Бронхопневмония телят, её патогенез, функциональная морфология и фармакотерапия композиционными пролонгированными препаратами

Размещено на http://www.allbest.ru/

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Бронхопневмония телят, её патогенез, функциональная морфология и фармакотерапия композиционными пролонгированными препаратами

Магомедов М.З.

Воронеж - 2007

Работа выполнена в ГНУ "Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии" РАСХН

Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов Сулейман Мухитдинович

доктор ветеринарных наук, профессор Шабунин Сергей Викторович

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Рахманов Анатолий Михайлович, ГНУ Всероссийский НИИ защиты животных

доктор ветеринарных наук Беспалова Надежда Сергеевна, ФГОУ ВПО "Воронежский ГАУ"

доктор ветеринарных наук Жуков Иван Васильевич, Липецкая областная ветеринарная лаборатория

Ведущая организация: ФГОУ ВПО "Ставропольский государственный аграрный университет"

Защита состоится "25" октября 2007 года в 13⁰⁰ часов на заседании диссертационного совета Д 220.010.02 при ФГОУ ВПО "Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки", 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1, тел. факс (4732) 53-86-51

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО "Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки"

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных наук Хромова Л.Г.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Прикаспийский регион является зоной наиболее развитого животноводства. Среди экономических районов России он занимает ведущее место по производству молока, мяса и другой продукции скотоводства и овцеводства. Важной задачей ветеринарной науки и практики в современных условиях рыночной экономики хозяйствования является обеспечение сохранности поголовья, особенно молодняка животных. Наиболее острой проблемой современного животноводства являются болезни молодняка, в том числе болезни органов дыхания у молодняка крупного рогатого скота.

А.Г. Шахов (2002) анализируя официальную статистику, отмечает, что в 2000 году в Российской Федерации только незаразными болезнями заболело 5193,6 тыс. телят, что составило к приплоду 78,6%, а пало 9,9%. Из общего количества павших крупного рогатого скота на долю телят приходилось 98,2%, в том числе падёж телят от респираторной патологии составил 38,2%.

Дагестан по физико-географическим и природным особенностям уникальная своеобразная республика юга России с наиболее развитым животноводством, вертикальной зональностью и резко континентальным климатом, что обусловливает развитие массовых респираторных болезней у молодняка животных. Они чаще всего представляют сложные инфекционные процессы, в которых на разных стадиях развития патологии принимают участие вирусы, микоплазмы, бактерии и другие возбудители, чаще всего в различных сочетаниях.

Вместе с тем, в Дагестане недостаточно изучена краевая патология бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота, что не позволяет разрабатывать эффективные меры и средства терапии и профилактики.

Цели и задачи исследований. Целью диссертационной работы являлось изучение заболеваемости и распространение бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота в Дагестане, её патогенеза и патологическую морфологию и разработка новых противомикробных композиционных пролонгированных препаратов (на примере левоксида и леводиоксида) для фармакотерапии.

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи:

- Изучить заболеваемость и распространение бронхопневмонии у молодняка животных в Дагестане;

- Изучить патогенез и функциональную морфологию органов дыхания у молодняка крупного рогатого скота при данной патологии;

- Разработать новые противомикробные композиционные пролонгированные препараты на примере левоксида и леводиоксида для лечения бронхопневмонии; бронхопневмония молодняк левоксид

- Разработать комплексную систему ветеринарной защиты у молодняка крупного рогатого скота при бронхопневмонии.

Научная новизна. Изучена заболеваемость и распространение бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота в Дагестане. Изучены морфологические изменения при бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях. Выявлены особенности сурфактантной системы легких и ультраструктурной организации альвеолоцитов I и II типов при бронхопневмонии. Впервые у телят описан альвеолоцит III типа. Выяснены патогенетические механизмы развития бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота. Разработаны новые композиционные пролонгированные противомикробные препараты (левоксид и леводиоксид) при бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота, на них получены два патента (№№ 2277418, 2278668).

Практическая значимость. Знание морфофункциональных особенностей органов дыхания у молодняка крупного рогатого скота при возникновении и развитии бронхопневмонии, с одной стороны, и разработка новых противомикробных композиционных пролонгированных препаратов на примере левоксида и леводиоксида, с другой стороны, создает теоретическую и практическую базу для организации рациональных мер борьбы с данной патологией.

Результаты исследований вошли в:

- Методические указания по диагностике, профилактике и лечению респираторных болезней телят (Утверждены зам. начальника ГУВ Госагропрома СССР Л.П. Маланиным 12.03.1987 г.);

- Методические рекомендации "Комплексная экологически безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных" (Одобрены ОВМ РАСХН 16.11.1998 г., протокол № 7 и утверждены Департаментом ветеринарии РФ 22.02.2000);

- а также используются в учебном процессе вузов и НИР НИУ Россельхозакадемии.

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, легших в основу диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных отчетных сессиях института в 1985-2007 годах; международных и всероссийских научно-практических конференциях в г.г. Воронеже, Махачкале, Таллине, Саратове и других в 1986 -2007 годах.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 32 научные работы, из них 10 в центральной печати, рекомендованной ВАК РФ для публикации результатов докторской диссертации, в том числе два патента на изобретение и один на полезную модель РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота в Дагестане;

2. Морфофункциональная характеристика бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота;

3. Фармакотерапия бронхопневмонии у молодняка крупного рогатого скота композиционными пролонгированными антибактериальными препаратами на примере левоксида и леводиоксида.

Материал и методы исследований

Исследования выполнены в 1984-2007 годы в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГНУ "Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии" РАСХН по заданию 04 Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ (№ гос. регистрации: 01860113279; 01.9.90001257 ; 01.200.117018).

Экспериментальная часть работы выполнена в отделах патологической морфологии, фармакологии и токсикологии, физико-химических методов исследований Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии, в республиканской ветеринарной лаборатории и в 2-х хозяйствах (Агрофирма "Чох" Гунибского района с общим поголовьем красно-степной и швицкой породы крупного рогатого скота - 1350 голов, в том числе 400 коров и ГУП "Красный Октябрь" Сергокалинского района с общим поголовьем крупного рогатого скота - 244 голов, в том числе коров 52 головы) Республики Дагестан Российской Федерации.

Материал для гистологического и гистохимического исследований фиксировали в 10-12%-ном растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа. Кусочки легочной ткани замораживали над жидким азотом для проведения ферментативных реакций и исследований сурфактанта легких.

Фиксацию материала для электронномикроскопических исследований проводили в 2,5%-ном глютаровом альдегиде на коллидиновом буфере с постфиксацией в 1%-ном растворе тетраокиси осмия, обезвоживали в спиртах, заключали в эпон-812. Срезы контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом, просматривали в электронном микроскопе " Тесла-500" и Philips EM-208.

Парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином и гематоксилин-пикрофуксином.

Альвеолярный сурфактант выявляли в криостатных срезах легких по Хакни (1965) в модификации А.А. Арбузова и др. (1981) родамином - Ж. При этом качественную и количественную оценку сурфактанта проводили в люминесцентном режиме микроскопа МБИ-15 и в микроскопе "Ломам И-3" при ультрафиолетовом освещении. Интенсивность свечения определялась микрофлюориметром в мкВ, в конструкцию которого входили фотоумножитель, блок питания, усилитель постоянного тока и универсальный вольтметр.

Объемные доли тканевых структур органов определяли методом точечного счета (Г.Г. Автандилов, 1973). При этом использовали окулярную измерительную сетку, подсчет велся в 225 узлах-пересечениях. Подсчитывалось 3375 узлов_, приходящихся на различные структуры в легочной ткани. Относительные доли определяли по формуле: р = m/n * 100, где m - количества узлов, приходящихся на исследуемые участки ткани; n - общее количество узлов.

При проведении опытов на лабораторных и домашних животных соблюдались требования к врачебно-биологическому эксперименту (Фролов И.Т., 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, одинаковому кормлению и содержанию животных в период исследований.

Антимикробную активность препаратов изучали in vitro методом серийных разведений (Антонов В.И., 1986) в отношении референтных и полевых штаммов микроорганизмов - основных потенциальных возбудителей раневых гнойных процессов. Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) определяли в мясопептонном бульоне, минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) путем высева из пробирок с МПБ на плотные питательные среды. Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 200 тыс.

Изучение острой токсичности препаратов проводили общепринятыми методами (Беленький М.П., 1963; Елизарова О.Н., 1971, Саноцкий И.В., 1970). Хроническую токсичность препаратов изучали на беспородных белых крысах обоего пола массой 100-110г. при длительном внутримышечном применении. Препараты вводили ежедневно один раз в день в течение 21 суток. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 31 суток от начала опыта.

Определение массы тела животных проводили до начала опыта и 7, 14 и 21 сутки. На 21 сутки от начала опыта у 10 крыс из каждой группы определяли относительную массу (коэффициенты) внутренних органов - печени, почек, легких, сердца, селезенки, надпочечников, тимуса и семенников (Гацура В.М., 1974).

Общее действие препаратов на организм кроликов при длительном внутримышечном введении, оценивали по клиническому состоянию. Препараты равномерно наносили на участки кожи животных с плотностью нанесения препарата 0,1 г/см ², в течение 14 дней. Наблюдение вели в течении 21 дня от начала опыта.

Раздражающее действие препаратов на кожу изучали в опытах на кроликах, которым наносили препараты в чистом виде. Площадь нанесения составляла 5% от общей поверхности тела животных. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры.

В экспериментах степень эритемы учитывалась визуально и оценивалась в баллах. Величина отека определялась путем измерения толщины кожной складки и также оценивалась в баллах.

Для изучения влияния препаратов на конъюнктиву глаз были проведены опыты на кроликах породы белый великан. Клиническое состояние животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие выделений, состояние роговицы и век, оценивали через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инстилляции препаратов.

Аллергенность определяли с помощью кожно-провокационной пробы (О.Л. Алексеева, Л.А. Дуева, 1978) при накожной аппликации, реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб (С.В. Суворов, 1974).

Общее действие препаратов на организм лабораторных животных оценивали по клиническому состоянию, морфологическим, биохимическим и иммунологическим показателям крови. С целью характеристики общего состояния животных при проведении модельных опытов общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (В.Г. Предтеченский, 1964; И.П. Кондрахин с соавт., 1983; И.М. Карпуть, 1986) определяли в крови количество эритроцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитов, тромбоцитов, общий белок - рефрактометрически, фракции белка - по Оллу и Маккорду (Карпюк С.А., 1962) или электрофорезом в агарозном геле. В сыворотке крови определяли концентрацию общих липидов, холестерина, мочевины, глюкозы, креатинина, активность аспартат и аланинаминотрасферазы (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы - наборами фирмы "Лахема", билирубин - набором фирмы "Коне" (Финляндия).

Статистическая обработка полученных данных проведена методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Г.Ф. Лакин, 1973; Е.В. Гублер,1978), а также с использованием прикладных программ "Statistica 5.0" и "Microsoft Excel" на РС "Pentium III".

Результаты собственных исследований

Заболеваемость и распространение респираторных болезней у молодняка крупного рогатого скота в Дагестане

Выявление степени распространения респираторных болезней у крупного рогатого скота проводилось путем анализа данных ветеринарной отчетности за 1999 - 2003 годы.

По республике за эти годы поголовье варьировало в пределах 634300 - 820580 голов крупного рогатого скота. При этом, основное поголовье сконцентрировалось в индивидуальных предприятиях, т.е. численность крупного рогатого скота в 5-6 раз превышала численности общественного сектора (табл.1), а заболеваемость респираторными болезнями была высокой.

Наибольшее количество больных респираторными болезнями животных наблюдалось в общественном секторе (табл.1).

В общественном секторе количество больных респираторными болезнями среди крупного рогатого скота варьировало в пределах 33,8 - 36,2 %.

Из числа заболевших респираторными болезнями животных на долю молодняка приходил высокий процент. Телята заболевали от 45,8 до 62,9 % случаях. Падеж и вынужденный убой от респираторных болезней составлял 23 - 25 %.

В 1999 году от респираторных болезней пало и вынужденно убито 16721 крупного рогатого скота из 81892 заболевших. В дальнейшем эти показатели варьировали в пределах 13-16 тыс. голов. Однако процент падежа от респираторных болезней среди молодняка животных был вдвое больше.

Анализ заболеваемости, падежа и вынужденного убоя телят от респираторных болезней по республике за последние годы показывает, что процент заболеваемости телят очень высокий и составляет в среднем 50,6±5,7. Более 50-57% из них приходится на долю бронхопневмонии незаразной этиологии. При этом падеж составляет 12-17%, а от 8 до 13% больных телят подвергаются вынужденному убою.

В общей сложности, в республике ежегодно более 21-28% телят из числа заболевших выбывают только по причине заболеваний органов дыхания незаразной этиологии. Официальная статистика респираторные болезни телят в большинстве случаев относит к незаразной патологии. Хотя в ветеринарной отчетности за указанный период в небольшом проценте были зарегистрированы бактериальные инфекции и вирусная диарея, возбудителем которых с большой долей вероятности могли вызвать патологический процесс в органах дыхания у телят.

Так, не мало потерь молодняка крупного рогатого скота происходили и от респираторных болезней инфекционной природы, дифференцируемые в виде сальмонеллеза, диплококковой инфекции, пастереллеза, парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции, вирусной диареи, хламидиоза и микоплазмоза. По этим заболеваниям в 1999 году число заболевших телят составило 1711 голов, а павших - 202.

В целом, в животноводческих хозяйствах республики всех категорий респираторные заболевания как незаразной, так и инфекционной этиологии имели широкое распространение в 1999-2003 годы с большим охватом поголовья и наносили значительный экономический ущерб. Процент заболеваемости к обороту стада составлял от 43 до 70%, а падеж - от 12 до 18%.

Год	Наименование	Ед. измер.	Зарегистр. больных первично	Из числа зарегистрированных, голов
				Пало	Убито	Всего	%
1	2	3	4	5	6	7	8
1999	1. По всем секторам	Гол.	81892	9673	7048	16721	20,4
	В т. ч. в общественном - всего	Гол.	35495	3679	3310	6989	19,7
	Из них молодняка	Гол.	15059	1875	4503	3378	22,4
		%	42,4
	2. Из числа забол. в общ. секторе: бол. орг. дыхания	Гол.	12278	1485	1216	2701	22,0
		%	34,6
	в т. ч. молодняка	Гол.	6922	949	701	1650	23,8
		%	46,0
2000	1. По всем секторам	Гол.	76126	6974	7749	14720	19,3
	В т. ч. в общественном - всего	Гол.	32093	3437	3111	6,548	20,4
	Из них молодняка	Гол.	14403	1795	1446	3241	22,9
		%	44,9
	2. Из числа забол. в общ. секторе: бол. орг. дыхания	Гол.	10870	1387	1108	2495	22,9
		%	33,9
	в т. ч. молодняка	Гол.	6600	875	687	1562	23,7
		%

Таблица 1

Заболеваемость крупного рогатого скота респираторными болезнями в Республике Дагестан за 1999 - 2003 гг.

2001	1. По всем секторам	Гол.	74081	7536	8912	16448	22,2
	В т. ч. в общественном - всего	Гол.	29341	3585	2679	6244	21,3
	Из них молодняка	Гол.	13554	1761	1246	3007	22,2
		%	46,2
	2. Из числа забол. в общ. секторе: бол. орг. дыхания	Гол.	10620	1401	975	2376	22,4
		%	36,2
	в т. ч. молодняка	Гол.	6746	878	624	1502	22,3
		%	49,8
2002	1. По всем секторам	Гол.	69026	6653	7446	14099	20,4
	В т. ч. в общественном - всего	Гол.	27599	2806	2285	5091	18,4
	Из них молодняка	Гол.	12133	1426	1014	2440	20,1
		%	44,0
	Из числа забол. в общ. секторе: бол. орг. дыхания	Гол.	9708	1127	872	1999	20,6
		%	35,2
	в т. ч. молодняка	Гол.	6111	699	485	1184	19,4
		%	50,4
2003	1. По всем секторам	Гол.	69630	6606	7464	14070	20,2
	В т. ч. в общественном - всего	Гол.	25804	2619	2222	4840	18,8
	Из них молодняка	Гол.	11439	1305	1021	2326	20,3
		%	44,3
	. Из числа забол. в общ. секторе: бол. орг. дыхания	Гол.	9101	1079	831	1910	21,0
		%	35,3
	в т. ч. молодняка	Гол.	5584	663	498	1161	20,8
		%	48,8

Установлено, что структурная организация органов дыхания у клинически здоровых телят соответствовала тем видовым и возрастным параметрам, которые известны из доступной литературы.

Так, при гистоисследовании отмечено, что у здоровых телят в возрасте 1,5 - 2 месяцев система воздухоносных путей и паренхима легочной ткани была достаточно развита.

Ацинусы, как структурные единицы легких, были отчетливо выражены (Рис.1а). Отмечено также, что в легких телят отсутствовали отчетливые респираторные бронхиолы, как указывали и B. Jovannitti e.a. (1985), и был характерен довольно резкий переход от терминальных бронхиол в альвеолярные ходы. Толщина эпителия слизистой оболочки была равномерной.

В просветах бронхов, бронхиол и альвеол отсутствовало какое-либо содержимое. Они были чистыми, неспавшимися (Рис. 1б). Целостность межальвеолярных перегородок не была нарушена. Это прослеживалось и на ультраструктурном уровне (Рис. 1в).

Аэрогематический барьер был хорошо сформирован. Толщина его на всем протяжении была примерно одинаковой. В капиллярах было отмечено умеренное количество эритроцитов (Рис.1г). Альвеолоциты и типов сохраняли характерную ультраструктуру (Рис. 2 а, б).

В альвеолоцитах типа отчетливо выявлялись осмиофильные пластинчатые тельца в количестве в среднем 2-3 в каждой клетке (Рис. 2б).

Рис. 1. Структурная организация альвеол и бронхиол легких у здорового теленка: а) бронхиолы в глубине легочной ткани; б) терминальная бронхиола; в) межальвеолярная перегородка; г) аэрогематический барьер.

В процессе исследований ультраструктурной организации легочной ткани в норме и при патологии нами был выявлен тип клеток, ранее не описанный у телят. По-видимому, это альвеолоциты типа, или так называемые "щеточные альвеолоциты" (brush-cells). Этот тип клеток был обнаружен и описан рядом авторов у разных видов животных: у крыс (B. Meyrick, L. Reid, 1968; Л.Н. Филиппенко, 1978), морских свинок (В.В. Ерохин, 1974), собак (E.R. Weibel, 1973), хомяков и лошадей (J.A. Nowell, W.S. Tyler, 1971). Альвеолоциты типа характеризовались наличием на свободной поверхности, обращенной в просвет альвеолы, "жестких" цилиндрических микроворсинок, напоминающих "щетки". Локализовались они в альвеолярной стенке на границе соседних альвеол, у входа в альвеолы, и у пор Кона. По данным В.В. Ерохина и А.К. Бойкова (1974), доля этих клеток - около 5%, что значительно меньше количества альвеолоцитов и типов. В легких у телят описанный тип клеток нами, как и другими авторами, ранее обнаружен не был.

Известно, что микроворсинки на апикальной поверхности имеют и альвеолоциты типа. Однако, у описываемых выше клеток не были обнаружены пластинчатые тельца, что не говорит в пользу их принадлежности к альвеолоцитам типа. Кроме того, микроворсинки были более выражены и многочисленны, чем у альвеолоцитов типа (Рис. 2 в, г).

Таким образом, результаты собственных исследований и анализ литературных данных дают основания полагать, что выявленный нами тип клеток может быть отнесен к альвеолоцитам типа.

Рис. 2. Ультраструктурная организация альвеолоцитов у клинически здорового теленка: а) альволоцит типа; б) альволоцит типа; в, г) альвеолоциты типа и их микроворсинки.

Гистоморфологическими исследованиями легких телят в самой ранней стадии бронхопневмонии было установлено, что наряду с серозно-катаральным процессом в верхних дыхательных путях (ринит, ларингит, трахеит) первичные изменения начинают выявляться в концевых отделах респираторного тракта (бронхиолы разного порядка), перибронхиальной ткани и в легочных альвеолах. Причем, изменения в этих структурах развиваются уже тогда, когда клинически заболевание еще почти не проявляется. Основным, иногда единственным клиническим признаком в эту стадию может быть только серозный катар верхних дыхательних путей. Поэтому эту стадию бронхопневмонии можно считать субклинической.

Изменения в этот период характеризовались воспалительно-гиперпластической реакцией в перибронхиальной ткани, мукоидным набуханием, отек перибронхиального и периваскулярного интерстиция (Рис. 3а). Отмечалось набухание эпителия слизистой оболочки бронхиол, его базальной мембраны, дискомплексация, десквамация клеток эпителия слизистой оболочки, сосудистая гиперемия (Рис. 3 в, г).

В некоторых бронхиолах было заметно накопление слизисто-серозного экссудата с примесью десквамированных эпителиоцитов (Рис. 3б). При этом, в прилегающей легочной паренхиме каких-либо изменений ещё не отмечалось.

Рис. 3. Первичные изменения в легочной ткани у теленка при субклинической стадии бронхопневмонии: а) дискомплексация и набухание базальной мембраны эпителия бронхиолы; б) заполнение слизисто-серозным экссудатом бронхиолы; в) десквамация эпителия бронхиолы; г) альтерация на слизистой оболочке бронхиолы.

В дальнейшем, начинали проявляться первичные изменения в паренхиме легких в форме гемодинамических нарушений. Гистологически отмечались гиперемия капилляров, отек, утолщение межальвеолярных перегородок вследствие повышенной проницаемости сосудистых стенок, сужение просветов альвеол (Рис. 4а). На электронограммах было видно увеличение количества эритроцитов в просветах капилляров, изменение толщины аэрогематического барьера вследствие набухания цитоплазматических отростков эндотелиоцитов и альвеолоцитов типа, их базальных мембран (Рис. 4б). Отечность, набухание тканевых структур распространялись и на более глубокие слои легочной ткани (Рис. 4 в, г).



Рис. 4. Гемодинамические и ультаструктурные нарушения в легочной ткани у теленка при субклинической стадии бронхопневмонии: а) гиперемия в ткани легкого; б) набухание аэрогематического барьера; в) отек и дистрофия альвеолоцитов и межклеточной субстанции; г) дистрофия клеток альвеол.

Как отмечалось нами ранее (1988), для этой стадии патогенеза характерно гиперпластическое состояние органелл клеток эндотелия капилляров и эпителия альвеол, усиление пиноцитоза, вакуолизации в них, повышенная "активность" ядер: фестончатость, гиперхроматоз, многоядрышковость (полиплоидия) (Рис. 5б). Это приводит к увеличению объёма клеток и отражает их гиперфункциональное состояние в связи с повышенной функциональной нагрузкой в начальных стадиях воспалительного процесса в легочной ткани при бронхопневмонии.

Нарастание явлений отека клеток и внеклеточных компонентов легочной паренхимы приводит к разрыхлению, нарушению межклеточных связей, создавая тем самым предпосылки для отслоения, десквамации клеток эпителия альвеол. Это отчетливо прослеживалось при гистоисследовании (Рис. 5а) и электронной микроскопии (Рис. 5 в, г) образцов легочной ткани телят при бронхопневмонии.

Рис. 5. Некробиотические и дистрофические процессы в альвеолярной ткани у теленка при бронхопневмонии: а) некробиотический распад альвеол; б) дистрофия альвеолоцита I типа; в, г) десквамация альвеолоцитов.

В динамике воспалительного процесса в легких при бронхопневмонии значительные изменения претерпевал сурфактантный комплекс альвеол, что обусловлено, с одной стороны, экссудацией и отеком компонентов аэрогематического барьера, а с другой стороны - развитием дегенеративно-некробиотического процесса в альвеолоцитах типа, ответственных за синтез сурфактанта. Следует отметить, что на ранних стадиях воспаления наблюдалось определенное увеличение яркости люминесценции сурфактантных "колец" альвеол по сравнению с нормой (Рис. 6 а, б). Это объясняется компенсаторной гиперфункцией альвеолоцитов типа в этот период болезни, о чем было сказано выше.

На электронограммах отчетливо видно резкое возрастание количества пластинчатых телец в альвеолоцитах типа (Рис. 6 в, г). Диаметр светящихся "колец" сурфактанта, при этом, был значительно меньше таковых в норме вследствие отека, увеличения объёмной доли собственно легочной ткани и уменьшения размеров альвеолярных просветов. В дальнейшем, с развитием цитопатологических и экссудативных явлений происходило угнетение функции альвеолоцитов, нарушение выработки ими сурфактанта, вымывание и разрушение сурфактантного монослоя с поверхности альвеол. Отмечалось отсутствие характерных "колец" сурфактанта, выявление его в виде прожилок различных размеров и конфигурации, с ослаблением свечения, вплоть до полного исчезновения (Рис. 7 а, б).

Рис. 6. Состояние сурфактантной системы в легочной ткани у теленка: а) в норме; б) усиление люминесценции при субклинической стадии болезни; в, г) гиперсекреция сурфактанта в альвеолоцитах II типа.

Электронномикроскопически отдельные фрагменты разрушенного сурфактанта можно было наблюдать в просветах альвеол свободно лежащими или в составе экссудата (Рис. 7 в, г). Подобные изменения сурфактантного комплекса легких в наибольшей степени проявлялись при переходе патологического процесса в гнойно-катаральную форму, характеризующуюся активной миграцией клеток - преимущественно сегментоядерных нейтрофилов, в зону воспаления на фоне нарастающей экссудации. В эту стадию наблюдалось заполнение таким серозно-катарально-гнойным экссудатом просветов бронхов и бронхиол, обильная диффузная инфильтрация легочной ткани. Границы альвеол становились неразличимыми, а сосудистые стенки и периваскулярные пространства были в состоянии выраженного отека и мукоидного набухания (Рис. 8 а, б, в).



Рис. 7. Дегрануляция и вымывания сурфактанта из легочной ткани теленка при бронхопневмонии: а, б) фрагментация и разрушение люминесценции сурфактанта альвеол; в, г) ультраструктурные фрагменты сурфактанта в полости альвеол.

Рис. 8. Катарально-гнойное расплавление легочной ткани у теленка при бронхопневмонии: а, б) гнойно-катаральный экссудат в бронхиоле и перибронхиолярная клеточная инфильтрация; в, г) ультраструктура клеточной инфильтрации и разрушение клеток альвеол.

В бронхиолярном эпителии, также, были отмечены отечность, набухание, размытость контуров, альтеративно-десквамативные изменения. Кроме преобладавших сегментоядерных нейтрофилов (гранулоцитов) в составе экссудата встречались десквамированные клетки эпителия бронхиол и альвеол, клетки лимфоидного ряда, альвеолярные макрофаги, плазмоциты, единичные эритроциты. Многие из них находились в состоянии дистрофии, рексиса и лизиса с формированием впоследствии клеточного детрита, в котором обнаруживалось большое количество органелл распавшихся клеток (Рис. 8г, 9 а, б, в).

В некоторых случаях вблизи пораженных долек легких развивалась очаговая альвеолярная эмфизема компенсаторного характера. Если процесс приобретал затяжной характер, то здесь отмечались истончение и разрывы межальвеолярных перегородок и слияние альвеол в более крупные воздушные полости (Рис. 9г).



Рис. 9. Некробиотические изменения клеток и ткани легкого у теленка при бронхопневмонии: а) альвеолоцит II типа; б) лимфоидная клетка; в) дистрофия альвеолоцитов; г) эмфизематозное состояние альвеол.

При длительном течении катарально-гнойной бронхопневмонии при отсутствии лечения отмечали такие варианты исходов, как переход в хроническую форму, спленизацию, развитие абцессов, некрозов, карнификации (пневмосклероза).

Экспериментальная фармакология

Изучение оптимального соотношения компонентов в левоксиде

Изучение различных соотношений левомицетина с окситетрациклина гидрохлоридом (ОТЦ) в опытах in vitro в отношении кишечной палочки - Escherichia coli 08, сальмонеллы - Salmonella cholerae suis, пастереллы - Pasteurella multocida показало, что наиболее выраженным антимикробным действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов обладает комбинация левомицетина и ОТЦ в соотношении 5%:5%. МБсК данной комбинации в отношении Salmonella cholerae suis и Pasteurella multocida составила 3,1 мкг/мл, а в отношении Escherichia coli 6,25 мкг/мл.

Фракциональная ингибирующая концентрация (ФИК) левомицетина в комбинации левомицетина и ОТЦ в оптимальном соотношении в опыте с культурой Salmonella cholerae suis составила 0,008, ОТЦ - 0,01. ФИК-индекс (сумма фракциональных ингибирующих концентраций компонентов) комбинации левомицетина с ОТЦ в оптимальном соотношении в опыте с культурой Salmonella cholerae suis равнялся 0,018. ФИК левомицетина в комбинации с оптимальным соотношением левомицетина с ОТЦ в опыте с культурой Escherichia coli 08 составила 0,008, ОТЦ - 0,011. ФИК-индекс комбинации левомицетина в оптимальном соотношении с ОТЦ в опыте с культурой Escherichia coli 08 равнялся 0,019. ФИК левомицетина в комбинации с оптимальным соотношением левомицетина с ОТЦ в опыте с культурой Pasteurella multocida составила 0,04, ОТЦ- 0,02. ФИК-индекс комбинации левомицетина с ОТЦ в оптимальном соотношении в опыте с культурой Pasteurella multocida равнялся 0,024.

Оптимальное соотношение компонентов в левоксиде также исследовали в опытах in vivo.

Для лечения больных колибактериозом поросят применяли левоксид в дозе 0,3-0,4 мл/кг массы тела один раз в сутки до и в течении 2-3-х дней после исчезновения клинических признаков заболевания со следующим соотношением компонентов:

1 группа: левомицетин - 6,0 г; окситетрациклина гидрохлорид - 4,0 г; полиэтиленоксид-400 - 20,0 г; 1,2 пропиленгликоль - до 100,0 м;.

2 группа: : левомицетин - 5,0 г; ОТЦ - 5,0 г; полиэтиленоксид-400 - 20,0 г; 1,2 пропиленгликоль - до 100,0 мл;

3 группа: левомицетин -4,0 г; ОТЦ - 6,0 г; полиэтиленоксид-400 - 20,0 г; 1,2 пропиленгликоль - до 100,0 мл.

Наиболее эффективным при лечении колибактериоза поросят является препарат с соотношением компонентов: левомицетин - 6,0 г; ОТЦ - 4,0 г; полиэтиленоксид-400 - 20,0; 1,2 пропиленгликоль - до 100,0 мл. Данное соотношение компонентов в левоксиде уменьшает срок лечения животных, больных колибактериозом, на 2,1-2,4 дня (47%) по сравнению со сроками лечения левоксидом с другими соотношениями компонентов. В группе животных, которым применяли левоксид с оптимальным соотношением активнодействующих компонентов, выздоровело 91,6 % животных, в то же время в двух других группах лечебная эффективность препарата составила 84,9% и 85,6%, а падеж составил 4,2% против 6,9% и 5,5%.

Антимикробная активность левоксида

Наиболее высокую чувствительность к левоксиду проявила кокковая микрофлора и бордетелла. МБсК составила 31,2 мкг/мл. Левоксид в концентрации 62,5 мкг/мл задерживал рост культур пастерелл, кишечной палочки и Bacillus subtilis. Наиболее устойчивыми к препарату оказалась сальмонелла и синегнойная палочка, для задержки их роста необходима была концентрация 125,0 мкг/мл.

Бактерицидные свойства левоксида проявлялись в концентрациях двукратно превышающих бактериостатические.

Острая токсичность левоксида

При изучении параметров токсичности левоксида в остром опыте при пероральном способе введения, препарат вводили однократно внутрижелудочно в дозах от 5000,0 до 25000,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения).

Среднелетальную дозу- LD₅₀ левоксида при пероральном введении определить не удалось, так как при введении препарата в максимально возможных дозах 25000,0 мг/кг - белым мышам и белым крысам, не отмечалось гибели животных. Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов. Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76).

Среднелетальная доза - LD₅₀ левоксида при подкожном введении составила для белых мышей 5,68, а для белых крыс - 5,99 (табл. 2).

Таблица 2

Параметры острой токсичности левоксида при однократном подкожном введении для лабораторных животных (мл/кг)

Вид животных	Параметры токсичности	SLD50
	МПД	LD16	LD50	LD84	LD100
Белые мыши	2,50	3,05	5,68	7,45	9,0	±0,65
Белые крысы	3,0	3,65	5,99	7,50	9,0	±0,65

Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс сопровождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей, мыши издавали при этом писк. У крыс отмечали агрессивность. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выраженное угнетение, состояние глубокого сна, переходящее в кому. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители, не принимали корм. К моменту гибели животных отмечалось увеличение частоты дыхания и сердечных сокращений. Дыхание часто становилось поверхностным, прерывистым. Развивался цианоз кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.

Патоморфологические изменения лабораторных животных характеризовались гемодинамическими расстройствами, общим венозным застоем в подкожной клетчатке и внутренних органах. Желудок был пуст, слизистая желудка и тонкого отдела кишечника гиперемированы, с мелкоточечными кровоизлияниями. В просвете тонкого отдела кишечника у отдельных животных отмечалось скопление значительного количества слизи. Печень, почки были застойно гиперемированы, несколько увеличены, неравномерно окрашены. У большинства трупов легкие были полнокровны, отечны, сердце растянуто, с множественными кровоизлияниями, предсердия были заполнены темно-вишневой кровью.

Подострая токсичность левоксида и кумулятивные свойства

Многократное (в течение 20 дней) подкожное введение левоксида белым крысам в дозах 0,3; 0,6 и 1,2 мл/кг массы тела животного (1/20; 1/10; 1/5 дозы от LD₅₀, установленной в опыте по изучению острой токсичности) не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения левоксида, так и в течение 10 дней после окончания применения левоксида, оставались в пределах нормы. За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, у них не отмечалось нарушение аппетита, были сохранены рефлексы. Проведенное взвешивание животных показало, что скорость роста крыс опытных существенно не отличалась от скорости роста крыс контрольной группы. Среднесуточный прирост массы тела за весь период наблюдения (30 дней) составил 106,9% при применении левоксида в дозе 0,6 мл/кг и 97,9% при применении левоксида в дозе 1,2 мл/кг. Относительная масса внутренних органов крыс, которым применяли препарат, существенно не отличались от контроля. Левоксид не оказывает влияние на гематологические и основные биохимические показатели крови при длительном применении в дозе 0,3 мл/кг массы тела. При увеличении дозы левоксида отмечалась устойчивая тенденция к более напряженному функционированию выделительной системы и печени. При 20-дневном применении препарата в дозе 1,2 мл/кг у крыс опытной группы достоверно возрастало содержание в сыворотке крови креатинина - на 26,0%, мочевины - на 40,5%, активность АлАТ- на 64,3 % и уровень билирубина - на 91,7%. Однако, среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных. С увеличением дозы левоксида наблюдалось также достоверное возрастание бактерицидной активности сыворотки крови. Через 10 дней после последнего введения препарата, данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.

С учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности левоксида и LD₅₀, полученной при определении острой токсичности, установлено, что левоксид обладает слабовыраженной кумуляцией (К_кум = 4,0).

Местнораздражающее действие левоксида

Установлено, что через 30 минут после введения красителя левоксид оказывал слабое раздражающее действие, через 60 и 180 минут раздражающее действие препарата было умеренным, через 4 часа - слабым, а через 5 часов отсутствовало.

При изучении раздражающего действия левоксида на конъюнктиву глаз кроликов установлено, что состояние организма кроликов после нанесения на конъюнктиву глаз препарата оставалось в пределах нормы, т.е. не выявлены изменения в температуре тела, частоте пульса и количестве дыхательных движений. При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз кроликов установлено, что левоксид вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 2-3 часа после закапывания, которое проходило уже к 4-му часу.

Таким образом, левоксид не обладает выраженным кожно-резорбтивным и раздражающим действием при наружном применении.

Субхроническая токсичность левоксида

В результате изучения субхронической токсичности (длительность опыта 15 дней) левоксида на телятах было установлено, что длительное применение препарата в дозах 0,3; 0,9 и 1,5 мл/кг не оказало отрицательного действия на организм животных. Препарат хорошо переносился животными даже в высоких дозах. Клиническое состояние телят во всех опытных группах было удовлетворительным (по показателям частота сердечных сокращений и дыхания, температура тела) и в течение всего опыта находилось в пределах физиологической нормы.

Левоксид в различных дозах не снижал скорости роста телят. При многократном применении левоксида в дозе 1,5 мл/кг морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови также существенно не отличалось от показателей у телят контрольной группы. Исключение составляли показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек. Повышение до верхних границ нормы в сыворотке крови мочевины, креатинина, а также количества билирубина и активности АлАТ свидетельствовало о возросшей нагрузке на эти органы. Однако через 10 дней после последнего введения препарата, данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.

Таким образом, результаты изучения субхронической токсичности левоксида на телятах показали, что длительное пятнадцатидневное применение левоксида даже в дозе в пять раз превышающей терапевтическую дозу (1,5 мл/кг) не оказывает токсического действия на организм животных.

Влияние левоксида на качество мясопродуктов

Гигиеническую оценку на качество мясопродуктов проводили на кроликах с массой тела 2,7-3,0 кг. Животным опытной группы вводили внутримышечно левоксид в дозе 0,2 мл/кг один раз в сутки в течение 14 дней.

В результате проведенных органолептических исследований не установлено существенных различий между качеством проб бульона и мяса кроликов контрольной и опытной групп.

Пробы мяса имели хороший, свойственный продукту цвет и вид на разрезе, ароматный запах, приятный вкус, нежную консистенцию и достаточную сочность. Бульоны были прозрачные, слегка золотистого цвета с капельками жира, приятные на вкус и достаточно ароматные. Общая органолептическая оценка проб мяса и бульона - хорошая.

Изучение фармакокинетики препарата левоксид

Изучение фармакокинетики левоксида проведено по определению содержания левомицетина (ЛМ) и окситетрациклина (ОТЦ) в органах, тканях и биологических жидкостях телят после однократного внутримышечного введения в дозе 0,3 мл/кг массы тела.

Исследования показали (рис.), что после введения препарата концентрация левомицетина в крови повышается до максимальных значений в течение 3 часов, продолжает расти и остается на этом уровне до 24 часов от момента введения препарата. Однако и через 48 часов в крови телят обнаруживается терапевтическая концентрация левомицетина (1,66 мкг/мл).

Рис.10. Фармакокинетика левомицетина и окситетрациклина в крови телят после однократного введения левоксида в дозе 0,3 мл/кг массы тела

Окситетрациклин, попадая в организм животного, достигает максимума медленнее, при этом значительное время остается в довольно высоких концентрациях до 24 часов. Через 48 часов терапевтическая концентрация сохраняется на уровне 1,92 мкг/мл.

Таким образом, терапевтическая концентрация левоксида при однократном применении в дозе 0,3 мл/кг массы тела телятам сохраняется до 48 часов.

Определение остаточных количеств левоксида в органах, тканях и биологических жидкостях телят

Определение остаточных количеств левоксида проведено по изучению содержания ЛМ и ОТЦ.

Опыт проведен на 10 клинически здоровых телятах с массой тела 60-80 кг. Животным (8 гол.) левоксид вводили внутримышечно один раз в сутки в дозе 0,3 мл/кг массы тела в течение 5 дней. Контрольным животным (2 гол.) препарат не вводили

Через 1, 3, 5 и 7 суток после введения препарата убивали по 2 подопытных животных и по 1 контрольному теленку через 1 и 7 суток. Содержание левомицетина и ОТЦ определяли в крови, моче, печени, почках, бедренной мышце и селезенке.

Как видно (табл. 3), через 24 часа после последнего применения левоксида (через 5 дней) остаточные количества левомицетина определяются во всех исследованных органах и биологических жидкостях.

Наибольшее его количество обнаружено в этот период в почках, моче, печени. На 5 сутки после последнего введения препарата левомицетин практически отсутствует во всех органах, тканях и жидкостях организма телят.

Таблица 3

Содержание левомицетина и окситетрациклина гидрохлорида (ОТЦ) в биологических жидкостях и органах телят после применения левоксида в дозе 0,3 мл/кг массы тела

Биосубстрат	Содержание левомицетина и окситетрациклина (мкг/г/мл) через, суток
	1	3	5	7
	ЛМ	ОТЦ	ЛМ	ОТЦ	ЛМ	ОТЦ	ЛМ	ОТЦ
Кровь	10,1	5,6	4,9	2,8	1,2	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
	10,2	5,5	3,6	2,3	Не обнар.	0,1	Не обнар.	Не обнар.
Печень	12,7	6,4	4,8	2,2	1,6	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
	10,3	5,8	6,3	1,7	1,7	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
Почки	10,2	9,2	4,2	2,7	1,3	0,4	Не обнар.	Не обнар.
	11,3	9,6	3,9	2,3	Не обнар.	0,6	Не обнар.	Не обнар.
Моча	10,3	7,8	5,6	2,5	1,6	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
	11,2	9,1	5,0	4,3	Не обнар.	0,7	Не обнар.	Не обнар.
Мышцы	7,8	6,8	4,3	2,4	1,2	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
	9,0	5,7	4,0	2,0	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
Селезенка	3,9	4,8	1,6	1,6	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.
	2,7	3,8	1,9	3,0	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.	Не обнар.

В эти же сроки определяли содержание окситетрациклина гидрохлорида в биологическом материале. Как видно из данных, через сутки после последнего введения левоксида при 5-ти дневном внутримышечном применении остаточные количества окситетрациклина гидрохлорида определяются во всех исследованных органах и биологических жидкостях, больше всего его определяется в почках и моче. Высокое содержание окситетрациклина гидрохлорида в почках свидетельствует о том, что из организма данный антибиотик при внутримышечном введении выводится в основном почками.

Изучение оптимального соотношения компонентов в леводиоксиде

Изучение различных соотношений левомицетина с диоксидином в опытах in vitro в отношении кишечной палочки - Escherichia coli 08, сальмонеллы - Salmonella cholerae suis, пастереллы - Pasteurella multocida показало, что наиболее выраженным антимикробным действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов обладает комбинация левомицетина и диоксидина в соотношении 2%:1%. МБсК данной комбинации в отношении Salmonella cholerae suis и Escherichia coli 08 составила 1,88 мкг/мл, а в отношении Pasteurella multocida - 0,47 мкг/мл.

Фракциональная ингибирующая концентрация (ФИК) левомицетина в комбинации левомицетина и диоксидина в оптимальном соотношении в опыте с культурой Salmonella cholerae suis составила 0,160; диоксидина 0,040. ФИК-индекс (сумма фракциональных ингибирующих концентраций компонентов) комбинации левомицетина с диоксидином в оптимальном соотношении в опыте с культурой Salmonella cholerae suis равнялся 0,200. ФИК левомицетина в комбинации с оптимальным соотношением левомицетина с диоксидином в опыте с культурой Escherichia coli 08 составила 0,160, диоксидина - 0,040. ФИК-индекс комбинации левомицетина в оптимальном соотношении с диоксидином в опыте с культурой Escherichia coli 08 равнялся 0,200. ФИК левомицетина в комбинации с оптимальным соотношением левомицетина с диоксидином в опыте с культурой Pasteurella multocida составила 0,079, диоксидина - 0,021. ФИК-индекс комбинации левомицетина с диоксидином в оптимальном соотношении в опыте с культурой Pasteurella multocida равнялся 0,100.

Оптимальное соотношение компонентов в леводиоксиде также исследовали в опытах in vivo. Комбинация левомицетина и диоксидина в соотношении 2%:1% при лечении колибактериоза у поросят оказалась наиболее эффективной. Препарат в оптимальной комбинации обладает более высокой терапевтической эффективностью при лечении колибактериоза у поросят (91,7%), что на 2,6% и на 1,9% выше эффективности комбинации с соотношением левомицетина и диоксидина 1%:2% и 1%:1% соответственно. В группе животных с оптимальным соотношением активнодействующих компонентов (2%:1%) по сравнению с поросятами, которым для лечения применяли леводиоксид в комбинациях с соотношением левомицетина и диоксидина 1%:2% и 1%:1%, падеж снизился в среднем в 2 раза.

Антимикробная активность леводиоксида

Наиболее высокую чувствительность к леводиоксиду проявила кокковая микрофлора. МБсК составила 3,9-7,8 мкг/мл. Леводиоксид в концентрации 7,8-15,6 мкг/мл задерживал рост культур пастерелл и бордетеллы. В отношении музейных и полевых культур сальмонелл и кишечной палочки бактериостатическая концентрация леводиоксида составила 31,25-62,50 мкг/мл. Наиболее устойчивой к препарату оказалась синегнойная палочка, для задержки ее роста необходима была концентрация 125,0 мкг/мл.

Бактерицидные свойства леводиоксида проявлялись в концентрациях двукратно превышающих бактериостатические.

Острая токсичность леводиоксида

При изучении параметров токсичности леводиоксида (табл. 4) в остром опыте при пероральном способе введения, препарат вводили однократно внутрижелудочно в дозах от 5000,0 до 25000,0 мг/кг массы тела в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл на крысу (дозы являются предельно допустимыми по объему для перорального введения).

Среднелетальную дозу- LD₅₀ леводиоксида при пероральном введении определить не удалось, так как при введении препарата в максимально возможных дозах 25000,0 мг/кг - белым мышам и белым крысам, не отмечалось гибели животных. Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов. Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76).

Табл...