Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота

Конструирование, иммунологическая и профилактическая эффективность живых и инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против респираторных и желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота.

Вирусвакцина живая культуральная против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. При разработке моновакцины против ИРТ была отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения. Доза вируса составляла 1-2 мл при инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней, что вызвало максимальную выработку противовирусных антител. При изучении иммунологической перестройки организма животных после иммунимзации моновакциной против ИРТ установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,25 раза, к 11 дню -- в 4 раза, а к 42 дню -- в 6,75 раза по сравнению с исходными данными. У контрольных животных также отмечалось увеличение титра антител, однако их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом наиболее активно происходит биосинтез иммуноглобулинов M-класса. Так, после вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило до 11 дня с 5,680,13 до 6,80,13 г/л, после чего отмечено их некоторое уменьшение. Биосинтез иммуноглобулинов G-класса начинался несколько позднее -- с 11 дня и его увеличение отмечалось до 42-65 дня - количество иммуноглобулинов G-класса возросло к 11 дню с 14,60,25 до 16,40,2 г/л, а к 65 дню достигло 17,00,24 г/л. У контрольных телят в биосинтезе иммуноглобулинов Ig G и Ig M значительных колебаний не отмечалось.

У иммунизированных телят количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,21,7% до 44,41,7%. Затем произошло снижение их количества к 21 дню до 40,41,29%, к 42 до 29,41,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,21,3% до 23,20,8%, а к 21 дню снизилось до 20,61,07%, к 42 дню до 18,61,5 г/л.

Установлено, что вакцина против ИРТ обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 11 дню с 29,15,96 до 59,75,6%, после чего отмечалось его снижение, к 65 дню титр составил 43,39,6%.

Вакцина против ИРТ обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,2-91% и широко используется в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота. В результате проведения исследований по разработке моновакцины против ВД отработана оптимальная доза вируса и кратность его введения, что составляло 1-2 мл при инфекционном титре от 5,5 до 6,0 lg ТЦД 50/мл, кратность - 21-28 дней. При изучении иммуногенеза у телят после иммунизации моновакциной против ВД установлено, что титр антител к 4 дню возрос с 0,8 log2 до 4,20,4 log2 к 21 дню и до 5.20.4 log2 к 42 дню. У контрольных животных отмечалось увеличение титров антител, но их уровень был значительно ниже, чем у иммунизированных животных. При этом активно происходит биосинтез антител Ig M и Ig G -классов. Так, количество антител Ig M класса возросло по сравнению с исходными данными в 1,27 раза, к 11 -- в 1,34 раза, а к 42 -- в 1,59 раза.

При иммунизации телят вакциной против ВД отмечено увеличение Т-лимфоцитов их количество возросло к 11 дню с 25,61,7 до 37,62,6%, к 21 до 39,01,1% и к 42 дню снизилось до 27,81,72%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 16,41,3 до 26,00,86%, к 21 до 22,41,7% и к 42 дню снизилось до 18,40,6%.

Установлено, что вакцина против ВД обладает высокой интерфероногенной активностью - титр интерферона у вакцинированных телят возрос к 21 дню с 32,68,37 до 70,16,29%. К 42 дню его титр снизился до 50,83,52%.

Вакцина против ВД обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 91-96,9% и широко используется в неблагополучных по данной инфекции животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота.

Разработка моновакцины против ПГ-3 включала отработку оптимальной дозы вируса и кратности его введения, что составляло 1-2 мл при инфекционном титре вируса от 5,5 до 6,5 lg ТЦД 50/мл, двукратно с интервалом 21-28 дней. При изучении иммунного ответа у телят после иммунизации моновакциной против ПГ-3 установлено, что титр антител к 4 дню возрос в 3,0 раза, к 11 дню -- в 3,2 раза, а к 42 дню -- в 5,2 раза по сравнению с исходными данными. После вакцинации активно происходит биосинтез антител Ig M -класса. На 4 день после иммунизации их количество возросло по сравнению с исходными данными в 1,19 раза, к 11 -- 1,35 раза, к 42 дню -- в 1,45 раза. У телят этой группы уровень антител Ig G-класса был несколько ниже, чем уровень антител Ig M-класса. К 14 дню отмечено увеличение уровня Ig G-антител в 1,1 раза, к 21 дню - в 1,18 раза,к 42 дню - в 1,39 раза.

При иммунизации телят вакциной против ПГ-3 отмечено увеличение количества Т-лимфоцитов - их количество возросло к 11 дню с 26,41,7 до 42,40,9%, к 21 до 38,81,5%, но к 42 дню снизилось до 28,80,9%. Количество В-лимфоцитов к 11 дню возросло с 17,13% до 22,600,86%, к 21 дню - до 20,81,7%, а к 42 дню снизилось до 19,81,3%. Вакцина также обладает интерфероногенной активностью. При иммунизации телят возрастание интерферона продолжалось до 21 дня с 22,79,9% до 42,13,0%. К 42 дню его титр снизился до 32,92,47%.

Вакцина обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,2-91%% и широко используется в неблагополучных по парагриппу-3 животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина бивалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея имеют широкое распространение среди крупного рогатого скота в различных странах мира - инфицированность стад крупного рогатого скота этими вирусами составляет от 25 до 70%. Животные в основном переболевают ассоциациированной ринотрахеитно-диарейной инфекцией, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%.

При отработке соотношения монокомпонентов вакцины оптимальным соотношением монокомпонентов бивалентной вирус-вакцины против ИРТ и ВД крупного рогатого скота является 1:1 при инфекционном титре вирусов 5,0 lg ТЦД 50/мл. При этом, уже начиная с 10-го дня наблюдения титры антител к вирусу ИРТ возрастали в с 0,2 до 2,5 log2 , а ВД - с 0,4 до 4,8 log2. Титр поствакцинальных антител продолждал увеличиваться до 60-го дня наблюдения и составил соответственно 7,6 и 7,9 log2.

У телят, иммунизированных бивалентной и моновакцинами против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, наиболее активно шел биосинтез антител, относящихся к Ig M-классу. На 10-й день после иммунизации их количество было максимальным. После этого отмечается снижение биосинтеза антител Ig M-класса, но увеличение биосинтеза антител Ig G-класса.

Изучение динамики Т- и В-лимфоцитов у телят, иммунизированных бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота отмечено увеличение Т-лимфоцитов к 11 дню с 26,41,7 до 42,40,9%, В-лимфоцитов - с 17,01,3 до 23,60,9%, после чего происходило их снижение к 42 дню соответственно до 28,00,9 и 19,81,3. У телят контрольной группы содержание Т- и В-лимфоцитов было практически на одном уровне на протяжение всего срока наблюдения. При иммунизации телят бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи возрастание интерферона продолжалось до 11 дня с 32,32,8 до 62,31,7%, а затем к 28 дню его титр снижался до 23,11,24%. У телят контрольной группы титр интерферона был на уровне 25,76,9 - 35,54,14%.Бивалентная вакцина против ИРТ и ВД обладает высокой профилактической эффективностью, которая составляет 88,0-90,8% широко используется в неблагополучных животноводческих хозяйствах Республики Беларусь.

Вирусвакцина трехвалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота. На основании проведения анализа результатов серологических исследований было установлено, что в хозяйствах Республики Беларусь животные в основном переболевают ассоциацией вирусов ИРТ+ВД+ПГ-3, удельный вес которой составляет 32,8-61,3%, тогда как моноинфекции выявляются значительно реже: ИРТ - 1,6-4,3%, ВД - 10,0 - 30,2%, ПГ-3 - 5,5-11,2%. Это послужило основанием для разработки трехвалентной живой культуральной вирус-вакцины против данных инфекций. При определении различных соотношений монокомпонентов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3 нами установлены оптимальные соотношения монокомпонентов 1:1:1 при инфекционном их титре каждого вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл. При этом биосинтез антител ко всем трем вирусам начинается уже после первого ведения вакцины и на 10-й день его уровень в 3-5 раз выше исходного - титр возрастал с 1:2-1:4 до 1:8-1:16. Дальнейшее возрастание титров антител продолжалось до 45 дня наблюдения и достигало 1:32-1:128. Отмечается также и увеличение количества Т-и В-лимфоцитов. Так, количество Т-лимфоцитов к 21 дню увеличилось с 28,43,05 до 41,25,3%, но к 45 дню снизилось до 38.14.91%. Количество В-лимфоцитов увеличилось к 21 дню с 16,41,76 до 25,43,33%, а к 45 дню снизилось до 22,32,87%. Биосинтез имуноглобулинов начался уже с первых дней после вакцинации. Их концентрация к 10-му дню у имунизированных телят возросла с 14,8 до 16,5 г/л, а к 45 дню - до 17,1 г/л. К 65 дню произошло некоторое их снижение до 16,2 г/л. У контрольных животных титры антител, концентрация глобулинов оставались практически на одном уровне. При изучении бактерицидной активности сыворотки крови у иммунизированных телят отмечено ее увеличение с 55,6+7,0 до 78,7+14,2% к 30 дню, после чего отмечено ее снижение к 45 дню до 50,8+8,3%; концентрация лизоцима возросла к 10 дню с 1,99+0,3 до 2,88+0,5 мкг/мл, после чего произошло его снижение к 45 дню до 1,05+0,4 мкг/мл; титр интерферона возрастал к 21 дню с 35,6+8,3 до 70,1+6,1%, после чего отмечалось снижение до 56,9+9,1%. У контрольных животных эти показатели имели недостоверные колебания по сравнению с исходными данными.

Производственные испытания трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота показали, что после иммунизации телят в условиях животноводческих комплексов заболеваемость с признаками пневмоэнтеритов составляла от 4,3% до 11,4%, тогда как в группе неиммунизированных телят заболеваемость была 95,5%- 97,1%. В опытных группах телят падежа и вынужденного убоя не было, а в контрольной - отход составлял от 7,1% до 14,5%.

У телят, полученных от иммунизированных коров, с признаками пневмоэнтеритов заболевало от 5,9% до 7,1% животных, отход составлял от 0,88% до 2,1%. Среди телят, полученных от неиммунизированных коров заболеваемость составляла от 77,9 до 90,8%, отход от 8,3% до 11,4%. Профилактическая эффективность вакцины на телятах составляла 95,7%, на коровах - 92,9%.

Ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота. При исследовании материала от больных энтеритами новорожденных телят в биологическом материале обнаруживаются антигены рота- и коронавирусов у 42 - 64% обследованных животных, у переболевших пневмоэнтеритами телят количество положительных проб было на 24-33,5% больше, чем у больных, что указывает на этиологическую роль вышеуказанных вирусов в возникновении заболевания.

При отработке режимов инактивации рота- и коронавирусов было установлено, что инактиванты формалин, теотропин в небольших концентрациях (0,125% - 0,3%) вызывают их полную инактивацию.

При изучении эффективности инактивации вакцинных штаммов, установлено, что наиболее эффективным явился способ инактивации с помощью 0,2% раствора теотропина.

На основании проведенного изучения иммунного ответа после введения кроликам и крысам инактивированных рота- и коронавирусов крупного рогатого с различными адъювантами установлено, что оптимальными адъювантами являются: для ротавирусов - 1 и 2% суспензия целлюлозы (титр антител 3,5 и 4,5 log2 у кроликов и 3,5 log2 у крыс) и 10%-ный эмульсиген (3,5 log2 у кроликов и 4,0 log2 у крыс); для коронавирусов - 2% суспензия целлюлозы (титр антител 4,38 log2 для кроликов и 3,38 log2 для крыс) и 10% эмульсиген (титр антител 4,50 log2 для кроликов и 4,80 log 2 для крыс). Оптимальной дозой монокомпонентов при инфекционном титре 6,5 lg ТЦД 50/мл является 2,5 мл на голову, что дает максимальное возрастание титров антител после введения монокомпонентов вакцины. Оптимальное соотношение монокомпонентов 1:1 при титре каждого вируса 6,5 lg ТЦД 50/мл в дозе 2,5 мл. При этом отмечается максимальная выработка антител ко всем изучаемым вирусам. При изучении иммуногенеза установлена активизация биосинтеза иммуноглобулинов: их количество возросло с 42,31+2,1 до 56,08+3,95 г/л на 60 день после вакцинации. Вакцинация коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции способствует существенному биосинтезу противовирусных антител к вышеуказанным вирусам: так к 45 дню титр антител к ротавирусу возрос с 5,2 до 7,8, коронавирусу - с 2,2 до 5,9 log2.

У новорожденных телят, родившихся от коров, иммунизированных инактивированной вакциной против рота- и коронавирусов и получавших молозиво в течение первых 2 часов, формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций - так титр антител через 12 часов после рождения составлял 1:512-1:1024 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

Профилактическая эффективность ассоциированной вакцины против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят в животноводческих хозяйствах Беларуси составила от 85,0 до 95,6 %.

Поливалентная инактивированная культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак»

Конструирование поливалентной инактивированной культуральной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота «Тетравак» проводилось по описанной выше последовательности:

При конструировании вакцины «Тетравак» вирусы ИРТ, ВД и коронавирусы культивировали на перевиваемых клетках почки теленка (МДБК); ротавирусы - на перевиваемиых клетках почки свиней (СПЭВ). Преимущественное культивирвоание - роллерное, при котором титр вируса возраста на 1,0-2,0 lg ТЦД 50/мл по сравнению со стационарным методом. При отработке инактивации вакцинных штаммов установлено, что оптимальным инактивантом является теотропин. В ходе подбора адъюванта установлено, что оптимальными являются 2% суспензия активированной целлюлозы (производства БГУ, Республика Беларусь) и 10% эмульсиген (производство США). На основании результатов отработки технологии изготовления вакцины установлено, что инфекционный титр монокомпонентов должен быть не менее 6,5 lg ТЦД 50/мл, оптимальное соотношение монокомпонентов - 1:1:1:1, вирусы подвергают инактивации теотропином в концентрации 0,2% в течение 24 часов при 37 С и добавляют адъювант - 2% суспензию активированной целлюлозы с 4 - 5% СООН-групп или эмульсиген до 10% концентрации. При исследовании сывороток крови коров, которым вводили вакцину, выявлен высокий уровень биосинтеза иммуноглобулинов - их уровень повывсился на 60-й день после вакцинации на 7,8%, титры антител к каждому из вирусов увеличились на 4-6 log2.

При условии выпойки в течение первых 2 часов молозива от матерей, иммунизированных поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусов у телят формируется напряженный колостральный иммунитет, способствующий защите организма теленка от вышеуказанных инфекций. При исследовании уровня антител с помощью РНГА, их титр через 12 часов после рождения составлял 9 - 10 log2 и оставался на этом уровне на протяжении всего срока наблюдения.

При проведении производственных испытаний поливалентная инактивированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной инфекций крупного рогатого скота имеет 93,3 - 95,1%-ю профилактическую эффективность.

Рекомбинантная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота с использованием генетически модифицированных штаммов бактерий

На первом этапе конструирования вакцины установлено норвое явление в биологической науке - спонтанная персистенция генома вирусов ИРТ и ВД в бактериальных клетках. Наличие общих антигенов бактерий и вирусов было установлено при изучении антигенного родства Bacillus alvei с вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого и Bacillus subtilis с вирусом диареи крупного рогатого скота с использованеим иммунологических реакций - РА, РТНГА, ИФА. Подтверждение наличия генома вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в бактериальной клетке установлено с помощью точечной гибридизации с радиоактивной меткой, с использованием ДНК-зонда, постановкой полимеразной цепной реакции (ПЦР) при установлении комплементарности участков ДНК вируса инфекционного ринотрахеита в Bac. аlvei и участков РНК вируса диареи в Bacillus subtilis.

Исследования, проведенные с использованием ПЦР показали, что в этом же штамме Bac.alvei (КМИЭВ-11) имеются участки ДНК, идентичные вирусу ИРТ (рисунок 5). Для сравнения использовали ДНК, выделенную из вируса ИРТ (штамм 4016) и ДНК из Bac.alvei (КМИЭВ-11). Маркеры - участки ДНК - стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ. Аналогично в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39) установлены участки РНК, комплементарные вирусу диареи крупного рогатого скота. На рис. 6 представлены результаты ПЦР при выявлении комплементарных участков РНК вируса диареи в Bac. Subtilis (КМИЭВ-39).Для сравнения использованы различные штаммы бацилл из коллекции микроорганизмов РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского»

Примечание:

Маркеры - стандартные олигонуклеотидные праймеры вируса ИРТ;

« - » - отрицательный контроль;

I - ДНК из Bac.alvei (КМИЭВ-11),

II - ДНК из вируса инфекционного ринотрахеита (штамм 4016).

Рисунок 5. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементаных участков ДНК вируса ИРТ в Bac.alvei (КМИЭВ-11).



Примечание:

№1 - Bacillus 100b(НИИП), №2 - Bacillus 200а (НИИП),

№3 - Bacillus Бел НИИЭВ-2, №4 - Bacillus Subtilis Бел НИИЭВ,

№5 - Bacillus Subtilis ВВИ-1, 6 - Bacillus alvei ВВИ - 1,

K+VD - положительный контроль вируса диареи

Рисунок 6. Результаты постановки ПЦР при выявлении комплементарных участков РНК вируса диареи в Bacillus Subtilis (КМИЭВ-39).

В результате проведенных исследований доказано, что инфекционные вирусы животных способны проникать в бактериальную клетку и участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вирусспецифические антитела у животных, иммунизированных данными бактериями. Так, у мышей, которых иммунизировали Bac.alvei (КМИЭВ-11) титр антител к вирусу ИРТ составлял 3,5+0,3 log 2, а у животных, получавших вирус ИРТ - 4,25+0,5 log2. При иммунизации мышей Bac.Subtilis (КМИЭВ-39), титр противодиарейных антител был 3,0+0,2 log2, а вирусом диареи - 4,5+0,6 log2. Полученные данные свидетельствуют о выработке противовирусных вируснейтрализующих антител у животных, иммунизированных бактериями с геномом вирусов и экспрессированными вирусспецифическими белками.

На основании доказательства наличия бактерий, несущих на своей поверхности вирус-специфические белки для специфической профилактики вирусных инфекций животных нами разработан бактериальный препарат, названный нами "Бактерин-3". Его готовили из 48-часовой агаровой культуры бактерий Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Bac.Subtilis (КМИЭВ-39) при концентрации бактерий 1,0 млрд. микробных тел в мл, которые инактивировали формальдегидом. Телятам вводили препарат в дозе 5,0 мл двукратно с интервалом в 14 дней .

При определении уровня г -глобулинов у подопытных телят, получавших "Бактерин-3", были получены довольно существенные результаты, свидетельствующие об активном образовании антител-иммуноглобулинов у телят подопытной группы - к концу 3-го месяца их количество составляло 16,26+1,3-17,84+1,35% (Р<0,01), тогда как в контроле не превышало 13,59+0,64% (Р< 0,001). При изучении иммуноглобулинов различных классов установлено довольно значительное увеличение количества Ig G у телят, получавших "Бактерин-3". Так, если в контроле максимальное их количество не превышало 18,59+1,48 г/л, то у иммунизированных телят их количество на 14 сутки после введения препарата составило 24,17+2,31 г/л (Р<0,01) - 3 группа и 21,00+2,38 г/л (Р< 0,01) - контрольная группа. Количество Ig A и Ig М у подопытных животных не отличалось от контрольной группы. Результаты постановки РНГА, поставленной с целью выявления противовирусных антител свидетельствовали, что через 35-40 дней после иммунизации «Бактерина-З» титры антител к вирусам ИРТ и ВД у животных были в наиболее высоких титрах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 log2 (ВД). Результаты исследования форменных элементов крови - количества лейкоцитов, а также анализ лейкоформулы показал, что у всех привитых "Бактерином-З" телят отмечен лейкоцитоз. В первые 14 дней - нейтрофилия, а к концу опыта (35-30 дни) - лимфоцитоз. Профилактическая эффективность «Бактерина-З» составила в среднем 70%; заболеваемость не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%

Стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов природного происхождения.

Для решения вопроса повышения эффективности иммунизации наряду с улучшением технологии содержания и кормления животных, важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммуностимулирующих препаратов. Для этого нами были проведены исследования по изучению стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью «Апистимулина-А» при вакцинации крупного рогатого скота против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи бивалентной вакциной. Нами изучен иммунный ответ организма телят на введение бивалентной вакцины против ИРТ и ВД на фоне стимуляции поствакцинального иммунитета с помощью препарата “Апистимулин-А”.

При изучении динамики антител Ig M и Ig G-классов в ИФА после вакцинации против ИРТ и ВД на фоне обработок “Апистимулином-А” установлено, что биосинтез антител Ig M-класса активно происходит у как телят, иммунизированных одной вакциной, так и на фоне активизации иммунитета. Показатель E (отношение показателя оптической плотности исследуемой сыворотки к показателю оптической плотности отрицательной сыворотки) у телят, иммунизированных одной вакциной начал постепенно возрастать уже с 4 дня с 1,68 до 1,71. К 21 дню этот показатель достиг 1,91, к 28 -- 1,94; к 65 дню -- 2,01. У телят, получавших вакцину на фоне обработки “Апистимулином-А”, биосинтез антител Ig M-класса был несколько выше, чем у телят, получавших чистый вирусный антиген. При этом показатель E до иммунизации составил 1,63, к 4 дню -- 1,93, к 21 -- 1,93, к 28 -- 1,98, к 65 -- 2,03. Биосинтез антител Ig G-класса был значительно слабее, чем Ig M. Так, до иммунизации показатель E составил 1,45, к 4 дню снизился до 1,31, к 21 дню несколько повысился до 1,39, к 42 дню он составил 1,74, к 65 -- 1,64. После иммунизации телят вакциной на фоне обработки “Апистимулином-А” наблюдалось некоторое увеличение количества антител к вирусу ИРТ, относящихся к иммуноглобулинам G-класса. Так, к 4 дню их количество увеличилось в 1,14 раза, к 11 -- в 1,26 раза, к 42-му - в 1,53 раза по сравнению с исходными данными.

У телят после иммунизации одной вирус-вакциной отмечается активизация биосинтеза иммуноглобулинов M-класса. После вакцинации увеличение количества иммуноглобулинов этого класса происходило с 5,680,13 до 6,80,13 г/л к 11 дню, после чего отмечено их некоторое уменьшение.

Иммунизация телят вирус-вакциной на фоне активизации иммунитета “Апистимулином-А” наряду с биосинтезом противовирусных антител активизирует и биосинтез всех иммуноглобулинов. Так, при иммунизации телят вакциной на этом фоне количество иммуноглобулинов M-класса было значительно выше, чем у телят, привитых одной вакциной. Их концентрация к 4 дню возросла с 5,560,09 до 7,80,1 г/л, а к 11 дню -- до 8,00,21 г/л, тогда как у телят, получавших моновакцину, к 11 дню концентрация Ig M была 6,80,13 г/л. После 11 дня биосинтез Ig M снижался. Однако биосинтез иммуноглобулинов G_класса был значительно активнее и их концентрация продолжала возрастать до 65 дня наблюдения. Количество Ig G начало возрастать уже начиная с 4 дня с 14,40,09 до 15,20,3 г/л, к 11 дню -- до 17,40,15 г/л, а к 42 дню -- до 18,40,37 г/л.

У телят, иммунизированных вакциной без иммуностимулятора, количество Т-лимфоцитов к 11 дню возросло с 29,21,7% до 44,41,7%. Затем произошло снижение их количества к 21 дню до 40,41,29%, к 42 до 29,41,5%. Аналогично изменялось количество и В-лимфоцитов у телят этой же подопытной группы. К 11 дню наблюдения их количество возросло с 15,21,3% до 23,20,8%, а к 21 дню снизилось до 20,61,07%, к 42 дню - до 18,61,5 г/л. У телят, иммунизированных вакциной против ИРТ и ВД на фоне обработки “Апистимулином-А”, также происходило увеличение как Т-, так и В-лимфоцитов. Количество Т-лимфоцитов у телят, получавших вакцину на фоне активизации иммунной системы, возросло с 28,83,9 до 48,81,7% к 11 дню, но к 21 дню снизилось до 42,21,7%, и к 42 дню до 29,21,5%. Аналогично изменялось и количество В-лимфоцитов. К 11 дню оно возросло с 16,81,3 до 30,01,7%, к 21 дню снизилось до 21,81,0 и к 42 дню -- до 20,21,93%.

Установлено, что на фоне активизации иммунитета титр интерферона возрастал также до 11 дня с 40,07,29 до 65,65,3%. К 65 дню его титр снизился до 44,32,85%. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета -- Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток. Это свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа на введение вакцин после активизации иммунитета.

Комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по применению иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии инфекционных пневмоэнтеритов у телят

Проведенные исследования по разработке иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят позволили обобщить и составить схему их использования для выращивания здоровых животных и получения от них экологически безвредной животноводческой продукции.

А. Обработка сухостойных коров и нетелей:

1а. Контроль качества кормов, нормализация и балансирование рационов премиксами в соответствии с потребностями;

2а. Вакцинация коров по схеме:

- поголовная двукратная иммунизация коров во второй половине стельности живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств);

-иммунизация сухостойных коров ассоциированной инактивированной вакциной против рота- и коронавирусной инфекции новорожденных телят или поливалентной инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств);

3а. Содержание глубокостельных коров изолированно в родильных отделениях;

4а. Обработка разработанными иммуностимулирующими препаратми глубокостельных коров и нетелей за 10-15 дней до отела для достижения у новорожденных телят высокого уровня иммуноглобулинов.

Б. Обработка новорожденных телят:

1б. Обработка телят с лечебной и профилактической целью иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липополисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»;

2б. Содержание телят в изолированных пластмассовых домиках для разрыва эпизоотической цепи;

В. Выращивание телят старше 20-25 дней:

1в. Антистрессовые обработки телят иммуностимулирующими препаратами - бактериальным липоплисахаридом из Bacillus alvei или «Апистимулином-А»;

2в. Двукратная иммунизация телят живыми моно- и ассоциированными вакцинами против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 (в зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств).

Применение данного комплекса в хозяйствах Республики Беларусь позволило в 2-3 раза снизить заболеваемость и в 1,5-2 раза - отход телят по причине заболевания их инфекционными пневмоэнтеритами.



Выводы

1. Основными причинами возникновении респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь являются предрасполагающие факторы (иммунодефицитное состояние организма новорожденных телят, создание стрессовых ситуаций, влияние неблагоприятных экологических факторов внешней среды, нарушение технологии содержания и кормления, генетическая однородность стад, вызванная использованием одних и тех же производителей при осеменении коров) и способствующие факторы (возбудителями респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят вирусной и бактериальной этиологии, способность вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, проникать через плацентарный барьер и внутриутробно инфицировать плод с дальнейшей его иммунотолерантностью и вирусоносительством).

2. В этиологической структуре вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в Республике Беларусь основной удельный вес занимают вирусы инфекционного ринотрахеита - 67,6% у коров, 65,8% у телят переболевших пневмоэнтеритами, 68,8 у клинически здоровых телят старше 6 мес., диареи соответственно 86,6, 84,1 и 88,9%, парагриппа-3 - 55,9, 71,5, 59,6%. При инфекционных энтеритах антитела к вирусу диареи выявлялись у 64,8% переболевших телят, к ротавирусу - 90,9%, коронавирусу - 80,6%. У больных энтеритами телят установлено наличие антигенов ротавируса - 67,4% (от обследованных), коронавируса - 33,7%, вируса диареи - 35,1%.

3. У больных и переболевших пневмоэнтеритами телят отмечается угнетение Т-лимфоцитов (в 1,2 раза), В-лимфоцитов (в 1,28 раза), фагоцитраной активности нейтрофилов периферической крови (в 1,23 фагоцитраное число и 1,56 - фагоцитарный индекс), в 2,7 раза снижается количество лизоцима, в 1,3 раза бактерицидная активность сыворотки крови, 1,6 раза титр интерферона, в 4,3 раза увеличивается количество циркулирующих иммунных комплексов, в 1,2-2,2 раза конценрарция низкомолекулярных азотистых веществ (мочевины, креатинина и мочевой кислоты), активность аспартатаминотрансферразы в 3,14 (у больных) и в 3,2 раза (у переболевших), аланинаминотрансферразы соответсвено 2,7 и 5,09 раза; креатининкиназы в 4,6 и 1,8 раза превышало уровень здоровых животных, но отмечается снижение активности амилазы в 1,05 и 1,16 раз, щелочной фосфатазы в 1,73 и 1,6 раза, холинэстеразы в 1,28 и 1,05 раза, что указывает на системный процесс.

4. Разработанные иммуностимулирующие препараты - препарат из пчелиной перги “Апистимулин-А” воздействующие на Т-систему лимфоцитов, бактериальный липополисахарид из Bac.alvei, влияющие на В-систему способствуют активизации угнетенных звеньев иммунитета и обмена веществ при респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях телят.

5. При конструировании живых и инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, рота- и коронавирусной инфекций выделены и селекционированы производственные штаммы вирусов крупного рогатого скота: ИРТ - КМИЭВ-6, диареи - КМИЭВ-7, парагриппа-3 КМИЭВ-8, ротавируса - КМИЭВ-3, коронавируса - КМИЭВ-1, которые наиболее активны в антигенном отношении и по своим генетическим характеристикам не отличаются от референтных штаммов, оптимальным является раздельное культивирование вирусов в роллерных установках на перевиваемых культурах клеток МДБК или СПЭВ с использованием гемогидролизата в качестве ростовой (с сывороткой) и поддерживающей питательной среды, что позволяет достигнуть инфекционного титра вышеуказанных вирусов до 6,5 - 8,0 lg ТЦД 50/мл, для инактивации вируса использован теотропин в 0,2% концентрации, а адъювант - эмульсиген или суспензия активированной целлюлозы.

6. Введение живых и инактивированных моно- и ассоциированных вакцин крупному рогатому скоту приводит к биосинтезу противовирусных антител (до 5,5 - 7,0 log2), активизации клеточного и гуморального иммунитета, основных показателей обмена веществ. Профилактическая эффективность вакцин в производственных условиях составляет от 88,2 до 97,5%.

7. Вирусы нфекционного ринотрахеита и диареи, способны проникать в бактериальную клетку, участки их генома интегрироваться в геном бактерий, что в дальнейшем приводит к биосинтезу вирусспецифических белков в бактериальной клетке, а введение бактерий животным позволяет вырабатывать вируснейтрализующие антитела у лабораторных животных в титрах от 3,0+0,2 log2, до 3,5+0,3 log2. Препарат, изготовленный на основе Bac.alvei (КМИЭВ-11) и Bac. Subtilis (КМИЭВ-39) приводит к выработке у телят антител к вирусам ИРТ и ВД в титрах 7,8-6 (ИРТ) и 7-7,5 log2(ВД) в РНГА. Профилактическая эффективность препарата составила в среднем 70%; заболеваемость животных не превышала 30%, тогда как в контрольной группе заболеваемость составила 62%

8. Иммунизация телят на фоне активизации иммунитета иммуностимуляторами природного происхождения способствовала усилению активизации специфических клеточных и гуморальных звеньев иммунитета -- Т- и В-лимфоцитов, концентрации антител и иммуноглобулинов, антигенсвязывающих клеток, что свидетельствует о формировании более напряженного иммунного ответа.

9. Научно-обоснованные подходы к профилактике и терапии вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций у телят, включающие комплекс организационно-хозяйственных, технологических, ветеринарно-санитарных и терапевтических мероприятий с использованием иммуностимуляторов, живых и инактивированных вакцин, при использовании в животноводческих хозяйствах позволяют в 2-3 раза снизить заболеваемость и в 1,5-2 раза - отход телят по причине инфекционных пневмоэнтеритов.

Предложения производству

Проведенные исследования позволяют рекомендовать производству следующие нормативные документы:

1. Вирусвакцина живая культуральная против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.223-97;

2. Вирусвакцина живая культуральная против вирусной диареи крупного рогатого скота, ТУ РБ 00028493.224-97;

3. Вирусвакцина живая культуральная против парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ 00028493.225-97;

4.Бивалентная живая культуральная вирусвакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота; ТУ РБ 00750971.006-98;

5. Вирусвакцина трехвалентная живая культуральная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота; ТУ РБ 600049353.033-2002;

6. Поливалентная инактивированная культуральная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота «Тетравак», ТУ BY 600049853. 099 - 2007;

7 Ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций новорожденных телят, ТУ BY 600049853. 093 - 2008;

8. Рекомендации по диагностике, профилактике и терапии инфекционных заболеваний телят. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 24.07.1991 г.

9. Методические рекомендации по диагностике и профилактике инфекционных заболеваний молодняка крупного рогатого скота. Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1.

10. Методические рекомендации по оценке функциональной активности В-лимфоцитов сельскохозяйственных животных. Утверждены на заседании секции иммунологии и биотехнологии ВАСХНИЛ 27 ноября 1991. Москва, 1991.

11. Использование протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота (Рекомендации). Рассмотрены и утверждены секцией ветеринарии НТС Агропромсоюза ССР Молдова 10 июля 1990 г., протокол № 1.

12. Методические рекомендации по комплексной профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят. Утверждены отделом ветеринарии управления сельского хозяйства Смоленской области 6 апреля 1994 г.

13. Методические рекомендации по иммунологической диагностике, профилактике и терапии пневмоэнтеритов телят вирусно-бактериальной этиологии. Рассмотрены и одобрены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 29 декабря 1996 г., протокол № 4.

14. Методические указания по профилактике и мерам борьбы с рота- и коронавирусой инфекцией телят. Утверждены НТС секции производства и переработки продуктов животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь, протокол №1 от 27.01.1998.

15. Методические рекомендации по профилактике, лечению и мерам борьбы с пневмоэнтеритами телят. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.

16. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике респираторных и желудочно-кишечных заболеваний телят вирусной и бактериальной этиологии. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 20.12.1999 г.

17. Ветеринарно-санитарные требования для племенных животноводческих хозяйств (ферм) Республики. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 9 августа 2002 г., протокол № 2.

18. Ветеринарно-санитарные требования для элеверов и госплемпредприятий Республики Беларусь. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г., протокол № 3.

19. Ветеринарно-санитарные требования для племенных заводов Республики Беларусь, поставляющих ремонтных бычков на элеверы. Утверждены НТС секции животноводства и ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь 25 октября 2002 г., протокол № 3.

20. Методические указания по эпизоотологическому обследованию животноводческих предприятий. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.

21. Методические рекомендации по профилактике пневмоэнтеритов телят технологическими методами. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода Республики Беларусь 10.04.2005 г.

22. Экологические методы профилактики и терапии пневмоэнтеритов телят (методические указания). Утверждены Комитетом Правительства Республики Дагестан по ветеринарии Российской Федерации 07.02.2006 г.



Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

Публикации в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ

1. Красочко П.А.. Помирко Т.И. Выявление антител к респираторным вирусам у крупного рогатого скота // «Ветеринария», М.: 1988, № 4.- С. 63-64.

2. Красочко П.А., Помирко И.И., Яровой П.И. Применение Т-активина и протаргола для лечения респираторных болезней телят // «Ветеринария». М.: 1990, № 11. - С.22-23.

3. Красочко П., Пузына Г. Вакцины против бесплодия // «Молочное и мясное скотоводство». М.: 1991, № 1.- С.37-38.

4. Красочко П.А. Чувствительность ИФА и РНГА при диагностике вирусной диареи крупного рогатого скота // «Ветеринария». М.: 1991, № 5. - С. 58-59.

5. Красочко П.А. Эффективное средство при респираторных заболеваниях // «Молочное и мясное скотоводство». М.: 1992, № 2.- С.7-8.

6. Многослойная керамика на алюмосиликатной основе для фильтрации ветеринарных препаратов / С.М.Азаров, Т.А.Азарова, П.А.Красочко, А.И.Ратько, Е.С.Журавлева // «Стекло и керамика». М.: 2004, № 7. -С.15-17

7. Красочко П.А. Бойчук С.В. Изучение иммунного ответа у животных после введения инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота с различными адъювантами // «Ветеринарная патология». М.: 2005, № 2. - С. 54-55

8. Красочко П.А., Журавлева Е.С., Курбанмагомедов К.Б. Метаболизм и состояние иммунитета у телят при энтеритах вирусно-бактериальной этиологии // «Международный вестник ветеринарии». Санкт-Петербург: № 5-6, 2006. - С.12-17.

9. Влияние инактивированной бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота на метаболизм иммунизированных коров / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.С.Журавлева, А.Н.Притыченко // «Ветеринарная патология». М.: 2007, № 3. С.213-220

10. Красочко П.А., Красочко И.А., Мосин В.М. Иммунотропное действие препарата из пчелиной перги «Апистимулина-А» на организм телят и поросят // «Ветеринарная патология». М.: 2007, № 3. С.220-224.

Монографии

11. Красочко П.А., Зелютков Ю.Г., Красочко И.А. Вирусные пневмоэнтериты телят. Издательское товарищество “Хата”. Минск: 1999.- 166 с.

12. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине / П.А.Красочко, В.С.Прудников, О.Г.Новиков и др. Под ред. Красочко П.А. // Смоленская городская типография. Смоленск: 2001.-324 с.

13. Инфекционные и инвазионные заболевания молодняка / П.А.Красочко, А.С.Ястребов, О.Г.Новиков и др. Под ред. Красочко П.А. // Смоленская городская типография. Смоленск: 2001.-380 с.

14. Болезни крупного рогатого скота и свиней / П.А.Красочко, О.Г.Новиков, А.И.Ятусевич и др. Под ред. Красочко П.А. // Издательство «Технопринт, Минск: 2003. -464 с.

15. Болезни сельскохозяйственных животных // П.А.Красочко М.В.Якубовский, А.И.Ятусевич и др. Под ред. Красочко П.А. Изд. „Бизнесофсет” Минск: 2005. - 800 с.

16. Болезни крупного рогатого скота и овец // П.А.Красочко, З.Д.Джамбулатов, К.Б. Курбанмагомедов и др. Под ред. Красочко П.А. Махачкала: 2007 - 657 с.

17. Иммунокоррекция в клинической ветеринарной медицине / П.А.Красочко, М.В.Якубовский, И.А. Красочко и др. Под ред. Красочко П.А. Изд. „Техноперспектива” Минск: 2008. - 520 с.

Открытия и изобретения

18. Свидетельство на открытие № 291 Российской академии естественных наук и Международной академии авторов научных открытий и изобретений./ Явление спонтанной персистенции генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках / Красочко П.А., Лысенко А.П., Волосянко Е.В. Москва, 18 октября 2005 г. Москва: 2005. 25 с.

19. Авторское свидетельство СССР № 1554590. Способ определения функциональной активности лимфоцитов крупного рогатого скота. П.А.Красочко, Е.В.Баева Т.И.Помирко, Заявл. 1.08.1988 № 4471085/30-13, опубл. 1.12.1989. Москва: 1989. - 4 с.

20. Патент Российской Федерации № 1835659 / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, В.И.Корольков / Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота. Заявл. 04.12.1990 № 4887098, опубл. 10.09.1993. Москва: 1991. - 5 с.

21. Патент Республики Беларусь № 763 / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, В.И.Корольков / Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота. МКИ А 61 К 39/15, заявл. 04.12.1990 № 238-4887098, опубл. 15.08.1995. Минск: 1995. - 2 с.

22. Патент Республики Молдова № MD 889. Remediu pentru stimularea sistemului imun al animalelor (Средство для стимулирования иммунной системы животных) Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав, Усов Сергей // Заявл. 26.12.1996 № 96-0314, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. - 4 с.

23. Патент Республики Молдова № MD 890. Metoda de stimulare a sistemului imun al animalelor (Метод стимулирования иммунной системы животных) Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав, Усов Сергей, Еремия Нина // Заявл. 26.12.1996 № 97-0075, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. - 6 с.

24. Патент Республики Молдова № MD 891. Procedeu de obtinere a remediului pentrustimularea suistemului imun al animalelor (Cпособ получения средства для стимулирования иммунной системы животных) / Красочко Петр, Ковалев Николай, Еремия Николай, Иванов Анатолий, Малиновский Иван, Красочко Ирина, Новиков Олег, Грибко Станислав, Кашко Леонид, Иванов Василий, Лукьянчик Станислав, Усов Сергей, Еремия Нина // Заявл. 26.12.1996 № 97-0076, опубл. 31.12.1997. Кишинев: 1998. - 5 с.

25. Патент Республики Беларусь № BY 2889 . Средство для стимуляции иммунной системы организма животных Апистимулин-А, способ его получения и способ стимуляции иммунной системы организма животных / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, Н.Г.,Еремия, А.Т. Иванов, И.Ф.Малиновский, И.А.Красочко, О.Г.Новиков, С.М.Грибко, Л.С.Кашко, В.Е.Иванов, С.А.Лукьянчик, С.М.Усов. Заявл. 24.061996 № 960314, опубл. 25.02.1999. Минск: 1999. - 7 с.

26. Патент Республики Беларусь № BY 3913. Способ повышения резистентности организма молодняка крупного рогатого скота / П.А.Красочко. А 61К 31/739, А 61 35/74 Заявл. 12.04.1996 № 960174 опубл. 15.01.2001. Минск: 2001. - 5 с.

27. Патент Республики Беларусь № 5304. Бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, способ ее получения и способ ее применения / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, С.А.Жидков, Т.В.Белявская, Е.Г.Колоницкая, О.Г.Новиков, С.М.Грибко, Л.С.Кашко. заявл. 11.12.1997 № 970693, Опубл. 17.03.2003. Минск: 2003. - 10 с.

28. Патент Республики Беларусь № 6091 . Штамм Bacillus alvei КМИЭВ-11, используемый для получения вирусспецифических белков вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота / П.А.Красочко, П.П.Фукс, Е.В.Волосянко, И.А.Красочко. Заявл. 30.06.1999 № а1999651, Опубл. 29.12.2003. Минск: 2004. - 4 с.

29. Патент на корисну модель України № 26673. Штамм Bacillus subtilis (КМИЭВ -39) для одержання вірусопецифічних білків вірусу діареі великоі рогатоі худоби / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Еремия Н.Г. - Заявлено 09.10.2006; № u 200610644 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 - Киев: 2007. - 2 с.

30. Патент на корисну модель України № 26677. Штам Infectious bovine rhinotracheitis (КМИЭВ-6) вipycy інфекційного ринотрахеіту великоі рогатоі худоби для виготовлення вакцинних i діагностичних препаратів / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Кассіч В.Ю. - Заявлено 20.10.2006; № u 200611089 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 - Киев: 2007. - 2 с.

31. Патент на корисну модель України № 26676. Штам вірусу діароеі bovine viral diarrhea (КМИЭВ-7) великоі рогатоі худоби для виготовлення вакцинних i діагностичних препаратів / П.А.Красочко, И.А.Красочко, Е.В.Волосянко, Кассіч В.Ю. - Заявлено 20.10.2006; № u 200611084 опубл. 10.10.2007. Бюл. № 16 - Киев: 2007. - 2 с.

32. Патент Республики Беларусь № 10696 Трехвалентная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота, способ ее получения и способ иммунизации крупного рогатого скота /П.А.Красочко, И.А.Красочко, Н.А.Ковалев, Е.Г.Колоницкая, Г.И.Жих, И.П.Иванова, Н.И.Кот. Заявл. 08.10.2004 № а20040924, Опубл. 06.03.2008. Минск: 2008. - 4 с.

33. Патент Республики Беларусь № 10697. Поливалентная инактивированная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота / П.А.Красочко, И.А.Красочко, С.С.Кабась, Г.И.Жих, И.П.Иванова, Н.А.Ковалев, В.А.Машеро, С.В. Бойчук, Ф.Н. Капуцкий, Е.В. Герт, В.И. Торгашов, О.В. Зубец Заявл. 08.10.2004 № а20040925, Опубл. 06.03.2008. Минск: 2008. - 8 с.

Список статей в журналах СНГ

34. Профилактика и терапия респираторных заболеваний телят / П.А.Красочко, Т.И.Помирко, В.И.Стародуб, А.В.Жовтан // Сельское хозяйство Молдавии. Кишинев: 1988.- № 11.- С.35-36.

35. Состояние иммунитета при вакцинации телят бивалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи / П.А.Красочко, Н.А.Ковалев, И.А.Красочко, Т.В.Белявская // Весцi Акадэмii аграрных навук Рэпублiкi Беларусь, Минск: 1998, № 2- С. 81-84.

36. Красочко П.А., Красочко И.А., С.М.Усов Влияние препарата “Апистимулин-А” на состояние иммунитета и обменные процессы организма здоровых телят //Весцi Акадэмii аграрных навук Рэпублiкi Беларусь, Минск: 1998, № 3- С. 87-90.

37. Красочко П.А., Борознов С.Л.Профилактика инфекционных энтеритов новорожденных телят технологическими методами // Вiсник Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал № 1-2 (13-14). Сумы: 2005. -С.70-72.

38. Красочко П.А., Машеро В.А. Реактогенность и иммунологическая эффективность инактивированных вакцин для специфической профилактики энтеритов новорожденных телят // Вiсник Сумського национального аграрного университету. Науково-методичний журнал № 1-2 (13-14). Сумы: 2005. -С.240-241

39. Красочко П.А., Журавлева Е.С., Мацинович А.А.Состояние иммунитета и обменных процессов у телят при вирусно-бактериальных энтеритах // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 3, 2004. - С.38-42.

40. Красочко П.А., Машеро В.А. Иммуностимуляторы и современные способы коррекции иммунного ответа // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 1, 2004. - С.3-11.

41. Красочко П.А., Лысенко А.П., Волосянко Е.В. Спонтанная персистенция генома инфекционных вирусов в бактериальных клетках, приводящая к биосинтезу вирус специфических белков // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 2, 2004. - С.34-40

42. Красочко П.А. Современные подходы к классификации иммуномодуляторов // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 2, 2006. - С.35-40

43. Красочко П.А., Ламан А.М. Научные основы изучения этиологии, патогенеза и разработка мер борьбы с вирусными инфекциями молодняка крупного рогатого скота // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. Минск: № 3, 2006. - С. 3-8.

44. Список статей в сборниках трудов СССР и СНГ

45. Этиология, профилактика и лечение острых гастроэнтеритов новорожденных телят / П.А.Красочко, А.И.Ерошов, В.М.Бондарь, Т.И.Помирко // Научное обеспечение животноводства Молдавии, Кишинев: Штиинца. 1989. - С. 100-103.

46. Спатарь Ф.В., Шитту Мохаммед, Красочко П.А. Комплексная терапия острых респираторных болезней крупного рогатого скота // Диагностика и специфическая профилактика инфекционных болезней животных и птиц. Сб. научн. тр. Кишиневский СХИ им. М.В.Фрунзе, Кишинев: 1989. - С.86-91.

47. Красочко П.А. Роль вирусов в этиологии респираторных инфекций телят // Биотехнологические аспекты развития животноводства. Сб. научн. статей. Кишинев: Молдагроинформ реклама, 1991. - С.125-130

48. Иммуностимулирующие свойства пыльцы и перги // П.А.Красочко, Н.Г. Еремия, Н.М.Еремия, Е.В.Баева, Т.М.Есауленко // Апитерапия и пчеловодство. Сб.научных трудов, Гадяч: 1991.- С.183-186

49. Использование ИФА для изучения динамики противовирусных антиител Ig М и Ig G-классов / П.А.Красочко, Н.А. Ковалев, И.А. Красочко, Ю.Г.Зелютков, Ю.Н.Федоров // Ученые записки Витебского ордена “Знак По-чета” ветеринарного института им. Октябрьской революции, Т.30. Витебск: 1993.- С.62-64.

...