Санитарно-микробиологическое значение и методика выявления при ветеринарно-санитарной экспертизе пищевых продуктов микроорганизмов рода Staphylococcus

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Департамент научно-технологической политики и образования ФГБОУ ВПО "Санкт-Петербургская государственная академия

ветеринарной медицины"

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

КУРСОВАЯ РАБОТА

на тему "Санитарно-микробиологическое значение и

методика выявления при ветеринарно-санитарной экспертизе пищевых продуктов микроорганизмов рода Staphylococcus"

Выполнил:

Студент 5 курса факультета ВСЭ

2 группы

Лавров Александр Васильевич

Проверил: Смирнова Любовь Ивановна

Санкт-Петербург 2013



План

I. Литературный обзор

1 Классификация

2 Морфология

3 Санитарно-микробиологическое значение

3.1 Место обитания в природных условиях

3.2 Пути распространения и попадания в пищевые продукты

3.3 Устойчивость к физическим и химическим воздействиям

3.4 Является ли СПМО

3.5 Является ли возбудителем болезней животных и человека. Если является, то как проявляется болезнь

3.6 Является ли возбудителем микробиологической порчи

3.7 Используется ли в пищевой промышленности и биотехнологии

4. Нормативные документы, регламентирующие содержание данных микроорганизмов в объектах внешней среды и пищевых продуктах. Нормативы

II. Собственные исследования

1 Отбор и подготовка пробы продукта

2 Микрокопия

3 Характеристика плотной элективной среды и методика посева

4 Учет роста на плотной элективной среде. Характеристика колоний

5 Характеристика тестов, необходимых для дифференциации и идентификации данных микроорганизмов

Выводы по итогам курсовой работы

Список использованной литературы

морфология бактерии staphylococcus aureus



I. Литературный обзор

1. Классификация

Род стафилококки входит в семейство Micrococcaceae, порядок Lactobacillales, класс Bacilli, тип Firmicutes, царство Бактерии.

В род стафолококки входят следующие виды: S. arlettae, S. aureus (стафилококк золотистый), S. auricularis, S. capitis, S. caprae, S. carnosus, S. caseolyticus, S. chromogenes, S. cohnii, S. delphini, S. epidermidis (стафилококк эпидермальный), S. equorum, S. felis, S. fleurettii, S. gallinarum, S. haemolyticus, S. hominis, S. hyicus, S. intermedius, S. kloosii, S. lactis, S. lentis, S. lugdunensis, S. lutrae, S. muscae, S. pasteuri, S. pettenkoferi, S. piscifermentans, S. saprophyticus (стафилококк сапрофитный), S. schleiferi, S. sciuri, S. simulans, S. succinus, S. vitulus, S. warneri, S. xylosus.

Ряд видов рода стафилококков, исходя из общности физиологических признаков и генетического родства, объединены в 4 группы:

группа staphylococcus epidermidis: S. epidermidis, S. capitis, S. warneri, S. haemolyticus, S. hominis и S. saccharolyticus

группа staphylococcus saprophiticus: S. saprophyticus, S. cohnii и S. xylosis

группа staphylococcus simulans: S. simulans и S. carnosus

группа staphylococcus sciuri: S. sciuri и S. lentus

2. Морфология

Стафилококки (от греч. staphyle -- виноградная гроздь) имеют форму круглых шаров диаметром 0,6--1 мкм, которые располагаются кучками, напоминающими грозди винограда. В патологическом материале они могут обнаруживаться в виде отдельно лежащих одиночных кокков, диплококков, коротких цепочек. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов стафилококков обнаруживают капсулу. Под действием пенициллина и других веществ стафилококки могут образовывать L-формы. Стафилококки хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительны.

Рисунок 1. Saureus (стафилококк золотистый)

По типу дыхания являются факультативными анаэробами. Стафилококки хорошо растут на простых питательных средах в различных атмосферных условиях, в том числе при 20--30% углекислоты, образуя при этом сильный токсин; оптимальный рН 7,2--7,8; растут в пределах 8--43°С при оптимуме 37°С. На мясо-пептонном бульоне дают равномерное помутнение с осадком. На плотных средах образуют средней величины (диаметр 2--4 мм) гладкие, круглые, выпуклые, блестящие, с ровными краями колонии. Благодаря пигментообразованию колонии могут быть золотистого, желтого, лимонно-желтого, кремового или белого цвета. Пигментообразование лучше выражено при посеве из молочно-солевой агар. Пигмент, выделяемый стафилококками, относится к липохромам и растворяется в спирте, эфире, ацетоне, не растворяется в воде. Поэтому при росте на питательной среде окрашены только колонии стафилококка. Встречаются беспигментные колонии.

Стафилококки разлагают ряд углеводов с образованием кислоты: глюкозу, лактозу, маннит, сахарозу, мальтозу, образуют на питательном субстрате сероводород, восстанавливают нитраты в нитриты, разжижают желатин.

3. Санитарно-микробиологическое значение

3.1 Место обитания в природных условиях

Стафилококки очень широко распространены в природе. На коже здорового человека и животных почти всегда можно обнаружить стафилококков. Очень часто их находят в носу, слюне, кале. Воздух, вода, сточные воды являются местом обитания стафилококков. Стафилококки часто и в больших количествах находятся в ряде пищевых продуктов. При этом не изменяется внешний вид, цвет и вкус пищевых продуктов. Обычно это кондитерские изделия с кремом, мясные и овощные салаты, винегреты. Часто стафилококковые отравления связаны с употреблением блюд из рубленного мяса (котлеты, блинчики с мясом, тефтели, макароны по-флотски и др.) овощных и мясных или рыбных консервов. В них стафилококк обычно попадает с обсеменненным стафилококками сырьем или растительным маслом. Молоко и молочные продукты занимают видное место в пищевых отравлениях, так как стафилококки являются частой причиной маститов у коров. Как молоко, так и мясо являются прекрасными питательными средами для размножения этих микроорганизмов. Обсеменять пищевые продуктами стафилококками могут люди с гнойничковыми заболеваниями рук или катарами верхних дыхательных путей, здоровые носители стафилококка.

3.2 Пути распространения и попадания в пищевые продукты

Стафилококки могут попасть в продукты питания эндогенным и экзогенным путями. При эндогенном обсеменении стафилококки попадают в мясо и молоко еще в организме живого животного (например, если молоко получено от коровы, страдающей гнойным маститом). При экзогенном обсеменении пищевые продукты обсеменяются стафилококками при переработке, перевозке, хранении и изготовлении (например, если изготовлением котлет, салатов и т.п. занят человек с гнойничковым заболеванием кожи).

Все отравления происходят благодаря накоплению в продуктах эитеротоксина. Эитеротоксин стафилококков - это экзотоксин, представляющий собой белково-углеводный комплекс. Название связано с его способностью воздействовать на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта.

Для накопления энтеротоксина в пищевом продукте необходимы определенные условия.

1. В продукте должны содержаться питательные для стафилококка

вещества: белки, сахар (но не более 60%), крахмал, влага.

2. Температурный оптимум образования энтеротоксина составляет

18-37°С, оптимальная рН 5,2-9. Более кислая реакция пищевого продукта подавляет размножение стафилококка, и образование энтеротоксина не наступает (например, в кисломолочных продуктах). Но если энтеротоксин уже образовался в молочных продуктах до скисания, то при хранении он не разрушается.

3. Необходимы условия аэрации, то есть доступ кислорода, поэтому в герметически закрытых консервах стафилококковый энтеротоксин не накапливается.

Можно заметить, что прекрасной питательной средой для размножения стафилококков и накопления стафилококкового энтеротоксина являются пирожные с заварным или взбитым белковым кремом, творожные сладкие сырки, салаты и винегреты, а также мясные полуфабрикаты (котлеты, зразы, бифштексы), кондитерские изделия, различные напитки, в том числе пиво, соки и лимонады, хранящиеся при комнатной температуре. Если условия оптимальны, то после попадания в пищевой продукт энтеротоксигенного штамма стафилококка энтеротоксин накапливается в количестве, которое может вызвать пищевое отравление, уже через 3 часа.



3.3 Устойчивость к физическим и химическим воздействиям

Среди не образующих споры микроорганизмов стафилококки наиболее устойчивы к высушиванию, замораживанию, действию солнечного света, химическим веществам. Низкие температуры (-10-18°С) подавляют жизнедеятельность стафилококков, но не убивают их. Стафилококки несколько часов выдерживают действие солнечных лучей, при нагревании до 70°С живут более 1 ч, при 80°С - 10-60 мин и только при кипячении погибают мгновенно (однако выделенный энтеротоксин при этом сохраняется). Если стафилококки содержатся в мясных хлебах, то они погибают только при достижении в центре батона температуры 85-90"С. Энтеротоксигенные стафилококки размножаются в пищевых продуктах даже при содержании в них около 40% влаги, содержащих до 7-12% хлористого натрия, до 30-40% сахара.

Экзотоксины также устойчивы к физическим и химическим воздействием. Например стафилококковый энтеротоксин типа А (различают 5 серовариантов (типов) энтеротоксина: А, В, С, В, Е). В замороженных продуктах стафилококковый энтеротоксин сохраняется 2 мес, в соленых продуктах - 2-3 недели, при кипячении в течение 1,5 ч Энтеротоксин не разлагается желудочным соком, устойчив к спирту, формалину, хлору.

При нагревании до 70°С они погибают в течение 1 ч, до 80°С -- через 10--20 мин. Менее устойчивы стафилококки к действию различных химических веществ: 0,1% раствор сулемы и 3% раствор карболовой кислоты убивают их в течение 15--30 мин, 1% раствора хлорамина -- через 2--5 мин. Стафилококки устойчивы к повышенной концентрации хлорида натрия. Поэтому при выделении их из загрязненного материала используют питательные среды с повышенным содержанием NaCl (7--10%). Стафилококки быстро приобретают устойчивость к антибиотикам. Особенно распространены штаммы, устойчивые к пенициллину, так как стафилококки обладают ферментом пенициллиназой.

3.4 Является ли СПМО

Стафилококки, а именно S. aureus (стафилококк золотистый) являются санитарно показательным микроорганизмами.

S. aureus с зеленящими и гемолитическими стрептококками, делит нишу, индикаторов воздушно-капельного загрязнения (представитель верхних дыхательных путей человека и животных).

Требования к СПМО:

-постоянное обитание в естественных полостях тела человека и животных ,

-постоянное выделение в большом количестве из организма во внешнюю среду,

-отсутствие других мест обитания,

-способность сохраняться в окружающей среде в течение тех же сроков(или более), что и патогенные микроорганизмы, паразитирующие в организме человека и животных. ,

-отсутствие способности активного размножения вне организма хозяина,

-относительная стабильность биологических свойств, важных для идентификации,

-отсутствие «двойников», с которыми СПМО можно перепутать,

-наличие простых в исполнении и вместе с тем надежных методов индикации.

3.5 Является ли возбудителем болезней животных и человека. Если является, то как проявляется болезнь

3.5.1 Особенности и предрасположенность

Одной из важнейших особенностей стафилококкоза является тот факт, что имеется выраженная индивидуальная чувствительность или устойчивость к этому возбудителю. Для того чтобы животное заразилось, оно должно либо обладать слабой сопротивляемостью к действию патогенного стафилококка либо доза заражения должна быть массивной. В зависимости от происхождения предрасполагающие к этому заболеванию факторы можно разделить на несколько групп:

1. нарушение углеводного обмена - повышение уровня углеводов (глюкозы, сахарозы) в крови и тканях (коже). Заболевание имеет выраженный характер при сахарном диабете и при неправильном кормлении;

2. иммунодефициты врожденные и приобретенные (особенно при нарушениях киллерной функции фагоцитов и синтеза секреторного IgA);

3. нарушение гормонального уровня - снижение уровня гормонов щитовидной железы (гипотиреоидизм) или повышение уровня кортикостероидных гормонов;

4. нарушение витаминного (особенно при недостатке витаминов А, Е и витаминов группы В) и минерального обмена;

5. общие токсикозы - хронические отравления токсическими веществами, а также нарушение функций печени и почек;

6. систематические травматические и воспалительные повреждения кожи, аллергии немедленного и замедленного типов, а также патологические процессы, индуцированные демодекозом, блохами, чесоточным клещом, язвы и эрозии;

7. индивидуальный Ir-генный контроль - т.е. генетически обусловленная неспособность иммунной системы данного индивидуума адекватно отвечать на стафилококковые токсины. В случае слабой реактивности сопротивление размножению стафилококка в организме подавлено.

3.5.2 Клинические симптомы

Одним из основных клинических симптомов стафилококкоза являются дерматиты, называемые обычно пиодермиями.

Ряд авторов считают, что у собак, по сравнению с другими млекопитающими, вообще снижены функции кожных барьеров, вследствие чего они особенно подвержены воздействию различных патогенов. Кроме стафилококка, заболевания кожи у собак могут вызывать стрептококки, микобактерии, синегнойная палочка в ассоциации с протеем и другие микробы.

Пиодермию можно классифицировать в соответствии с клинической картиной и глубиной поражения дермы. Отельные авторы в зависимости от этого предлагают различать поверхностную, неглубокую и глубокую шюдерму.

Для поверхностной пиодермы характерны поражения верхних слоев эпвдермалыюй ткани и, как следствие, неглубокие эрозии, напластования

грануляции, небольшие экссудативные процессы и периодический зуд. Пораженные области часто болезненны.

Различают две разновидности этой пиодермии. Одну из них - острый мокнущий дерматит - иногда называют влажной экземой или летней экземой, так как её проявлению способствует жаркая и влажная погода. Быстроразвивающиеся поражения кожи могут охватывать область паха, подгрудка, шею и хвост. Предрасполагающими факторами для этой формы могут служить аллергия (особенно к блохам), ожирение, а также плохая кожная вентиляция. Последнее особенно характерно для длинношерстных пород, а также в случае плохого ухода за шерстью. Нередко'к подобному дерматиту приводят и небольшие травмы кожи.

Развитие другой разновидности, называемой в иностранной литературе "intertrigo", связано с определенными анатомическими особенностями у некоторых пород собак. Наличие складок кожи затрудняет вентиляцию этих участков, способствует скапливанию слюны в углах губ или мочи в области паха и т.д. Все это облегчает стафилококковую колонизацию эпителиальных клеток и развитие воспалительного процесса.

При отсутствии лечения или неадекватном ответе иммунной системы воспалительный процесс может расширяться и захватывать более глубокие слои дермы.

При неглубокой пиодерме в патологический процесс вовлекаются все слои эпидермиса, а также поверхностные структуры волосяных фолликулов. Обычно эта форма ассоциируется с возникновением пустул. Различают также два варианта этой пиодермии: импетиго, или пустулезный дерматит раннего возраста, и поверхностный фолликулит.

Первый вариант характеризуется появлением пустулезных высыпаний в паховой или подмышечной областях у животных, не достигших половой зрелости. Этот дерматит может быть обнаружен даже случайно при уходе за собакой. Часто он сопровождается зудом. Считают, что предрасполагающими факторами к этому варианту болезни могут служить гормональные и иммунные нарушения, эндо- и эктопаразиты, неправильное кормление и неумелый уход.

При втором варианте (поверхностном фолликулите) в воспалительный процесс вовлекаются поверхностные структуры волосяного фоликула. Это приводит к выпадению волос и облысению участков кожи. Возникает сильный зуд, который сопровождается расчесами и травмами. Иногда образуются алопеции, эритемы и довольно часто гиперпигментация. Чаще всего поражается нижняя часть живота, подмышечная и паховая области. Предрасполагающими факторами здесь могут быть гиперчувствительность к эктопаразитам, анатомические и иммунологические факторы, а также нарушение эндокринных процессов - гипотиреоидизм и гиперпродукция кортикостероидных гормонов.

Глубокая пиодермия характеризуется вовлечением в воспалительный процесс не только волосяных фолликулов и эпидермального слоя, но и собственно дермы и подкожной клетчатки. Фолликулярные стенки обычно разрушаются и могут образовываться фурункулезные очаги.

Наиболее вероятной причиной возникновения такой пиодермии является демодекоз, течение которого почти всегда осложняет стафилококковая инфекция. Из других предрасполагающих факторов необходимо отметить недостаток выработки тиреоидного гормона или повышенный уровень адренокортикотропного гормона, а также выраженный иммунодефицит. Длительное применение кортикостероидов тоже может служить причиной данного заболевания.

Глубокая пиодермия бывает как локализованной, так и генерализованной. Генерализованная форма глубокой пиодермии пожалуй самое тяжелопротекающее заболевание кожи, сопровождающееся фурункулезом, изъязвлением, увеличением региональных лимфоузлов и обильным экссудативным процессом. При сильно выраженном течении возможен также подъем температуры тела. Анализ крови в этот период часто свидетельствует о нейтрофилии и лимфопении. Отмечается снижение альбуминов и повышение уровня гамма-глобулинов.

Из локально протекающих глубоких пиодермии наиболее часто встречаются лицевой и подбородочный фолликулит и фурункулез, межпальцевый фолликулит, анальный фурункулез и назальная пиодермия, поражающая спинку носа у собак.

Другим очень важным клиническим признаком стафилококкоза является поражение слизистых оболочек половых органов. У сук отмечают развитие вагинитов, сопровождаемых гнойными (реже катаральными) выделениями. При отсутствии лечения может быть поражена и матка (эндометриты и пиометра). У кобелей развиваются поститы, сопровождающиеся гнойными выделениями из препуция. При хроническом течении могут активироваться пролиферативные процессы, приводящие к патологическому разрастанию эпителиальных тканей препуция. При микроскопии в экссудате обнаруживают слущенные клетки эпителия, фагоциты, лимфоциты (и обломки этих клеток), а также в значительном количестве микробные клетки стафилококков.

Третьим важным клиническим признаком стафилококкоза является развитие отитов. Их также можно различать по интенсивности поражений. В одних случаях они протекают скрытно, вызывая лишь небольшое беспокойство животных, которое выражается в частом встряхивании головой и усиленном расчесывании больного уха. При его пальпации можно услышать хлюпающие звуки скопившегося экссудата. При более интенсивном поражении в воспалительный процесс вовлекаются ткани наружного уха и эпителия ушной раковины. Воспаление обычно сопровождается отечностью, покраснением и болезненностью.

В отдельных случаях течение болезни может осложняться конъюнктивитами и воспалительными процессами в некоторых железах.

У щенков в первые дни жизни болезнь протекает по типу пищевых отравлений. Заболевание начинается внезапно на 2-7-й день жизни. Отмечают диарею и быстрое обезвоживание, приводящее к летальному исходу. У взрослых животных хронические диареи стафилококкового происхождения встречаются редко.

3.5.3 Пищевые токсикоинфекции

заболевания, вызываемые микроорганизмами в сочетании с токсическими веществами, образующимися в процессе их жизнедеятельности (преимущественно эндотоксинами).

Пищевыми токсикозами (интоксикациями) называют пищевые отравления, связанные с употреблением в пищу продуктов, в которых накопился экзотоксин в результате жизнедеятельности токсинобразующих микроорганизмов.

После употребления человеком продуктов, содержащих экзотоксин, последний всасывается через желудочно-кишечный тракт в кровь и разносится по всему организму. При этом поражаются в первую очередь сердечнососудистая и центральная нервная системы. Появляются головные боли, головокружение, нарушаются зрение, функции сердечнососудистой системы и др. Позже появляются признаки нарушения функций желудочно-кишечного тракта рвота, диарея, боль в области желудка и др.

Инкубационный период при токсикозах короче, чем при пищевых токсикоинфекциях, и составляет несколько часов.

Возбудителями пищевых токсикозов являются патогенные стафилококки, стрептококки.

3.6 Является ли возбудителем микробиологической порчи

Продукты, обсемененные стафилококками, не изменяются, этим они и коварны.

3.7 Используется ли в пищевой промышленности и биотехнологии

Не используются.



4. Нормативные документы, регламентирующие содержание данных микроорганизмов в объектах внешней среды и пищевых продуктах. Нормативы.

Определения стафилококков в пищевых продуктах проводятся в соответствии с ГОСТами. ГОСТ 30347-97 Молоко и молочные продукты. Методы определения Staphylococcus aureus, ГОСТ 31746-2012 (ISO 6888-1:1999, ISO 6888-2:1999, ISO 6888-3:2003) Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus, ГОСТ Р 54674-2011 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления и определения Staphylococcus aureus. для установления соответствия микробиологических показателей, качества пищевого продукта, требованиям нормативно-технической документации ,

-для установления промышленной стерильности продуктов.

-для выяснения возникновения причины дефектов продукта



II. Собственные исследования

Проводились на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии. Материалы и оборудования подготовила лаборант кафедры Лебцева Виктория Константиновна. Работа провидена с целью изучения санитарной микробиологии.

1. Отбор и подготовка пробы продукта

Проводился в соответствии с ГОСТ 26668-85» Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов»

1.1 Аппаратура, посуда, материалы, реактивы

- горелки газовые или спиртовые по ГОСТ 25336-82;

- ножи и проволоку из нержавеющей стали;

- скальпели, пинцеты по ГОСТ 21241-89, шпатели, ложки, половник, долота, пилы из нержавеющей стали;

- посуду широкогорлую с крышкой;

- чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;

- вата

- стекла предметные по ГОСТ 9284

- термостат с диапазоном рабочих температур 28 °С - 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С;

- сухая кроличья плазма;

Посуду, инструменты и материалы, соприкасающиеся с продуктом во время отбора проб, стерилизуют одним из следующих способов:

- насыщенным паром - в течение 30 мин в автоклаве при температуре (121±1) °С;

- горячим воздухом в стерилизаторе

- с принудительной циркуляцией воздуха при температуре от 170 до 175 °С в течение 60 мин;

- без принудительной циркуляции воздуха при температуре от 180 до 185 °С в течение 15 мин, при температуре от 160 до 165 °С в течение 120 мин.

- Допускается инструменты обрабатывать погружением в этиловый спирт с последующим фламбированием.

1.2 Отбор проб продукта

Я иследовал6 видов колбас. В мой ассортимент вошли (рис. 2):

-Колбаса докторская - Ладога (рис. 6);

-зельц - Новгородский бекон (рис. 3);

-Колбаса к завтраку (докторская) - Великолужскии продукт (рис. 4);

-Колбаса Красовская - Ладога (рис. 5);

-Паштет мясной - Новгородский бекон;

Колбаса варено-копченая - Новгородский бекон.

Рисунок 2. 6 видов колбас

Рисунок 3. Зельц - Новгородский бекон

Рисунок 4. Колбоса к завтраку (докторская) - Великолужский продукт

Рисунок 5. Колбаса Красовская - Ладога

Рисунок 6. Колбаса докторская - Ладога



2. Микроскопия

Рисунок 7. Предметное стекло

Микроскопия заключается в том, чтоб увидеть наличие или отсутствия бактерий, грибов, и других микроор ганизмов в продуктах. В данном случае в колбасах.

Для этого поверхность батона я профламбировал, дабы избежать обсеменения микроорганизмами, существующими вне батона. После вскрыл оболочку и с помощью заранее профлабированых ножниц, скальпеля и пинцета вырезал кусочек из глубины батона.

Далее, сделал отпечаток на предметном стекле(отпечаток делал самой глубиной частью кусочка, извлеченного из глубены батона). Потом зафиксировал его над пламенем горелки и окрасил по грамму.

Данная процедура проведена со всеми образцами.

При микроскопии и макроскопии изменений не обнаружено.



3. Характеристика плотной элективной среды и методика посева

3.1 Характеристика плотной элективной среды

Для дальнейшей работы мне понадобился молочно-солевой агар.

Молочно солевой агар - твердая элективная среда которая готовится Непосредственно перед посевом к 1 дм расплавленного и охлажденного до температуры 60-70 °С мясо-пептонного агара, содержащего 65 г хлористого натрия, добавляют 100 см стерильного обезжиренного молока. Устанавливают рН (7,4±0,1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Применяют для культивирования стафилококков.

Данная среда готовится в соответствии с ГОСТ 10444.1-84

3.2 Методика посева

Взял стерильные чашечки Петри и аккуратно залил в них молочно- солевой агар.

Рисунок 8. Стерильные чашечки Петри

После того как агар остыл, готовлю навеску. Для этого я поверхность батона я профламбировал. После вскрыл оболочку и с помощью заранее профлабированида ножниц, скальпеля и пинцета вырезал кусочек 5 граммов из глубины батона от каждой из колбас. Эти кусочки я поместил в отдельные заранее приготовленные для своих образцов чашечки Петри. В каждую ступку добавил 10 мл стерильного физиологического раствора, после чего стал перетирать, стерильны ми пестиками (к каждой ступке прилагается свой пестик).

Далее, из навески с помощью прокаленной бак петли, я сделал посевы на поверхность молочно-солевого агара, аккуратными штрихообразными движениями. Чашечки Петри подписал и поставил в термостат при температуре (37±1) °С на 48 часов.



4. Учет роста на плотной элективной среде. Характеристика колоний

Рисунок 9. Колонии

В сделанном с зельца посеве хорошее заметны колонии, которые растут в виде непрозрачных круглых колоний, окрашенных в бледно-желтый цвет, диаметром 2-4 мм, слегка выпуклых с ровными краями. Обычно такие колонии свойственны Staphylococcus aureus.

Из колонии я сделал мазок и окрасил его по Грам.

Для этого на чистое и охлажденное после фламбирования предметное стекло нанес петлей каплю дистиллированной воды, в которую внес петлей часть колонии. Полученную смесь размазал на участке примерно 1 см, и просушивают при температуре (20±2) °С, после чего зафиксировал, медленно проводя предметное стекло над пламенем горелки и окрасил по Грам. Под микроскопом обнаружил стафилококки, которые окрасились в темно-фиолетовый цвет, имеют шарообразную форму и располагаются скоплениями, напоминающими гроздья винограда. Даная картинанапоминает Staphylococcus aureus.

Рисунок 10. Staphylococci

Сделал пересев на плазму крови кролика.

Постановка реакции плазмокоагуляции.

В пробирку с 0,5 см разведенной кроличьей плазмы я внес петлей суточной агаровой культуры. Внесенную культуру тщательно размешал. Одну пробирку с плазмой оставляют незасеянной. Пробирки поместил в термостат и выдержал при температуре (37±1) °С в течении суток.

При определении коагулазной активности реакцию считают отрицательной в тех случаях, когда в плазме не образуются отдельные нити или сгустки, или в тех случаях, когда в плазме появились отдельные нити (реакцию плазмокоагуляции оценивают на один плюс).

Учет реакции через сутки.

Плазма в пробирке свернулась, имеет прозрачный вид, что свойственно для Staphylococcus aureus.



Выводы по итогам курсовой работы

Основной целью данной курсовой работы являлось изучение санитарно-микробиологического значения и методики выявления при ветеринарно-санитарной экспертизе пищевых продуктов бактерий рода Staphylococci и в главную очередь Staphylococcus aureus.

Я познакомился с морфологией данного рода, его санитарно-микробиологическим значением, а именно: местом обитания в природных условиях. На собственном примере изучил Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк). Изучил ГОСТы по его определению в продуктах и выявлению его.



Список литературы

1. Berg J.N et al. - AmerJ.Vet.Res., 1984, 45.

2. Deboer D.J., et al. - Proc. 5th Ann.meet. AmAcad.Vet.Derm., 1989

3. Doery H., North Е. - Nature (London), 1963, 198, N4889.

4. Mason I.S. - The Europ.J.CompAn.Pract., 1993, v.3.

5. Mason I.S., Loyd D.H. - J.Smoll Anim.Prect. 1989,30.

6. Билетова Н.В., Корнелаева Р.П., Кострикина Л.Г. и др. Под ред. Любашенкои С.Я. Санитарная микробиология. - Москва Пищевая пром-сть, 1980.

7. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. Санитарные правила и нормы (САНПиН 2.3.2.560-96). - Москва 1997.

8. ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

9. ГОСТ 30347-97 Молоко и молочные продукты. Методы определения Staphylococcus aureus

10. ГОСТ 31746-2012 (ISO 6888-1:1999, ISO 6888-2:1999, ISO 6888-3:2003) Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus

11. Езепчук Ю.В. -Патогенность как функция биомолекул, Москва, 1985.

12. Загаевский И.С. Жмурко Т.В. «Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии переработки продуктов животноводства». Москва Колос. 1983.

13. Корнелаева Р.П., Степаненко П.П., Павлова Е.В., Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения. - Москва 2006.

14. Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Санитарная микробиология молока и молочных продуктов. - Москва Пищевая промышленность, 1980.

15. М.А. Сидоров, Р.П. Корнелаева «Микробиология мяса и мясопродуктов» 3-е издание. Москва «Колос» 1998

16. Макаров В.А. и др. «Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства». Москва Агропромиздат. 1991.

17. Смирнов В.В. и др. - Стафилококк, "Наукова думка", 1988.

18. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов. - Москва Лира, 2002.

Размещено на Allbest.ru

...