают в клетке цепь свободнорадикальных реакций (Николаева М. И. с соавт.,1986). ДОУМГ вводили после 24-часового голодания однократно подкожно в дозе 130-150 мг/кг массы тела.

Критериями интегральной оценки активности препаратов при стрессе служили выживаемость животных, их выносливость при функциональных нагрузках, заболеваемость, сохранение здоровья и продуктивности в критических ситуациях.

С целью характеристики общего состояния животных при применении изучаемых олигопептидов определяли количество в крови эритроцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитов и тромбоцитов общепринятыми методами (Предтеченский В.Г., 1964; Кондрахин И.П. с соавт., 1983; Карпуть И.М., 1986); содержание в сыворотке крови общего белка (г/л) рефрактометрически (Филиппович Ю.В. с соавт., 1975); активности АлАТ, АсАТ и щелочной фосфатазы (мМ/лч) (Меньшиков В.В., 1973).

Оценку влияния олигопептидов на углеводный обмен проводили по показателям крови: гликоген, г/кг (Мильман Л.С. с соавт., 1974); глюкоза, мМ/л (Меньшиков В.В., 1971); лактат, мМ/л (Прохорова М.И. с соавт., 1965); пируват, мкМ/л (Бабаскин П.М, 1976); активность глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы, мкМ/лмин (Вульфсон П.В. с соавт., 1979); лактатдегидрогеназы, мкМ/минмг белка (Пырков Я.Н. с соавт., 1970).

Состояние системы ПОЛ-АОЗ у животных определяли по показателям: содержание в крови конъюгированных диенов (ДК) в ед.опт.пл./мг липидов или в мкМ/л крови (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977); малонового диальдегида (МДА) в мкМ/л крови (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. 1977); содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа (ОШ) в усл.ед./мл сыворотки (Bidlack W.R., Tappel A.L., 1973; Malshet V.G., Tappel A.L., 1973); содержание в крови общих и небелковых SH-групп в мМ/л (Рубина Х.М., Романчук Л.А., 1961); содержание в сыворотке крови витамина Е в мкМ/л (Кисилевич Р.Ш., Скварко С.И., 1972), ферроксидазную активность церулоплазмина (ЦП) в сыворотке крови в мкМ бензохинона/лмин (Антонов М.П. с соавт., 1985); активность супероксиддисмутазы (СОД) в эритроцитах в отн.ед./мг гемоглобина (Чумаков В.Н., Осинская Л.Ф., 1977), каталазы (КАТ) в крови в мМ Н2О2/лмин (Королюк М.А. с соавт., 1988), пероксидазы (ПО) в усл.ед./л крови (Плешков Б.П., 1976), глутатионпероксидазы (ГПО2) в крови в мМ восстановленного глутатиона/лмин (Кругликова Г.О., Штутман И.М., 1976), глутатионредуктазы (ГР) в крови в мМ окисленного глутатиона/лмин (Кругликова Г.О., Штутман И.М., 1976); содержание НЭЖК в сыворотке крови в мкМ/л (Прохоров М.Ю. с соавт., 1977), в-липо-протеидов в мг% (Ледвина М., 1960), холестерина в мМ/л (Меньшиков В.В. с соавт., 1987).

Для характеристики состояния гуморального звена неспецифической иммунологической резистентности организма определяли: бактерицидную активность (%) сыворотки крови (Смирнова О.В., Кузьмина Т.А., 1966); лизоцимную (мкг/мл) (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974), комплементарную (% гемолиза) активности сыворотки крови (Вагнер Г.Ф., 1966); содержание пропердина (г/л) с сыворотке крови (Томилка В.С., Старостин И.С., 1984).

В проведении экспериментальных и научно-производственных исследований использовали: инфузории Paramecium caudatum (36 опытов, с оценкой 3-х препаратов); мышей - белых беспородных самцов и самок с массой тела 20,0±2,0 г (n=1659); белых крыс беспородных и линии Wistar самцов и самок с массой тела 150,0±20,0 г (n=1780); кроликов обоего пола породы шиншилла с массой тела 1,1-2,0 кг (n=44); собак (n=6); коров, откормочных быков и телят чёрно-пёстрой породы (n=286); свиней крупной белой, украинской пород и помесей разного возраста и пола (n=463); кур и цыплят породы леггорн, линии хайсекс и др. (n=3450); норок, песцов и хорьков (n=12045).

Опыты на продуктивных животных проводили в производственных условиях содержания и кормления. При заболеваниях диагнозы ставили в соответствии с утверждёнными инструкциями и методическими указаниями с привлечением соответствующих специалистов и данных лабораторных исследований.

Кровь для исследований получали из хвоста, ярёмной, ушной вен, при декапитации, а внутренние органы или их фрагменты - при вскрытии животных.

Полученный цифровой материал обработан методами математической статистики принятыми в биологии и медицине (М.Л. Беленький, 1963; Г.Ф. Лакин, 1973; Е.В. Гублер, 1978 и др.) с использованием прикладной статистической программы “Statistica 5.0” (Stat Soft Inc., 1998) и электронных таблиц “Microsoft Excel” на РС «Pentium IV».

3. Собственные исследования

Общая фармако-токсикологическая характеристика синтетических олигопептидов

Опыты на Paramecium caudatum

Токсическое действие на одноклеточных оценено по двум параметрам: дозозависимому и временному. Тимоген и неоген в диапазоне доз от 0,001 до 1,0 мг/мл среды не оказывают влияния на жизнеспособность инфузорий. Седатин в дозе 1,0 мг/мл среды проявляет протистоцидный эффект.

Испытанные олигопептиды, независимо от аминокислотного состава и структуры молекулы способствуют повышению сопротивляемости клеток к мембраноповреждающему действию гипертонического раствора натрия хлорида. Установлены существенные различия между препаратами в зависимости от дозы. Тимоген и неоген по активности близки между собой, хотя последний по всем соответствующим дозам активнее своего аналога на 8,0-21,0%.

Седатин в дозах от 0,001 до 0,1 мг/мл, хотя и менее значительно, чем неоген, повышает сопротивляемость клеток к повреждению. Но в высокой концентрации (0,1 мг/мл) он её существенно, на 25,0 %, снижает. По сравнению с неогеном, разница составляет 86,7 %.

Изучаемые синтетические олигопептиды при добавлении в питательную среду оказывают выраженное стимулирующее влияние на скорость деления инфузорий, находящихся в экспоненциальной фазе роста. Препараты повышают интенсивность деления на 65,0-125,0 % по сравнению с контролем в зависимости от дозы. Оптимум у неогена и тимогена оказался в пределах 0,01-0,1 мг/мл, а у седатина 0,001- 0,01 мг/мл. В дозе 0,1 мг/мл и выше седатин вызывал угнетение роста на 40,0 %.

Характеристика токсического действия препаратов

Острая токсичность. В опытах на белых мышах установлено, что препараты ни в одной из испытанных доз (250,0; 500,0; 1000,0; 5000,0 и 10000,0 мкг/кг массы тела) не проявили общетоксического действия и не вызывали гибели мышей.

Внутримышечные и внутрибрюшинные инъекции белым крысам олигопептидов в тех же дозах не вызывали признаков интоксикации. Лишь применение седатина в дозе 10000,0 мкг/кг в течение первых 3-4 часов вызывало угнетение подвижности и уменьшение тактильной чувствительности. К 5-му часу эти признаки исчезали и опытные животные не отличались от контрольных.

Внутримышечное введение неогена собакам в дозе в 1000,0 мкг/кг не оказывает отрицательного влияния на клиническое состояние животных и не вызывает их гибели. Не изменяются поведение, аппетит, состояние кожных покровов и слизистых оболочек, не изменяются показатели температуры, пульса и дыхания.

Хроническая токсичность. Во всех опытах белым мышам и крысам растворы подкожно, а собакам внутримышечно растворы олигопептидов вводили в течение 3-х месяцев ежедневно в дозах 10,0-1000,0 мкг/кг. Длительное применение тимогена, неогена и седатина не вызвало гибели животных и не сопровождалось клиническими изменениями за весь период наблюдений.

Длительное применение седатина в дозе 1000,0 мкг/кг изменяло поведенческие реакции животных, уже на 5-е сутки после начала его применения опытные животные становились более спокойными, меньше реагировали на внешние раздражители (табл.1).

Местное раздражающее действие. Установлено, что нанесение на коньюктиву глаза кроликов 0,01 %; 0,1 % и 1,0 % растворов изучаемых пептидов не оказывает заметного влияния на клиническое состояние животных, их поведение, аппетит, температуру тела.

Препараты как при однократном, так и при длительном нанесении отрицательно не влияли на состояние слизистой оболочки глаз.

Как при однократном, так и при длительном нанесении растворов изучаемых пептидов на выстриженную и выбритую кожу не установлено заметного влияния на клиническое состояние кроликов, их поведение, аппетит у кроликов, не вызывала изменений цвета, упругости и температуры при аппликации на участки кожи. При этом седатин в концентрации 0,1 % и 1,0 % при ежедневном двухнедельном нанесении на кожу проявил выраженное стимулирующее влияние на рост шерсти у кроликов.

Таблица 1. Поведенческие реакции белых крыс при длительном применении седатина в дозе 1000,0 мкг/кг

Сутки от начала введения седатина	Реакция	Тактильная чувствительность
	возбуждение	торможение	усилена	ослаблена
5	-	±	-	±
10	-	±	-	+
15	-	+	-	+
20	-	±	-	±
25	-	-	-	±
30	-	-	-	-

Примечание: - нет; + есть; ± промежуточное состояние

Аллергенные свойства. Морским свинкам в правую ушную раковину внитрикожно однократно инъецировали по 0,1 мл 0,01 % стерильных растворов тимогена, неогена и седатина. Контрольным свинкам вводили стерильный физраствор. Через 12 дней в конъюнктивальный мешок правого глаза закапывали по 1-й капле тех же растворов. Одновременно животным субплантарно в правые лапки вводили по 0,1 мл этих же растворов. Учитывали воспаление конъюктивы и отёк лап. Установлено, что все испытуемые синтетические олигопептиды не обладают аллергизирующим действием.

Эмбриотоксическое и тератогенное действие. При применении самцам белых крыс перед спариванием в течение двадцати дней ежедневно раствора седатина внутримышечно в дозах 10,0; 100,0 и 1000,0 мкг/кг установлено, что олигопептид в дозе 10,0 мкг/кг не оказал влияния на оплодотворяющую способность самцов. У самок по количеству жёлтых тел, живых и мёртвых плодов не выявлено существенных отличий от контрольных. Отмечена несколько меньшая доимплантационная и постимплантационная гибель плодов при применении препарата. Не обнаружено уродливых и аномальных живых плодов.

Установлено, что неоген и седатин не обладают эмбриотоксическим и тератогенным действием при многократном их применении самкам белых крыс в диапазоне доз 10,0-1000,0 мкг/кг. У животных, получавших седатин в дозе 10,0 мкг/кг, живых эмбрионов было примерно на 5,0 % больше, а постимплантационная гибель плодов не отличалась от контроля (табл.2).

Количество живых и мёртвых эмбрионов у крыс, получавших препарат в дозе 100,0 мкг/кг не отличалось от контрольных, но предимплантационная и общая эмбриональная смертность были несколько ниже.

Применение седатина в дозе 1000,0 мкг/кг, а это выше возможной лечебной или профилактической доз в 100-1000 раз, также не оказало существенного влияния на процесс плодоношения самок и состояние эмбрионов.

Таблица 2. Влияние седатина на состояние яичников и эмбрионов у белых крыс

Показатели	Контроль	Седатин, мкг/кг
		10,0	100,0	1000,0
Количество беременных самок	10	10	10	10
Количество желтых тел на 1 самку	17,4±1,2	18,1±1,5	17,0±1,8	17,9±1.5
Количество живых эмбрионов у 1 самки	10,9±0,6	11,4±1,1	11,0±0,8	10,8±1,3
Количество мертвых эмбрионов на 1 самку	4,0±0,3	4,2±0,1	4,0±0,5	4,4±0,4
Общее количество имплантировавшихся эмбрионов на 1 самку	14,9±1,1	15,6±1,3	15,2±1,4	15,4±1,2
Предимплантационная гибель, %	14,4	13,8	10,6	14,0
Постимплантационная гибель, %	2,7	2,7	2,6	2,9
Общая эмбриональная смертность, %	17,1	16,5	13,2	16,9

Самки, получавшие весь период беременности седатин в разных дозах не отличались от контрольных и родившиеся от них крысята не отличались друг от друга. Уродств и других аномалий развития плодов практически не было. Применение седатина беременным животным способствует рождению более физиологичного приплода (табл. 3).

Таблица 3. Рождаемость и анатомическое состояние новорожденных крысят при длительном применении седатина беременным самкам

Показатели	Контроль	Седатин, мкг/кг
		10,0	100,0	1000,0
Кол-во живорожденных на 1 самку	9,2±0,70	11,0±0,61	10,8±0,82	10,2±0,34
Кол-во мертворожденных на 1самку	1,1±0,30	0,8±0,10	0,5±0,10*	0,6±0,10*
Процент живорождаемости	88,0	94,6	95,6	94,1
Масса тела 1 крысенка, г	5,6±0,32	6,8±0,55	7,0±0,61*	5,9±0,47
Длина туловища 1 крысенка, мм	50,1±0,44	55,8±0,37	62,8±0,40*	51,4±0,52

Соотношение живорождаемости к мёртворождаемости у подопытных животных было выше. В дозе 100,0 мкг/кг седатин способствует увеличению живорождаемости на 7,6 %, повышению массы тела новорожденных на 24,3 %, увеличению длины туловища на 25,3 %.

В целом, проведённые исследования дают основание заключить, что изучаемые олигопептиды не проявляют эмбриотоксического действия, а седатин при этом оказывает положительное влияние на течение беременности и рождение жизнеспособного приплода.

Органно-системное действие синтетических олигопептидов

Нейротропное действие.

Ориентировочный (норковый) рефлекс у белых крыс. Тимоген и неоген не оказывают влияния на безусловно-рефлекторную деятельность крыс не зависимо от дозы препаратов. Седатин в дозе 1,0 мкг/кг способствует увеличению количеств заглядываний на 13,6 % по сравнению с контролем, а в дозе 100,0 мкг/кг количество заглядываний уменьшилось на 4,8 %.

Общая возбудимость центральной нервной системы. Тимоген и неоген с одной стороны, а с другой - седатин по-разному влияют на реакцию ЦНС при наркотическом влиянии этанола. Первые практически не влияли на продолжительность наркоза и количество животных, спавших без бокового положения. Лишь в дозе 0,1 мг/кг можно говорить о тенденции антинаркотического действия препаратов. Они в зависимости от дозы на 10,0-23,0% сокращают продолжительность сна. Седатин с увеличением дозы потенцирует продолжительность наркоза у мышей и в дозе 0,1 мг/кг продолжительность наркоза увеличивается более чем на 20,0 %, а половина животных спят не в боковом положении, а на животе (в некомфортном состоянии).

Когнитивные функции. Седатин в дозах 0,001-0,1 мг/кг не оказывает существенного влияния на функции памяти, обучения и сохранения полученных навыков при использовании 3-х канальной челночной камеры с микропроцессором. Установлена тенденция удлинения латентного периода, некоторого ухудшения обучаемости и её скорости при применении седатина в дозе 0,1 мг/кг (табл.4).

Таблица 4. Влияние седатина на выработку, сохранение и воспроизведение условного рефлекса

Показатели	Контроль	Седатин, мкг/кг
		1,0	10,0	100,0
Через 1 час после введения препарата
Латентный период рефлекса,час.	25,8±0,43	25,7±0,32	26,4±0,51	27,9±0,62*
50 % обученности	46,1±9,7	49,4±7,7	46,3±4,8	40,0±3,7*
Успех/неуспех	0,64±0,09	0,81±0,11*	0,69±0,07	0,59±0,04*
Скорость обученности	0,12±0,01	0,14±0,02	0,11±0,01	0,09±0,01
Через 1 сутки после введения препарата
Латентный период рефлекса,час.	26,2±0,31	26,7±0,28	26,5±0,30	25,9±0,34
50 % обученности	47,4±3,8	48,2±5,4	47,7±4,9	46,1±5,6
Успех/неуспех	0,71±0,06	0,80±0,09*	0,74±0,04	0,70±0,04
Скорость обученности	0,13±0,01	0,13±0,01	0,14±0,01	0,13±0,01
Через 3 суток после введения препарата
Латентный период рефлекса,час.	27,8±0,51	27,1±0,64	26,9±0,77	27,4±0,92
50 % обученности	48,1±3,3	49,3±2,8	49,0±3,4	50,0±3,3
Успех/неуспех	0,76±0,04	0,80±0,08	0,79±0,05	0,72±0,08
Скорость обученности	0,14±0,01	0,14±0,01	0,15±0,01	0,16±0,01

Психомоторная деятельность изучена на модели «открытого поля». Тимоген и неоген не изменяют психомоторную активность. При применении крысам седатина (особенно это заметно при применении препарата в дозе 100,0 мкг/кг) суммарная дистанция движений уменьшилась на 5,5 %. Количество движений в пределах размеров тела (повороты и др.) уменьшилось на 22,2 %. Препарат способствовал уменьшению безостановочных движений на 12,6 %. Уменьшилось количество вставаний на задние лапы на 7,5 %. Уменьшилось на 23,9 % число комфортных действий.

В целом оценка нейротропной активности изучаемых синтетических олигопептидов показала , что тимоген и неоген в большей степени индифферентны к деятельности центральной нервной системы, а действие седатина можно характеризовать как мягкое успокаивающее.

Влияние на сердечно-сосудистую систему и дыхание. Ни один из изучаемых олигопептидов в дозах 1,0; 10,0; 100,0 и 1000,0 мкг/кг, введенных однократно, подкожно не оказал существенного влияния на изменения систолического и диастолического артериального давления, частоту сердечных сокращений и дыхательных движений белых крыс-самцов в условиях нембуталового наркоза (внутрибрюшинно в дозе 55,0 мг/кг).

Влияние на системы органов пищеварения и выделения.

Эвакуаторная функция желудка и кишечника. Тимоген и неоген в дозах 1,0-100,0 мкг/кг не оказывают достоверного влияния на функциональную деятельность желудка и кишечника.

Седатин в дозах 1,0 и 10,0 мкг/кг не оказывает заметного влияния на функциональное состояние желудочно-кишечного тракта. В дозе 100,0 мкг/кг эвакуация содержимого желудка замедляется на 12,8 %. Перистальтика тонкого кишчника снижается на 11,6 %. Заполнение слепой и тонкой кишок уменьшается на 19,4 и 27,6 %, соответственно, что характеризует седатин в этой дозе как успокаивающее средство.

Антитоксическая функция печени. Изучаемые олигопептиды независимо от индивидуальных свойств и вводимой дозы (от 1,0 до 100,0 мкг/кг) не оказывают влияния на антитоксическую функцию печени при проведении гексеналового теста.

Функция почек. Тимоген, неоген и седатин при длительном применении в дозах 1,0-100,0 мкг/кг не оказывают влияния на функциональное состояние почек. Препараты не изменяют по сравнению с контролем объёма суточной мочи. В ней не обнаруживается белок, сахар, билирубин, существенно не изменяется экскреция электролитов (Na+ и K+ ). При водной нагрузке функция почек у подопытных животных не отличается от контрольных.

Влияние на массу паренхиматозных органов. Установлено, что при длительном применении в дозах 1,0; 10,0 и 100,0 мкг/кг однократно, ежедневно, подкожно в течение 30 дней синтетические олигопептиды не влияют на относительную массу паренхиматозных органов у белых крыс.

Анаболическое действие седатина.

Установлено, что седатин оказывает выраженное влияние на интенсивность роста молодых животных (рис.1). Зависимость доза-эффект проявляется как на самцах, так и на самках.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рис.1. Интенсивность роста самцов и самок мышей под влиянием седатина

Однако она более выражена на самках. Например, если разница в минимальной стимулирующей дозе 1,0 мкг/кг у самцов по сравнению с контролем составляет 14,2%, то у самок - 40,7 %.Оптимальной дозой препарата является 10,0 мкг/кг. В этой дозе седатин стимулирует рост молодых самцов на 16,8, а самок - на 20,1 % по сравнению с контролем.

Интенсифицируя рост по анаболическому типу, седатин у бо-лее быстро растущих животных увеличивает аппетит, а это в свою очередь способствует интенсификации роста молодых крыс с достаточно высоким потенциалом набора массы тела (табл.5).

Таблица 5. Влияние седатина (10,0 мкг/кг) на потребление корма и интенсивность роста молодых крыс

Показатели (за 10 суток)	Контроль	Седатин	% к контролю
Прирост, г, массы тела одной крысы	14,3±0,8	18,1±0,3*	126,6
Съедено корма одним животным	33,0±2,5	37,4±1,8	113,3
Прирост, г, массы тела одного животного из расчёта на 1 г съеденного корма	0,43	0,49	114,0

Изучено влияние седатина на интенсивность роста петушков породы леггорн 35-дневного возраста. Контрольным птицам ввели в грудную мышцу по 0,2 мл пролонгатора (ПЭО-400), опытным - однократно раствора седатина в ПЭО-400 из расчёта 50,0 мкг/кг массы тела. Наблюдали за птицей в течение 35 дней. В 70-дневном возрасте петушков взвешивали, убивали и определяли массу потрошеных тушек.

Установлено, что введение седатина в пролонгированной форме молодняку птицы не оказывает на него неблагоприятного действия, не происходит изменений состояния внутренних органов. Все петушки, с учётом того, что это порода яичного направления, имели низкую исходную массу и невысокий потенциал роста. На таком фоне седатин способствовал интенсификации роста петушков. Оно выражалось в увеличении абсолютной массы тела подопытных особей по сравнению с контрольными на 4,5%, повышении среднесуточных привесов и индекса интенсивности роста на 4,3%.

Влияние тимогена и неогена на кроветворение.

Интактное состояние. Однократное и 10-дневное (подкожно 1 раз в сутки в течение 10 дней) применение тимогена в дозе 100,0 мкг/кг и неогена в дозе 10,0 мкг/кг не оказывает заметного достоверного влияния на состояние красной и белой крови крыс.

Гемопоэз после воздействия окисленной олеиновой кислоты (ООК) и преднизолона. В качестве цитостатика использовали окисленную олеиновую кислоту, которую вводили мышам-донорам однократно внутрибрюшинно в дозе 1,0 мл на особь. Тимоген и неоген вводили животным подкожно 1 раз в сутки в течение 3-х дней в дозе 10,0 мкг/кг. Первую инъекцию препаратов делали через 1 час после введения ООК. Через 8 дней после введения ООК доноров убивали и подсчитывали в костном мозге бедренной кости количество кариоцитов. Далее 0,1 мл взвеси костного мозга доноров вводили внутрибрюшинно реципиентам и последних убивали через 8-12 дней. Подсчитывали в селезёнке количество колоний.

Установлено, что под влиянием ООК количество кариоцитов в костном мозге уменьшается на 36,8 %. Дифференцировка клеток задерживается на 8-й день на 55,6 %, а на 12-й - на 50,5 %.

Рис.2. Защитное действие синтетических олигопептидов на состояние костного мозга белых мышей при цитостатическом действии ООК

Рис. 3. Иммунотропное действие неогена на клеточном уровне

Как тимоген, так и неоген (в большей степени) защищали костный мозг от цитостатического действия ООК. Под влиянием неогена и тимогена на 8-й день дифференцировки количество кариоцитов составило соответственно 94,3 и 96,8 % от интактных при 56,2% при введении ООК, а на 12-й день - 75,9 и 76,6 % при 49,4% при введении ООК (рис. 2).

Таким образом проведённые опыты показали, что олигопептиды на интактном уровне практически не влияют на гемопоэз. Однако, при его угнетении, как неоген, так и тимоген проявляют выраженное защитное действие.

Иммунотропное действие неогена. Установлено, что введение ООК существенно, на 25,0-50,0%, угнетает клеточный иммунитет у животных (рис.3). Применение неогена интактным животным не влияло или в пределах 10,0% активизировало этот процесс, однако на фоне воздействия иммунодепрессанта, особенно при многократном применении олигопептида показатели клеточного иммунитета не только остаются в пределах нормы, но и потенцируются.

Влияние синтетических олигопептидов на адаптационные способности и выносливость организма

Иммобилизационный стресс

Опыты проведены на 110 белых крысах-самцах линии Wistar со средней массой тела 180,0±20,0 г. Животных за 15-18 часов до начала экспериментов лишали корма при свободном доступе к воде. После этого их распределяли на группы: 1- интактные, животным которой внутримышечно вводили стерильный физраствор и затем оставляли в клетках на голодной диете, но никаким воздействиям не подвергали; 2 - контроль(-), вводили по той же схеме физраствор, но затем в отличие от первой подвергали 18-ти часовой иммобилизации; 3 - контроль(+), вводили растворы испытуемых препаратов и затем оставляли в клетках на голодной диете, но никаким воздействиям не подвергали; 4 - опытные - им вводили растворы испытуемых препаратов и затем подвергали 18-ти часовой иммобилизации.

Масса тела. Установлено, что седатин уже в дозе 1,0 мкг/кг на 23,3 % способствует уменьшению потери массы тела крыс при иммобилизации. С увеличением дозы препарата его активность возрастает. В дозе 10,0 мкг/кг защитный эффект составляет 61,2 %, а 100,0 мкг/кг - 86,6 %. Тимоген и неоген проявляют незначительную защитную активность.

Паренхиматозные органы. Вскрытие и патологоанатомические исследования показали, что изучаемые олигопептиды на не оказывали влияния на состояние сердца, лёгких, печени и почек белых крыс при иммобилизационном стрессе.

Надпочечники. У контрольных животных масса надпочечников при иммобилизации возрастает в среднем на 47,0 %. Седатин проявляет выраженное стресс-протекторное действие (рис.4.А).

А

Б

Рис. 4. Влияние седатина (А) и негена (Б) на массу надпочечников белых крыс при иммобилизационном стрессе (в % к интактным).

Обнаружены некоторые особенности активности в зависимости от дозы препарата и пола животного. Так, в дозе 1,0 мкг/кг, к седатину более чувствительны самки. У них на 7,0 - 10,0 % в большей степени проявляется протекторное действие. Увеличение дозы в десять раз повышает активность препарата, как на самцах, так и на самках.

В дозе 100,0 мкг/кг седатин у самцов полностью предупреждает гипертрофию, а у самок такого влияния не наблюдается. Так же, как и в дозе 10,0 мкг/кг, надпочечники увеличиваются в массе при иммобилизации на 18,7 %. Самцы более чувствительны к препарату, чем самки на 12,8 %. Оптимальной стресс-протекторной дозой седатина при остром иммобилизационном стрессе является 100,0 мкг/кг массы тела однократно.

Применение неогена также способствовало уменьшению гипертрофии надпочечников (рис.4.Б). Тимлоген действует аналогично неогену.

Иммунокомпетентные органы. Развитие иммобилизационного стресса у белых крыс сопровождалось инволюцией тимуса на 26,8 %. Применение неогена проявляет выраженное протективное действие. С увеличением дозы активность пептида повышается.

В дозе 1,0 мкг/кг он по отношению к интактым животным способствует снижению массы тимуса при стрессе на 12,1 %, что на 10,7 % меньше, чем в контроле. По отношению к контролю неоген способствует сохранению на 14,6 %. массы железы. В дозе 10,0 мкг/кг неоген вызывает потерю массы по сравнению с интактыми крысами на 8,9 %, что на 18,9 % меньше, чем в контроле. По отношению к контролю пептид способствует сохранению массы тимуса при стрессе на 24,4 %, что почти на 10,0 % больше, чем при его применении в дозе 1,0 мкг/кг. В дозе 100,0 мкг/кг неоген способствует сохранению массы тимуса: по сравнению с интактными животными потеря составляет всего 3,6 %, что на 31,7 % меньше, чем в контроле.

Тимоген предотвращает инволюцию тимуса при иммобилизационном стрессе в несколько меньшей степени, чем неоген.

Седатин в дозе 1,0 мкг/кг не оказал существенного влияния на этот процесс. При применени седатина самкам в дозе 10,0 мкг/кг в опытной группе по сравнению с интактными животными масса тимуса снизилась на 7,5 %, что на 15,9 % меньше, чем в контроле. В дозе 100,0 мкг/кг, как на самцах, так и на самках седатин на 95,0 % - 96,0 % способствует сохранению массы тимуса у опытных животных по отношению к контрольным и до 25,0 % - по отношению к интактным. Общее протективное действие достигает 50,0 %. Дальнейшее увеличение дозы пептида в 10 раз не повышает, а даже снижает активность препарата.

Установлено, что инволюция селезёнки у контрольных крыс при стрессе достигает 40,0 %. В дозе 1,0 мкг/кг седатин не влияет существенно на процесс стрессорной инволюции селезёнки. В дозах 10,0 и 100,0 мкг/кг он потенцирует инволюцию и лишь в дозе 1000,0 мкг/кг седатин на 10,2 % по сравнению с контролем предупреждает её стрессогенную инволюцию.

Рис. 5. Влияние неогена на инволюцию селезёнки у белых крыс при иммобилизационном стрессе (в % к интактным)

Применение тимогена уже в дозе 1,0 мкг/кг уменьшает стрессогенную инволюцию селезёнки на 4,0%; 10,0 мкг/кг - на 10,0 %, а 100,0 мкг/кг - на 18,0 %. Действие неогена было идентичным влиянию тимогена (рис.5).

Ульцерогенез. Установлено, что уже в дозе 1,0 мкг/кг седатин на 37,5% способствует уменьшению количества животных с язвами (табл. 6). Уменьшается также количество язв у каждого животного в среднем на 50,7% по сравнению с контролем.

Таблица 6. Стрессогенный ульцерогенез у самцов белых крыс на фоне применения седатина (n=10 в каждой группе)

Показатели	Интактные	Контроль	Седатин, мкг/кг
			1,0	10,0	100,0	1000,0
Количество крыс с язвами в группе	2	8	5	1	0	0
Среднее количество язв на одно животное	3,0±0,0	14,0±1,7*	6,9±0,5*¦	2	0	0
Среднее количество поверхностных язв на одно животное	3,0±0,0	9,2±0,9*	5,8±0,4*¦	2	0	0
Среднее количество глубоких язв на одно животное	0	6,0±0,6*	3,7±0,4*¦	0	0	0
Средняя длина окружности одной язвы, мм	2,8±0,2	9,4±1,1*	5,8±0,3*¦	5,0	0	0
Диаметр одной язвы, мм	0,7±0,04	1,9±0,1*	1,7±0,1*¦	0	0
Среднее количество кровоизлияний на одно животное:	0	17,5±1,4*	8,2±1,0*¦	2	0	0
Из них: точечных	0	12,0±0,9*	7,5±0,8*¦	2	0	0
петехиальных	0	7,0±0,9*	2,7±0,2*¦	0	0	0

* - Р < 0,05-0,001 по сравнению с интактыми; ¦ - Р < 0,05-0,001 по сравнению с контролем

При этом соотношение поверхностных и глубоких язв практически не изменяется. Оно у контрольных крыс составляет 1,53, а у опытных - 1,57. Уменьшаются размеры язв. Средняя длина окружности язв уменьшается на 38,3 %, а диаметр - на 10,5%. Параллельно со снижением ульцерогенеза под влиянием седатина уменьшалось количество кровоизлияний в 2,1 раза, из них точечных и патехиальных стало меньше соответственно на 37,5 и 61,4%.

Применение седатина в дозе 10,0 мкг/кг способствовало резкому снижению язвообразования у стрессированных животных. Две язвы обнаружены только у одной крысы. Они были небольшого размера и поверхностными. Седатин в дозах 100,0 и 1000,0 мкг/кг способствовал полному предотвращению ульцерогенеза, вызываемого иммобилизационным стрессом.

Ди- и трипептид в дозах 10,0 и 100,0 мкг/кг проявляют антиульцерогенное действие при иммобилизационном стрессе. Так неоген в дозе 10,0 мкг/кг в 2 раза уменьшает поражаемость крыс язвами, а тимоген в дозе 100.0 мкг/кг - в 1,8 раза. Препараты в 2,4 - 2,8 раза, способствуют уменьшению количества язв, в 3,6 - 4,9 раза - глубины поражения, в 1,5 - 2,0 раза - обширности язв. Не возникают кровоизлияния.

Здесь представляет интерес следующее. По пяти основным учитывавшимся показателям ульцерогенеза как сами препараты, так и их разные дозы проявляли различающуюся активность (рис. 6).

Рис. 6. Стрессогенный ульцерогенез на фо-не применения синтетических олигопептидов

Так, седатин в дозе 10,0 мкг/кг способствовал уменьшению степени поражения на 87,5, а обширность язв (длина окружности) - на 46,8 %. При этом все язвы были поверхностными. Неоген в той же дозе проявлял значительно более низкую активность. Степень поражения уменьшалась лишь на 50,0 %, глубина язв на 79,4 %. Применение тимогена в дозе 100,0 мкг/кг было менее эффективно, чем седатина и неогена. Хотя иммобилизация крыс на его фоне не сопровождалась кровоизлияниями. Обширность язв при применении всех трёх пептидов независимо от доз была на уровне 50,0 % ниже по сравнению с контролем и колебалась в пределах 10,0 %.

Кислородная недостаточность

Кислородная недостаточность, возникающая при острых и хронических стрессовых состояниях сопровождается нарушением метаболизма, развитием гипоксии, а затем относительной гипероксии. Возникает кислородная дезадаптация с резким увеличением активных форм кислорода, модифицирующих липиды, белки и нуклеиновые кислоты.

Аноксическая асфиксия. Установлено, что тимоген и неоген в дозах 1,0-1000,0 мкг/кг не оказывают влияния на выживаемость мышей при аноксической асфиксии.

Рис.7. Влияние седатина на динамику гибели мышей при аноксической асфиксии

Применение седатина увеличивает выживаемость белых мышей при гипоксической нагрузке. С увеличением дозы от 1,0 до 1000,0 мкг/кг активность препарата возрастает. И если в малой дозе он предупреждает гибель мышей только на 10,0 % по сравнению с контролем, то в большой - на 70,0%, то есть в 4,5 раза (рис. 7).

Аноксическая асфиксия на фоне гипертермии. В контроле при такой нагрузке гибнут все животные в первые 10 минут.

Это косвенно указывает на то, что гипертермия вызывает повышенное потребление и расход кислорода, что на треть повышает чувствительность к последующей асфиксии (рис. 8). Седатин и в таких экстремальных условиях способствует повышению выживаемости мышей на 10,0-60,0% в зависимости от дозы.

Рис.8. Влияние седатина на динамику гибели мышей при аноксической асфиксии на фоне гипертермии

Аноксическая асфиксия на фоне гемолитической анемии. Гемолитическую анемию вызывали путём подкожного введения сапонина в течение 5 дней по 1 разу в сутки в возрастающих дозах от 1,0 до 5,0 мг/кг. Седатин вводили через 1 сутки после последнего введения сапонина.

На фоне гемолитической анемии аноксическая асфиксия протекает наиболее тяжело. В конт-роле гибнут все животные в первые 10 минут. Смертность в первые 5 минут в контрольной групппе составляет 90,0 %.Защитная активность седатина выражена слабо. В дозе 1,0 мкг/кг препарат не повышает выживаемость. В дозе 10,0 мкг/кг седатин способствует выживаемости 10%, 100,0 мкг/кг - 40% и в дозе 1000,0 мкг/кг - 50% животных (табл.7). При этом гибель животных нарастала постепенно и достигала максимума через 25 минут.

Таблица 7. Влияние седатина на выживаемость белых мышей при аноксической асфиксии на фоне гемолитической анемии

Седатин, мкг/кг	n	Пало	% выживаемости
1,0	10	10	0,0
10,0	10	9	10,0
100,0	10	6	40,0
1000,0	10	5	50,0
Контроль	10	10	0,0

Гипоксическая гиперкапния. Тимоген и неоген в диапазоне доз от 1,0 до 1000,0 мкг/кг не изменяют реакцию белых мышей в условиях постепенного уменьшения содержания кислорода в герметичном пространстве и накопления, выдыхаемого животными, углекислого газа.

При испытаниях седатина нагрузке подвергали животных через 1 час и повторно через 3 и 24 часа. Через 1 час после введения седатин не проявил выраженного защитного действия. Оказалось, что гипоксическая гиперкапния обладает сама по себе выраженным тренирующим эффектом. Так, повторение нагрузки через 3 часа способствовало повышению продолжительности жизни мышей контрольной группы на 73,8, а через 24 часа - на 258,8 секунды. Применение седатина существенно увеличивало продолжительность жизни животных при повторной нагрузке через 3 часа после первой. Эффект колебался от 9,3 до 23,3 %. Максимальное увеличение продолжительности жизни мышей наблюдается при применении седатина в дозе 1000,0 мкг/кг. Через 24 часа после первой нагрузки третья нагрузка показала несколько иные результаты. Лишь применение седатина в дозе 10,0 мкг/кг способствовало увеличению продолжительности жизни мышей на 13,0 %.

При введении в дозе 10,0 мкг/кг нарастает тренирующее действие седатина и превосходит как эффект в контроле (на 11,4 %), так и при его использовании в остальных дозах (табл. 8).

Таблица 8. Тренирующеее действие седатина при гипоксической гиперкапнии, (в % к контролю)

Сроки оценки, часы	Седатин, мкг/кг
	Контроль	1,0	10,0	100,0	1000,0
1	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0
3/1	109,5	123,1	121,7	118,5	131,5
24/1	133,4	129,0	144,8	122,7	128,4
24/3	121,8	104,8	119,0	103,6	97,6

В целом следует подчеркнуть, что седатин потенцирует тренирующее действие нагрузочного характера на организм животных.

Гипоксическая гиперкапния на фоне гемолитической анемии изучена при применении седатина. Гемолитическая анемия, вызванная введением сапонина как указано в п. 3.2.2.3. резко снижает продолжительность жизни мышей. Животные практически не выживают после первого же воздействия, а выжившие оказываются непригодными для повторных испытаний. У контрольных животных по сравнению с неосложнённой нагрузкой продолжительность жизни уменьшается в 1,9 раза.

У опытных животных, получавших седатин в дозах от 1,0 до 1000,0 мкг/кг по сравнению с контролем она удлиняется в зависимости от дозы на 5,2-24,1 %.

Гемическая гипоксия. Гемическую гипоксию создавали путём подкожного введения мышам раствора нитрита натрия в дозе 180,0 мг/кг по 1 разу в сутки в течение 3-х дней. Седатин вводили через 1 сутки после последнего введения гемолитика.

В дозе 1,0 мкг/кг седатин не проявил защитной активности, а в дозе 10,0 мкг/кг даже несколько способствовал гибели животных. В дозах 100,0 и 1000,0 мкг/кг препарат на 10-20,0 % по сравнению с контролем снижал смертность мышей.

Актопротекторное действие

3.2.3.1. Физически-эмоциональная нагрузка - плавание белых мышей до истощения. Проведенные исследования показали, что все испытанные олигопептиды в той или иной мере в зависимости от индивидуальных особенностей, доз и времени нагрузки после введения препаратов увеличивают продолжительность плавания (рис. 9). По сравнению с контролем максимум повышения выносливости 2,7 раза проявляет седатин в доз...