Ветеринарно-санитарный контроль остаточных количеств антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения на основе современных методологий
Изучение уровня загрязнения продуктов животного происхождения антибиотиками. Модификация метода их микробиологического определения в субстрате с помощью унифицированных тест-культур. Способы экстракции антибиотиков из мышечной ткани, молока и яиц.
| Рубрика | Сельское, лесное хозяйство и землепользование |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 26.12.2017 |
| Размер файла | 192,5 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Наиболее существенно на экстракцию антибиотиков из мышечной ткани повлияло добавление к гомогенизату ацетона в соотношении 11. При его внесении перед центрифугированием диаметр зоны задержки роста тест-культур увеличился: для тетрациклина с 23,5 0,5 мм до 27,50,2 мм ("17 %), для левомицетина - с 23,5 0,3 мм до 26,90,5 мм ("15 %), для неомицина - с 20,0 0,0 мм до 22,30,0 мм (11,5 %).
Добавление метанола в соотношении 11 практически не изменило степень диффузии антибиотиков.
Таким образом, опытами установлено, что предварительная обработка образцов мышечной ткани оказывает влияние на степень извлечения антибиотиков. Наибольшее влияние наблюдается при добавлении к образцам ацетона в соотношении 11, наименьшее - при добавлении 10 %-ного раствора серной кислоты и при заморозке образцов в течение 12 ч. при температуре -8С.
Термостатирование образцов при 37С в течение 90 мин., добавление 2%-ного раствора пепсина, реактива Карреза и метанола практически не влияло на степень извлечения антибиотиков из мышечной ткани и диаметр зоны задержки роста тест-культур.
Влияние предварительной обработки образцов на степень извлечения тетрациклина, левомицетина, неомицина показано на рис. 5.
Исходя из полученных результатов, нами предложен метод пробоподготовки образцов мышечной ткани, который заключается в следующем: пробу без предварительного нагревания необходимо гомогенизировать в ступке и добавить дистиллированной воды в соотношении 12. Перемешать в шуттель-аппарате в течение 10 мин. Для более полного экстрагирования добавить к пробе ацетон в соотношении 11 и подвергнуть повторному встряхиванию в шуттель-аппарате в течение 10 мин. Затем пробу необходимо подвергнуть центрифугированию при 3000 об./мин. в течение 10 мин. Надосадочную жидкость слить, осадок отжать. Полученная проба готова к исследованию.
Рис. 5. Влияние реактивов на степень извлечения антибиотиков из образцов мышечной ткани
При сравнении пробоподготовок мяса, яиц, молока, предложенных в "Методических указаниях по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства" (№ 3049-84), в "Экспресс-методе определения антибиотиков в пищевых продуктах" (МУК 4.2.026-95), в "Определении остаточных количеств левомицетина (Хлорамфеникола, Хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа" (МУК 41.1912-04) и пробоподготовок, разработанных нами, установлено, что предложенные нами способы не только не снижают, а и несколько увеличивают степень извлечения антибиотиков, а также позволяют экономить реактивы и время за счет исключения термостатирования (90 мин.) и заморозки (1 сут.).
Определение остаточных количеств антибиотиков методом иммуноферментного анализа, высокоэффективной жидкостной хроматографии и микробиологическим методом в сравнительном аспекте. Разработка новых и модификация существующих методов анализа антибиотиков, пригодных для массовых исследований, позволит более полно изучить содержание антибиотиков в пищевых продуктах, сопоставить данные, полученные в разных лабораториях, должным образом оценить проблему и принять необходимые меры, обеспечивающие сохранность здоровья населения. антибиотик загрязнение животное продукт
Подготовка проб мяса, яиц проводилась двумя способами: по методике МУК 4.1.1912-04 и по методике, разработанной нами. Пробоподготовка согласно методике МУК 4.1.1912-04 длилась около двух часов и требовала большего количества реактивов, чем пробоподготовка, разработанная нами. Кроме того, самостоятельно разработанная пробоподготовка не уступала по эффективности пробоподготовке по МУК 4.1.1912-04.
Результаты, полученные нами с помощью метода иммуноферментного анализа с использованием различных способов обработки образцов, практически не различались, что позволило предположить, что для постановки ИФА возможно применение пробоподготовки, разработанной нами. Концентрация левомицетина в образцах, подготовленных по методике, разработанной самостоятельно, составляла в говядине 0,063 мг/кг, в свинине - 0,065 мг/кг, фарше - 0,062 мг/кг, яйцах - 0,051 мг/кг. Концентрация левомицетина в образцах, обработанных по МУК 4.1.1912-04 соответственно: 0,064; 0,068; 0,062; 0,05 мг/кг.
Аналогичные результаты были получены при исследовании методом ИФА проб молока и говядины, искусственно загрязненных 50 мкг/л тетрациклина. В качестве тест-системы использовали набор реагентов RIDESCREEN Тетрациклин. Концентрация тетрациклина в образцах, подготовленных по МУК 4.1.1912-04, составила в говядине 0,044 мг/кг, в молоке - 0,043 мг/кг, а при пробоподготовке, разработанной самостоятельно соответственно: 0,041 мг/кг и 0,046 мг/кг.
Большее значение содержания тетрациклина в молоке, полученное при использовании пробоподготовки, разработанной самостоятельно, объясняется применением в процессе обработки образца ацетона, который разрушает белковую оболочку жировых шариков молока.
В мясе более высокий результат получен при пробоподготовке, описанной в МУК 4.1.1912-04. Однако следует учитывать, что эта пробоподготовка более трудоемкая, дорогостоящая и длительная, тогда как разница в полученных результатах незначительная.
В образцах молока и мяса, искусственно загрязненных 50 мкг/л тетрациклина, степень извлечения была очень высокая и составила соответственно для молока 91 1 %, для мяса - 85 3 % при использовании обеих пробоподготовок.
Экспериментальные данные, полученные при использовании метода иммуноферментного анализа мяса и молока, подтвердили его высокую чувствительность и специфичность.
Использование методики пробоподготовки, разработанной самостоятельно, показало ее эффективность при определении концентрации антибиотиков методом иммуноферментного анализа и позволило более полно извлечь тетрациклин из молока по сравнению с пробоподготовкой, рекомендуемой МУК 4.1.191-04.
С целью сравнения эффективности и достоверности методов ИФА и ВЭЖХ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии определялись антибиотики в тех же образцах животноводческой продукции, в которых они определялись методом ИФА.
При пробоподготовке образцов по методике, предложенной в МУК 4.1.1912-04, были получены более высокие результаты по определению содержания левомицетина и тетрациклина в сравнении с методикой пробоподготовки, разработанной самостоятельно. Это позволяет сделать вывод о том, что методика пробоподготовки, разработанная нами, менее эффективна при определении антибиотиков методом ВЭЖХ. По-видимому, исключение из пробоподготовки некоторых этапов экстрагирования и обезжиривания привело к тому, что содержание антибиотиков в образцах, которые готовились к исследованию по методике пробоподготовки, разработанной самостоятельно, оказалось ниже в среднем на 25-30 %, чем в идентичных образцах, подготовленных согласно МУК 4.1.1912-04.
Общее количество времени, ушедшее на исследование одного образца методом ВЭЖХ от начала опыта и до получения результата, составило около 9 ч. Определение содержания антибиотиков в образцах животноводческой продукции методом ВЭЖХ сопряжено с длительной пробоподготовкой и использованием большого количества дорогостоящих реактивов. Кроме того, исследования реализуются на дорогостоящем оборудовании, которое нуждается в постоянном квалифицированном обслуживании.
Микробиологический метод определения антибиотиков позволил обнаруживать остаточные количества левомицетина и тетрациклина с точностью до 0,01 мг/кг. Подготовка проб длилась приблизительно 2 ч. Результат исследования был получен через 12 ч.
Значения, полученные при использовании пробоподготовки, разработанной нами, практически не отличались от значений, полученных при обработке образцов с применением пробоподготовки по МУК 3049-84.
Результаты сравнительного тестирования чувствительности методов ИФА, ВЭЖХ (МУК 4.1.1912-04) и микробиологического метода (МУК 3049-84) по определению левомицетина и тетрациклина в одних и тех же образцах мяса, фарша, яиц и молока представлены в таблице 5.
Таблица 5. Содержание левомицетина и тетрациклина в образцах продукции
|
Образец |
АБ |
Концентрация антибиотика, мг/кг |
||||||||
|
ИФА |
ВЭЖХ |
Микробиология |
Мm |
|||||||
|
1 |
2 |
1 |
2 |
1 |
2 |
1 |
2 |
|||
|
Говядина |
Л |
0,064 |
0,063 |
0,071 |
0,051 |
0,070 |
0,08 |
0,0670,003 |
0,0650,01 |
|
|
Свинина |
Л |
0,068 |
0,065 |
0,065 |
0,050 |
0,060 |
0,050 |
0,0610,004 |
0,0550,007 |
|
|
Фарш |
Л |
0,062 |
0,062 |
0,067 |
0,052 |
0,050 |
0,050 |
0,0590,006 |
0,0540,005 |
|
|
Яйцо |
Л |
0,050 |
0,051 |
0,055 |
0,045 |
0,050 |
0,040 |
0,0510,002 |
0,0450,003 |
|
|
Молоко № 1 |
Т |
0,150 |
0,170 |
0,255 |
0,150 |
0,220 |
0,200 |
0,2080,036 |
0,1750,02 |
|
|
Молоко № 2 |
Т |
0,043 |
0,046 |
0,047 |
0,040 |
0,040 |
0,040 |
0,0430,002 |
0,0420,003 |
|
|
Говядина искусствен. загрязненная |
Т |
0,044 |
0,041 |
0,045 |
0,041 |
0,040 |
0,050 |
0,0430,002 |
0,0420,003 |
1 - подготовка образцов к исследованию по МУК 4.1.1912-04 и 3049-84
2 - подготовка образцов к исследованию по методике, разработанной самостоятельно
Л - левомицетин, Т - тетрациклин.
Результаты, полученные параллельно с использованием одних и тех же образцов, вполне сопоставимы и различаются незначительно, что свидетельствует о сходной эффективности использованных методов.
Статистическая обработка данных позволила определить, что отличия в концентрации антибиотиков, полученной с помощью различных методов, не превышают 10 %-ный уровень. То есть, повторяемость результатов при использовании разных методов очень высокая.
Если сравнить данные, полученные с использованием разных способов пробоподготовки образцов, то можно отметить следующее: использование пробоподготовки, разработанной нами, эффективно для определения концентрации антибиотиков методом ИФА и микробиологическим методом. При этом полученные данные концентрации не ниже, а в некоторых случаях выше, чем данные, полученные при использовании пробоподготовки, рекомендуемой МУК 4.1.1912-04 и 3049-84. Например, при определении содержания остаточных количеств тетрациклина в образцах молока № 1 и № 2, тетрациклина и левомицетина в говядине.
Тогда как данные, полученные с помощью метода ВЭЖХ при использовании пробоподготовки, разработанной нами, оказались во всех случаях ниже, чем данные, полученные с использованием пробоподготовки, рекомендованной МУК 4.1.1912-04. Сказалось отсутствие обезжиривания и экстракции.
Следует отметить, что на сегодняшний момент методом ИФА и ВЭЖХ возможно определять только остаточные количества левомицетина и тетрациклина, тогда как на практике применяется около 50 антибиотиков и их миксов.
Преодолеть эти недостатки позволяет микробиологический метод, для которого нами усовершенствована схема пробоподготовки, занимающая 1,5-2 часа, и с помощью которого можно определять остаточные количества любых антибиотиков, в том числе современных, методом подбора тест-культур.
Для сравнения чувствительности методов ИФА, ВЭЖХ и микробиологического метода изучению на содержание остаточных количеств антибиотиков подвергались образцы молока, искусственно загрязненные различным количеством левомицетина и тетрациклина (от 0,00001 мг/кг до 1,0 мг/кг). Для исследования брали по 10 проб молока, в которые вносили одинаковое количество антибиотика и определяли его содержание тремя методами (табл. 6).
Таблица 6. Частота обнаружения остаточных количеств левомицетина и тетрациклина различными методами в искусственно загрязненных образцах молока
|
Пробы молока |
Количество положительных проб |
|||||||
|
Количество внесенного антибиотика, мг/л |
Количество исследуемых образцов |
ВЭЖХ |
ИФА |
Микробиологический метод |
||||
|
Л |
Т |
Л |
Т |
Л |
Т |
|||
|
0,000001 |
10 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
0,00001 |
10 |
- |
- |
10 |
10 |
- |
- |
|
|
0,0001 |
10 |
- |
- |
10 |
10 |
- |
- |
|
|
0,001 |
10 |
4 |
5 |
10 |
10 |
1 |
3 |
|
|
0,01 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
|
|
0,1 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
|
|
1,0 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
Л - левомицетин, Т - Тетрациклин.
Исследования показали, что предел чувствительности для метода ВЭЖХ и микробиологического метода составляет 0,01 мг/кг, а для метода ИФА - 0,00001 мг/кг антибиотика, что совпадает с данными большинства литературных источников.
С помощью метода ВЭЖХ только в 4-х образцах из 10-ти (40 %) был обнаружен левомицетин и в 5-ти образцах из 10-ти (50 %) тетрациклин в концентрации 0,001 мг/кг. С помощью микробиологического метода левомицетин в концентрации 0,001 мг/кг был обнаружен в 1-ом образце из 10-ти (10 %), а тетрациклин в 3-х образцах из 10-ти (30 %). Более низкие концентрации левомицетина и тетрациклина с помощью этих методов не обнаруживались.
Следовательно, ВЭЖХ и микробиологический метод определения остаточных количеств антибиотиков могут быть использованы для определения левомицетина и тетрациклина в концентрации 0,01 мг/кг и выше. Содержание левомицетина и тетрациклина в концентрации 0,00001 мг/кг и выше может быть определено с помощью метода ИФА.
Таким образом, метод ВЭЖХ и микробиологический метод позволяют определять остаточные количества этих антибиотиков на уровне, обусловленном требованиями СанПиН 2.3.2.1078-01 (0,01 мг/кг). Более чувствительный метод ИФА может использоваться для изучения образцов с пограничным содержанием антибиотиков во избежание получения ложно отрицательных результатов.
Микробиологический метод определения антибиотиков, как наиболее доступный, может использоваться для скрининговых целей, а положительные результаты, полученные с его помощью, должны служить основанием для дальнейших исследований продуктов животноводства методом ИФА или ВЭЖХ.
Рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов убоя, содержащих антибиотики. "Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов" (1988 г.) не содержат рекомендаций по ветсанэкспертизе продуктов убоя, содержащих остаточные количества антибиотиков. Даны лишь следующие указания: "В случае вынужденного убоя животных, подвергшихся отравлению ядовитыми веществами химического происхождения, решение о возможности использования в пищу мяса от таких животных принимается в каждом отдельном случае, с учетом степени и клинических признаков отравления животных, токсичности и остаточного количества яда, вызвавшего отравление" (п. 9.1.).
В таких случаях бактериологические и физико-химические исследования не способны решить вопрос о дальнейшей реализации продуктов убоя. Необходимо определять остаточные количества антибиотиков (их МДУ нормируются СанПиН 2.3.2.1078-01), а также принимать решение об использовании продуктов убоя, полученных от таких животных.
Нами исследованы 140 образцов мышечной ткани различных видов животных и птицы по следующей схеме:
Введение антибиотиков опытным животным, птице согласно наставлениям по применению препаратов Убой опытных животных, птицы в различные сроки после введения препарата, отбор образцов по ГОСТ 26668-85 Исследование образцов на содержание антибиотиков по МУ 3049-84 Термическая обработка образцов Повторное исследование образцов на содержание антибиотиков.
Образцы тканей отбирали согласно методам отбора проб для микробиологических анализов - ГОСТ 26668-85.
В результате термической обработки в мышечной ткани животных и птицы значительно сокращается содержание антибиотиков. В основном из мышечных волокон лекарственный препарат вместе с мышечным соком переходит в бульон, часть препарата разрушается под действием высоких температур.
После варки в мышечной ткани животных и птицы остается приблизительно десятая часть исходного количества антибиотиков. В бульон переходит около 70 % антибиотиков. Следовательно, можно предположить, что около 20 % антибиотиков разрушается в результате проварки, либо переходит в метаболиты, которые микробиологическим методом не определяются (табл. 7).
Таблица 7. Содержание антибиотиков в мышечной ткани животных и птицы до и после проварки
|
Вид животного |
Антибиотик |
Содержание в сырой мышечной ткани (100 %) (Мm) |
Содержание в мышечной ткани после варки (Мm) |
Содержание в бульоне (Мm) |
Разрушено (Мm) |
|||
|
мг/кг |
мг/кг |
% |
мг/кг |
% |
% |
|||
|
Крупный рогатый скот |
Тетрациклин n8 |
0,40,12 |
0,040,01 |
9,23,1 |
0,280,05 |
70,02,9 |
20,84,0 |
|
|
Левомицетин, n6 |
0,30,05 |
0,030,01 |
11,32,9 |
0,210,03 |
67,53,0 |
21,23,9 |
||
|
Свиньи |
Тетрациклин n10 |
0,980,05 |
0,010,001 |
8,92,6 |
0,720,07 |
71,34,0 |
19,83,3 |
|
|
Левомицетин, n6 |
0,650,04 |
0,080,005 |
12,03,0 |
0,450,04 |
70,01,1 |
18,05,8 |
||
|
Птица |
Тетрациклин, n30 |
0,50,01 |
0,0450,008 |
9,02,6 |
0,360,04 |
71,22,9 |
19,84,1 |
|
|
Левомицетин, n30 |
0,50,02 |
0,0550,01 |
11,71,9 |
0,340,03 |
69,01,5 |
19,32,0 |
||
|
Гризин, n30 |
0,250,05 |
0,010,0 |
5,91,6 |
0,170,03 |
76,03,4 |
18,12,8 |
||
|
Бацитрацин, n20 |
0,20,04 |
0,0150,0 |
7,33,0 |
0,150,03 |
78,22,2 |
14,52,1 |
Таким образом, если в продуктах убоя обнаружено десятикратное превышение предельно допустимого количества перечисленных антибиотиков, для дальнейшей реализации туш может быть рекомендована промышленная переработка в виде проварки кусков мышечной ткани массой не более 2 кг в течение 3 ч. при достижении температуры внутри куска не менее 80С. Тушки птицы необходимо проваривать при 100С в течение 1 ч.
Бульон после варки должен быть утилизирован, так как содержит около 70 % первоначального содержание антибиотика.
Для изучения возможности использования сырья, содержащего остаточные количества антибиотиков, при изготовлении вареных колбас в условиях АО "ТАМП" был изготовлен опытный образец колбасы "Закусочной" согласно технологической инструкции по производству изделий колбасных вареных (ГОСТ Р 52196-2003).
Говядину получили от животного, которому при жизни был введен препарат "Тиакат-и". Препарат разработан ВИЭВ и изготовлен на основе окситетрациклина. Препарат вводили животному в виде внутримышечной инъекции из расчета 0,5 мл на 10 кг живого веса.
В 1 г говядины, полученной после убоя, содержался 1 мкг окситетрациклина, что в 100 раз превышает требования СанПиН 2.3.2.1078-01.
В сыром фарше содержание окситетрациклина составило 0,73 мкг/г. Уменьшение количества объясняется разбавлением мышечной ткани шпиком, крахмалом и другими инградиентами, добавляемыми по рецептуре. В готовом продукте содержание окситетрациклина после варки составило 0,65 мкг/г.
Учитывая то, что в сыром фарше содержание окситетрациклина составляло 0,73 мкг/г, снижение его в готовом изделии оказалось незначительным.
Для выяснения влияния термической обработки на содержание остаточных количеств антибиотиков в фарше, из которого изготовлены колбасные изделия, нами были приготовлены несколько образцов продукта в искусственной оболочке диаметром от 32 до 120 мм.
Для изготовления образцов использовали говядину жилованную, которую предварительно инъецировали растворами следующих антибиотиков: левомицетина, бензилпенициллина, стрептомицина, тетрациклина.
Образцы продуктов были подвержены всем технологическим операциям, которые используются для изготовления колбас вареных. В таблице 8 отражено содержание антибиотиков в опытных образцах и говядине, которая использовалась для их изготовления.
Таблица 8. Влияние технологических параметров (варки) на содержание антибиотиков в готовом изделии (n6)
|
Объект исследования |
Содержание антибиотиков, мкг/г, (Мm) |
||||
|
Левомицетин |
Бензил-пенициллин |
Стрептомицин |
Тетрациклин |
||
|
В сыром фарше |
1,000,02 |
0,650,01 |
0,700,05 |
1,500,01 |
|
|
В готовом изделии |
0,920,07 |
0,580,02 |
0,640,08 |
1,320,04 |
|
|
В % к начальному содержанию |
93 % |
89 % |
90 % |
89 % |
Полученные данные позволяют предположить, что варка колбасных изделий с использованием горячего пара в термических камерах не приводит к значительному разрушению антибиотиков и не может быть рекомендована для использования мышечного сырья с содержанием антибиотиков в концентрациях, превышающих предельно допустимые. В отличие от проварки мышечного сырья кусками в ваннах или автоклавах, при изготовлении вареных колбас не образуется бульон, в который могла бы уходить большая часть антибиотика.
Использование антибиотиков для продления сроков хранения пищевых продуктов. За последние десятилетия во многих странах мира внимание привлечено к антибиотикам как к веществам, задерживающим в процессе хранения порчу многих пищевых продуктов: мяса, рыбы, птицы, овощей и др. Применяемые в небольших концентрациях, они способны предохранить продукты от порчи в течение более или менее длительного времени.
Мы ввели в лимфатические узлы куска говядины цитратно-кислый буфер, снижающий рН мяса и растворы антибиотиков различной концентрации. Использовали хлортетрациклин и нистатин в концентрации 10 мг/л, 50 мг/л и 100 мг/л раствора, а также раствор, содержащий 100 мг/л хлортетрациклина и 200 мг/л нистатина. Эти же растворы были использованы для орошения кусков говядины. Растворы вводили сразу после убоя. Через 24 часа определяли КМАФАнМ в говядине. Контролем служил необработанный растворами антибиотиков кусок говядины от той же туши.
Использование цитратно-кислого буфера позволило снизить рН в куске мяса до 5,5, что привело к уменьшению КМАФАнМ с 5050 24 микробных клеток/г в контроле до 3548 52 микробных клеток/г при введении буфера в лимфатические узлы и до 3800 61 микробных клеток/г при орошении куска.
Наибольшее понижение наблюдалось при введении в лимфоузлы раствора, содержащего 100 мг/л хлортетрациклина и 200 мг/л нистатина - до 340 19 микроорганизмов в грамме мяса при введении в лимфоузлы и до 1190 16 микроорганизмов в грамме мяса при орошении по сравнению с контролем. Такой же порядок микроорганизмов в мясе обнаруживался при применении растворов хлортетрациклина с концентрацией активного вещества 10 мг/л, 50 мг/л и 100 мг/л. Это позволило сделать вывод о том, что для предотвращения порчи возможно использование более низких концентрации хлортетрациклина, чем мы встречали в исследованиях других авторов.
При использовании растворов нистатина заметного снижения количества микрофлоры не наблюдалось. Эффект был ниже, чем при использовании цитратно-кислого буфера. По-видимому, это связано с тем, что нистатин эффективен в основном против дрожжей и плесеней.
В опытах доказана эффективность применения растворов хлортетрациклина с концентрацией активного антибиотика 10, 50, 100 мг/л и смеси растворов хлортетрациклина 100 мг/л и нистатина 200 мг/л в соотношении 1:1 для предохранения охлажденной говядины от порчи. Однако вопрос о безопасности применения антибиотиков остается открытым.
Поэтому в каждом куске говядины охлажденной мы определяли содержание остаточных количеств антибиотиков (табл. 9).
Таблица 9. Остаточные количества антибиотиков в говядине охлажденной
|
Концентрация раствора вводимого антибиотика |
Остаточные количества антибиотиков, мг/кг, |
||
|
Введение в лимфоузлы |
Орошение куска |
||
|
Хлортетрациклин, 10 мг/л |
0,76 0,003 |
0,58 0,01 |
|
|
Хлортетрациклин, 50 мг/л |
4,45 0,05 |
4,21 0,02 |
|
|
Хлортетрациклин, 100 мг/л |
8,94 0,01 |
7,62 0,09 |
|
|
Нистатин, 10 мг/л |
0,64 0,017 |
0,57 0,024 |
|
|
Нистатин, 50 мг/л |
4,12 0,06 |
4,00 0,003 |
|
|
Нистатин, 100 мг/л |
6,90 0,03 |
5,77 0,015 |
|
|
Х Н, 100 мг/л 200 мг/л |
24,03 0,21 |
20,12 0,05 |
При обработке говядины орошением количество антибиотика несколько ниже, чем при введении в лимфатические узлы. Возможно, это связано с тем, что при орошении обрабатывается только поверхность куска, и за 24 часа антибиотик не успевает проникнуть в глубокие слои мышечной ткани, а также частично испаряется с поверхности. Однако в обоих случаях остаточные количества хлортетрациклина и нистатина значительно превышают требования СанПиН 2.3.2.1078-01. Это говорит о том, что охлажденная говядина, подвергшаяся обработке растворами антибиотиков с целью предохранения от порчи, не может быть реализована потребителю без ограничений в охлажденном виде.
Даже при применении растворов с низкой концентрацией активного антибиотика (10 мг/л) в охлажденной говядине обнаруживается 0,76 0,003 мг/кг (при введении в лимфоузлы) и 0,58 0,01 мг/кг (при орошении) хлортетрациклина и 0,64 0,017 мг/кг (при введении в лимфоузлы) и 0,57 0,024 мг/кг (при орошении) нистатина, что недопустимо для мяса, поступающего в реализацию. При применении более высоких концентраций растворов антибиотиков (50, 100, 200 мг/л), рекомендуемых в литературе, остаточные количества превышают допустимые показатели в сотни и тысячи раз. Мы считаем, что для получения бактериостатического эффекта достаточно использовать раствор хлортетрациклина с концентрацией активного антибиотика не более 10 мг/л. Дальнейшие исследования проводились с применением этого раствора.
Чтобы снизить количество хлортетрациклина в мясе, было решено охлажденные куски говядины промыть под проточной водой и заморозить. Замораживали куски в морозильной камере в течение 48 часов. Остаточные количества антибиотиков определяли на поверхности куска, на глубине 1 см и на глубине 3 см. Промывание проточной водой привело к лучшим результатам по остаточному количеству хлортетрациклина, в том случае, когда куски говядины для предохранения от порчи орошались раствором антибиотика, а не обрабатывались введением раствора в лимфатические узлы (рис. 6).
Рис. 6. Динамика разрушения хлортетрациклина в говядине после промывки и замораживания
Для кусков, которые обрабатывались введением хлортетрациклина в лимфатические узлы, практически не имела значение глубина отбора проб, а при орошении остаточные количества на поверхности составляли 0,51 0,07 мг/кг хлортетрациклина, тогда как на глубине 3 см - 0,14 0,023 мг/кг, что втрое меньше.
Замораживание кусков привело к небольшому снижению остаточного количества хлортетрациклина. В результате наименьшие показатели остаточного количества антибиотика получены на глубине 3 см после заморозки в кусках, обработанных орошением, - 0,09 0,007 мг/кг хлортетрациклина и на глубине 1 см после заморозки кусков, которым вводили раствор антибиотика в лимфатические узлы - 0,33 0,014 мг/кг хлортетрациклина. Однако в обоих случаях концентрация хлортетрациклина в мясе превышала требования СанПиН 2.3.2.1078-01.
Следовательно, для предотвращения порчи говядины возможно использование хлортетрациклина с концентрацией активного антибиотика 10 мг/кг. Лучший бактериостатический эффект получен при введении антибиотика в лимфатические узлы, однако при таком способе введения даже после промывки и заморозки остаточные количества антибиотика втрое выше, чем при использовании орошения.
Мясо, обработанное орошением раствором хлортетрациклина, не может быть использовано в охлажденном виде для реализации из-за превышения в нем МДУ антибиотика. Промывка и заморозка снижают количество антибиотика в мясе, но оно остается выше нормативов.
Рекомендации по ветеринарно-санитарной экспертизе молока, содержащего антибиотики. При анализе молока и молочных продуктов наиболее широкое распространение за рубежом получил тест-микроб Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C-953, который чувствителен не только к пенициллину, но и к ряду других антибиотиков, а также отличается быстротой роста при повышенных температурах. Эта тест-система под названием Дельвотест-R в последние годы является самой распространенной при проведении анализа молока на содержание антибиотиков. Онако в наставлении по применению указана чувствительность только к пенициллину, в то время как на практике применяется около 20 антибиотиков.
Для расширения возможностей Дельвотест- R мы использовали метод подбора чувствительности культуры Bacillus stearothermophilus var. calidolactis C-953 к различным антибиотикам.
Результаты определения нижнего уровня чувствительности Дельвотест- R к различной концентрации антибиотиков отражены в таблице 10.
Таблица 10. Нижний предел чувствительности Дельвотест- R к антибиотикам
|
Антибиотик |
Нижний уровень чувствительности, мг/л |
|
|
Левомицетин |
0,5 |
|
|
Пенициллин |
0,002 |
|
|
Тетрациклин |
0,01 |
|
|
Линкомицин |
0,04 |
|
|
Эритромицин |
0,01 |
|
|
Олеандомицин |
0,6 |
|
|
Полимиксин |
0,1 |
|
|
Рифамицин |
0,08 |
|
|
Неомицин |
0,007 |
|
|
Гентамицин |
0,005 |
|
|
Стрептомицин |
0,04 |
Считаем, что результаты, полученные с помощью тест-системы Дельвотест- R, должны подтверждаться дополнительными методами, для того, чтобы учесть низкие концентрации таких антибиотиков, как линкомицин, эритромицин, рифамицин, стрептомицин, олеандомицин, полимиксин, левомицетин.
Для изучения влияния температурных режимов на уменьшение содержания антибиотиков в молоке использовали пробы молока, отобранные с помощью Дельвотест-R (молоко с естественным фоном загрязнения антибиотиками) и образцы молока с искусственным внесением пенициллина, тетрациклина, стрептомицина и левомицетина.
Все пробы молока были подвергнуты длительной, кратковременной и мгновенной пастеризации каждая в объеме 50 мл. После охлаждения в каждой пробе определяли остаточное количество антибиотика и сравнивали с первоначальным содержимым в сыром молоке. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 11.
Таблица 11. Влияние режимов пастеризации на разрушение антибиотиков в молоке
|
Пробы молока |
Исходное содержание антибиотиков, мг/л |
Остаточное содержание антибиотиков в молоке |
||||||
|
Длительная пастеризация |
Кратковременная пастеризация |
Мгновенная пастеризация |
||||||
|
мг/л (Мm) |
% |
мг/л (Мm) |
% |
мг/л (Мm) |
% |
|||
|
Естественный фон, n15 |
0,0090,0002 |
0,0070,001 |
77,7 |
0,0090,01 |
100 |
0,0090,001 |
100 |
|
|
Пенициллин, n10 |
0,10,003 |
0,080,005 |
80 |
0,080,002 |
80 |
0,090,003 |
90 |
|
|
Тетрациклин, n10 |
0,50,002 |
0,370,01 |
74 |
0,420,02 |
84 |
0,400,01 |
80 |
|
|
Стрептомицин, n10 |
0,050,002 |
0,0390,00 |
78 |
0,0410,005 |
82 |
0,0400,01 |
80 |
|
|
Левомицетин, n10 |
1,00,005 |
0,860,005 |
86 |
0,900,01 |
90 |
0,900,002 |
90 |
Как видно из таблицы 11, пастеризация оказывает незначительное разрушительное действие на содержание антибиотиков в молоке. После пастеризации в молоке содержание антибиотиков составляло 74-100 % от исходного показателя. Максимально был подвержен разрушению тетрациклин при использовании режима длительной пастеризации.
Представленные результаты свидетельствуют о том, что с помощью пастеризации можно незначительно снизить количество антибиотиков в молоке на 10-20 %, используя различные режимы пастеризации.
Из-за частичного свертывания белков и образования солей на поверхности чанов образуется осадок - молочный камень (пригар). Возможно, его образование и способствует уменьшению остаточных количеств антибиотиков в молоке, которые частично денатурируют и образуют белково-солевые комплексы, оседающие на стенках.
Кипячению и стерилизации подвергали образцы молока сырого, в которые искусственно вносили антибиотик. Результаты статистической обработки данных представлены в таблице 12.
Таблица 12. Влияние кипячения и стерилизации молока на разрушение антибиотиков
|
Образец молока |
Исходное содержание антибиотика, мг/л (Мm) |
Содержание антибиотиков после обработки |
||||
|
Кипячение |
Стерилизация |
|||||
|
мг/л (Мm) |
% |
мг/л (Мm) |
% |
|||
|
Естественный фон, n 15 |
0,009 0,0002 |
0,00860,01 |
95 |
0,00850,004 |
95 |
|
|
Пенициллин, n 10 |
0,1 0,003 |
0,0900,001 |
90 |
0,100 0,05 |
100 |
|
|
Тетрациклин, n 10 |
0,5 0,002 |
0,4650,02 |
93 |
0,500 0,002 |
100 |
|
|
Стрептомицин, n 10 |
0,05 0,002 |
0,0450,003 |
90 |
0,0460,005 |
92 |
|
|
Левомицетин, n 10 |
1,0 0,005 |
0,9100,04 |
90 |
0,9450,03 |
95 |
При рассмотрении результатов анализов, очевидно, что кипячение и стерилизация практически не влияют на количество антибиотиков в молоке. После кипячения в молоке остается от 90 до 95 % исходного количества антибиотиков, то есть разрушается от 5 до 10 % их количества. Стерилизация разрушает антибиотики еще незначительней - в образце, содержащем стрептомицин, разрушено - 8 % от исходного количества антибиотика, в образце, содержащем левомицетин - 5 %, а тетрациклин и пенициллин не разрушались вовсе. После стерилизации в молоке оставалось от 92 до 100 % исходного количества антибиотиков. Такие данные позволяют сделать выводы о непригодности параметров кипячения и стерилизации для разрушения антибиотиков в молоке.
Рис. 7. Влияние различной технологической обработки молока на содержание в нем остаточных количеств антибиотиков
При сквашивании молока в конечном продукте незначительно уменьшается количество изучаемых антибиотиков. Среднее значение остатка антибиотиков составило 90,4 %. То есть при сквашивании разрушается около 10 % изначального содержания антибиотиков. Таким образом, увеличение кислотности молока от 16-18Т (кислотность сырого молока) до 100Т (такова кислотность полученной ацидофильной простокваши) позволяет снизить количество антибиотика в среднем на 10 %.
На рис. 7 отмечено диаграммами влияние различных параметров технологической обработки образцов молока на разрушение в них антибиотиков.
Анализируя данные диаграммы, можно отметить, что наибольшее разрушение антибиотиков в образцах происходило при длительной пастеризации. Возможно это связано с наиболее длительным влиянием на антибиотики высокой температуры, которая приводит к коагуляции белков и оседанию их вместе с антибиотиком на стенках емкостей.
В наименьшей степени антибиотики разрушались под действием стерилизации. В молоке оставалось от 92 до 100 % антибиотиков от исходного количества.
Кратковременная и мгновенная пастеризация приводили к разрушению приблизительно 12 % количества антибиотиков, что оказалось эффективнее, чем кипячение и сквашивание, после которых в образцах молока оставалось от 90 до 100 % от исходного количества антибиотиков.
ВЫВОДЫ
1. Сырье и продукты животного происхождения импортного и отечественного производства, отобранные на предприятиях, в лабораториях и на рынках г. Москвы, содержат остаточные количества антибиотиков.
Наиболее часто в образцах обнаруживались антибиотики тетрациклинового ряда - в 74,5 % проб, стрептомицин присутствовал в 14,9 % исследуемых проб. Левомицетин встречался чаще в молоке и молочных продуктах - всего 5,2 % случаев. Пенициллин обнаруживали только в молочных продуктах в 4,0 % случаев. Гризин и бацитрацин были обнаружены в продуктах убоя крупного рогатого скота - в 0,6 и 0,8 % случаев соответственно.
2. Штаммы B.subtilis L2, B.mycoides 537, B.pumilus NCTC8241, S.aureus 209-P, S.aureus ATCC 6538, M.luteus ATCC 9341, Str.thermophilus, Str.faecium могут служить тест-культурами для определения остаточных количеств антибиотиков: бензилпенициллина, тетрациклина, неомицина, гентамицина, спектиномицина, левомицетина, линкомицина, гризина и бацитрацина в различных субстратах.
3. Наиболее широким спектром чувствительности обладают штаммы B.subtilis L2 (является одновременно чувствительным к наличию в среде бензилпенициллина, тетрациклина, неомицина, гентамицина, спектиномицина, линкомицина и гризина) и M.luteus ATCC 9341 (чувствителен к наличию в субстрате левомицетина и бацитрацина). У остальных изучаемых микроорганизмов интервал антибиотикочувствительности уже или же степень чувствительности ниже требуемой.
3. Установлено, что оптимальной средой для культивирования штаммов B.subtilis L2 и M.luteus ATCC 9341 является перевар Хоттингера с содержанием 120-140 мг % аминного азота с добавлением 1 % глюкозы, рН среды 7,2-7,4. Плотность инокулюма для получения сплошного газона должна составлять 1 млрд. бактериальных клеток в 1мл культуральной жидкости. Величина инокулюма - 1 мл на одну чашку Петри. Температура культивирования - 35-37С в течение 18 часов.
4. Максимальное извлечение тетрациклина и левомицетина из образцов мышечной ткани достигается при гомогенизации пробы, экстракции антибиотика ацетоном в соотношении 11 с дальнейшим центрифугированием пробы при 3000 об./мин.
5. Модифицированная методика с использованием штаммов Bacillus subtilis L2 и Micrococcus luteus ATCC 9341 позволяет пластинчатым методом определять в продуктах животного происхождения наличие широкого спектра антибиотиков.
6. Методы ВЭЖХ, ИФА и микробиологический метод позволяют определять остаточные количества антибиотиков на уровне, обусловленном требованиями СанПиН 2.3.2.1078-01 ( 0,01 мг/кг). Более чувствительный метод ИФА (0,00001 мг/кг) может использоваться для изучения образцов с пограничным содержанием антибиотиков во избежание получения ложноотрицательных результатов.
7. При обнаружении десятикратного превышения предельно допустимого количества антибиотиков для дальнейшей реализации туш рекомендуется проварка мышечной ткани при общепринятых технологических параметрах (куски массой не более 2 кг в течение 3 ч, для птицы - 1 ч). Бульон после варки должен быть утилизирован, так как содержит около 70 % первоначального содержание антибиотика.
8. Изготовление вареных колбас не приводит к значительному разрушению антибиотиков и не может быть рекомендовано для использования мышечного сырья с содержанием антибиотиков в количествах, превышающих предельно допустимые.
9. Для продления сроков хранения говядины возможно использование раствора хлортетрациклина с концентрацией активного антибиотика не более 10 мг/л. Мясо, обработанное орошением раствором хлортетрациклина, не может быть использовано в охлажденном виде для реализации из-за превышения в нем МДУ антибиотика. После использования необходима промывка, снижающая количество хлортетрациклина в три - четыре раза и проварка при общепринятых технологических режимах.
Замораживание не влияет на снижение остаточного количества хлортетрациклина в мышечной ткани.
10. Микробиологическая тест-система Дельвотест-R чувствительна к присутствию в молоке пенициллина, тетрациклина, эритромицина, неомицина, гентамицина. Другие антибиотики изменяют цвет системы при концентрации активного антибиотика выше МДУ.
Результаты, полученные с помощью Дельвотест-R, должны подтверждаться дополнительными методами, для того, чтобы учесть низкие концентрации таких антибиотиков, как линкомицин, эритромицин, рифамицин, стрептомицин, олеандомицин, полимиксин, левомицетин.
11. Пастеризация оказывает незначительное разрушительное действие на содержание антибиотиков в молоке. После длительной пастеризации в молоке содержание антибиотиков составляет 74-100 % от исходного показателя. Максимально подвержен разрушению тетрациклин при использовании режима длительной пастеризации.
После кратковременной и мгновенной пастеризации в молоке остается соответственно 87,2 % и 88,0 % антибиотиков от исходного количества.
12. Кипячение и стерилизация незначительно влияют на содержание остаточных количеств антибиотиков в молоке. После кипячения в молоке остается от 90 до 95 % исходного количества антибиотиков. После стерилизации в молоке остается от 92 до 100 % исходного количества антибиотиков. Сквашивание снижает исходное количество антибиотиков в молоке в среднем на 10 %.
13. Контроль за остаточными количествами антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения должен проводиться повсеместно и регулярно с целью исключения поступления к потребителю продукции, не соответствующей требованиям стандартов качества и безопасности по содержанию лекарственных препаратов.
Практические предложения. Результаты работы могут быть использованы при определении качественных и количественных показателей содержания антибиотиков в продукции животноводства, а также могут быть полезны при решении вопросов о дальнейшей реализации сырья животного происхождения, содержащего остаточные количества антибиотиков.
Отделением ветеринарной медицины РАСХН утверждены методические рекомендации для специалистов научно-исследовательских учреждений и лабораторий, занимающихся вопросами ветеринарно-санитарного контроля мяса и мясопродуктов:
"Подбор микробиологической тест-системы для обнаружения антибиотиков в продуктах животного происхождения" (11.05.2005г.);
"Определение концентрации антибиотиков в продуктах животного происхождения пластинчатым методом с помощью штаммов Bacillus subtilis L2 и Micrococcus luteus ATCC 9341" (11.05.2005г.);
"Методические рекомендации по ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя, содержащих остаточные количества антибиотиков" (26.10.06);
"Методические рекомендации по определению антибиотиков в продуктах животноводства методом высоковольтного электрофореза" (26.10.06).
"Чувствительность микробиологической тест-системы ДЕЛЬВОТЕСТ-R к антибиотикам, применяемым в животноводстве и ветеринарии" (06.02.08).
"Снижение содержания остаточных количеств антибиотиков в молоке под действием режимов пастеризации, стерилизации и сквашивания" (06.02.08).
Изданы учебные пособия для студентов ветеринарных и технологических факультетов высших учебных заведений, курсов повышения квалификации и практических специалистов по ветсанэкспертизе:
"Методы лабораторного контроля животноводческой продукции, содержащей антибиотики" - М.: МГУПБ, 2005. - 80 с.;
"Ксенобиотики лекарственного происхождения в продукции животноводства" - М.: МГУПБ, 2005. - 80с.
Материалы экспериментальных и клинических исследований используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных, ветеринарно-санитарных врачей, технологов, биотехнологов, слушателей курсов повышения квалификации по курсам ветсанэкспертиза, производственный ветеринарный контроль, ветсанэкспертиза с основами технологии производства продуктов животного происхождения.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Кальницкая О.И. Оптимальные среды и режимы культивирования микроорганизмов // Научный вестник ЛГАВМ. - Львов. - 2000. - С. 112-114.
2. Кальницкая О.И. О качестве и безопасности пищевых продуктов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Материалы 4-ой международной научно-практической конференции. - М., 2002. - С. 54-55.
3. Кальницкая О.И. Ветеринарно-санитарные требования к качеству продуктов убоя животных // Практик. - 2003. - № 6.
4. Кальницкая О.И. Определение потенциально опасных химических соединений в продуктах убоя животных и птицы // Пища. Экология. Человек: Материалы 5-ой международной научно-технической конференции. - М. - 2003. - С. 244-245.
5. Кальницкая О.И. Проблемные аспекты использования антибиотиков в ветеринарии и животноводстве // Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве: Материалы международной научно-практической конференции. - Чебоксары. - 2004. - С. 4-8.
6. Кальницкая О.И. Экспериментальное определение чувствительности споровых тест-культур к наиболее распространенным антибиотикам // Состояние и проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии в животноводстве: Материалы международной научно-практической конференции. - Чебоксары. - 2004. - С. 8-11.
7. Кальницкая О.И. Антибактериальные препараты и их определение в животноводческой продукции // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Материалы 5-ой международной научно-практической конференции. - М. - 2004. - С. 163-165.
8. Кальницкая О.И. Нитрофураны как ксенобиотики лекарственного происхождения // Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Материалы 5-ой международной научно-практической конференции. - М. - 2004. - С. 165-166.
9. Кальницкая О.И. Подбор микробиологической тест-системы для обнаружения антибиотиков в продуктах животного происхождения: методические рекомендации (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.05.05). - М.: МГУПБ, 2005. - 18 с.
10. Кальницкая О.И. Определение концентрации антибиотиков в продуктах животного происхождения пластинчатым методом с помощью штаммов Bacillus subtilis L2 и Micrococcus luteus ATCC 9341: методические рекомендации (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.05.05). - М.: МГУПБ, 2005. - 6 с.
11. Кальницкая О.И. Влияние остаточных количеств антибиотиков на результаты ветсанэкспертизы продуктов животноводства // Оптимальное питание - здоровье нации: 8 Всероссийский Конгресс. - М., ГУ НИИ питания РАМН. - 2005. - С. 110.
12. Кальницкая О.И. Использование антибиотиков в ветеринарии и животноводстве // Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы: Материалы международной конференции. - М., ФГУ ВГНКИ, 2005. - С. 51-53.
13. Кальницкая О.И. Новые направления использования антибиотиков в пищевой промышленности // Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы: Материалы международной конференции. - М., ФГУ ВГНКИ, 2005. - С. 53-54.
14. Кальницкая О.И. Определение остаточных количеств антибиотиков в мышечной ткани птицы // Мясная индустрия. - 2005. - № 12. - С. 35-37.
15. Кальницкая О.И. Проблема применения антибиотиков // Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды: Материалы международной конференции. - Саратов, ИБФРМ РАН. - 2005. - С. 132-133.
16. Кальницкая О.И. О необходимости ветеринарного контроля за остаточными количествами антибиотиков в продукции животноводства / Кальницкая О.И., Кунаков А.А., Серегин И.Г. // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы научно-практической конференции. - Санкт-Петербург. - 2005. - С. 89-90.
17. Кальницкая О.И. Антибиотики в мясных продуктах питания / Кальницкая О.И., Мулюкова А.П. // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Материалы научно-практической конференции. - Санкт-Петербург. - 2005. - С. 88-89.
18. Кальницкая О.И. Экологические аспекты производства пищевых продуктов // Пищевые технологии-2005: Материалы международной научно-практической конференции. - Одесса, ОНАПТ. - 2005. - С. 130-131.
19. Кальницкая О.И. К вопросу о безопасности питания // Материалы 3 съезда общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. - М. - 2005. - С. 151.
20. Кальницкая О.И. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, применяемым в ветеринарии и животноводстве // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сборник научных трудов. - М. - 2006. - Т. 118. - С. 149-155.
21. Кальницкая О.И. Ксенобиотики лекарственного происхождения в продукции животноводства: учебное пособие. - М.: МГУПБ, 2006. - 93 с.
22. Кальницкая О.И. Методы лабораторного контроля животноводческой продукции, содержащей антибиотики: Учебное пособие. - М.: МГУПБ, 2006. - 99 с.
23. Кальницкая О.И. Нормативные акты в области обеспечения безопасности сырья / Кальницкая О.И., Баранов М.А. // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы 4 международной научной конференции. М., МГУПБ. - 2005. - С. 199-201.
24. Кальницкая О.И. Лекарственные средства как возможные контаминанты продукции животноводства // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: Материалы международного симпозиума. - Казань, ФГУ ФЦТРБ-ВНИВИ. - 2005. - С. 165-169.
25. Кальницкая О.И. Методы определения антибиотиков в продуктах животноводства // Научное обеспечение инновационных процессов в перерабатывающей отрасли: сборник трудов, посвященный 75-летию ВНИИМП им. В.М. Горбатова. - М. - 2005. - С. 19-21.
...Подобные документы
Порядок отбора проб сырья растительного и животного происхождения. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса, яиц, рыбы, молока, растительных пищевых продуктов, грибов, меда, муки и крупы. Санитарные мероприятия на рынке и контроль качества дезинфекции.
отчет по практике [263,1 K], добавлен 13.12.2010Ветеринарно-санитарные правила для организаций, осуществляющих транспортировку, хранение и обработку сырья животного происхождения. Требования к железнодорожному транспорту, его ветеринарно–санитарная обработка. Ветеринарное свидетельство (сертификат).
курсовая работа [59,7 K], добавлен 11.04.2014Характеристика возбудителя, патогенеза и клинических признаков туберкулеза, бруцеллеза и лейкоза. Изучение патологоанатомических изменений в организме животных. Методика санитарно-гигиенического исследования пищевых продуктов животного происхождения.
курсовая работа [35,8 K], добавлен 03.12.2015Санитарно-гигиенические нормы скота, птицы, рыбы и сырых животных продуктов. Ветеринарно-санитарная экспертиза как наука, изучающая методы исследования и санитарной оценки продуктов животного происхождения. Методы проведения послеубойного ветосмотра туш.
курсовая работа [920,7 K], добавлен 07.09.2015Государственный ветеринарный надзор. Экспертиза пищевой продукции, поступающей на рынок. Оснащенность Лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы рынка Тогучинского района. Проведение санитарной оценки продуктов животного и растительного происхождения.
отчет по практике [47,0 K], добавлен 17.06.2015Организация проведения ветеринарно-санитарной экспертизы продукции и сырья животного происхождения. Должностная инструкция ветеринарного врача лаборатории ВСЭ. Учет и отчетность лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы на продовольственных рынках.
курсовая работа [73,9 K], добавлен 10.06.2015Общие требования к кормам животного происхождения. Состав и питательность молочных кормов, использование молочных продуктов в кормлении животных. Особенности применения отходов мясной и рыбной промышленности для кормления сельскохозяйственных животных.
курсовая работа [22,1 K], добавлен 03.09.2013Рассмотрение особенностей сибирской язвы, определение ее возбудителя, методов диагностики. Изучение правил ветеринарно-санитарной экспертизы туши и внутренних органов животного при подозрении на сибирскую язву. Мероприятия по профилактике заболевания.
курсовая работа [46,5 K], добавлен 28.06.2015Практическое ознакомление с отделом мониторинга и дополнительного образования. Основные методы микробиологических исследований в отделе ветеринарно-санитарной экспертизы. Исследования на паразитарную чистоту. Санитарная экспертиза овощей, фруктов, грибов.
курсовая работа [76,0 K], добавлен 18.12.2014Изучение состава и пищевой ценности молока. Определение качества молока в комплексе органолептических, физико-химических и бактериологических исследований. Нарушения санитарных условий дойки, обработки, хранения и транспортировки, заболевания коров.
презентация [251,2 K], добавлен 10.06.2014Классификация молока, его химический состав и пищевая ценность. Ветеринарно-санитарные и гигиенические требования к ферме. Технология и гигиена обработки молока на ферме. Ветеринарно-санитарный контроль производства молока. Требования к качеству молока.
курсовая работа [53,1 K], добавлен 15.11.2015Значение в животноводстве кормов животного происхождения - молочных кормов, отходов мясной и рыбной промышленности, птицефабрик и инкубационных станций. Характеристика комбинированных кормов и их балансирование по содержанию критических аминокислот.
реферат [24,0 K], добавлен 13.12.2011Биология, мероприятия по выявлению и меры борьбы с азиатской многоядной зерновкой и грушевой огневкой. Защитные действия, установление концентраций фумигантов и их остаточных количеств. Методика количественного определения бромистого метила в воздухе.
курсовая работа [900,7 K], добавлен 23.06.2011Внутренние незаразные болезни. Различные формы воспаления плаценты. Лечение марганцевой недостаточности. Болезни желудочно-кишечного тракта и печени. Ветеринарно–санитарный контроль при незаразных болезнях и гибели животного от случайных причин.
отчет по практике [2,7 M], добавлен 20.05.2015Рост потребления продуктов животного происхождения в развивающихся странах и, с связи с этим, быстрое увеличение объемов производства мяса, молока и яиц. Рост сельскохозяйственного производства в разбивке по регионам, меры по поддержке производителей.
реферат [1,7 M], добавлен 24.07.2011Эритема, облысение, дерматоз, экзема, пиодерма. Гиперчувствительность организма животного к аллергенам различного происхождения. Пути попадания аллергена в организм животного. Иммунный ответ организма собаки при аллергической контактной экземе.
история болезни [1,5 M], добавлен 12.05.2014Общая характеристика и внутренняя структура предприятия ИП "Коза-дереза". Гигиена и технология молока и молочных продуктов на ферме, порядок и методика проведения ветеринарно-санитарной экспертизы. Экологическая безопасность на исследуемом предприятии.
дипломная работа [304,0 K], добавлен 12.09.2015Теория академика Н.И. Вавилова о центрах происхождения культурных растений. Задачи селекции, понятие о сорте, его значение. Химический состав и питательность злаковых культур. Страны-производители зерновых. Характеристика основных злаковых культур.
дипломная работа [980,7 K], добавлен 01.06.2010Типы меда и их характеристика. Классификация меда по ботаническому составу и способу добывания. Оценка меда по физико-химическим параметрам. Органолептическая оценка. Методы идентификации фальсифицированного меда. Ветеринарно-санитарный контроль качества.
курсовая работа [67,9 K], добавлен 25.06.2013Порядок ветеринарно-санитарной экспертизы внутренних органов животных. Методика послеубойного осмотра внутренних органов крупного и мелкого рогатого скота. Оценка продуктов убоя по результатам осмотра головы, внутренних органов и туши убитого животного.
реферат [29,4 K], добавлен 06.06.2013
