Морфофункциональные особенности лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе, при уролитиазе и лимфотропной коррекции

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Морфофункциональные особенности лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе, при уролитиазе и лимфотропной коррекции

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Складнева Евгения Юрьевна

Красноярск - 2012

Работа выполнена на кафедре морфологии и физиологии животных Сельскохозяйственного института ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет имени Н.Ф. Катанова»

Научный консультант:

доктор ветеринарных наук, профессор Чумаков Виктор Юрьевич

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор

Ильина Ольга Петровна

доктор ветеринарных наук, профессор Дроздова Людмила Ивановна

доктор ветеринарных наук, профессор Байматов Валерий Нурмухаметович

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина»

Защита диссертации состоится «21» марта 2012 г. в 10⁰⁰ часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.037.07 при ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» по адресу: 660049, г. Красноярск, проспект Мира, 90. тел/факс: 8(391) 227-36-09

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан «_____»________2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Е.Г. Турицына



1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Внедрение в клиническую практику методов лимфокоррекции потребовало от специалистов глубокого изучения морфологии лимфатической системы в норме и при различных патологических процессах.

Кроме того, не менее важным является и поиск морфологических критериев целесообразности проведения прямой управляемой и непрямой (лимфотропной) эндолимфатической лекарственной терапии (Выренков Ю.Е., 1997, 2000, 2001; Алехина С.П. с соавт., 2003; Кучма С.Н., 2009). В связи с этим, в последние годы появился повышенный интерес исследователей к изучению функциональной морфологии лимфатического русла, как организменной системы, занимающей одно из центральных положений в развитии иммунологических реакций организма на внедрение генетически чужеродного материала (Сапин М.Р., Борзяк Э.И., 1982; Бородин Ю.И., Григорьев В.Н., 1986; Castenholtz А., 1990; Сапин М.Р., 1992, 1999; Бородин Ю.И. с соавт., 1990, 2008; Гаряева Н.А. с соавт., 2008; Райт Д., Эддис Б., Леонг Э., 2008; Петренко В.М., 2010).

Имеющиеся в отечественных и зарубежных литературных источниках сведения, касающиеся морфологии интраорганного лимфатического русла мочевыделительной системы домашних животных в постнатальном онтогенезе носят довольно фрагментарный характер и не дают полного представления о детальном строении лимфатического региона данного органа.

По сведениям И.М. Самородовой (2009), D.F. Senior (2009, 2011) уролитиаз является одной из самых частых причин обращения владельцев домашних кошек и собак в ветеринарные клиники. Кроме того, его принято относить к трудноизлечимым и периодически рецидивирующим патологиям.

Известно, что при мочекаменной болезни в мочевом пузыре развиваются патологические изменения, вызванные наличием инородных тел в полости мочевого пузыря и связанными с этим острым или хроническим воспалением, вторичным инфицированием и обструкцией мочевыводящих путей. В свою очередь, обструкция мочевыводящих путей приводит к чрезмерному переполнению и перерастяжению стенок мочевого пузыря, а также к ишемии и застойным явлениям как в кровеносном, ток и в лимфатическом руслах, что не может не повлиять на морфологию последнего. В настоящее время установлено, что лимфатическая система мочевыводящих путей, вместе с интерстициальной тканью является вторым звеном почечной реабсорбции (Кокорин В.В. с соавт., 2002; McGregor J.C. et al., 2007; Houdouin V. et al., 2007). Нарушение этой функции может значительно усугубить отечность и гипоксию тканей стенки мочевого пузыря при уролитиазе и в дальнейшем способствовать развитию склеротических изменений в стенке органа, что необходимо учитывать при проведении лечебных мероприятий. Несмотря на вышеизложенное, в отечественной и зарубежной литературе практически отсутствуют сведения о структурных и функциональных изменениях лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных при уролитиазе.

Одним из путей коррекции при воспалительных процессах органов мочевыделения является воздействие на функциональное состояние лимфатической системы, заключающееся в усилении ее дренажной функции и потенцировании барьерной функции регионарных лимфатических узлов (Макарова Т.П. с соавт., 2000; Кокорин В.В. с соавт., 2002; Алехина С.П. с соавт., 2003; Кучма С.Н., 2008), а также рациональная антимикробная терапия. Однако, в настоящее время, большинство ассоциативных групп микроорганизмов устойчивы к применяемым антибиотикам, что требует использования сочетаний лекарственных средств разных групп, использования препаратов широкого спектра действия, а также разработки новых нетрадиционных путей подведения их к патологическому очагу с учетом роли лимфатической системы в патогенезе болезни.

По сведениям И. Яремы и В. Евдокимова (2002), фармакокинетические исследования эндолимфатической терапии антибиотиками разных групп в эксперименте демонстрируют преимущества этого метода по сравнению с традиционными путями введения, в том числе с точки зрения нормализации иммунного статуса за счет снижения общей курсовой дозы антибиотиков, а также их положительного влияния на процессы первичного иммунного ответа в очаге воспаления. Одним из механизмов такого положительного влияния служит способность лимфоцитов удерживать на поверхности своей мембраны молекулы антибиотика и в процессе рециркуляции из лимфатического узла переносить его в зону воспалительного процесса.

К сожалению, несмотря на доказанную высокую эффективность и безопасность применения эндолимфатической и лимфотропной терапии в гуманитарной медицине, в ветеринарии они пока еще не нашли столь широкого применения. Вероятно, это связано с недостатком доступных и подробно описанных методик.

Цель исследования: изучить видовые и возрастные морфофункциональные особенности лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе, при спонтанном уролитиазе и в условиях лимфотропной коррекции.

Задачи исследования:

1. Исследовать макро-, микро- и ультраструктуру интраорганного лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных на различных этапах постнатального онтогенеза;

2. Изучить топографию и структуру экстраорганного лимфатического русла мочевыделительной системы домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе;

3. Определить возрастные и локальные изменения депонирующих свойств и структурных основ моторной функции лимфангионов лимфатических сосудов и капсулы регионарных лимфоузлов мочевого пузыря домашних плотоядных;

4. Определить особенности морфологических изменений лимфатического русла мочевого пузыря происходящих при спонтанном уролитиазе с различными формами течения;

5. Определить оптимальные, морфофункционально обоснованные зоны для выполнения лимфотропных инъекций и разработать методику лимфотропной терапии уролитиаза у домашних плотоядных;

6. Выявить особенности течения уролитиаза у домашних плотоядных на фоне применения классической и разработанной нами лимфотропной терапии и описать морфофункциональные изменения лимфатического русла мочевого пузыря в результате ее применения.

Научная новизна. Впервые лимфатическое русло мочевого пузыря домашних плотоядных было изучено с позиции лимфангиона, как структурно-функциональной единицы лимфатических сосудов. Кроме того, выявлены видовые и возрастные особенности морфологии и топографии лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов мочевого пузыря собак и кошек в условиях физиологической нормы и при различных формах и течении спонтанного уролитиаза. Впервые исследованы морфологические основы транспорта лимфы мочевого пузыря домашних плотоядных, изучена конструкция стенки лимфатических сосудов и соединительнотканной стромы регионарных лимфатических узлов в постнатальном онтогенезе, при уролитиазе и в условиях лимфотропной коррекции. Установлена взаимосвязь миоцитов лимфатических сосудов и капсулы лимфатических узлов, определены разнообразные варианты миоархитектоники всех частей лимфангиона. В работе приводятся подробное описание авторской методики лимфотропной антибиотикотерапии уролитиаза у домашних плотоядных и доказательства ее положительного влияния в составе комплексной терапии на течение уролитиаза и структурно-функциональное состояние мочевого пузыря и его лимфатического русла.

Новизна проведенных исследований подтверждена Патентом РФ на изобретение № 2342121 от 27.12.2008г. «Способ непрямой эндолимфатической антибиотикотерапии при уролитиазе у самцов домашних плотоядных» и положительным решением о выдаче патента РФ на изобретение «Способ лимфотропной антибиотикотерапии при воспалительных процессах органов мочевыделения у самок домашних плотоядных» от 30.05.2011.

Теоретическая и практическая значимость работы. Проделанная работа значительно дополняет, уточняет и обогащает имеющиеся данные о морфологии лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе, при уролитиазе и в условиях лимфотропной коррекции и дает возможность исследователям по-новому рассмотреть все физиологические процессы, происходящие в органах мочевыделения. Кроме того, полученные результаты позволяют расширить представления о путях распространения болезнетворных агентов из мочевого пузыря по организму собак и кошек, что должно помочь клиницистам, терапевтам и эпизоотологам в проведении диагностических и лечебных мероприятий.

Новейшие сведения о морфологии лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в норме, постнатальном онтогенезе и при уролитиазе будут служить основой для разработки эффективных методов диагностики, терапии и профилактики мочекаменной болезни и сопутствующих осложнений.

На основании теоретических исследований были определены морфофункционально обоснованные зоны для выполнения лимфотропных инъекций при патологиях органов тазовой полости у домашних плотоядных, а также разработана методика лимфотропной антибиотикотерапии уролитиаза у домашних плотоядных. Внедрение разработанной методики лимфотропной терапии в ветеринарную практику позволит сократить затраты на медикаменты (как минимум в два раза), сократить сроки выздоровления животных, повысить эффективность лекарственных препаратов, а также значительно снизить их токсичность за счет сокращения разовой и суточной дозы и увеличения интервалов между введениями препаратов.

Материалы диссертационной работы легли в основу трех научно-практических рекомендаций: 1) «Лимфотропная терапия уролитиаза у домашних плотоядных», одобренных и принятых к внедрению ГНУ «Научно-исследовательский институт аграрных проблем Хакасии» СО Россельхозакадемии (протокол №7 от 30.05.2011г.); 2) «Терапия уролитиаза у домашних плотоядных», одобренных и принятых к внедрению ГНУ «Научно-исследовательский институт аграрных проблем Хакасии» СО Россельхозакадемии (протокол №7 от 30.05.2011г.); 3) «Использование препаратов традиционной китайской медицины в лечении и профилактике уролитиаза у домашних плотоядных» одобренных и принятых к внедрению управлением государственной ветеринарной инспекции Республики Хакасия (протокол №2 от 3.11.12.2009г.).

Результаты исследований используются в практической работе Абаканских, Усть-Абаканских, Черногорских и Минусинских ветеринарных станций и клиник, ГКУ РХ «Хакасская ветеринарная лаборатория», ГКУ РХ «Центр живой природы», кинологических служб МВД и УФСИН РФ по Республике Хакасия и Красноярскому краю, кинологического отдела Хакасской таможни, питомника служебного собаководства «Аргус» ООО АПК «Мавр», Хакасских республиканских кинологических и фелинологических клубов, научных исследованиях ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН, а также в учебном процессе и научных исследованиях Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина, Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана, Санкт-Петербургской и Уральской государственных академий ветеринарной медицины; Нижегородской, Уральской и Вятской государственных сельскохозяйственных академий; Омского, Красноярского, Гродненского, Кубанского и Дальневосточного государственных аграрных университетов, Бурятской государственной сельскохозяйственной академии имени В.Р. Филиппова, Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева, Национальном университете биоресурсов и природопользования Украины «Крымский агротехнологический университет».

Диссертация выполнена в рамках плановых научных работ кафедры морфологии и физиологии животных Хакасского государственного университета имени Н.Ф. Катанова (№ государственной регистрации 01.9.80.007521).

Основные положения, которые выносятся на защиту:

1. Морфофункциональные особенности структурных элементов интра- и экстраорганного лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе;

2. Локальные и возрастные изменения депонирующих и структурных основ моторных свойств лимфангионов и капсулы лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных;

3. Структурно-функциональные особенности лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных при спонтанном уролитиазе с острой и хронической обструкцией уретры;

4. Лимфотропная терапия уролитиаза у домашних плотоядных и клинико-морфологическое обоснование ее эффективности в сравнении с традиционным лечением.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены и обсуждены: на ежегодных научно-практических конференциях "Катановские чтения" (Абакан, 2004-2010), международных электронных научных конференциях «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (2004), «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (2004), «Технологии 2007» (2007), «Новые медицинские технологии» (2007), «Медицинские технологии» (2008), «Клинико-эпидемиологические проблемы ревматологии, гастроэнтерологии, кардиологии, нефрологии, неврологии и инфектологии» (2008), II международной научно-практической конференции «Современные научные достижения - 2007» (Днепропетровск, 2007), международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008), международной научно-практической конференции «Проблемы развития АПК Саяно-Алтая» (Абакан, 2008), III международной конференции «Вопросы интеграции традиционной китайской и европейской медицины в России» (Новосибирск, 2010), V международной электронной научно-практической конференции «Наука и современность - 2010», Республиканском молодежном конвенте Инновационная Хакасия» (Абакан, 2010), XIV международной конференции «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (Абакан, 2010, 2011), II виртуальной 3D конференции "Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии животных" (Казань, 2011), Всероссийской научно-практической конференции «Современные тенденции и перспективы развития агропромышленного комплекса Сибири» (Абакан, 2011).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 50 научных работ, в том числе 14 - в ведущих научных журналах и изданиях, перечень которых утвержден Высшей аттестационной комиссией РФ, 2 монографии, 3 научно-методических рекомендации, получен патент на изобретение «Способ непрямой эндолимфатической антибиотикотерапии при уролитиазе у самцов домашних плотоядных», а также положительное решение о выдаче патента РФ на изобретение «Способ лимфотропной антибиотикотерапии при воспалительных процессах органов мочевыделения у самок домашних плотоядных».

Личный вклад. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В проведении исследований с использованием электронной микроскопии практическую и консультационную помощь оказывали сотрудники лаборатории ультраструктурных исследований НИИКЭЛ СО РАМН доктор биологических наук, профессор Бгатова Н.П. и младший научный сотрудник кандидат биологических наук Скуридина Е.Г.

Объем и структура диссертации. Работа включает введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список и приложения. Диссертация изложена на 350 страницах компьютерного набора, содержит 53 таблицы, 169 рисунков (в том числе 141 макро- и микрофотографии и 25 диаграмм). Список литературы включает 431 работу, в том числе 109 на иностранных языках.



2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась на кафедре морфологии и физиологии Сельскохозяйственного института ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет имени Н.Ф. Катанова, а также на базе ветеринарных клиник города Абакана республики Хакасия.

Исследования состояли из трех основных этапов:

- исследование лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе;

- анализ клинических проявлений и морфологических изменений лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных при спонтанном уролитиазе;

- выявление особенностей течения и структурных изменений лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в условиях лимфотропной терапии и традиционной медикаментозной коррекции.

В соответствии с поставленными задачами на всех этапах работы проводились комплексные морфологические исследования, а в условиях спонтанного уролитиаза и его коррекции еще и клинические, ультразвуковые и лабораторные исследования.

С целью изучения структурных особенностей лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе, исследования проводились на аутопсийном и биопсийном материале, полученном от здоровых беспородных собак и кошек обоего пола. Живая масса взрослых кошек составляла 3-5 кг, взрослых собак - 5-10 кг.

Лимфатическое русло мочевого пузыря собак в постнатальном онтогенезе изучалось на 272 животных пяти возрастных групп: новорожденные (1-7 дней), периодов отъема (1-2 мес.), полового созревания (6-8 мес), физиологической зрелости (2-6 лет), выраженных старческих изменений (8-13 лет) в соответствии с классификацией, предложенной С.И Архангельским (1965). Возраст животных определяли со слов владельцев и уточняли по зубной формуле (Белов А.Д. с соавт., 1990).

Особенности лимфатического русла мочевого пузыря кошек в постнатальном онтогенезе изучались на 300 животных пяти возрастных групп: новорожденные (1-3 дня), периодов отъема (1-1,5 мес.), полового созревания (6-8 мес.), функциональной зрелости (1,5-6 лет), и выраженных старческих изменений (старше 9 лет). Классификация возрастных периодов кошек производилась согласно методике, предложенной рядом авторов: А.С. Батуев (1983); С.А. Козей (1984); О.Б. Башлак (1994); Н.Н. Тятенкова (1998); Г.П. Дюльгер (2004).

Клинический статус и морфологические изменения лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных при спонтанном уролитиазе изучались нами на животных 6 групп (205 собак и 294 кошки): 1) собаки и кошки на первые сутки острой задержки мочи при уролитиазе с полной обструкцией уретры; 2) домашние плотоядные с уролитиазом на вторые сутки острой задержки мочи; 3) собаки и кошки на третьи сутки острой задержки мочи при уролитиазе с полной обструкцией уретры; 4) собаки и кошки на четвертые сутки острой задержки мочи при уролитиазе с полной обструкцией уретры; 5) домашние плотоядные с уролитиазом, сопровождающимся хроническим циститом; 6) собаки и кошки с длительно протекающим уролитиазом, сопровождающимся цистопатией.

Для изучения особенностей течения уролитиаза у домашних плотоядных на фоне применения классической и лимфотропной антибактериальной терапии по принципу аналогов отобрали 192 беспородных нестерильных самца домашних плотоядных (96 кобелей и 96 котов) в возрасте от 2 до 6 лет (среднего возраста). Живая масса котов составляла 3-6 кг, вес собак колебался на уровне 5-10 кг. У всех животных был диагностирован струвитный уролитиаз с интравезикальной локализацией многочисленных мелких конкрементов с размерами не превышающими 3 мм у котов и 6 мм у кобелей и хронический цистит в стадию обострения. Диагноз был поставлен на основании анамнеза, результатов клинического исследования, лабораторных исследований мочи и крови и результатов ультразвукового и рентгенологического исследования.

Для выявления эффективности разрабатываемой методики лимфотротпной антибиотикотерапии уролитиаза за животными всех групп проводились ежедневные клинические наблюдения, а также ультразвуковое исследование органов брюшной полости, клинический и биохимический анализ крови и мочи по общепринятым методикам при поступлении, на 3-и, 5-е, 7-е, 10-е, 14-е и 30-е сутки. Кроме того, после проведения терапии в течение 12 месяцев проводились регулярные клинические осмотры и обследования всех участвующих в эксперименте животных на наличие рецидивов. Некоторым пациентам на 5-е, 14-е и 30-е сутки выполнили лапаратомию и биопсию стенки мочевого пузыря для проведения морфологических исследований.

С момента поступления на лечение, животных всех групп переводили на стандартные готовые рационы Hills Prescription Diet Canin s/d (для собак) и Feline s/d (для кошек) и поение кипяченой водой вволю. Владельцам собак опытной и контрольной группы было рекомендовано не менее чем трехразовое выгуливание их питомцев.

Животных опытных групп лечили с применением авторской методики лимфотропной антибиотикотерапии. Собакам и кошкам контрольных групп антибиотик вводился внутримышечно в стандартной дозировке и с обычной кратностью.

Антимикробную терапию во всех случаях дополняли симптоматическим лечением, заключающемся в проведении дезинтоксикационной терапии, назначении спазмолитиков, катетеризации мочевого пузыря и ежедневных инстилляций в его полость 0,5% раствора имозимазы (урофера) в качестве литолитического компонента.

Архитектонику лимфатического русла мочевого пузыря собак и кошек изучали после его визуализации методом внутритканевой (интерстициальной) инъекции видоизмененной синей массой Герота (Gerota D., 1896), сажей газовой, 0,5% раствором метиленовой сини и 50% раствором черной и синей туши.

Препарирование производили при помощи глазных скальпелей, ножниц, хирургических и анатомических пинцетов, препаровальных игл. Микропрепарирование проводилось под бинокулярной лупой "МБС-2".

Для выявления архитектоники мелких лимфатических сосудов и капиллярного лимфатического русла, а также выяснения взаимоотношений между лимфатическими и кровеносными капиллярами и сосудами в мочевом пузыре пользовались методом просветления стенки органа по упрощенным методикам по В.Ю.Чумакову (2003), Т.С. Сетекову, С.А. Абдыкеримову и Р.К. Садырову (1988). При исследовании просветленных препаратов обращали внимание на форму и размер лимфатических капилляров и их петель. Все измерения производились при помощи окуляр-микрометра МОВ-1-15Ч на микроскопе МБИ-15.

Гистологический материал заливался в парафиновые блоки по методикам, описанным в руководствах Б. Ромейс (1954), В.Г. Елисеевым с соавт. (1967), Г.А. Меркуловым (1969), О.В. Волковой и Ю.К. Елецким (1982).

Из полученных блоков готовились продольные, поперечные и тангенциальные срезы толщиной от 3 до 7 мкм на микротоме «МЗП-01 ТЕХНОМ». Готовые срезы окрашивались пикрофуксином по Ван-Гизон, гематоксилином по Верхгофу, гематоксилин-эозином, орсеином по методу Унны-Тенцера, азаном по Гейденгайну и импрегнировались серебром.

Полученные гистологические препараты изучались под световым микроскопом Micros MC 300.

При макроморфометрическом исследовании лимфатических узлов производились вычисления отношения коркового вещества к мозговому (индекс К/М - по Ю.И. Бородину, 1969) и отношения площади мякотных тяжей к площади мозговых синусов (индекс МТ/МС).

Для детального изучения архитектоники, гистотопографии и количества гладкомышечных и соединительнотканных элементов стенки лимфангионов интра- и экстраорганных лимфатических сосудов и капсулы регионарных лимфоузлов из них изготавливались окрашенные галлоцианином и орсеином тотальные препараты при помощи безинъекционной методики, предложенной А.В. Борисовым (1973). На полученных препаратах определяли ориентацию миоцитов и производили подсчет их количества с помощью окулярной сетки С.Б. Стефанова (1974) в поле зрения микроскопа при окуляре 7 и объективе 40.

Для электронномикроскопического исследования отбирались кусочки лимфатических сосудов, узлов и слизистой оболочки мочевого пузыря собак и кошек размером 1х1мм, сразу после эвтаназии животного, а также биопсийный материал, полученный во время хирургических операций. Непосредственно после забора материал фиксировался в 1% растворе четырехокиси осмия на фосфатном буфере с добавлением 4,5% сахарозы (рН=7,2), дегидрировался в этиловых спиртах возрастающей концентрации и заключался в эпон. После этого на ультрамикротоме LKB-8800 получали полутонкие (толщина 1мкм) и ультратонкие (толщина 35-45нм) срезы. Полутонкие срезы окрашивали толлуидиновым синим, заключали в полистерол и изучали под световым микроскопом. Ультратонкие срезы контрастировали в насыщенном водном растворе уранилацетата, окрашивали цитратом свинца по Рейнолдсу и изучали в электронном микроскопе JOEL-1010 при ускоряющем напряжении 100кВ.

Данные, полученные при исследовании, заносились в документы первичного учета, зарисовывались и фотографировались фотоаппаратом «Nikon Coolpix P100». Микрообъекты фотографировались с помощью микрофотонасадки «МФН 12».

Название анатомических и гистологических структур и образований приведены в соответствии с 4-й редакцией Международной ветеринарной анатомической номенклатуры (Зеленевский Н.В., 2003) и 3-й редакцией Международной гистологической номенклатуры (Семченко В.В., Самусев Р.П., 1999).

Клинический осмотр включал термометрию, определение общего состояния, наличия и степени интоксикации и обезвоживания, пальпацию области почек и мочевого пузыря для определения их величины, степени наполнения и болезненности, осмотр наружных половых органов, степени их развития.

С помощью ультразвукового исследования устанавливали факт наличия, размеры, количество, характер и локализацию конкрементов, а также степень структурного поражения органов брюшной и тазовой полостей. Для ультразвукового исследования органов мочевыделения использовали ультразвуковой сканер Mindray DP-1100Plus с электронным конвексным датчиком 35C50EB с частотой 2.0/3.5/6.0МГц. Исследования выполнялись согласно методикам, изложенным в руководствах Ф. Барра (2006), В. Иванова (2007), П. Манниона (2008), Е.В. Бушаровой (2008) и С.Ф. Мелешкова (2002, 2003, 2007-2009).

Рентгенологическое исследование органов мочевыделения проводили по стандартным методикам, изложенным в руководствах М. Хан Конни, Д. Херд Черил (2006) с учетом рекомендаций Г.А. Зедгенидзе, В.А. Куликова, Ю.С. Мардынского (1984) и Д. Чью, Т. Баффингтона, П. Бартеса (1999) рентгеновским аппаратом SY-HF-110 с рентгеновской трубкой компании TOSHIBA.

Полученные сведения о размерах, количестве и локализации конкрементов использовались при выборе метода лечения (консервативный или оперативный), а также для выбора оптимального операционного доступа при хирургическом вмешательстве.

Лабораторные исследования морфологического и биохимического состава крови выполнялись согласно общепринятым в клинической практике методикам, изложенным в руководствах В.Е. Предтеченского (1964), М. Уилларда с соавт. (2004), М.А. Медведевой (2009) с учетом рекомендаций Е. Бажибиной и А. Коробова (2004).

Среди параметров учитывали количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина в периферической крови, скорость оседания эритроцитов, выводили лейкограмму.

Для биохимических исследований из цельной крови без добавления стабилизаторов и консервантов получали сыворотку и исследовали на полуавтоматическом биохимическом анализаторе-полуавтомате BioChem SA.

В сыворотке крови определяли содержание общего белка, мочевины, креатинина, кальция, фосфора и магния.

Лабораторные исследования мочи проводили согласно общепринятым методикам, изложенным в руководствах Л.А. Даниловой (2003), М. Уилларда с соавт. (2004) и С.В. Середы с соавт. (2009).

При исследовании мочи определяли ее макроскопичиеские показатели (цвет, прозрачность, запах), удельный вес, проводили химический анализ и микроскопию осадка центрифугированной мочи для выявления и дифференциации кристаллов, эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров, эпителиоцитов, бактерий, грибов и др.

Анализ физико-химических свойств мочи осуществлялся на полуавтоматическом переносном уриноанализаторе CL-50 с помощью специализированных тест-полосок UrineRS H10 и включал в себя определение содержания в ней глюкозы, билирубина, кетонов, удельного веса, скрытой крови, pH, белка, уробилиногена, нитритов и лейкоцитов.

Общий анализ мочи дополняли микроскопией осадка, полученного при центрифугировании. При микроскопии нативных препаратов, полученных из осадка мочи определяли наличие, количество, размеры и вид эпителиальных клеток, цилиндров, кристаллов, лейкоцитов, эритроцитов.

Для дифферециальной диагностики выявленных в осадке мочевых кристаллов проводили микрохимический анализ осадка по методикам В.Я. Краевского (1976).

Для выявления в моче микроорганизмов мазки из центрифугата мочи высушивали и окрашивали по методу Романовского-Гимзе и просматривали под иммерсией при увеличении 10Ч90.

Математико-статистический анализ проводили в соответствии с правилами получения репрезентативных выборок генеральных совокупностей для биологических объектов (Автандилов Г.Г., Яблучанский Н.И., Губенко В.Г., 1981; Автандилов Г.Г., 1990; Лакин Г.Ф., 1990). Все расчеты были выполнены при помощи персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ электронной таблицы Microsoft Excel 7,0 и Statistica 6. Для каждого показателя вычисляли среднее арифметическое и его ошибку. Достоверность отличий оценивали по t-критерию Стьюдента. Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р<0,05).



3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Морфология интраорганного лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе

Лимфатические капилляры мочевого пузыря домашних плотоядных формируют капиллярные сети с петлями различных размеров и форм, залегающие в пределах каждой оболочки органа и обусловленные его морфологией. Сети лимфатических капилляров всех оболочек и слоев мочевого пузыря домашних плотоядных тесно связаны между собой посредством многочисленных анастомозов, что объединяет их в единое многоплоскостное лимфомикроциркуляторное русло. Необходимо отметить, что лимфокапиллярное русло мочевого пузыря собак и кошек имеет много общего, что связано, по нашему мнению, с одинаковой функцией, физиологией и похожим строением данного органа у этих эволюционно близких видов животных.

В слизистой оболочке шейки мочевого пузыря домашних плотоядных лимфатические капилляры имеют более прямолинейный ход, по сравнению с капиллярами других областей. Сплетаясь между собой, лимфатические капилляры данной области формируют крупнопетлистые сети с петлями многоугольной формы, не имеющими определенной ориентации. В области тела мочевого пузыря собак и кошек эти сети более густые и мелкопетлистые. Ячейки этих петель овальной или многогранной формы с продольной ориентацией длинников, что обусловлено наличием мощных продольных складок слизистой оболочки донного участка органа. В области дна мочевого пузыря лимфокапиллярные сети мелкопетлисты, имеют петли многогранной или треугольной формы без определенной направленности длинников.

Подслизистое сплетение лимфатических капилляров мочевого пузыря домашних плотоядных по нашим сведениям развито максимально, в сравнении с другими оболочками органа, кроме того, сети подслизистого слоя тесно связаны с капиллярными сетями других слоев органа посредством множественных анастомозов. Мы объясняем это тем, что лимфатическое русло подслизистого слоя выполняет резервную функцию как при наполнении мочевого пузыря, так и в момент его опустошения, что предотвращает разрывы стенок лимфатических капилляров.

Лимфатические капилляры мышечной оболочки мочевого пузыря домашних плотоядных имеют хорошо выраженную извилистость хода. Сливаясь между собой посредством частых зигзагообразных анастомозов, прободающих мышечные слои под острым углом, лимфатические капилляры формируют трехслойные мелкопетлистые сети, залегающие в плоскости продольных внутреннего и наружного и среднего циркулярного мышечных слоев. При значительном растяжении стенки мочевого пузыря в результате его заполнения мочой извилистость хода лимфатических капилляров мышечной оболочки исчезает, определяя их значительный предел растяжимости. Кроме того, при растяжении стенки органа происходит выпрямление зигзагообразных анастомозом между лимфокапиллярными сетями всех слоев мышечной оболочки. Обнаруженные в большом количестве веретенообразные лакуны на месте слияния лимфатических капилляров мышечной оболочки мочевого пузыря, по нашему мнению, необходимы для депонирования лимфы в момент сокращения стенок органа при мочеиспускании.

Капилляры серозной оболочки мочевого пузыря домашних плотоядных развиты гораздо слабее по сравнению с капиллярами других оболочек. По нашему мнению это связано с менее выраженной функциональной активностью данной области.

Морфометрические показатели лимфатических капилляров мочевого пузыря домашних плотоядных (длина, диаметр, размеры петель) в постнатальном онтогенезе увеличиваются прямо пропорционально возрасту животных при высокой степени достоверности (Р?0,001).

Стенка лимфатических капилляров мочевого пузыря домашних здоровых плотоядных представлена одним слоем эндотелиальных клеток с ядрами преимущественно овальной и палочковидной форм с вдавлениями по всей поверхности. Базальная мембрана лимфатических капилляров на наших препаратах не выявлялась. Данный факт по сведениям A.A. Duenne and J.A. Werner (2000), можно рассматривать как один из важнейших моментов, способствующих инвазии опухолевых клеток в лимфатическую систему.

Необходимо отметить, что многие исследователи признают только межклеточный путь проникновения веществ через эндотелий лимфатических капилляров. Однако в своих исследованиях мы отмечали, что цитоплазма эндотелиальных клеток лимфатических капилляров мочевого пузыря домашних плотоядных содержит множество микропиноцитозных везикул, имеет микроворсинки и образует складки и выросты как на базальной, так и на люминальной поверхности. Все это свидетельствует о наличии везикулярного пути проникновения веществ в лимфатический капилляр наряду с межэндотелиальным. Признаков, доказывающих наличие проникновения веществ в лимфатический капилляр через микропоры и фенестры, которые характерны для кровеносных капилляров, на препаратах из лимфатических капилляров мочевого пузыря домашних плотоядных мы не обнаружили.

Лимфатические посткапилляры мочевого пузыря домашних плотоядных берут начало от сетей лимфатических капилляров или на месте слияния нескольких одиночных капилляров и являются обязательным составным элементом лимфомикроциркуляторного русла всех оболочек данного органа. Лимфатические посткапилляры посредством многочисленных анастомозов формируют сети, особенные для каждой оболочки органа.

Во всех оболочках мочевого пузыря лимфатические посткапилляры залегают в непосредственной близости с кровеносными посткапиллярами и практически всегда имеют аналогичную им направленность.

В отличие от лимфатических сосудов мочевого пузыря домашних плотоядных, стенка лимфатических посткапилляров не разделена на отдельные слои и состоит из одного слоя эндотелиоцитов с ядрами округлой, овальной и палочковидной форм. Эндотелиоциты в стенке посткапилляров расположены несколько плотнее, чем в лимфатических капиллярах, базальная мембрана истончена и прерывиста. Кроме того, вокруг посткапилляров располагается окружной слой очень тонкой соединительной ткани. Морфологически стенка до- и послеклапанных участков лимфатических посткапилляров практически идентична и лишена гладких миоцитов на всем протяжении.

Клапаны лимфатических посткапилляров мочевого пузыря домашних плотоядных представлены дубликатурой эндотелия их стенки. Между двумя слоями эндотелиоцитов клапанов лимфатических посткапилляров мочевого пузыря домашних плотоядных встречается очень тонкая прослойка из соединительнотканных волокон.

Длина и диаметр лимфатических посткапилляров мочевого пузыря домашних плотоядных прямо пропорциональны, а их клапанный индекс - обратно пропорционален возрасту животного (степень достоверности высокая (P?0,001)).

Интраорганные лимфатические сосуды мочевого пузыря домашних плотоядных формируются за счет слияния между собой лимфатических посткапилляров и подразделяются на сосуды трех порядков. Было отмечено, что интраорганные лимфатические сосуды всех оболочек органа сообщаются друг с другом посредством множества анастомозов и всегда имеют очень сильную извитость, которая, по нашему мнению, связана с физиологической необходимостью изменения натяжения стенки органа вследствие его наполнения мочой.

В подслизистой основе слизистой оболочки тела мочевого пузыря собак лимфатические сосуды первого порядка формируют сплетение с крупными петлями овальной (у собак) и прямоугольной (у кошек) форм и длинниками, ориентированными параллельно продольной оси органа. В области дна мочевого пузыря петли этого сплетения имеют преимущественно овально-округлую (у собак) и многоугольную (у кошек) формы без определенной ориентации длинников, а в области шейки - удлиненно-овальную или прямоугольную формы и преимущественно поперечную ориентацию длинников. От данных сплетений ответвляются лимфатические сосуды второго порядка, которые вначале располагаются в подслизистом слое мочевого пузыря, а затем, прямо или косо прободая все три слоя мышечной оболочки и принимая соответствующие сосуды и посткапилляры последней, следуют в серозную оболочку, где сливаются с лимфатическими сосудами второго порядка.

Лимфатические сосуды первого порядка мышечной оболочки мочевого пузыря собак и кошек формируются из сплетений лимфатических посткапилляров каждого из трех ее слоев. Анастомозируя между собой в районе наружного продольного мышечного слоя, а также принимая его лимфатические посткапилляры, они формируют лимфатические сосуды второго порядка, которые направляются к лимфатическим сосудам первого и второго порядков серозной оболочки.

В серозной оболочке мочевого пузыря собак и кошек, за счет слияния лимфатических посткапилляров, формируются лимфатические сосуды первого порядка, которые принимают лимфососуды мышечной оболочки и становятся при этом лимфатическими сосудами второго порядка. В последние вливаются сосуды подслизистой основы мочевого пузыря и, сформированные таким образом лимфатические сосуды третьего порядка дают начало афферентным лимфососудам. Сплетения интраорганных лимфатических сосудов серозной оболочки мочевого пузыря домашних плотоядных имеют локальные особенности. Так, форма петель этих сплетений в области тела мочевого пузыря преимущественно прямоугольная, реже удлиненно-овальная, а ориентация длинников всегда продольная. В области шейки мочевого пузыря форма этих петель удлиненно-овальная, а ориентация длинников соответствует продольной оси органа. В серозной оболочке мочевого пузыря кошек, в области его дна, интраорганные лимфатические сплетения формируют крупнопетлистые сети с петлями преимущественно квадратной или многоугольной формы и длинниками, не имеющими определенной ориентации.

Морфометрические показатели интраорганных лимфатических сосудов мочевого пузыря домашних плотоядных положительно коррелируют с возрастом животного и порядковостью сосуда, а их клапанный индекс - обратно пропорционален данным показателям. Данная закономерность с высокой степенью достоверности (P?0,001) прослеживается до достижения животными зрелого возраста. С наступлением периода выраженных старческих изменений морфометрические показатели лимфатических сосудов несколько уменьшаются, а их клапанный индекс, напротив, возрастает. Также в постнатальном онтогенезе и по направлению лимфотока у домашних плотоядных происходит увеличение коэффициента извилистости всех интраорганных лимфатических сосудов мочевого пузыря, что свидетельствует о том, что с возрастом животного и возрастанием порядка лимфатические сосуды становятся более прямолинейными. Однако с наступлением периода выраженных старческих изменений извилистость интраорганных лимфатических сосудов возрастает, по сравнению с таковой у аналогичных сосудов собак и кошек среднего возраста. Кроме того, была отмечена значительно выраженная отрицательная корреляция извилистости всех компонентов интраорганного лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных со степенью наполнения органа.



3.2 Анатомо-топографические особенности экстраорганных путей транспорта лимфы мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе

Экстраорганное лимфатическое русло мочевого пузыря домашних плотоядных представлено: афферентными лимфатическими сосудами, собирающими лимфу из интраорганных лимфатических сосудов; регионарными лимфатическими узлами; и эфферентными лимфатическими сосудами, выносящими лимфу из последних по направлению к поясничному лимфатическому стволу и поясничной цистерне.

Афферентные лимфатические сосуды мочевого пузыря домашних плотоядных. формируются за счет слияния интраорганных лимфатических сосудов третьего порядка серозной оболочки и несут лимфу в направлении различных лимфатических узлов.

С вентральной поверхности мочевого пузыря собак и кошек лимфа собирается в 1-3 крупных афферентных лимфатических сосуда, которые направляются в медиальный подвздошный лимфоузел. В 3,26% случаев у собак и в 4,0% случаев у кошек 1-2 афферентных лимфатических сосуда от вентральной поверхности мочевого пузыря отводили лимфу в латеральный подвздошный лимфатический узел. В 6,52% случаев у собак и в 5% случаев у кошек 1-2 афферентных лимфатических сосуда вентральной поверхности мочевого пузыря впадали в подчревный лимфоузел.

С каждой из латеральных поверхностей стенки мочевого пузыря домашних плотоядных лимфа собирается в 2-4 интраорганных лимфатических сосуда третьего порядка, которые, объединяясь между собой, дают начало 1-2 афферентным лимфатическим сосудам. Последние, в сопровождении кровеносных сосудов, следуют в составе боковых пузырных связок на пристеночную брюшину. На границе входа в тазовую полость они сливаются в 1-2 сосуда с каждой стороны и следуют чаще (96,74% случаев у собак и 93% случаев у кошек) в медиальные подвздошные лимфоузлы своей стороны, реже (3,26% случаев у собак и 7% случаев у кошек) - в подчревный лимфатический узел.

Парные афферентные лимфатические сосуды дорсальной поверхности мочевого пузыря домашних плотоядных формируются на месте слияния интраорганных лимфатических сосудов третьего порядка серозной оболочки органа. Переходя в боковые пузырные связки, афферентные лимфатические сосуды, совершая плавный изгиб, переходят в области шейки мочевого пузыря на париетальную брюшину и следуют в сопровождении кровеносных сосудов в подчревный лимфатический узел. В 2,17% случаев у собак и в 4% случаев у кошек по 1-2 афферентных лимфатических сосуда дорсальной поверхности мочевого пузыря следуют также в каудальный поясничный лимфатический узел.

Длина и диаметр афферентных лимфатических сосудов мочевого пузыря домашних плотоядных увеличиваются прямо пропорционально их возрасту. Кроме того, отмечалось, что длина и диаметр афферентных лимфатических сосудов мочевого пузыря собак преобладают над таковыми аналогичных сосудов кошек. Афферентные сосуды кошек более волнисты, по сравнению с таковыми у собак, о чем свидетельствует их более низкий коэффициент извилистости.

Расстояние между клапанами в афферентных сосудах мочевого пузыря домашних плотоядных возрастает прямо пропорционально возрасту животных при высокой степени достоверности (P?0,001), о чем свидетельствует их клапанный индекс.

Эфферентные лимфатические сосуды мочевого пузыря домашних плотоядных. выносят лимфу из его регионарных лимфатических узлов в различном направлении.

В ходе исследования было установлено, что эфферентные лимфатические сосуды из медиального лимфатического узла у собак и кошек отводят лимфу непосредственно в поясничный лимфатический ствол, реже - в латеральный подвздошный лимфатический узел своей стороны. Эфферентные лимфососуды из латерального подвздошного лимфатического узла следуют также в поясничный лимфатический ствол, реже в медиальный подвздошный узел. Из подчревного лимфатического узла лимфа отводится эфферентными лимфатическими сосудами в медиальный и очень редко в латеральный подвздошные узлы. Каудальный поясничный лимфатический узел присутствовал только у 4,35% собак и у 3,0% кошек. Эфферентные лимфатические сосуды из каудального поясничного лимфатического узла во всех случаях, как у собак, так и у кошек отводили лимфу в медиальный лимфатический узел.

Количество эфферентных лимфатических сосудов, выносящих лимфу из регионарных лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных, как правило, превышало один и достигало в некоторых случаях четырех. Однако было отмечено, что количество афферентных лимфатических сосудов, впадающих в любой из регионарных лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных, всегда преобладало над таковым эфферентных лимфососудов, выносящих лимфу из данного лимфоузла.

Длина и диаметр эфферентных лимфатических сосудов мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе увеличиваются прямо пропорционально, а их клапанный индекс - обратно пропорционально возрасту. Извилистость эфферентных сосудов мочевого пузыря собак и кошек с возрастом уменьшается до достижения ими среднего возраста, о чем говорит их возрастающий коэффициент извилистости (высокая степень достоверности (Р?0,001)). С наступлением периода выраженных старческих изменений, как у собак, так и у кошек, эфферентные лимфатические сосуды становятся более извилистыми, по сравнению с таковыми у животных среднего возраста. Между извилистостью эфферентных сосудов мочевого пузыря собак и кошек достоверно значимых отличий выявлено не было.

Регионарные лимфатические узлы мочевого пузыря домашних плотоядных. Регионарными лимфатическими узлами первого этапа для мочевого пузыря домашних плотоядных являются: парные медиальные и латеральные подвздошные и подчревные лимфатические узлы, а также непарный каудальный поясничный лимфатический узел. К регионарным лимфатическим узлам второго этапа для мочевого пузыря домашних плотоядных относятся: медиальные и латеральные подвздошные лимфатические узлы.

Частота встречаемости лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных, их количество и форма варьируют в постнатальном онтогенезе.

Левый и правый латеральные подвздошные лимфоузлы были обнаружены у всех собак и кошек. Было отмечено, что у щенков и котят эти узлы преимущественно парные. У животных зрелого возраста и периода выраженных старческих изменений с каждой стороны выявляется, как правило, по одному лимфатическому узлу. В большинстве случаев эти лимфатические узлы справа имеют удлиненно-овальную, реже треугольную форму и локализуются на латеральной подвздошной артерии. Правый латеральный подвздошный лимфатический узел у молодых животных, как правило, двойной и имеет преимущественно бобовидную форму. У взрослых и старых плотоядных он одинарный и имеет преимущественно удлиненно-овальную форму с двумя четко выраженными сегментами по поверхности. Данные лимфатические узлы собирают лимфу с вентральной поверхности мочевого пузыря.

Правый и левый медиальные подвздошные лимфоузлы выявляются на всех препаратах и залегают между наружной подвздошной артерией и веной. Форма данных лимфатических узлов преимущественно удлиненно-овальная или веретеновидная. Данные лимфатические узлы собирают лимфу с вентральной и латеральных поверхностей мочевого пузыря.

Правый и левый подчревные лимфатические узлы были обнаружены на всех препаратах. Располагаются данные лимфатические узлы в подкрестцовой области медиальнее устья внутренних подвздошных артерий. Преобладающая форма правого подчревного лимфатического узла колбасовидная, левого - треугольная. В данные лимфатические узлы впадают афферентные лимфатические сосуды, частично собирающие лимфу с вентральной и дорсальной поверхностей мочевого пузыря.

Каудальный поясничный лимфатический узел одинарный, имеет преимущественно овальную форму и залегает у устья поясничных артерий, краниально гранича с поясничным лимфатическим стволом. В данный лимфатический узел при его наличии впадают афферентные лимфатические сосуды, отводящие лимфу от дорсальной поверхности мочевого пузыря.

Морфометрические показатели (длина, ширина и толщина) регионарных лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных в постнатальном онтогенезе увеличиваются при высокой степени достоверности (P?0,001) вплоть до достижения животными зрелого возраста. С наступлением периода выраженных старческих изменений длина, ширина и толщина всех регионарных лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных несколько уменьшаются. При сравнении морфометрических показателей лимфатических узлов мочевого пузыря в одних и тех же возрастах установлено, что самым крупным лимфоузлом мочевого пузыря у собак и кошек является правый латеральный подвздошный лимфоузел, а самым мелким - каудальный поясничный лимфатический узел. Кроме того, было отмечено, что регионарные лимфатические узлы мочевого пузыря собак несколько крупнее аналогичных узлов кошек.

Структурно в капсуле лимфатических узлов мочевого пузыря домашних плотоядных выделяют три зоны с различной топографией и клеточной и тканевой архитектоникой: периферическая коллекторная (над входом в краевой синус), промежуточная, или распределительная (над корковым веществом) и центральная коллекторная, или хиларная (стенка воротного синуса). Данные результаты позволяют морфологически и функционально отождествлять лимфатический узел со сложным многоклапанным лимфангионом. лимфатический мочевой пузырь

...