Особливості організації і функціонування сигнальних мереж в нормальних та пухлинних клітинах

5. Показано, що інгібітор тирозинових протеїнкіназ гербіміцин А, індукує еритроїдну диференціацію і викликає пригнічення росту клітин К562, пов'язане, в значній мірі, зі зниженням життєздатності клітин (на 22 %) внаслідок включення апоптичної програми. Індуктор мегакаріоцитної диференціації, пухлинний промотор РМА, також викликає значне зниження клітинного росту (на 67 %), яке не супроводжується індукцією апоптозу.

6. Встановлено, що гербіміцин А індукує тимчасові координовані зміни активності ключових ефекторних ланок р210Bcr-Abl, активацію p21Ras та інгібування активності РІ-3-кінази на 3 год еритроїдної диференціації клітин К562. Подібні зміни активності РІ-3-кінази спостерігаються і в процесі мегакаріоцитної диференціації, індукованої РМА.

7. Показано, що осциляції перебігу сигнальних процесів у лейкемічних клітинах К562 корелюють зі змінами р210Bcr-Abl-залежних надмолекулярних комплексів, до складу яких входять адаптерні білки Cbl, Grb2, Shc і р85б регуляторна субодиниця РІ-3-кінази.

8. Динамічні системні зміни стехіометрії адаптерних білків Grb2, Shc, с-Cbl і р85б регуляторної субодиниці РІ-3-кінази у Bcr-Abl-опосередкованих надмолекулярних комплексах визначають рівень Ras-залежного і РІ-3-кіназного сигналювання в процесі еритроїдної і мегакаріоцитної диференціації клітин К562.

9. Встановлено, що профілі експресії ізоформ Ruk та його ортолога у людини, білка CIN85, їхня субклітинна локалізація та здатність до олігомеризації є специфічними для кожної з досліджених ліній клітин (NIH3T3, Cos1, L1210, HEK293, Ramos, HeLa S3, MDCK, C6, A549, U937). Виявлені зокономірності відображають різну біологічну роль ізоформ Ruk/CIN85 в клітинах різного видового та тканевого походження.

10. Ідентифіковано р85б регуляторну субодиницю РІ-3-кінази, як зв'язувальний партнер адаптерного білка Ruk. Показано, що взаємодія між двома білками носить комплексний характер і опосередковується SH3-доменами і Pro-багатими ділянками як Ruk, так і р85б.

12. У системі in vitro, з використанням очищених бакуловірусних препаратів РІ-3-кінази і Ruk показано, що здатність адаптерного білка інгібувати активність ліпідкінази залежить від стехіометрії Ruk у надмолекулярному комплексі. Максимальний інгібуючий ефект Ruk виявляється при еквімолярному співвідношенні сигнальних білків у комплексі.

13. Продемонстровано, що адаптерний білок Ruk може утворювати комплекси з ендонуклеазою(ами) в клітинах лінії НЕК293 ембріональної нирки людини. Виявлена нуклеазна активність є Мg²⁺, Ca²⁺-залежною і інгібується іонами Zn²⁺ та гепарином. Встановлено, що взаємодія з ендонуклеазою опосередковується С-кінцевим суперспіралізованим районом Ruk.

14. З'ясовано механізми внутрішньо- та міжмолекулярних взаємодій, опосередкованих доменами і мотивами Ruk. Виявлення осциляцій у здатності пролін-багатих мотивів Ruk взаємодіяти з екзогеннними партнерами в процесі TNFб-ідукованого апоптозу клітин U937 свідчить про існування в клітинах динамічної рівноваги між активними (відкритими) і неактивними (закритими внаслідок внутрішньомолекулярних взаємодій) формами адаптерного білка.

15. Встановлено зниження експресії повнорозмірної форми ортолога Ruk у людини, білка CIN85, у переважній більшості досліджених зразків (у 12 випадках з 20) світлоклітинної карциноми нирки людини.

ПЕРЕЛІК НАУКОВИХ ПРАЦЬ, ОПУБЛІКОВАНИХ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Дробот Л.Б., Юрженко В.С., Кусень С.И. Фосфорилирование плазматических мембран клеток зародышей вьюна. 1. Базальное фосфорилирование //Биологические мембраны.-1989.-Т.6, №3.-С.275-282.

2. Дробот Л.Б., Юрженко В.С., Кусень С.И. Эпидермальный фактор роста стимулирует протеинкиназную активность, специфическую к рибосомному белку S6, в бластодерме зародышей в'юна //Молекулярная биология.-1989.-Т.23, №3.-С.872-878.

3. Дробот Л.Б., Кошельник Ю.Р., Шевчук М.Я., Кусень С.И. Влияние инсулина и гуаниловых нуклеотидов на метаболизм полифосфоинозитидов в плазматических мембранах клеток зародышей вьюна (Misgurnus fossilis L.) //Биологические мембраны.-1991.-Т.8, №10.-С.1066-1074.

4. Стойка Р.С., Дробот Л.Б., Сушельницкий С.И., Юрженко В.С., Кошельник Ю.Р., Кусень С.И. Ранние эмбриональные клетки вьюна специфически связывают трансформирующий фактор роста типа бетта //Онтогенез.-1993.-Т.24, №1.-С.38-42.

5. Юрженко В.С., Дробот Л.Б., Барсук Л.С., Кусень С.И. Функциональная активность рецепторов эпидермального роста в клетках ранних зародышей вьюна //Онтогенез.-1993.-Т.24, №3.-С.70-80.

6. Drobot L.B., Yurzhenko V.S., Koshelnik Yu.R., Kusen S.I. Identification and characterization of insulin and epidermal growth factor receptors in loach embryonic cells //Biol. Mem.-1994.-Vol.7, №3.-P.291-299.

7. Drobot L.B., Koshelnick Yu.R., Kusen S.I. GTP-binding proteins in plasma membranes of loach embryonic cells //Membr. And Cell Biol.-1995.-Vol.9, №1.-P.49-56.

8. Вальовка Т.Й., Філоненко В.В., Пальчевський С.С., Великий М.М., Дробот Л.Б., Вотерфілд М., Мацука Г.Х., Гут І.Т. Функціональні та регуляторні особливості кінази рибосомного білка S6 типу бетта //Биополимеры и клетка.-1999.-Т.15, №5.-С.415-421.

10. Вальовка Т.Й., Філоненко В.В., Великий М.М., Дробот Л.Б., Вотерфілд М., Мацука Г.Х., Гут І.Т. Особливості фібронектинзалежної активації кіназ рибосомного білка S6 (S6K1 і S6K2) //Укр. біохім. журн.-2000.-Т.72, №3.-С.31-37.

11. Ільницька О.М., Паливода О.Ю., Гусак Д.М., Вальовка Т.Й., Ігуменцева Н.І., Кусень С.Й., Дробот Л.Б. Аналіз білок-білкових взаємодій, опосередкованих адаптерним білком Grb2, в процесі мегакаріоцитної диференціації клітин еритролейкемії людини лінії К562 //Біополімери і клітина.-1999.-Т.15, №6.-С.501-507.

12. Gout I., Middleton G., Adu J., Ninkina N.N., Drobot L.B., Filonenko V., Matsuka G., Davies A.M., Waterfield M., Buchman V.L. Negative regulation of PI 3-kinase by Ruk, a novel adaptor protein//EMBO J.-2000.-Vol.19, №15.-P.4015-4025.

13. Rzeszowska-Wolny J., Drobot L. Sygnalizacja i zmiany funkcjonowania komorki po uszkodzeniu DNA /In: Na pograniczu chemii I biologii.-Poznan: Wydawnictwo Naukowe UAM.-2003.-T. IV.-S.231-252.

14. Ільницька О.М., Мазур І.Я., Ігуменцева Н.І., Дробот Л.Б. Вивчення регуляції фосфатидилінозит-3-кіназного шляху в процесі гербіміцин А-індукованої еритроїдної диференціації клітин еритролейкемії лінії К562 //Укр. біохім. журн.-2001.-Т.73, №2.-С.31-33.

15. Ільницька О.М., Олексин Г.О., Кусень С.Й., Дробот Л.Б. Регуляція активності фосфатидилінозит-3-кінази в процесі мегакаріоцитної диференціації клітин еритролейкемії людини, індукованої форбол-12-міристат-13-ацетатом //Біополімери і клітина.-2002.-Т.18.-№2.-С.110-114.

16. Дрель В.Р., Паливода О.Ю., Шуваєва Г.Ю., Ігуменцева Н.І., Кіт Ю.Я., Гут І.Т., Бухман В.Л., Дробот Л.Б. Субклітинна локалізація адаптерного білка Rukl у клітинах НЕК293 //Біополімери і клітина.-2002.-Т.18, №4.-С.312-318.

17. Ільницька О.М., Олексин О.Г., Кусень С.Й., Дробот Л.Б. Динаміка процесів диференціації і апоптозу в клітинах еритролейкемії людини лінії К562, індукованих інгібіторами тирозинових протеїнкіназ гербіміцином А і кверцетином //Медична хімія-2002.-Т.4, №4.-С.13-17.

18. Кіт Ю.Я., Шуваєва Г.Ю., Дрель В.Р., Ігуменцева Н.І., Дробот Л.Б. Дослідження експресії дезоксирибонуклеаз у клітинах ссавців методом ренатурації білків у поліакриламідному гелі //Укр. біохім. журн.-2002.-Т.74, №3.-С.100-103.

19. Кіт Ю., Шуваєва Г., Дрель В., Ігуменцева Н., Дробот Л. Дослідження нуклеазної активності клітинних лізатів методом ренатурації білків у поліакриламідному гелі // Вісник Львів. Ун-ту.-2002.-Т.28.-С.28-33.

20. Verdier F., Valovka T., Zhyvoloup A., Drobot L.B., Buchman V., Waterfield M., Gout I. Ruk is ubiquitinated but not degraded by proteasome //Eur. J. Biochem.-2002.-Vol.269, №14.-P.3402-3408.

21. Kit Yu.Ya., Drel V.R., Petriv O.I., Kovalyova V.A., Shuvayeva G.Yu., Palivoda O.Yu., Vovk E.I., Bobak Ya.P., Rzeszowska-Wolny J., Gout I.T., Buchman V.L., Drobot L.B. Adaptor protein Rukl forms protein-protein complexes with endonuclease activity in HEK293 cells //Biochemistry (Moscow).-2003.-Vol.68, №7.-P.810-815.

22. Czajkowski R., Banachewicz W., Ilnytska O., Drobot L.B., Baranska J. Differential effects of P2Y₁ and P2Y₁₂ nucleotide receptors on ERK1/ERK2 and phosphatidylinositol 3-kinase signalling and cell proliferation in serum-deprived and nonstarved glioma C6 cells //Br. J. Pharm.-2004.-Vol.141, №3.-P.497-507.

23. Borthwick E.B., Korobko I.V., Courtney L., Drel V.R., Fedyshyn Ya.Ya., Ninkina N., Drobot L.B., Buchman V.L. Multiple domains of Ruk/CIN85/SETA/CD2BP3 are involved in interaction with p85б regulatory subunit of PI 3-kinase //J. Mol. Biol.-2004.-Vol.343, №4.-P.1135-1146.

24. Дробот Л.Б., Петрів О.І., Кіт Ю.Я., Дрель В.Р., Гут І.Т. Вплив адаптерного білка RukL на активність фосфатидилінозит-3-кінази за умов in vitro //Експ. та клін. фізіол. і біохім.-2004.-Т.7, №4.-С.50-59.

25. Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Маєвська О.М., Ігуменцева Н.І., Ржепецький Ю.А., Машталір Н.Б., Поспішіль Ю.О., Шуляк О.В., Возіанов С.О., Дробот Л.Б. Експресія адаптерного білка CIN85/Ruk в пухлинах нирки людини //Експ. та клін. фізіол. і біохім.-2004.-Т.7, №4.-С.93-99.

26. Ilnytska O.M., Drel' V.R., Shuvayeva H.Yu., Havrylov S.V., Fedyshyn Ya.Ya., Mayevska O.M., Ihumentseva N.I., Gout I.T., Buchman V.L., Drobot L.B. Intra- and intermolecular interactions mediated by adaptor protein Ruk/CIN85/SETA //Biopolymers and Cell.-2005.-Vol. 21, №1.-P.48-54.

27. Drobot L., Husak Z., Ilnytska O., Igumentseva N., Oleksyn H., Kusen' S. Transient activation of Ras-dependent signalling at the early stages of Herbimycin A-induced erythroid differentiation of human erythroleukemia K562 cells //Experimental Oncology.-2005.-Vol. 27, №1.-P.31-37.

28. Дробот Л.Б., Маєвська О.М., Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Барська М.Л., Ігуменцева Н.І., Басараба О.І., Федорко О.І. Поліклональні та моноклональні антитіла проти адаптерного Ruk/CIN85 білка: отримання, характеристика, можливості застосування //В зб.: Фундаментальні орієнтири науки (Біологія та науки про Землю і навколишнє середовище).-К.: Академперіодика.-2005.-С.105-118.

29. Drobot L.B., Koshelnik Yu.R., Kusen S.I. GTPS potentiate inhibition of phosphatidylinositol -3' kinase by insulin in loach embryo cells //Abstracts of 14th Joint Meeting of British Endocrine Societies/1st Joint Meeting with European Federation of Endocrine Societies.-Warwick (Great Britain).-1995.-P.143.

30. Drobot L.B., Koshelnik Yu.R., Kusen S.I. Enhancement or inhibition of insulin signalling in loach embryonic cells is dependent on stage of development //Abstracts of the Congress of the European Developmental Biology Organization (EDBC-1995).-Toulouse (France).-1995.-P.77.

31. Drobot L. Ruk/CIN85 scaffolding adaptor protein: structural features and role in the signal transduction //Abstracts of 1^st (Inaugural) Ukrainian Congress for Cell Biology.-Lviv (Ukraine).-2004.-P.14.

32. Drobot L.B. Expression profiles of Ruk/CIN85 adaptor/scaffold protein isoforms in human tumors //Ukr.Biokhim.Zh.-Abstracts of 5th Parnas Conference.-Kiev (Ukraine).-2005.-P. 19.

33. Havrylov S., Czajkowski R., Drobot L., Baranska J. Complex pattern of RUK/CIN85 adaptor localization //FEBS Lett.-Abstracts of 30^th FBS congress and 9^th IUBMB Conference.-Budapest (Hungary).-2005.-P.320.

Размещено на Allbest.ru