Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах

Проведенные исследования показали, что количество и степень изменений рН крови находятся в прямой зависимости от величины и степени функциональной нагрузки. Чем дальше расположены фермы от убойного пункта и больше время нахождения в пути, тем значительнее выражены сдвиги в величине рН крови (рис.1).

Рис. 1. Степень и типы нарушений кислотно-щелочного баланса у свиней после дозированных функциональных нагрузок

В I-й группе из 35 свиней, перенесших легкую функциональную нагрузку, в 83% случаев отсутствовали изменения и только в 6 случаях (17%) при нормальном рН крови отмечены сдвиги метаболического и респираторного компонентов. Во II-й группе животных отсутствие нарушений отмечено только у 7 животных, в остальных 23 случаях отмечались компенсаторные нарушения. У всех свиней III группы, перенесших тяжелую функциональную нагрузку, наблюдались нарушения физиологических систем и органов, обеспечивающих постоянство рН крови. Из 30 животных этой группы в 12 случаях имели место компенсированные, в остальных - субкомпенсированные нарушения величины рН крови.

Сопоставление клинических симптомов и полученных показателей КЩБ позволяет объективизировать заключение о состоянии животных и дать индивидуальную количественную и качественную характеристику его реакции на воздействие повреждающих факторов на всех стадиях предубойного этапа.

Применение функционально-диагностических методов исследования позволяет врачу-ветсанэксперту обосновать свое заключение о состоянии резистентности животного не только опираясь на клиническую симптоматику, но и с учетом степени нарушений физиологических систем и органов, выполняющих гомеостатическую задачу по обеспечению постоянства рН крови, что позволяет своевременно провести коррекцию выявленных нарушений.

Полученные данные подтвердили, что при метаболическом ацидозе основным компенсирующим органом являются легкие. Установлено, что компенсация осуществляется за счет избыточного выведения СО2. Это снижает концентрацию респираторного компонента (РаСО2 в крови пациента) и, следовательно, делает рН крови менее кислым. При респираторном алкалозе наблюдалось снижение напряжения углекислого газа в артериальной крови (как результат гипервентиляции альвеол).

Основной задачей, которую должно разрешить любое функциональное исследование, является выяснение резервных возможностей достаточности функции изучаемой системы, определение способности организма животного отвечать адекватной реакцией на предъявляемые к ней требования.

В ходе проведенных исследований показано, что у 95 из 96 животных физиологические системы и органы, обеспечивающие поддержание постоянства рН крови, могут выполнять эту задачу в условиях покоя. При предъявлении дополнительных требований в виде различных по степени тяжести и интенсивности функциональных нагрузок, связанных с транспортировкой животных к месту убоя, только у 36 животных (38%) не обнаружено нарушений, а у 59 (61%) выявлены признаки недостаточности систем и органов (рис.1).

По интенсивности выявленных нарушений физиологических систем и органов, определяющих резистентность организма, и по их способности решать гомеостатическую задачу по поддержанию постоянства рН крови полученные результаты позволили выделить и обосновать три степени функциональной недостаточности.

Недостаточность I степени - неспособность систем и органов осуществлять функцию по поддержанию постоянства рН крови не обнаруживается в покое, а определяется лишь при предъявлении значительных требований к системе, то есть при максимальных нагрузках. В проведенных исследованиях о такой степени недостаточности указывают компенсированные и субкомпенсированные изменения рН крови, выявленные соответственно у 12 и 18 животных при тяжелой нагрузке.

Недостаточность II степени - нарушение способности системы осуществлять функцию определяется при выполнении умеренной нагрузки, но не обнаруживается в покое. Такая степень недостаточности в виде компенсированных нарушений выявлена в 29 случаях.

Недостаточность III степени - неспособность организма осуществлять функцию по поддержанию рН крови обнаруживается при любой нагрузке, то есть при предъявлении любых повышенных требований, а в покое выявляется ограниченная способность поддерживать постоянство рН. С III степенью недостаточности было выявлено только одно животное.

В ходе проведенных исследований установлено, что величина рН крови является интегральным показателем состояния функции многих взаимосвязанных систем и органов. Поэтому функциональные исследования КЩБ позволяют не только определить степень нарушений функции поврежденной системы, оценить резервные возможности компенсирующих систем и органов, но и распознать преморбидную фазу начинающегося заболевания.

Проведенные исследования по определению способности организма животных сохранять постоянство рН крови не дают представления ни о патологоанатомическом, ни о бактериологическом диагнозе. Они показывают насколько меняется резистентность организма животных, обеспечивающая постоянство его внутренней среды в зависимости от функциональных нагрузок.

По данным ряда авторов установлено, что резистентность позвоночных животных при воздействии повреждающих факторов определяется неспецифическим и специфическим иммунитетом (Задорожин П.А., 1996; Петров А.М., 2006). Для определения степени влияния физических и стрессовых факторов на ослабление иммунитета свиней при различных функциональных нагрузках было проведено бактериологическое исследование продуктов убоя на контаминацию их сальмонеллами.

Контаминация мезентериальных лимфоузлов сальмонеллами после функциональных нагрузок

При выбранных функциональных нагрузках различной степени тяжести обследованные животные подвергались одновременному воздействию стрессовых, физических факторов и меняющихся условий внешней среды.

Для выявления, насколько тяжесть перенесенных функциональных нагрузок способствует активности возбудителей пищевых зоонозов, было проведено бактериологическое исследование проб мезентериальных лимфоузлов с целью выявления в них сальмонелл.

Рис.2. Зависимость количества контаминированных сальмонеллами проб от величины функциональной нагрузки на предубойном этапе

Из 95 обследованных проб, взятых после убоя клинически здоровых животных, сальмонеллы были выявлены в 16 (16,8%) случаях (рис.3). По серологическим свойствам культуры были отнесены к следующим серотипам: S. tуphimurium - 8, S. enteritidis - 7 и S. anatum - 1 культура.

Проведенными исследованиями установлено, что в 8% случаев у животных, перенесших при транспортировке легкую нагрузку, в пробах из мезентериальных лимфоузлов были выявлены возбудители сальмонеллеза. После средней нагрузки количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13%, а после тяжелой нагрузки - 30%. Такой результат указывает на повышение частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб по мере увеличения стресса и физического напряжения.

Полученные данные согласуются с литературными источниками, свидетельствующими, что эмерджентные пищевые зоонозы связаны в первую очередь с сырьем и продукцией, полученными от клинически здоровых животных, и подтверждают существующее мнение о влиянии повреждающих факторов на равновесие во взаимоотношении хозяин-паразит (В.И. Покровский, Б.Л. Черкасский, 1993; А.В. Куликовский, 2002).

По мнению исследователей, любые меняющиеся условия ведут к изменению динамического равновесия в отношениях хозяин-паразит, снижая защитные силы организма и стимулируя жизнедеятельность патогенных микроорганизмов, как проживающих в животных, так и обитающих в окружающей среде (N.N. Lizko., 1987; К. Fehlhaber, Т. Alter, 1999).

Сопоставление количества контаминированных проб с характером изменения КЩБ позволило отметить, что по мере нарушения рН крови увеличивается количество случаев выявления сальмонелл. Взаимосвязь частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб и изменений величины рН крови указывает на зависимость этих показателей от резистентности организма животных. Отмечено, что в 75% эти случаи наблюдались при дыхательном алкалозе. Вероятно, более благоприятные условия для стимуляции жизнедеятельности сальмонелл в организме облигатного хозяина обеспечиваются при сдвиге рН крови в щелочную сторону.

Установленная взаимосвязь частоты выявления контаминированных сальмонеллами проб и изменениями величины рН крови у свиней после функциональных нагрузок, связанных с транспортировкой к убойному пункту, определяется зависимостью этих показателей от резистентности организма животного. Таким образом, ещё раз подтверждается точка зрения, определяющая устойчивость организма к повреждающим факторам (биологическим, химическим, физическим и т.д.) как способность сохранять свой гомеостаз.

Являясь интегральным показателем постоянства внутренней среды организма, количественная и качественная характеристика рН крови как индикатор отражает адекватность доставки кислорода и потребность в нем всех систем и органов, обеспечивающих как жизнедеятельность животных, так и их защиту при воздействии повреждающих факторов.

Проведенные исследования показали, что интенсивность окислительных процессов аэробного и анаэробного энергообразования влияет на рН крови и работающих мышц в зависимости от величины функциональных нагрузок, полученных свиньями перед убоем. Для определения влияния таких нагрузок на биохимические свойства мяса, состоящего на 60 - 80% из мышц, выполнялись измерения рН мяса в период его созревания.

Влияние функциональных нагрузок на изменение рН мяса в период его созревания

Несмотря на то, что при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса рН-метрии отводится дополнительное место, главное достоинство определения показателя рН в комплексе регламентированных исследований - его количественная оценка. Сравни-тельный анализ результатов измерения рН в m.semimembranosus (рН m.s.) сразу после убоя показал разницу в её величинах в зависимости от длительности и интенсивности функциональных нагрузок, полученных животными на предубойном этапе.

При длительной (тяжелой) нагрузке у животных III группы рН m.s. имело среднюю величину 6,72 ± 0,12, показатель рН m.s. от животных I группы, получивших кратко-временную (легкую) нагрузку, составлял 6,42 ± 0,10 и во II группе, перенесших среднюю нагрузку, рН m.s. имел значения 6,61 ± 0,09. Разность средних величин показателей рН m.s., полученных сразу после убоя, была статистически достоверной между всеми группами животных. Наиболее выраженной достоверность определялась между I и III (р<0,01 при tSt= 15,00) и I и II группами (р<0,01 при tSt= 10,02). Менее выраженные, но достоверные отличия оставались в этот период у животных II и III групп (р<0,01 при tSt=4,28). Во всех случаях мясо от животных, перенесших тяжелую и умеренную функциональную нагрузку, характеризовалось сдвигом рН m.s. в сторону алкалоза.

Наиболее выраженное снижение величины рН m.s. выявлено в первый час после убоя. В среднем при легкой нагрузке кислотность увеличилась на 15% в мясе животных, перенесших умеренную и тяжелую нагрузку, соответственно на 18% и 9%. В показателях рН m.s. достоверные различия за этот период сохранялись только между I и III (р<0,01 при tSt= 21,92) и II и III групп (р<0,01 при tSt= 20,71).

В остальные временные отрезки периода созревания отмечалось медленное, но стабильное снижение рН m.s. во всех группах. При этом по мере увеличения функциональных нагрузок сохранялась тенденция к гипоацидным реакциям в мышце..

В конечном итоге за весь период созревания снижение величины рН m.s. по сравнению с исходным уровнем составило в среднем во всех группах 20%. Временная характеристика изменений рН m.s. за этот период графически приближалась к гиперболической зависимости. Такая динамика определяет качество мяса, смещая его в зону PSE мяса. При этом у животных, перенесших тяжелую нагрузку, в конце периода созревания сохраняется достоверно выраженный сдвиг рН m.s. в сторону оснований (5,55 ± 0,08) относительно рН m.s. 5,36 ± 0,06 от животных I группы (р<0,01 при tSt= 11,89).

Таким образом, при длительном воздействии на свиней стресса и физического напряжения наблюдается сдвиг рН мяса в сторону алкалоза. Отмечено, что такие изменения не только влияют на качество мяса, но и благоприятствуют развитию в мясе микроорганизмов и предопределяют его меньшую стойкость при хранении.

Результаты проведенных исследований позволяют дать не только количественную характеристику биохимическим процессам, но и прогнозировать качество и безопасность мяса с учетом изменения величины его рН. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее динамичные изменения величины рН мяса происходят в первые часы его созревания, поэтому коррекция в этот период аутолиза наиболее эффективна.

К оценке методов выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов

Результаты исследования проб мяса со слабым уровнем инвазии трихинеллами

С учетом международных и отечественных требований безопасности мяса и различного отношения к методам выявления трихинелл в условиях слабой инвазии (от 2 до 6 личинок в 1 гр. мяса) проведено сравнение эффективности регламентированных методов компрессорной трихинеллоскопии и искусственного переваривания по критериям специфичности и чувствительности.

Результаты исследования, представленные в таблице 4, свидетельствуют о низкой чувствительности метода КТ(компрессорной трихинеллоскопии). Так, ложноотрицательные

Таблица 4 - Результаты сравнительных исследований проб мяса со слабым уровнем инвазии трихинеллами

результаты отмечены в 56,7% от всех отрицательных ответов. Такое количество ложноотрицательных результатов говорит о низкой чувствительности метода - 46,9%. Ложноположительные ответы при КТ составляли 16,7% от всех положительных случаев. Специфичность метода составляла 81,2%. По мере увеличения уровня зараженности специфичность КТ возрастала и при инвазии 4 - 6 личинок в 1 гр. мышц достигала 97,5%.

Таким образом, простой и широко применяемый на практике метод КТ недостаточно эффективен при слабом заражении мышц личинками трихинелл. Такой результат обосновывает необходимость обязательного применения метода искусственного переваривания при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов на трихинеллез, так как слабые инвазии являются причиной поражения людей и животных значительно чаще, чем интенсивные и умеренные.

Сравнительный анализ методов контроля мясопродуктов при сальмонеллезе и листериозе

Для повышения диагностической достоверности при идентификации возбудителей сальмонеллеза и листериоза были сопоставлены современные методы, применяемые в отечественной и зарубежной практике ветсанэкспертизы при контроле безопасности мяса и мясопродуктов.

В процессе проведения сравнительного анализа различных методов выявления бактерий рода Salmonella было исследовано согласно ГОСТ 30519-97 и международному стандарту ISO 6579 : 2002 50 проб мяса и мясопродуктов в вакуумной упаковке. Сравнительная оценка культурального, иммуноферментного (VIDAS SLM) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл показала, что число положительных результатов в пробах мясопродуктов, полученных при применении полимеразно-цепной реакции (PCR) превышает число позитивных ответов, полученных другими методами. Такой результат объясняется высокой чувствительностью данного метода и его способностью выявлять не только живые, но и нежизнеспособные сальмонеллы, не дающие рост на питательных средах. Поэтому наибольшее совпадение результатов исследований (98%) определялось при выявлении сальмонелл культуральным и иммуноферментным (VIDAS SLM) методами, наименьшее (94%) - между культуральным и молекулярно-биологическим (Real-Time PCR) методами. Наибольшая специфичность (97,92%) была отмечена при выявлении сальмонелл культуральным и иммуноферментным методами. Исследования с применением молекулярно-биологического и иммуноферментного методов характеризовались высокой автоматизацией процесса исследования и быстротой получения конечного результата.

Согласно отечественным и международным нормативным документам по определению сальмонелл положительные результаты, полученные упомянутыми методами, не являются окончательными и требуют подтверждения. При проведении исследований для подтверждения принадлежности выделенных культур к сальмонеллам использовались биохимические панели системы API 20Е (фирмы «BioMerieux»). Положительные результаты по выявлению сальмонелл в исследуемых мясопродуктах отмечались в одном случае в свежих пробах и такое же количество случаев в пробах с истекшим сроком реализации.

В процессе проведения сравнительного анализа различных методов выявления бактерий рода Listeria было исследовано согласно вышеупомянутому ГОСТ Р 51921-2002 и международному стандарту ISO 11290-1 50 проб мясопродуктов в вакуумной упаковке. Из 50 исследованных образцов листерии были выявлены в 11 случаях. При этом 9 из 11 положительных проб были с истекшим сроком реализации продукта. В ходе биохимической идентификации выделенных микроорганизмов рода Listeria, проведенной с помощью стрипов API Listeria, была определена L.monocytogenes в 3-х случаях, в 6-ти - L. welschimeri и в 2-х - L.innocua. Наличие гемолиза на кровяном агаре (SB) и характерная реакция в виде зоны просветления на хромогенной среде ALOA позволяла дифференцировать L.monocytogenes от непатогенных видов листерий. Применение среды ALOA позволило также подавить рост сопутствующей микрофлоры и сократить временные затраты в процессе качественного и количественного определения L.monocytogenes. В отечественной практике ветсанэкспертизы не проводится количественное определение в пищевых продуктах L.monocytogenes, хотя в странах ЕС оно регламентировано ISO 11290-2 и установлена допустимая концентрация Listeria monocytogenes в пищевых продуктах не более 100 КОЕ/г. Известно, что листериоз, как многие инфекционные заболевания, возникает в условиях микробной ассоциации, связанной с постоянным присутствием разнообразных микроорганизмов. Результаты исследований по определению наличия роста сопутствующей микрофлоры на различных питательных средах, используемых в работе для выделения листерий, представлены в таблице 5. В процессе исследований было определено соотношение роста листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С) на средах Oxford, PALCAM и ALOA. На среде PALCAM обнаружен менее интенсивный рост сопутствующей микрофлоры (соотношение Л/С=1,5-1,8), чем на Oxford-агаре (соотношение Л/С=1,0-1,1). Наиболее обильным рост сопутствующей микрофлоры был на Oxford-агаре, её рост одновременно с ростом листерий отмечался во всех чашках свежих проб (6/6), и в 8 чашках из 9 (9/8) проб с истекшим сроком реализации. Наличие сопутствующей микрофлоры на среде ALOA было наименьшим (соотношение Л/С = 2,0-3,0), что подтверждает её более высокую специфичность.

Таблица 5 - Рост бактерий рода Listeria и сопутствующей микрофлоры на средах Oxford, PALCAM и ALOA

В ходе работы была проведена сравнительная оценка методов выявления L.monocytogenes: культурального, иммуноферментного (VIDAS LMO 2) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR). Данные, представленные в таблице 6, показывают, что не все Real-Time PCR-положительные результаты подтверждались культуральным методом и тестом VIDAS (LMO2), что объясняется высокой чувствительностью метода ПЦР и его возможностью выявлять патогенные листерии в пробах с низким уровнем контаминации, а также не только живые, но и нежизнеспособные L.monocytogenes, не дающие роста характерных колоний на питательных средах (K. Rantsious et al, 2008).

Таблица 6 - Частота выявления L.monocytogenes различными методами

Наибольшая специфичность была отмечена при выявлении L.monocytogenes культуральным и иммуноферментным методами. Исследования с применением молекулярно-биологического и иммуноферментного методов характеризовались высокой автоматизацией процесса исследования и быстротой получения конечного результата. Согласно отечественным и международным нормативным документам по определению патогенных листерий положительные результаты, полученные упомянутыми методами, не являются окончательными и требуют подтверждения. При проведении исследований для подтверждения принадлежности выделенной культуры к патогенному виду L.monocytogenes использовались биохимические панели системы API Listeria (фирмы «BioMerieux»). В результате положительные результаты по выявлению L.monocytogenes в исследуемых мясопродуктах отмечались в 2-х случаях в свежих пробах и в 1-м случае в пробах с истекшим сроком реализации.

Проведенные сравнительные оценки методов по критериям чувствительности и специфичности при выявлении возбудителей трихинеллеза, сальмонеллеза и листериоза показывают, что для дифференцированного подхода к результатам исследования необходимо стандартизировать методы и питательные среды, применяемые в различных странах. Обобщение накопленного международного опыта позволит повысить диагностическую достоверность и состоятельность результатов исследования, выработать единые критерии для оценки безопасности мяса и мясопродуктов.

Выводы

1. Обоснованы, разработаны и применены функциональные методы исследования с использованием современной техники для проведения мониторинга физиологических параметров, обеспечивающих постоянство важнейшего показателя гомеостаза - рН крови, с целью оценки функционального состояния органов и систем, определяющих устойчивость организма свиней при транспортных нагрузках на предубойном этапе.

2. Установлены изменения величины рН крови свиней по мере возрастания дополнительных требований (нагрузки), связанной с увеличением времени и расстояния при транспортировке к убойному пункту.

При легкой нагрузке у 82,8% свиней нарушений гомеостаза не наблюдалось, в 17,2% случаев постоянство величины рН крови обеспечивалось компенсаторным напряжением буферных систем организма свиней. При умеренной нагрузке у 22,6% свиней отмечалась устойчивость гомеостаза, в 74,2% случаев наблюдались компенсаторные нарушения и в одном случае у свиноматки имели место декомпенсированные изменения величины рН крови. При тяжелой нагрузке у всех свиней по прибытии на убойный пункт наблюдались нарушения гомеостаза. В 40% случаев изменения величины рН крови носили компенсированный характер, в 60% - субкомпенсированный.

3. Мониторинг показателей кислотно-щелочного баланса свиней в условиях транспортных нагрузок по прибытии на убойный пункт выявил изменения как респираторного, так и метаболического компонентов рН крови. Напряжение углекислого газа крови, составляющее респираторный компонент рН крови, уменьшилось по сравнению с исходными значениями во всех группах животных: при легкой нагрузке - на 7,8%, при умеренной нагрузке - на 11,2%, при тяжелой нагрузке на 15,5%. Дефицит оснований, составляющих метаболический компонент рН крови, увеличился по сравнению с исходным состоянием (-0,3 ± 0,28 мэкв/л) при легкой нагрузке до -1,6 ± 0,24 мэкв/л, а при умеренной нагрузке до -1,8 ± 0,64 мэкв/л. При тяжелой нагрузке накопление кислых продуктов обмена в крови свиней увеличило дефицит оснований до -2,2 ± 0,54 мэкв/л. Различные соотношения респираторного и метаболического компонентов определили разные типы нарушений кислотно-щелочного баланса крови: у 32% свиней наблюдался дыхательный ацидоз, у 45%-дыхательный алкалоз и у 23% - метаболический ацидоз.

4. Установлено увеличение концентрации молочной кислоты в крови свиней на 37,5% после легкой нагрузки, на 85,4% после умеренной нагрузки, на 22,4% после тяжелой нагрузки, которое сопровождалось уменьшением недоокисленных продуктов обмена в мясе в постмортальном периоде. У свиней, перенесших тяжелую нагрузку, наблюдался статистически достоверный сдвиг рН мяса в конце периода созревания в сторону оснований по сравнению с животными, перенесшими легкую нагрузку (5,55 ± 0,08 против 5,36 ± 0,06; p < 0,01).

Таким образом, функциональные исследования энергообмена у свиней установили, что увеличение транспортной нагрузки на предубойном этапе снижает резервы аэробного энергообразования, уменьшает количество кислот и гликогена в мышцах и приводит к снижению пищевой ценности мяса, приближая его к свойствам DFD - мяса, благоприятствуя развитию в нём микроорганизмов, предопределяя его меньшую стойкость при хранении.

5. Результаты бактериологического исследования мезентериальных лимфоузлов в постмортальном периоде установили, что у свиней, получивших легкую нагрузку, сальмонеллы выделены в 8% случаев, у получивших умеренную нагрузку количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13%, а у перенесших тяжелую нагрузку - 30%. Учитывая, что обсемененные пробы выявлены только у свиней с нарушениями гомеостаза, то исследование рН крови позволит на предубойном этапе прогнозировать вероятность контаминации мяса патогенными микроорганизмами.

6. Применение мониторинга состояния функции органов и систем, определяющих величину рН крови организма свиней на предубойном этапе, позволяет контролировать качество и безопасность мяса на начальных звеньях пищевой цепочки в процессе производства (животноводческие фермы, убойные пункты и т.д.), когда не затрачены средства и усилия на получение готового продукта, и есть возможность влиять на его качество, реализуя принцип «Здоровое животное - безопасное мясо».

7. Сравнительный анализ регламентированных методов определения возбудителей трихинеллеза при слабой инвазии выявил низкую чувствительность (46,9%) и эффективность (58,3%) метода компрессорной трихинеллоскопии. Специфичность этого метода по мере снижения уровня инвазии от 4-6; 2-4 и 0-2 личинок в 1г. мышц соответственно уменьшалась от 96,7%, 95,1% и 86,7% относительно метода группового ферментативного переваривания. Результаты исследования свидетельствуют, что наиболее эффективным методом с позиций предупреждения трихинеллеза является метод выделения трихинелл, основанный на ферментативном переваривании мышечных проб.

8. Сравнительная оценка культурального, имунноферментного (VIDAS) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл и патогенных листерий в мясопродуктах по критерию эффективности характеризовалась наименьшим совпадением результатов между культуральным и молекулярно-биологическим методами, составлявшим соответственно 94% и 42%. Наибольшее совпадение результатов (98%) отмечали при применении культурального и иммуноферментного методов. Иммуноферментный метод (VIDAS) позволяет наиболее быстро обнаружить возбудителя в пищевой продукции, что и определяет возможность его применения в экспресс-диагностике сальмонеллеза и листериоза.

9. Сопоставление результатов первичных посевов на питательные среды: ALOA-агар по Оттавиани-Агости, PALCAM-агар и Oxford-агар, применяемых для избирательного роста листерий, показало, что величина соотношения листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С) на этих средах в пробах свежих мясопродуктов, соответственно равнялась 2,0; 1,5 и 1,0, а в пробах с истекшим сроком реализации соответственно 3,0; 1,8 и 1,1, что свидетельствуют о надежности хромогенной среды ALOA-агар по Оттавиани-Агости при идентификации патогенных штаммов листерий и служат основанием её применения для количественного определения L.monocytogenes в мясопродуктах после прямого посева.

10. Унифицированный подход к оценке международных методов и национальных стандартов, применяемых для выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов, на основе критериев эффективности, чувствительности и специфичности позволит обобщить опыт и повысить достоверность и состоятельность результатов исследований.

Автор признателен сотрудникам продовольственно-ветеринарной службы Краславского района Латвии за создание оптимальных условий при содружественном решении проблем, связанных с транспортировкой свиней на убойный пункт, выражает благодарность сотрудникам Института гигиены и технологии продуктов животного происхождения г. Мюнхен (Германия), а также коллективу лаборатории микробиологии и гигиены производства ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова за содействие и большую помощь при выполнении данной работы.

Практические предложения

1. Применение функциональных методов диагностики дает возможность с учетом клинической симптоматики определить компенсаторные возможности организма и представить индивидуальное клинико-функциональное экспертное заключение о состоянии животного согласно методическим рекомендациям «Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса», утвержденным Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., и данным, изложенным в методическом пособии «Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы», утвержденном методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №2 от 28 февраля 2007 г.

2. Определение функциональных возможностей организма свиней сохранять свой гомеостаз на всех стадиях предубойного этапа позволяет оценить адекватность реакции органов и систем животного на воздействие повреждающих факторов, связанных с транспортировкой к месту убоя. Полученные данные положены в основу для оптимального решения о выборе места расположения убойного пункта среди близлежащих свиноводческих хозяйств Краславского района (Латвия).

3. Установленная взаимосвязь основных физиологических параметров, определяющих функцию жизнеобеспечивающих систем и органов с кислотно-щелочным балансом (КЩБ) организма животного, дает возможность определить исходную базу для мониторинга функциональных показателей в условиях воздействия повреждающих фак-торов и проведения своевременной коррекции величины рН крови. Мероприятия (отдых, кормление, содержание, уход), направленные на восстановление выявленных нарушений в предубойном периоде, в конечном итоге повышают качество и безопасность мяса.

4. Применение результатов проведенных функциональных исследований в ветеринарных учреждениях г. Санкт-Петербурга и Ленинградской области показало их эффективность при восстановлении гомеостаза у животных, оказавшихся в чрезвычайных условиях (хирургическое вмешательство, стресс, неотложные и критические состояния).

5. Опыт сопоставления результатов исследований по диагностике пищевых зоонозов, полученных в отечественных и зарубежных лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, по критериям чувствительности и специфичности позволяет гармонизировать методы выявления возбудителей пищевых зоонозов в общепринятой системе международных координат и применять их при ветсанэкспертизе мяса и мясопродуктов согласно методическим рекомендациям: «Исследование мяса и мясопро-дуктов на цистицеркоз и трихинеллез» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №4 от 19.06.2001 г.), «Метод полимеразной цепной реакции» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.), «Применение метода ПЦР в ветеринарной практике» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.).

6. Материалы исследований, изложенные в методических рекомендациях «Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., определили подходы для введения количественных критериев выявления L. monocytogenes в соответствии с международным стандартом ISO 11290-2, регламентирующим методы подсчета бактерий Listeria monocytogenes.

7. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры ветеринарной гигиены и санитарии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ

1. Нечаев А.Ю. Послеубойная диагностика трихинеллеза / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Мясная индустрия. - М., 2003. - №6. - С. 40 - 42.

2. Нечаев А.Ю. Применение автоматического анализатора mini VIDAS для определения сальмонелл /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе.- М., 2006. - №3.- С. 35 - 36.

3. Нечаев А.Ю. Проблемы диагностики трихинеллеза в свиноводстве / А.Ю. Нечаев // Свиноводство. - М., 2006. - №4. - С.23 - 25.

4. Нечаев А.Ю. Диагностические возможности ветсанэкспертизы мяса при трихинеллезе / А.Ю. Нечаев // Все о мясе. - М., 2007. - №1. - С. 26 - 28.

5. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А. Ю. Нечаев // Ветеринарная патология. - М., 2007. - № 1. - С. 141 - 143.

6. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животного / А.Ю. Нечаев // Ветеринария. - М., 2007. - №3. - С. 54 - 55.

7. Нечаев А.Ю. Применение рН-метрии в процессе ветеринарно-санитарной экспертизы мяса / А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия.- М., 2007.- №6.- С.58 - 60.

8. Нечаев А.Ю. Применение ускоренных микробиологических методов определения патогенных листерий в мясе /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе. - М., 2007. - №3. - С.27 - 28.

9. Нечаев А.Ю. Экспресс-методы для определения листерий в мясе и мясных продуктах / А.В. Яшин, А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. - М., 2008. - №8. - С. 51 - 54.

10. Нечаев А. Ю. Сравнительный анализ результатов выявления Listeria monocytogenes в мясе и мясопродуктах /А.Ю. Нечаев // Международный вестник ветеринарии. - СПб., 2009. - № 3. - С. 13 - 17.

11. Нечаев А.Ю. Определение сальмонелл в мясе и мясных продуктах / А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. - М., 2009. - №7. - С. 25 - 28.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях

12. Нечаев А.Ю. Методика определения состояния вентиляции и кровотока в легких у животных с помощью оксигемометрии / А.Ю. Нечаев, М.В. Куляко // Материалы 54-й конф. молодых ученых и студентов. - СПб., 2000. - С. 64-65.

13. Нечаев А.Ю. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2001. - 32 с.

14. Нечаев А.Ю. Цистицеркоз крупного рогатого скота и свиней /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Практик. - СПб., 2001. - №5. - С. 6-8.

15. Нечаев А.Ю. К диагностике сальмонеллеза / А.Ю. Нечаев // Практик. - СПб., 2003. - №3/4. - С. 14-15.

16. Нечаев А.Ю. Выявление сальмонелл на пищевых предприятиях методом ПЦР / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2003 - №135.- С. 78 - 79.

17. Нечаев А.Ю. Ветсанэкспертиза мяса и мясопродуктов при цистицеркозе и трихинеллезе / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2003. - 44 с.

18. Нечаев А.Ю. Перспективы внедрения метода ПЦР в ветеринарную практику / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2004.- С. 92-93.

19. Нечаев А.Ю. Современные методы оценки мясной продукции в кролиководстве /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Международный вестник ветеринарии - СПб., 2004 - № 2.- С.79-82.

20. Нечаев А.Ю. О дополнительных мерах по предупреждению трихинеллеза / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2006.- С. 74.

21. Нечаев А.Ю. К вопросу о безопасности продукции на мясном рынке России / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2006.- С. 99-100.

22. Нечаев А.Ю. Метод полимеразной цепной реакции / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина. - СПб., 2006. - 18 с.

23. Нечаев А.Ю. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина, Ю.Н. Соколова.- СПб., 2006.- 26с.

24. Нечаев А.Ю. Идентификация листерий в пищевых продуктах методом флуоресцентного анализа / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2006 - №138.- С. 62-64.

25. Нечаев А.Ю. О возможностях рН-метрии при ветеринарно-санитарной оценке мяса /А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2006 - №138.- С. 64-65.

26. Нечаев А.Ю. Оценка эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А.Ю. Нечаев // Ветеринарный консультант. - М., 2006. - №19. - С. 21-22.

27. Нечаев А. Ю. Ускоренные методы определения сальмонелл и листерий в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2007.- С. 57-58.

28. Нечаев А.Ю. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2007. - 15 с.

29. Нечаев А.Ю. рН-метрия на различных этапах ветсанэкспертизы мяса / А.Ю. Нечаев // Практик. - СПб., 2007. - №5. - С. 20-25.

30. Нечаев А.Ю. Применение показателей рН для ветеринарно-санитарной оценки мяса / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» СПбГАВМ. - СПб., 2007.- С. 48-49.

31. Нечаев А.Ю. Кислотно-щелочной баланс как метод оценки функционального состояния животного / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» СПбГАВМ. - СПб., 2007. - С. 46-47.

32. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления трихинелл с низким уровнем инвазии / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. - СПб., 2007 - №139.- С. 78-79.

33. Нечаев А.Ю. Крупный рогатый скот: содержание, кормление, болезни, диагностика и лечение: учеб. пособие / А.Ю. Нечаев, А.Ф. Кузнецов, Г.М. Андреев и др.-СПб: Изд-во«Лань», 2007.- 624с.

34. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев. - СПб., 2008. - 17 с.

35. Нечаев А.Ю. Особенности ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, А.В. Яшин // Практик. - СПб., 2008. - №5. - С. 14-19.

36. Нечаев А.Ю. Nachweis von Listeria monocytogenes in Vakuum verpackten Fleischerzeugnissen mittels PCR, VIDAS und kulturellen Methoden / А. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stolle. In: Amtstierдrztlicher Dienst und Lebensmittelkontrolle. - Abstractband zur 49 Arbeitstagung des Arbeitsgebietes Lebensmittelhygiene. - Garmisch-Partenkirchen, 2008. - S. 141.

37. Нечаев А.Ю. Особенности ветсанэкспертизы мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, А.В. Яшин // Известия СПбГАУ. - СПб., 2008. - № 11 - С. 101 - 104.

38. Нечаев А.Ю. Detection of Listeria monocytogenes in vacuum-packed meat products using real-time PCR, immunoassay and culturing / А. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stolle // Archives for Food Hygiene. - 2009. - Vol. 60. - Р. 12 - 17.

39. Нечаев А.Ю. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса / А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева. - СПб., 2009.-12 с.

40. Нечаев А.Ю. Коррекция нарушений резистентности поросят по показателям кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев, К.В. Племяшов // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. - СПб., 2009.- С. 84 - 85.

Размещено на Allbest.ru